Extractos alcohólicos, hexánicos y diclorometánicos de 751 muestras de artrópodos fueron estudiados por la presencia de actividad antimalárica. En este trabajo se empleó un modelo murino usando el Plasmodium berghei, modelo que es biológicamente similar a la malaria humana. El estudio fue realizado determinando el efecto del extracto sobre el parásito por la inclusión o no del colorante azul de cresil brillante. Estimando como positivos aquellos extractos cuya actividad antimalárica se mostró en concentraciones no mayores de 50 mg, se encontró que los órdenes más promisorios fueron Lepidoptera (24.1%), Polydesmida (81.3%), Blattodea (25%) y Opiliones, entre otros. Las formas inmaduras de Lepidoptera fueron las más positivas, por lo que se analizaron las plantas hospederos de donde se alimentaban dichos organismos. Las familias de estas plantas eran Malvaceae, Acanthaceae, Rutaceae, Myrtaceae, Solanaceae, Fabaceae, Urticaceae, Anacardiaceae, Rosaceae, Asteraceae, Rubiaceae, Lauraceae y Caprifoliaceae. Especies de casi todas estas familias han sido reportadas con actividad antimalárica. En el caso de los órdenes Polydesmida, Opiliones y Blattodea, cuyas formas adultas presentaron alguna actividad contra P. berghei, encontramos que todos esos grupos se alimentan también de plantas. En el caso de Opiliones sus especies son predadores de lepidópteros, coleópteros, hemípteros fitófagos y otros artrópodos, además de que producen sustancias de defensas tales como alcoholes, cetonas y quinonas, entre otros, todo lo cual podría explicar la actividad encontrada. Algunas especies del Orden Polydesmida, también secretan ciertas sustancias químicas, las cuales podrían tener un efecto antiparasitario. Así, a través de este trabajo en artrópodos hemos llegado a identificar fuentes vegetales potenciales para componentes antimaláricos.

Natural concentration of antimalaric components in Tropical arthropods (in vitro). Alcohol, hexane and dichlorometane extracts of 751 samples of Costa Rican arthropods were studied for the presence of antimalaric components. With Plasmodium berghei we set an in vitro model in which the effect of the extract was determined by staining of the parasites with cresil brilliant blue. Active extracts at concentration of 50 mg or less, were considered positive. Promissory extracts were found in the orders Lepidoptera (24.1%), Coleoptera (32.8%), Hemiptera (38.5%) and Polydesmida (81.3%). Since most of the Lepidoptera samples were in the immature stages, the relation with the host plant was analyzed. Cannaceae, Flacourtiaceae, Crisobalanaceae, Lauraceae, Fagaceae, Ulmaceae, Rosaceae, Asteraceae, Rubiaceae, Lauraceae and Caprifoliaceae were related with the Lepidoptera larvae, and an antimalaric effect has been reported in most of these families. In the orders Polydesmida, Opiliones and Blattodea, the extract from adults also had some important effect, probably because all of them fed on plants. Polydesmida and Opiliones have chemical substances that probably serve as defensive purposes; these chemicals could also have some antiparasitic effect. Therefore, the detection of antimalaric components in arthropod species led to the identification of plants with promissory antimalaric components. Rev. Biol. Trop. 56 (2): 473-485. Epub 2008 June 30.

Previamente se había identificado un extracto crudo a partir de Chamaecrista nictitans (Fabaceae)con actividad antiviral contra el virus herpes simplex.Los objetivos de esta investigación fueron determinar el paso en el ciclo de replicación del herpes simplex inhibidos por el extracto y caracterizar la naturaleza química de dicho extracto.El extracto crudo de la planta se obtuvo con una mezcla de diclorometano/metanol y fraccionado,utilizando la guía de un bioensayo,mediante cromatografía preparativa de capa fina y cromatografía en columna.Los ensayos se llevaron a cabo en monocapas de células Vero.La actividad antiviral exhibida por el extracto fue determinada mediante la inhibición total del efecto citopático después de tres días de incubación.La concentración máxima de la fracción positiva que no presentó citotoxicidad fue 200 µg/ml.Se utilizaron técnicas inmunoquímicas y de inmunofluorescencia para elucidar el mecanismo antiviral ejercido por el extracto; con este propósito,se infectaron células Vero con el virus herpes simplex y se determinó la producción de proteínas virales a diferentes tiempos después de la infección.Se detectó la producción de una proteína de aproximadamente 60 kDa a las 2 hr y 8 hr luego de la infección;sin embargo no se detectó producción de ningún tipo de proteína tardía, hecho correlacionado con la ausencia de efecto citopático a las 24 hr.Este resultado indica que el extracto actúa intracelularmente siendo capaz de inhibir la transcripción secundaria.Sin embargo,el extracto permite la transcripción y traducción de proteínas tempranas.Estos resultados fueron confirmados mediante inmunofluorescencia.En células control no tratadas con el extracto,se observó una fuerte señal fluorescente acompañada de la aparición del efecto citopático característico 24 hr después de la infección con el virus herpes simplex.Por el contrario,células en presencia de acyclovir o del extracto desarrollaron un patrón muy discreto de inmunofluorescencia sin presencia de efecto citopático.Se realizaron adicionalmente ensayos de neutralización utilizando preincubaciones con un antisuero específico contra herpes simplex 1,200 µg/ml del extracto o 20 µg/ml de acyclovir.Solamente el virus tratado con acyclovir fue capaz de producir un efecto citopático,mientras que el extracto inhibió el virus y no se detectó efecto citopático. Se concluye que el extracto inhibe la adherencia inicial del virus a las células y los eventos de transcripción secundaria del virus.La caracterización química del extracto demostró la presencia de taninos en el mismo.

We have previously identified a crude extract of the plant Chamaecrista nictitans (Fabaceae)with antiviral activity against herpes simplex virus.The main objectives of this research were to identify the step of the replication cycle of herpes simplex inhibited by the extract,and to attempt to characterize the chemical characteristics of this extract.The crude extract from Chamaecrista nictitans (Fabaceae)was extracted with a mixture of diclorometane/methanol,and further fractionated following a bioassay-guided protocol using a combination of preparative thin layer and column chromatography.Toxicity and bioassay experiments were carried out in monolayers of Vero cells.The antiviral activity of the extract was assessed by total inhibition of cytopathic effect after three-day incubation.The highest concentration of the extract which was not toxic to the cells was 200 mu g/ml. Western blot and immunofluorescence techniques were used to elucidate the antiviral mechanism of the extract by infecting Vero cells with the virus at different times and monitoring the synthesis of viral proteins.A 60 kDa protein was detected at 2 hr and 8 hr post-infection but no additional proteins were synthesized at later time intervals,and cytopathic effect was not observed after 24 hr.This result indicates that the extract acts at the intracellular level in order to inhibit late transcription.However,it does not inhibit transcription/translation of early viral proteins.These results were confirmed by immunofluorescence experiments.A strong fluorescent signal was observed in control cell monolayers at 24 hr post infection,accompanied with a clear cytopathic effect.In contrast,in the presence of acyclovir or the extract,cells showed very discrete immunofluorescence,characterized by a punctuated pattern, and no cytopathic effect was observed.Neutralization assays were performed using pre-incubation of virus with either specific herpes simplex-1 antiserum,200 mu g/ml of the extract or 20 mu g /ml of acyclovir.After 1 hr incubation,cells were infected and monitored for cytopathic effect.Only the virus treated with acyclovir showed viral activity,while no cytopathic effect was induced by samples of virus incubated with the extract.It is concluded that the extract inhibits both the attachment of the virus to the cell and the secondary transcription of the virus within the cells.Chemical characterization of the extract showed the presence of tannins.Rev.Biol.Trop.52(3):807-816. Epub 2004 Dic 15.