Resumen Introducción. Los problemas en la cadena de suministro aumentaron los costos de las materias primas y redujeron la disponibilidad de materiales para la producción de agentes de control biológico. Esto puede ejercer mayor presión de enfermedades y menores rendimientos en las granjas. Objetivo. Determinar el efecto de diferentes cantidades de almidón y el uso de ingredientes locales en procesos de fermentación a pequeña y gran escala para Trichoderma harzianum. Materiales y métodos. El estudio se ralizó en San José, Costa Rica, entre 2016 y 2018. Se realizaron ensayos en matraces para investigar la reducción o eliminación de almidón en medios de fermentación comerciales. Se llevaron a cabo ensayos en recipientes de fermentación para evaluar la efectividad de un medio local alternativo, que incluyó tres tratamientos: 1) medio comercial como control, 2) melaza al 10 % y 3) melaza al 10 % con 0,5 % de extracto de levadura. Se realizaron recuentos de esporas viables para determinar las unidades formadoras de colonias (UFC/mL). Resultados. La reducción de almidón al 10 % del medio original no tuvo impacto en las UFC/mL. Sin embargo, la ausencia de almidón resultó en un crecimiento desigual durante la fermentación. La melaza produjo aproximadamente la mitad de las UFC/mL en comparación con el medio comercial, pero superó el umbral de 107 UFC/mL utilizado en estudios para el control biológico de patógenos de plantas. Los resultados obtenidos en un fermentador a escala comercial fueron similares a los de la fermentación a escala piloto. Conclusión. La reducción del contenido de almidón en el medio comercial no afectó al crecimiento, pero la ausencia de almidón provocó acumulaciones sólidas de micelio. El uso de un medio de melaza de origen local a escala comercial parece factible mientras se mantenga un recuento de esporas viables requeridas para su uso en el campo.

Abstract Introduction. Supply chain issues have increased the costs of raw material and reduced the availability of materials for the production of biological control agents. This can result in greater disease pressure and lower yields on farms. Objective. To determine the effect of different amounts of starch and the use of local ingredients in small- and large-scale fermentation processes for Trichoderma harzianum. Materials and methods. The study was conducted in San José, Costa Rica, between 2016 and 2018. Flask experiments were performed to investigate the reduction or elimination of starch in commercial fermentation media. Fermentation vessel trials were conducted to evaluate the effectiveness of an alternative local medium, which included three treatments: 1) commercial medium as a control, 2) 10 % molasses medium, and 3) 10 % molasses with 0.5% yeast extract. Viable spore counts were performed to determine colony-forming units (CFU/mL). Results. Reducing starch to 10 % of the original medium had no impact on CFU/mL. However, the absence of starch resulted in uneven growth during fermentation. Molasses produced approximately half the CFU/mL compared to the commercial medium but exceeded the threshold of 107 CFU/mL used in studies for the biological control of plant pathogens. Results obtained in a commercial-scale fermenter were similar to those of pilot-scale fermentation. Conclusion. Reducing starch content in the commercial medium did not affect growth, but the absence of starch led to solid mycelium clumps. The use of a local molasses-based medium on a commercial scale feasible as long as the required viable spore count for field use is maintained.

Resumen La piña es uno de los principales cultivos de exportación en Costa Rica y la presencia de moho en el pedúnculo afecta su calidad en los mercados internacionales. El objetivo de esta investigación fue determinar en frutos de piña, en la cera aplicada sobre la fruta y en el aire de las cámaras de enfriamiento, la frecuencia de los principales hongos asociados al desarrollo de mohos en el pedúnculo. Se realizó un muestreo mensual de abril de 2012 a marzo de 2013 en empacadoras de Sarapiquí y Puntarenas, Costa Rica. En cada empacadora se muestreó: frutos luego del proceso-comercial que se realiza para exportación y almacenamiento, la cera aplicada sobre la superficie de las frutas y el aire de las cámaras de enfriamiento. Se realizó un análisis de frecuencia de los principales hongos recuperados por muestreo en cada zona, para la cáscara y el pedúnculo, la cera y el aire. Además, se comparó el crecimiento in vitro a 18°C de los hongos más frecuentes al finalizar los muestreos. El hongo más frecuente en las cámaras de enfriamiento, el pedúnculo y la cáscara de ambas zonas y en la cera de Sarapiquí fue Penicillium diversum, con valores entre 7% y 100%. Mientras que en la cera de Puntarenas únicamente destacó la presencia de un grupo de hongos de micelio blanco. P. purpureogenum, Penicillium sp., Talaromyces calidicanius y Cladosporium sp., fueron microorganismos también recuperados con alta frecuencia tanto en la fruta como en el aire de las cámaras de enfriamiento de ambas empacadoras. P. purpureogenum, P. diversum y T. calidicanius fueron las especies con mayor crecimiento in vitro. Se concluyó que el manejo integrado de P. diversum, P. purpureogenum y T. calidicanius es necesario si se desea evitar el desarrollo de moho en el pedúnculo de la piña.

Abstract Pineapples are one of the top fruits exported from Costa Rica and its quality is affected by molds in the pedunculus at international markets. The objective of this research was to determine in pineapple fruits in the wax applied to the surface of fruits and in the air of cooling rooms, the frequency of the main fungi associated with the development of the molds in the pedunculus. From April 2012 to March 2013 monthly sampling was carried out in 2 packing houses in Sarapiquí and Puntarenas, Costa Rica. In each packing house, fruits were sampled after commercial processing for export and storage and the applied wax on the surface of the fruits and the air of the cooling rooms was sampled too. An analysis of the frequency of the main fungi recovered by the sampling in each zone for the peel and peduncle, the wax and the air was done. Also, it was compared the in vitro growth at 18ºC of the most frequent fungi at the end of the samplings. The most frequent fungi in cooling rooms, peduncle, peel from both zones and in the wax of Sarapiquí was Penicillium diversum showing the highest frequency, with values between 7% and 100%. While in the wax of Puntarenas, only the presence of a group of white mycelium fungi highlighted. P. purpureogenum, Penicillium sp., Talaromyces calidicanius and Cladosporium sp., were microorganisms also recovered with high frequency both in fruit and in the air of the cooling rooms of the both packing houses. P. purpureogenum, P. diversum and T. calidicanius were the species with the higher growth in vitro. It was concluded that the integrated management of P. purpureogenum, P. diversum and T. calidicanius is necessary if development of pineapple molds is to be avoided in the pedunculus.

ResumenEl desarrollo de mohos en el pedúnculo de la piña de Costa Rica, es uno de los problemas poscosecha más importantes que conlleva al rechazo de la fruta en el mercado destino. El objetivo de esta investigación fue evaluar las poblaciones de los hongos causantes de mohos en el pedúnculo de la piña, en diferentes fases de procesamiento poscosecha, mediante muestreos mensuales durante un año de producción en 2 zonas. Además, se realizó la identificación morfológica y molecular de los hongos más frecuentes. Se cuantificó, in vitro, el número de unidades formadoras de colonias (UFC) en el agua de desinfección, la cera, el aire de las cámaras de almacenamiento y en el pedúnculo y la cáscara de la fruta, sin procesar (SP) y procesada (P) con los tratamientos comerciales de las fincas. Además, se evaluó la incidencia y severidad de moho en el pedúnculo. Hubo variaciones en las poblaciones de hongos en todas las fases de procesamiento y en la fruta, con valores más altos en la cera que en el agua de desinfección. En el pedúnculo de fruta SP se obtuvo poblaciones más altas que en fruta P, lo cual coincidió con mayores porcentajes de moho al finalizar el almacenamiento. En las cámaras de enfriamiento también se recuperó esporas de hongos, que podrían ser una fuente de inóculo para el desarrollo de moho. Los principales hongos identificados fueron Penicillium purpureogenum, P. diversum y Penicillium sp., los cuales presentaron alta esporulación in vitro y crecimiento en el pedúnculo. Además en diferentes puntos del proceso como el encerado y el enfriamiento, en los que se capturaron esporas, la fruta podría ser contaminada, por lo que se considera importante la adecuada limpieza de las cámaras de enfriamiento, así como evitar que la cera acumule poblaciones importantes de microorganismos.

AbstractPineapple peduncle mold is an important postharvest problem in Costa Rica and it causes fruit rejection. The objective of this study was to identify and quantify the most important fungi in different postharvest phases. Monthly samplings were performed during one production year in 2 regions of Costa Rica. The main genera of fungi were identified and characterized at the molecular level. The colony forming units (CFU) were determined in disinfection water, wax, cooling rooms air and in the peel and peduncle of fruits before (NP) and after (P) processing with the common postharvest treatments of the farms. Fruits were stored in cooling rooms during 22 days and at the end incidence and severity of peduncle molds were evaluated. During the year, changes in fungi populations were observed in all postharvest phases and in the fruits, with higher populations in wax than in disinfection water. Fungi population and molds were higher in the peduncle of NP fruits as compared with P fruits, coincident with larger mold populations at the end of storage. Fungi recovered in the cooling rooms air could also be a source for peduncle molds development. Penicillium purpureogenum, P. diversum and Penicllium sp., were the main fungi identified, with an in vitro high sporulation rate and growing in the peduncle. Moreover, different commercial practices, such as waxing and cooling, where spores were captured, can enhance the peduncle molds development, so it is considered important the cleaning of cooling rooms, as well as developing mechanisms to avoid accumulation in wax of important populations of microorganisms.