RESUMO A partir de informações e amostras coletadas em abatedouro, o presente estudo estabeleceu o perfil dos animais condenados por tuberculose em abatedouros do Estado de São Paulo e também caracterizou as suas propriedades de origem. Entre maio de 2002 a janeiro de 2004, foram colhidas 587 amostras de lesões sugestivas de tuberculose em 79 abatedouros bovinos do Estado de São Paulo, das quais foram obtidos 253 isolados de Mycobacterium bovis. Um conjunto de informações sobre as carcaças condenadas acompanhou cada amostra colhida e as propriedades de origem desses animais foram rastreadas e nelas foi aplicado um questionário. A análise dos resultados permitiu concluir que a tuberculose bovina no Estado de São Paulo está mais concentrada em rebanhos de leite com algum grau de tecnificação da produção e que acomete preferencialmente fêmeas leiteiras de raças europeias com idade superior a 36 meses. Além disso, as propriedades foco de tuberculose praticam a introdução e a venda de animais aparentemente sem a realização de testes tuberculínicos, contribuindo para a disseminação da doença.

ABSTRACT Analyzing data and samples collected at abattoirs in the state of São Paulo, Brazil, the present study provided a profile of the tuberculosis condemned bovine and characterized their herds. From May/2002 to January/2004, tuberculosis lesions from 587 animals were sampled in 79 abattoirs, and from these samples a total of 253 Mycobacterium bovis isolates were obtained. The herds of these animals were tracked down and an epidemiological questionnaire was applied. A dataset about the condemned carcasses was attached to each sample. The data analyses showed that bovine tuberculosis in São Paulo state is concentrated in dairy herds with some sophistication of the production system and mostly affects dairy cows of European breeds older than 36 months. Moreover, the owners of infected herds sell animals without testing them for tuberculosis, contributing to the spread of the disease.

RESUMO Desenvolveu-se uma reação de "nested PCR" direcionada para o gene do ectodomínio S1 da glicoproteína S dos coronavírus para a detecção de coronavírus bovino (BCoV) em amostras fecais. Foram desenhados um par de primers externos e um par de primers internos para regiões conservadas flanqueando a região hipervariável do gene S (GenBank accession No. M31053). Os primers externos produziram um fragmento de 885pb (nn 1204 ao 2088 do gene S) e os internos um fragmento de 488bp (nn 1329 ao 1816 do gene S, interno ao produto do primeiro PCR). Temperaturas ótimas de hibridação dos primers foram testadas em um termociclador com gradiente e utilizadas no protocolo final. Os limites de detecção para os primers externos e para o protocolo "nested" final foram testados com a amostra Kakekawa de BCoV diluída em base 2, em uma suspensão de fezes livre de BCoV. O protocolo final de "nested" foi testado em 22 amostras de fezes de bezerros diarréicos e não-diarreicos e em uma amostra de uma vaca com diarréia, resultando em 10 amostras positivas entre fezes diarréicas e não-diarreicas. O nested PCR aqui relatado é uma ferramenta específica e sensível para o diagnóstico de coronavírus bovino.

ABSTRACT A nested PCR targeted to the S1 ectodomain gene of the spike (S) glycoprotein of coronaviruses was developed to detect bovine coronavirus (BCoV) in stool specimens from cattle. One outer and one internal pair of primers were designed to conserved regions surrounding the hypervariable region of the S gene (GenBank accession No. M31053). Outer primers produced an 885bp-long product (nn 1204 to 2088 from S gene) and the internal primers a 488bp-long product (nn 1329 to 1816 from S gene, internal to the first PCR). Optimal annealing temperatures were tested in a gradient thermocycler and used in the final protocols. Outer primers and the final nested protocol detection limits were tested with the BCoV Kakegawa strain diluted two-fold in BCoV-free stool suspension. The nested PCR assay was tested in 22 clinical stool specimens from calves with or without diarrhea and 1 sample from a diarrheic cow, resulting in 10 positive samples both from diarrheic and non-diarrheic individuals. The nested PCR reported here is a specific and sensitive tool for bovine coronavirus diagnosis.

RESUMO Estudou-se a ocorrência dos rotavírus e dos coronavírus em propriedades de criação de gado bovino leiteiro, localizadas em diversos Municípios do Estado de São Paulo, a partir de amostras fecais diarréicas de bezerros, utilizando como provas diagnósticas a eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) e hemaglutinação (HA) / inibição da hemaglutinação (HI), respectivamente para rotavírus e coronavírus. Das 72 amostras amostras fecais, 14% delas apresentaram-se positivas para os rotavírus do sorogrupo A e 39% para coronavírus. Em uma propriedade foram detectadas co-infecções de rotavírus e coronavírus em dois (3%) bezerros. Estes achados confirmaram a participação dos rotavírus e coronavírus na etiologia das diarréias de bezerros na área estudada.

ABSTRACT The occurrence of coronavirus and rotavirus was surveyed using 72 diarrheic stool specimens from calves reared in 12 municipalities of São Paulo State, using haemagglutination (HA) / haemagglutination inhibition (HI) and Polyacrilamide Gel Electrophoresis (PAGE), respectively, for the detection of these agents. An amount of 14% of the samples were positive for serogroup A rotavirus and 39% were positive for Coronavirus. In one farm it was found a rotavirus/ coronavirus co-infection in 2 calves (3%). These results confirmed the participation of rotavirus and coronavirus in the etiology of neonatal calf diarrhea in the surveyed area.

RESUMO Rotavírus é um agente viral de diarréias neonatais de crianças e de animais jovens de várias espécies, principalmente bezerros e leitões. Este estudo teve por objetivo avaliar a ocorrência de anticorpos anti-rotavírus pela técnica da contraimunoeletroosmoforese (CIEOF) em bovinos criados no Estado de São Paulo. Duzentas amostras de soro foram colhidas em 23 fazendas pertencentes a 19 municípios. A soropositividade total encontrada foi de 77,5% e a positividade média por fazenda foi de 76,57 ± 21,73%. Uma vez que não há vacinas anti-rotavírus de uso regular no Brasil, estes resultados demonstram elevada ocorrência de infecções naturais por rotavírus no Estado de São Paulo.

ABSTRACT Rotavirus is a worldwide occurring viral agent of neonatal diarrheas of children and the young of many species, mainly calves and piglets. This survey aimed to evaluate the occurrence of antirotavirus antibodies in cattle raised in São Paulo State by the counterimmunoelectroosmophoresis (CIEOP) test. Two hundred serum samples were collected from 23 farms in 19 counties. The total positivity found was 77.5% and the mean farm-level positivity was 76.57 ± 21.73%. Since there are no regular anti-rotavirus vaccines currently available in Brazil, these results show a high occurrence of rotavirus natural infections in São Paulo State.

RESUMO Um método de ELISA policlonal tipo “duplo-sanduíche” foi desenvolvido para a detecção de rotavírus a partir de material fecal. A amostra NCDV de rotavírus do sorogrupo A foi concentrada por ultracentrifugação utilizando-se um colchão de sacarose a 45% (v/v), e inoculada em coelhos e carneiros. Em seguida, a fração IgG oriunda dos soros dos animais foi purificada por cromatografia de troca iônica e absorvida, utilizando-se polímero de glutaraldeído, de modo a eliminar reações inespecíficas. A presença dos rotavírus foi detectada pela IgG de carneiro e revelada pela IgG de coelho, usando-se IgG de cabra anti-IgG de coelho conjugada à peroxidase. Aplicado a um painel constituído de 86 amostras fecais diarréicas de leitões obteve-se 100% de sensibilidade; 98,79% de especificidade, com uma concordância de 98,83%, tendo como prova padrão a eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). As variâncias entre 86 repetições da mesma amostra foram 0,001 (para a amostra positiva) e 0,0002 (para a amostra negativa). Estes resultados demonstram que este ELISA constitui-se numa alternativa sensível e específica para o diagnóstico de rotavírus a partir de material fecal.

ABSTRACT There was developed a polyclonal “double-sandwich” antibody ELISA method for detection of rotavirus from stool specimens. The NCDV strain of rotavirus group A was concentrated by ultra-centrifugation using a 45% (v/v) saccharose cushion and inoculated in rabbits and sheep. After that, the IgG of serum samples of the animals was purified by ion-exchange chromatography and absorbed with whole serum of both animal species using a glutaraldehyde polymer, in order to eliminate unspecific reactions. The presence of rotavirus was detected by the sheep’s IgG and revealed by the rabbit’s IgG, using an anti-rabbit IgG peroxidase conjugate developed in goats. When applied in population of 86 fecal samples from piglets with diarrhea, the results of the ELISA were: 100% of sensivity; 98.79% of specificity, with an agreement of 98.83%, using as standard the polyacrilamide gel electrophoresis (PAGE) test. The variances between 86 repetitions of the same sample were 0.001 (for one positive sample) and 0.0002 (for one negative sample). These results showed that this ELISA is a sensitive and specific alternative test for rotavirus diagnosis from fecal material.