O desempenho de um antígeno de promastigotas de L. major-like para o diagnóstico sorológico de leishmaniose mucocutânea pelo teste de imunofluorescência-IgG foi comparado com o desempenho de um antígeno de L. braziliensis braziliensis. Cada antígeno foi usado para testar 224 soros de etiologias como leishmaniose mucocutânea, micoses profundas, toxoplasmose, malária, doença de Chagas, leishmaniose visceral, fator anti-núcleo, esquistossomose mansônica, fator reumatóide e controles normais. A concordância entre as respostas a cada antígeno foi grande: 77,2% dos soros de leishmaniose mostraram resultado positivo para ambos os antígenos ou negativo, assim como 91,1% dos soros controle negativos. Reações cruzadas ficaram restritas à doença de Chagas, leishmaniose visceral, fator anti-núcleo e paracoccidioidomicose. A resposta quantitativa dos soros de leishmaniose e doença de Chagas foi avaliada pelo método de regressão linear; embora a intercessão com o eixo y e o "slope" fossem diferentes para cada antígeno nenhum deles se mostrou melhor na evidenciação de anticorpos anti-Leishmania. O antígeno de L. major-like mostrou-se melhor que o de L. b. braziliensis na evidenciação de anticorpos em soros de doença de Chagas.

The performance of an antigen of L. major-like promastigotes for the serological diagnosis of mucocutaneous leishmaniasis in the IgG-immunofluorescent test was compared to that of an antigen of L. braziliensis braziliensis. Each antigen was used to test two hundred and twenty-four sera of etiologies such as mucocutaneous leishmaniasis, deep mycoses, toxoplasmosis, malaria, Chagas' disease, visceral leishmaniasis, anti-nuclear factor, schistosomaiasis, rheumatoid factor and normal controls. Agreement between responses to each antigen was high: 77.2% of leishmaniases sera agreed on a positive or a negative result to both antigens and 91.1 % of control sera. Cross reactivity was restricted to Chagas' disease sera, visceral leishmaniasis, anti-nuclear factor and paracoccidiodomycosis. The quantitative response of leishmaniasis and Chagas' disease sera to both antigens was evaluated by a linear regression; although the y-intercept and the slope were different for each antigen, neither was better than the other in the disclosure of anti-Leishmania antibodies. In the case of Chagas' disease sera the L. major-like antigen was better than L. b. braziliensis' to disclose cross-reacting antibodies.

Índices de desempenho diagnóstico de sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e eficiência foram determinados nas reações de dot-ELISA e IgG-ELISA em 340 soros de leishmaniose mucocutânea. A sensibilidade do dot-ELISA foi significativamente mais baixa que a da IgG-ELISA e os dois testes tiveram índices de especificidade e de valor de predição positivo da mesma magnitude. Setenta e oito soros tinham resultado negativo à reação de dot-ELISA e resultado positivo ao IgG-ELISA. Quando os soros foram examinados de acordo com diferentes critérios de análise, quanto a esta discrepância a estatística kappa não corroborou esta hipótese indicando que os dois testes concordavam substancialmente. Os resultados apresentados indicam que os índices de desempenho diagnóstico obtidos em trabalhos de campo onde haja boa caracterização das variáveis podem ser extrapolados a outros estudos populacionais desde que a doença se mostre de alta prevalência (devido a um viés de seleção ou não) e nestas condições se pode esperar que os índices façam o diagnóstico de doença entre os resultados positivos ao teste.

Diagnostic performance indexes of sensitivity, specificity, positive predictive value and efficiency were determined for dot-ELISA and IgG-ELISA tests in 340 leishmaniasis sera. Sensitivity of the dot-ELISA was significantly lower than IgG-ELISA's; the two tests had indexes of specificity and positive predictive value of the same magnitude. Seventy-eight sera gave a negative dot-ELISA test result and a positive IgG-ELISA test result. When sera were classified according to different criteria as how to interpret this diversity, the kappa statistic did not corroborate the classification indicating that the two tests display a substantial strength of agreement. The results presented indicate that performance indexes accrued in a survey where variables arc well known may be extrapolated to other population studies if the disease presents itself as highly prevalent (due to a selection bias or not) and may be expected to discriminate a disease status among test positives.

Os parâmetros sorológicos do teste de imunoperoxidase foram comparados aos do teste de imunofluorescência. O teste de imunoperoxidase mostrou ter sensibilidade e valor de predição negativo estatisticamente mais alto que aqueles do teste de imunofluorescência porém, os limites de confiança 95% da especificidade e do valor de predição positivo estavam contidos naqueles encontrados para o teste de imunofluorescência. Tais diferenças se mantiveram quando os cálculos dos índices foram feitos com e sem a inclusão de soros de doença de Chagas ou leishmaniose visceral. A análise estatística mostrou que os dois testes tinham um grau substancial de concordância mas o teste de imunofluorescência tinha um índice de especificidade e o vaior de predição positivo igual a 100,0% quando os soros de Chagas e leishmaniose visceral foram excluídos. Neste caso. o teste positivo se torna o teste diagnóstico da doença em face da não existência de falso-positivos. O conjugado de peroxidase poderá se constituir em fonte de problemas técnicos na sorologia se a relação enzima proteína se afastar das quantidades ótimas de marcação.

Performance indexes of the peroxidase antibody test were compared to that of the fluorescent antibody test. The peroxidase antibody test had a statistically higher sensitivity and negative predictive value and a higher efficiency than the fluorescent antibody test but its specificity and positive predictive value were within the 95% confidence limits for the values found for the fluorescent antibody test. Such differences did not change when Chagas' disease and visceral leishmaniasis sera were included in index calculations. Statistical analysis showed that the two tests have a substantial degree of agreement but the immunofluorescent test had a specificity index and a positive predictive value equal to 100.0% when Chagas' disease and visceral leishmaniasis sera were not included in the calculations of the performance index; in this instance, a positive test result equals a disclosure of the disease attribute due to the inexistence of false positive results. The enzyme/ protein ratio of the peroxidase conjugate, resulting in heavy or light-labeled conjugates may pose technical problems to its use in serology tests.

Promastigotas de Leishmania braziliensis braziliensis (MHom/BR/75/M2903) foram cultivadas em meio de Schneider de cultura de drosófilas. Em um tipo de experiência as formas promastigotas já haviam sido previamente adaptadas ao meio por passagens consecutivas enquanto que no segundo as promastigotas foram cultivadas em meio bifásico e depois transferidas para o meio liqüido. O crescimento foi mais abundante nas células já adaptadas ao meio de cultura; células degeneradas e mortas, em pequenos números, estavam presentes desde o dia 5 para promastigotas adaptadas ao meio liqüido e desde o dia 3 para células recentemente adaptadas. A síntese de antígenos de superfície diferiu de acordo com o modo como as células eram cultivadas, como verificado pelo título de 5 soros de leishmaniose mucocutânea. O melhor período para a preparação de antígenos de imunofluorescência foi considerado o dia 5 para promastigotas adaptadas ao meio de cultivo e o dia 3 para células recentemente adaptadas.

Leishmania braziliensis braziliensis(MHOM/BR/75/M2903) was grown in Schneider's Drosophila medium. In one set of experiments promastigotes were already adapted to the medium by means of serial passages whereas in the second cells were grown in a biphasic medium and transfered to the liquid. Growth was more abundant for culture medium adapted cells; degenerate cells in small numbers as well as dead ones were present from day 5 for promastigotes adapted to liquid medium and from day 3 for newly adapted cells. Synthesis of surface antigens differed according to length of cell culture as assessed by the titer of five mucocutaneous leishmaniasis sera on subsequent days. Five days of culture for cells already adapted to the culture medium and 3 days for newly adapted ones were judged to be the best for the preparation of immunofluorescence antigens.

Os Autores descrevem a reação de IgA ELISA na leishmaniose mucocutânea. Títulos acima do normal foram encontrados no primeiro e segundo anos de infecção e em soros de micoses profundas acompanhados por envolvimento mucoso ou doença disseminada.

The Authors describe an anti-Leishmania IgA-ELISA assay in mucocutaneous leishmaniasis. Increased titers were found in leishmaniasis patients, mainly in the first and second year of infection and in deep mycoses patients showing either mucosal involvement or widespread disease.