Abstract Objetive: Mesenchymal stem cells (MSCs) are commonly used in regenerative therapy of human diseases. In murine models, in which human MSCs are transplanted, distinguishing the origin of the identified MSCs in the organs of mice is important. The objective of this study was to determine the performance of PCRbased analysis of human Alu sequences to detect human DNA after infusion of human bone marrow stem cells (hBMSCs) in immunodeficient mice. Material and method: HBMSCs were obtained from the femoral head of patients undergoing hip replacement surgery. 106 hBMSCs were infused intravenously by injection into the retroorbital sinus of NOD/SCID mice. The presence of human DNA in lung, liver and bone was then assessed. Results: In in vitro DNA mixtures, human DNA was easily detected with a good logarithmiclinear relationship. Similarly, when human and mouse osteoblasts were mixed, 110 cells were easily detected among 105 mouse cells. Likewise, human DNA was detected in the lungs 1 and 7 days after cell infusions in NOD/SCID mice. However, human DNA was inconsistently detected in the liver and bones. Conclusion: Detecting Alu sequences is an effective procedure to observe human DNA. The results confirm that most intravenously injected hBMSCs are trapped in the lungs. Thus, for the treatment of skeletal disorders, procedures are needed to increase the migration of these cells to the bone.

Resumen Objetivo: Las células madre mesenquimales (MSCs) son atractivas en la terapia regenerativa de patologías humanas. En los modelos murinos, en los que se trasplantan MSCs humanas, es muy importante poder distinguir el origen de las MSCs identificadas en los órganos de ratones. El objetivo de este estudio fue determinar el rendimiento del análisis basado en PCR de secuencias Alu humanas para detectar ADN humano después de la infusión de células madre de médula ósea humana (hBMSCs) en ratones inmunodeficientes. Material y método: Las hBMSCs se obtuvieron de la cabeza femoral de pacientes sometidos a cirugía de reemplazo de cadera. Se infundieron 106 hBMSCs por vía intravenosa mediante inyección en el seno retroorbitario de ratones NOD/SCID. Después se evaluó la presencia de ADN humano en pulmón, hígado y hueso. Resultados: En mezclas de ADN in vitro, el ADN humano se detectó fácilmente con una buena relación logarítmicalineal. De manera similar, cuando se mezclaron osteoblastos humanos y de ratón, se detectaron fácilmente 110 células humanas entre 105 células de ratón. Asimismo, se detectó el ADN humano en los pulmones 1 y 7 días después de las infusiones celulares en ratones NOD/SCID. Sin embargo, el ADN humano se detectó de manera inconsistente en el hígado y los huesos. Conclusión: La detección de secuencias Alu es un procedimiento eficaz para detectar ADN humano. Los resultados confirman que la mayoría de las hBMSCs inyectadas por vía intravenosa quedan atrapadas en los pulmones. Por lo tanto, de cara al tratamiento de trastornos esqueléticos, se necesitan procedimientos para aumentar la migración de dichas células al hueso.

Summary Introduction: Several genome-wide association studies (GWAS) and others which focused on the sclerostin gene (SOST) have found that some SOST polymorphisms are associated with bone mass and risk of fractures. This study analyzes the functional relevance of certain polymorphisms of the SOST promoter region, and their relationship with the expression and methylation of this gene Material and method: Alleles of the rs851054, rs851056, rs10534024, rs1234612 polymorphisms and DNA methylation were analyzed by pyrosequencing in serum and bone samples of 33 patients undergoing hip replacement. In addition, SOST expression was studied in bone samples. Also, different alleles of the SOST promoter were cloned into double reporter vectors with the luciferase gene under this promoter and the alkaline phosphatase gene under a constitutive promoter Results: Methylation analysis of the SOST promoter region in serum free DNA and bone DNA revealed no statistically significant differences across the alleles of the analyzed polymorphisms (p>0.05). However, transfections with reporter vectors showed high transcriptional activity, regardless of the vector used. Conclusions: We have not found a clear association between the different alleles and the DNA methylation of the SOST promoter region. Further studies are needed to determine the polymorphisms' functional effects on the methylation and expression of the SOST gene and the consequences on bone mass.

Resumen Introducción: Varios estudios de barrido genómico (GWAS) y otros focalizados en el gen de la esclerostina (SOST) han encontrado que algunos polimorfismos de SOST se asocian con la masa ósea y el riesgo de fracturas. El objetivo de este estudio fue analizar la relevancia funcional de ciertos polimorfismos de la región promotora de SOST, en relación con la expresión y la metilación de dicho gen Material y método: Para ello, se determinaron los alelos de los polimorfismos rs851054, rs851056, rs10534024, rs1234612 y se analizó la metilación de ADN de 33 muestras de suero y de hueso, procedentes de pacientes intervenidos para colocar una prótesis de cadera, mediante pirosecuenciación tras conversión con bisulfito. Además, en el hueso se estudió la expresión de SOST. Por último, se clonaron diferentes alelos del promotor de SOST en vectores reporteros dobles con el gen de la luciferasa bajo dicho promotor y el gen de la fosfatasa alcalina bajo un promotor constitutivo. Resultados: El análisis de metilación de la región promotora de SOST en ADN libre en suero y en ADN de hueso no reveló diferencias estadísticamente significativas en relación con los alelos de los polimorfismos analizados (p>0,05). Sin embargo, las transfecciones con los vectores reporteros mostraron una elevada actividad transcripcional, independiente mente del vector utilizado. Conclusión: No hemos encontrado una asociación clara entre los distintos alelos y la metilación de ADN de la región promotora del gen SOST. Son necesarios más estudios para determinar los efectos funcionales de los polimorfismos sobre la metilación y expresión del gen de SOST y los efectos sobre la masa ósea.

Abstract Introduction Suicide is the second leading cause of death in young adults worldwide and the leading cause of violent death in Spain. Methods for committing suicide vary due to demographic and geographic factors. The present study analyzes the methods of suicide used over 13 years throughout Spain, and in particular in the region of Cantabria. Material and methods A retrospective study was carried out to study the methods of suicide chosen in Spain. Temporal trends were analyzed throughout the period, as well as differences according to age and sex. Results Toxic agents were present in 9.8% of recorded suicides, being more commonly used by the women. Suicide by non-toxic violent agents have declined in recent years (p = 0.002). The geographical pattern in suicides according to the chosen method is heterogeneous. In Cantabria, suicide by hanging was the most commonly chosen method (50.2% of the total). Conclusions Toxic agents are relatively infrequent in self-inflicted deaths, which could be attributed to their lower lethality (compared to other active methods such as jumping from height or hanging) and to the effectiveness of medical measures against poisoning. The Boletín Estadístico de Defunción Judicial may not be a completely reliable source for conducting epidemiological studies, due to the cause of death being recorded by non-medical personnel without access to the full medical history of the patients.

Resumen Introducción El suicidio es en todo el mundo la segunda causa de muerte en adultos jóvenes, y en España es la principal causa de muerte violenta. Los métodos para llevarlo a cabo varían según factores demográficos y geográficos. En el presente estudio se analiza de manera global el método de suicidio empleado en España, y se detalla el análisis en la región de Cantabria. Material y métodos Estudio retrospectivo en el que se clasifican los suicidios en dos grupos según el método, por envenenamiento y por agentes violentos no tóxicos. Se evaluó la tendencia en los métodos elegidos para provocar la muerte, así como las diferencias según la edad y el sexo. Resultados El patrón geográfico en los suicidios según el método es heterogéneo. Los suicidios por agentes violentos no tóxicos fueron los más frecuentes, representando el 90,2% del total, si bien cabe destacar que este grupo ha sufrido un descenso en los últimos años (p = 0,002). Los agentes tóxicos estuvieron presentes en el 9,8% de los suicidios, siendo más usados por las mujeres. En Cantabria, el ahorcamiento fue el principal método elegido (50,2% del total). Conclusiones Los tóxicos son agentes poco presentes en las muertes autoinfligidas, lo que podría atribuirse a su menor letalidad (respecto a otros métodos activos, como la precipitación o el ahorcamiento) y a la efectividad de las medidas sanitarias ante un envenenamiento. El Boletín Estadístico de Defunción Judicial no es del todo fiable como fuente de datos para la realización de estudios epidemiológicos, lo que puede deberse a que es rellenado por personal no sanitario que no tiene acceso a la historia del paciente.