RESUMO A raça tropicalmente adaptada Curraleiro Pé Duro (CPD) possui grande rusticidade e capacidade de produção. A técnica de criopreservação de células somáticas permite estocar, por tempo indeterminado, o material genético. O objetivo deste trabalho é avaliar a viabilidade de fibroblastos, pós-criopreservação, em protocolos diferentes. Foi utilizada uma biópsia auricular de um bovino CPD, que passou por antissepsia e anestesia local. Posteriormente o material foi processado e incubado para ser observado quanto à confluência e à morfologia. Em seguida, os fibroblastos foram criopreservados em três tratamentos (T1, T2 e T3). Após serem criopreservados, foram descongelados e analisados quanto à viabilidade celular, à capacidade de crescimento e à morfologia. Na análise de variância e das médias, foram comparados pelo teste de Tukey com significância de 5%. Não foram observadas, nos protocolos, diferenças estatísticas entre a viabilidade celular (T1 = 67,98%, T2 = 71,42% e T3 = 69,93%), a capacidade de confluência (T1 = 80%, T2 = 90%, T3 = 85%) ou a passagem de origem das células. A criopreservação de fibroblastos auriculares de bovinos CPD não mostrou diferença entre os três métodos, sugerindo até que o método que demanda equipamentos menos especializados (T1) é tão eficiente quanto os demais.

RESUMO O colostro é a principal fonte de imunoglobulinas (Ig) para leitões recém-nascidos e desempenha um papel crucial na saúde e no crescimento dos leitões. Atualmente, na suinocultura, ainda não existem métodos amplamente utilizados na prática de produção para medir a concentração de imunoglobulinas no colostro suíno. Avaliou-se a concentração de IgG no colostro de porcas usando refratômetros Brix óptico e digital, e o desempenho foi comparado com ELISA e citometria de fluxo. As concentrações de IgG e IgA no colostro foram 74,05 ± 21,37mg/mL e 20,2 ± 5,32mg/mL, respectivamente. A percentagem de Brix média das amostras de colostro para o refratômetro óptico foi 26,32%, e para o digital foi 28,32%. As medições dos refratômetros de Brix apresentaram elevada correlação com a concentrações de IgG medidas por ELISA (óptico=0,74, digital=0,87; P<0,001). Considerando a imunofenotipagem, os valores dos linfoblastos IgG e IgA apresentaram alta correlação com o ELISA (IgG=0,77, IgA=0,84; P<0,001). O refratômetro Brix pode ser considerado uma ferramenta útil para ser incluída em um programa de monitoramento de colostro para melhorar a saúde neonatal. Além disso, foi demonstrado que a citometria de fluxo pode ser uma ferramenta importante para analisar e caracterizar o potencial imunológico do colostro de porcas.

ABSTRACT Colostrum is the main source of immunoglobulins (Ig) for neonate piglets and plays a crucial role within the health and growth of the piglet. Currently in pig farming, there are still no widespread practical methods for measuring the Ig concentration in colostrum at herd level. We evaluated sows’ colostrum IgG concentration using an optical and a digital Brix refractometer and their performance was correlated to an IgG ELISA test, and flow cytometry. Colostrum concentrations of IgG and IgA averaged 74.05 ± 21.37mg/mL and 20.2 ± 5.32mg/mL respectively. The mean value of the Brix percentages for optical refractometer was 26.32%, and for digital was 28.32%. The Brix refractometer measurements of colostrum samples presented high correlation for IgG content analyzed by ELISA (Optical = 0.74, Digital = 0.87; P <0.001). Considering the immunophenotyping, the values for IgG and IgA lymphoblasts indicated a highly significant relationship to ELISA (IgG=0.77, IgA=0.84; P<0.001). The Brix refractometer can be considered a useful tool to be included in a colostrum monitoring program to improve potentially neonatal health. In addition, we demonstrated that flow cytometry can be an important tool to analyze and characterize the immunological potential of sow colostrum.

RESUMO O presente estudo avaliou o efeito da suplementação com OmniGen-AF® na proliferação de linfócitos e títulos de anticorpos após vacinação em bovinos leiteiros. Amostras de sangue periférico foram coletadas de 32 vacas leiteiras para quantificação dos títulos de anticorpos anti-Leptospira, e amostras de sangue periférico de 16 vacas leiteiras foram também coletadas para avaliação da proliferação de linfócitos. Observou-se que a suplementação com OmniGen-AF® aumentou a proliferação basal de linfócitos (sem estímulos) 21 dias após a vacinação (P=0,03), apesar de reduzir a proliferação de linfócitos B quando estimulada com Leptospira borgpetersenii serovar Hardjo inativada pelo calor (P=0,03). Ademais, nenhum efeito da suplementação sobre a proliferação de linfócitos no momento imediatamente anterior à vacinação e nos títulos de anticorpos anti-Leptospira foi encontrado. Além disso, a proliferação de linfócitos estimulada com lipopolissacarídeos foi maior em vacas multíparas que em primíparas 21 dias após a vacinação (P=0,03). Desse modo, o presente estudo demonstra que a suplementação com OmniGen-AF® não afetou de forma robusta a proliferação de linfócitos e os títulos de anticorpos anti-Leptospira após vacinação em vacas leiteiras sadias.

ABSTRACT This study aimed to evaluate the neutrophil oxidative metabolism and phagocytosis of Zymonsan particles of primiparous and pluriparous Lacaune ewes during the first 30 days after lambing. A total of 20 ewes were evaluated, 10 primiparous (GPR) and 10 pluriparous (GPL). Evaluation of basal oxidative metabolism was performed using the nitroblue tetrazolium (NBT) technique, stimulating neutrophil phagocytosis with Zymosan particles. Blood samples were collected at parturition day (M1) and 1, 3, 7, 15 and 30 days after parturition, corresponding to M2, M3, M4, M5 and M6, respectively. In relation to the groups, GPR presented lower oxidative basal metabolism neutrophils in M1 compared to M4, in M3 with M1, M2, M4 and M5. In M4 and M5 differences were found at all times and in M6 with M4 and M5. Higher percentage of neutrophils than phagocytes were found in M4, M5 and M6 than in M1 and M2 in GPL animals. At all times GPR presented a lower percentage of phagocytosis than GPL. Thus it is concluded that the immune response in pluriparous sheep was more efficient than in primiparous sheep.

RESUMO O objetivo deste trabalho foi avaliar a recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, utilizando as técnicas de fluxo retrógrado (FR) e flutuação (FL) em diluidor Tris-gema, antes e após a criopreservação. Foram coletados 30 complexos testículo-epididímos (CTE), sendo 15 para FR e 15 para FL, e, logo após a recuperação dos espermatozoides, foram analisadas as alterações morfológicas nessas células espermáticas. Após a adição do diluidor, foram avaliados os parâmetros de motilidade total (MOT) e vigor (V) espermáticos. O sêmen pós-criopreservado foi submetido ao teste de termorresistência nos tempos T0, T30, T60 e T90 minutos, além da avaliação das membranas plasmática e acrossomal por sondas fluorescentes. Não houve diferença estatística entre as técnicas quanto à MOT e ao vigor no sêmen diluído (FR-MOT: 82,3% e V: 3,4; FL-MOT: 79,6% e V: 3,2) e pós-criopreservado (FR-MOT: 34% e V: 2,8; FL-MOT: 30% e V: 2,7). A partir do T30, houve diferença significativa quanto à MOT e ao vigor nas técnicas utilizadas, e o tempo também prejudicou o acrossoma espermático a partir do T30. Conclui-se que as técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, testadas neste trabalho, podem ser utilizadas para refrigeração e criopreservação de sêmen.

ABSTRACT The objective of this work was to evaluate the recovery of epididymal spermatozoa from castrated dogs using retrograde flow (FL) and flotation (FL) techniques in Tris-egg yolk diluent, before and after cryopreservation. Thirty testicle-epididymal complexes (CTE) were collected, 15 for FR and 15 for FL and soon after spermatozoid recovery, morphological changes in these spermatic cells were analyzed. After addition of the diluent, the parameters of total motility (MOT) and vigor (V) were evaluated. The post-cryopreserved semen was submitted to thermoresistance (TTR) test at T0, T30, T60 and T90 minutes, as well as the plasma and acrosomal membrane evaluation by fluorescent probes. There was no statistically significant difference between techniques tested for MOT and vigor in the diluted semen (FR-MOT: 82.3% and V: 3.4, FL-MOT: 79.6% and V: 3.2) and post-cryopreserved (FR-MOT: 34% and V: 2.8, FL-MOT: 30% and V: 2.7). From the T30 there was a significant difference regarding MOT and vigor in the used techniques, and the time also damaged the spermatic acrosome from the T30. It is concluded that the epididymal spermatozoa recovering techniques from castrated dogs, tested in this study, can be used for semen refrigeration and cryopreservation.

ABSTRACT This study aimed to evaluate the viability of using a non-invasive digital monitor to monitor heart rate (HR) and motility during the embryonic development of Pantanal alligator (Caiman yacare) using Egg Buddy ® , at different incubation temperatures. The collection of the eggs followed the Ranching system and egg identification, transportation, and incubation were performed with the required care; all eggs were incubated with 90% humidity at 29°C for the first 45 days. Thereafter, the incubation temperature was either maintained at 29°C, increased to 33°C or maintained at 29°C and embryos simultaneously treated with 4-aminopyridine on days 46, 47, 48, and 49 (29°C-4AP). Embryo movement was measured with a digital non-invasive monitor on days 30, 35, 42, 49, 56, and 60, at which point embryos were sacrificed. In the statistical analysis no differences were observed between the groups for the temperature (33°C and 29°C); for motility, a difference was observed at day 49 for the 29°C-4AP group. This revealed that the non-invasive evaluation method can be used to verify embryonic motility and HR effectively in Caiman yacare embryos.

RESUMO O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de estafilococos não aureus (NAS) isolados de diferentes nichos ecológicos (leite, ambiente e ápice do teto), associados a vacas leiteiras, de inibir os principais agentes etiológicos da mastite bovina (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis e Escherichia coli). Neste estudo, 38 isolados NAS de diferentes nichos ecológicos foram avaliados quanto à capacidade de inibir o crescimento in vitro de importantes patógenos causadores de mastite pelo método cross-streaking. No total, 19 (50%) isolados de NAS (oito isolados de S. chromogenes, 10 de S. fleurettii e um de S. haemolyticus) apresentaram inibição contra os principais patógenos causadores de mastite. No entanto, a inibição dos patógenos causadores da mastite bovina por isolados de NAS foi maior contra bactérias Gram-positivas. Além disso, o presente estudo não sugeriu que os nichos ecológicos influenciam a capacidade do NAS de inibir os principais patógenos causadores da mastite bovina. Com base nesses resultados, concluiu-se que certos isolados de NAS apresentam potencial efeito protetor contra os principais patógenos da mastite, pelo menos in vitro.

RESUMO Avaliou-se a influência das condições climáticas em regiões tropicais, bem como do treinamento e da implementação de boas práticas de manejo na produção e qualidade do leite em distintos períodos em fazendas leiteiras no estado de Minas Gerais, Brasil. No presente estudo, as características físico-químicas do leite, a contagem bacteriana total (CBT) e a contagem de células somáticas (CCS) foram determinadas em 3.096 amostras de tanques de leite proveniente de 43 fazendas leiteiras, durante um período de três anos, e correlacionadas com os principais fatores climáticos (temperatura diária do ar mínima, média e máxima; pluviosidade e umidade relativa). Foram avaliados os resultados obtidos nas análises das amostras de leite cru coletadas no ano anterior (2009/2010) e também no posterior (2011/2012) àquele em que foi realizado o treinamento para implementação das boas práticas de manejo de ordenha (2010/2011), compreendendo três etapas: antes do treinamento (período seco - tempo 0, etapa I), 48 dias após o treinamento (período de transição - etapa II) e 96 dias após o treinamento (período chuvoso - etapa III). Na etapa I foi realizado um diagnóstico de situação com coleta de amostras para análises laboratoriais, aplicação da lista de verificação padronizada e treinamento para a implementação das boas práticas de manejo de ordenha; na etapa II foram realizadas novas análises laboratoriais e reaplicação da lista de verificação para avaliar a eficiência do treinamento; e na etapa III foi realizada a repetição da etapa II. Com base no histórico dos três anos, observou-se que condições climáticas de alta temperatura e pluviosidade representam importantes fatores que afetam a composição do leite e o volume produzido, assim como parâmetros higiênico-sanitários do leite. Ademais, as boas condições de manejo são ferramentas úteis, eficazes, práticas e essenciais para a maior produção de leite com qualidade, desde que constantemente monitoradas.

ABSTRACT The influence of seasonality and the training and implementation of good dairy farming practices on raw milk production and quality was evaluated on dairy farms in Minas Gerais State, Brazil. The physico-chemical composition, somatic cell count (SCC) and total bacterial count (TBC) were determined in 3,096 milk samples collected from bulk tanks originated from 43 dairy farms over a three-year period and correlated with key climatic factors. The recommended milking management practices were applied through a training program and correlated with the seasonal data in three stages: I) prior to training (dry period); II) 48 days after the training (transition period); III) 96 days after the training (rainy period). In the first stage, a diagnosis of the situation was performed with raw milk samplings for laboratory analysis, and training for implementation of good milking practices. In stages II and II, the checklist and laboratory analysis were also performed. The rainfall and high temperatures were found to represent the main factors affecting the milk composition and production, and TBC. The composition and physical properties of raw milk, and the TBC and SCC parameters can be controlled or minimized by applying proper milking management practices and constant monitoring.

RESUMO Setecentos e nove casos clínicos de mastite foram analisados e tratados com combinação antimicrobiana à base de cefalexina-neomicina e o anti-inflamatório prednisolona. Uma amostra de leite foi coletada para realização de cultura microbiológica antes do início do tratamento e 14 dias depois. A contagem de células somáticas (SCC) foi obtida de amostras coletadas no dia do caso clínico (D0), 14 dias após (D14) e 28 dias após (D28). Do total, 435 (61,4%) no D0 apresentaram crescimento de microrganismos, enquanto em 274 (38,6%) não houve crescimento. Dos agentes isolados, 365 (84%) eram Gram-positivos e 66 (16%) eram Gram-negativos. A cura clínica foi alcançada em 63% dos casos. A cura bacteriológica ocorreu em 75% dos casos. Apenas no D28 verificou-se uma redução significativa na SCC. A regressão logística para a cura clínica mostrou efeitos significativos para dias em lactação e paridade (P<0,05). Para a cura bacteriológica, houve efeitos significativos de Log (SCC) D0; cura clínica e quarto afetado (P<0,05). Na análise do componente principal, o índice de temperatura-umidade foi associado com a redução da cura clínica dos casos clínicos da mastite.

ABSTRACT 709 clinical mastitis cases were analyzed and treated with antimicrobial combination cephalexin-neomycin and the anti-inflammatory prednisolone. A sample of milk was collected to perform a microbiological culture before starting the treatment and 14 days later. Somatic cell count (SCC) was obtained from samples collected on the day of the clinical case (D0), 14 days after (D14) and 28 days after (D28). Of the total, 435 (61.4%) at the D0 exhibited growth of microorganisms. Of the isolated agents, 365 (84%) were Gram-positive, and 66 (16%) were Gram-negative. A clinical cure was achieved in 63% of cases. Bacteriological cure occurred in 75% of cases. Only at D28 after the clinical case a significant SCC reduction was verified. The logistic regression for clinical cure showed significant effects for days in milk and parity (P< 0.05). For bacteriological cure, there were significant effects of Log (SCC) D0; clinical cure and quarter affected (P< 0.05). In the principal component analysis, the Temperature-Humidity Index was associated with reduced clinical cure of clinical mastitis cases.

RESUMO O presente estudo objetivou avaliar o perfil das Ig durante os diferentes tratamentos de vacas com mastite clínica. Para isso, 30 vacas com mastite clínica em um quarto mamário foram utilizadas e divididas em três grupos. O primeiro grupo foi composto por 10 animais submetidos ao tratamento combinado com infusão intramamária de 8,5mg de sulfato de cefquinoma após cada ordenha, totalizando três aplicações e administração intramuscular de 2,5mg/kg de enrofloxacina por três dias. O segundo grupo foi composto por 10 animais submetidos ao tratamento intramamário, com infusão intramamária de 8,5mg de sulfato de cefquinoma, após cada ordenha, totalizando três aplicações. O terceiro grupo foi composto por 10 animais submetidos ao tratamento sistêmico, com 2,5mg/kg de enrofloxacina, durante três dias. As amostras de leite foram coletadas de todos os animais antes dos tratamentos (momento 0), no segundo (momento 1), no quinto (momento 2) e no 12º dia (momento 3) após o término dos tratamentos. Estas foram submetidas à contagem de células somáticas, ao California Mastitis Test (CMT), ao exame bacteriológico e à quantificação das IgG1, IgG2, IgA e IgM. O tratamento combinado foi mais eficaz e precoce na taxa de cura clínica, na redução dos escores de CMT e da contagem de células somáticas. Além disso, os resultados do presente estudo demonstraram que as concentrações lácteas das diferentes classes de Ig, apesar de sua importância biológica, não estão relacionadas ao prognóstico da mastite clínica bovina, ou seja, não podem ser consideradas marcadores robustos associados à cura clínica e/ou bacteriológica da infecção intramamária.

ABSTRACT The present study aimed to evaluate the profile of immunoglobins profile, clinical and bacteriological cure after different treatment routes of clinical bovine mastitis. Here, 30 Holstein cows with clinical mastitis in one quarter were uniformly divided into: 10 dairy cows that received 8.5mg of cefquinome sulphate administrated intramammarily during three consecutive milkings and 2.5mg/kg of enrofloxacin administrated parenterally during three consecutive days (Group 1); 10 dairy cows that received 8.5mg of cefquinome sulphate administrated intramammarily during three consecutive milkings (Group 2); and 10 dairy cows that received 2.5mg/kg of enrofloxacin administrated parenterally during three consecutive days (Group 3). Milk samples for somatic cell count, California Mastitis Test (CMT), bacteriological culture and quantification of IgG1, IgG2, IgM and IgA were collected before antimicrobial treatment, and after two, five and 12 days after the antimicrobial treatment. The combined treatment was more effective in the clinical cure rate, reduction of somatic cell count and CMT scores. Furthermore, the results demonstrated that milk concentration of different Igs classes were not related to prognosis of bovine clinical mastitis, and then cannot be considered as robust markers associated with clinical and bacteriological cures.

RESUMO O presente estudo identificou potenciais marcadores sanguíneos associados tanto à mastite, durante o período de transição em vacas leiteiras submetidas à antimicrobianoterapia, quanto à utilização do selante interno de teto na secagem por modelo de regressão logística. Trinta e quatro vacas da raça Holandesa foram divididas em três grupos experimentais, a saber: 13 animais (42 quartos mamários) que não receberam tratamento na secagem; 10 animais (40 quartos mamários) tratados por via intramamária com uma bisnaga do antimicrobiano para vaca seca à base de cefalônio anidro após a última ordenha em cada quarto mamário; e 11 animais (44 quartos mamários) que receberam, por via intramamária, uma bisnaga de selante à base de subnitrato de bismuto após a última ordenha em cada quarto mamário. As amostras de leite e sangue foram coletadas 60 dias antes da data prevista do parto, na secagem, e no dia do parto e após três, sete, 15 e 21 dias após o parto. As amostras de leite foram utilizadas para o exame microbiológico e a determinação da contagem de células somáticas. As amostras de sangue foram utilizadas para determinação do eritrograma, leucograma, fibrinogênio plasmático, funções hepáticas e renais, perfil metabólico, proteína total e albuminas séricas e concentração sérica de cálcio e fósforo. A concentração total de proteínas séricas foi associada à alta contagem de células somáticas. Similarmente, a concentração total de proteínas séricas e triglicérides foi associada ao isolamento de patógenos causadores de mastite nas amostras de leite durante o período de transição. Desse modo, conclui-se que vacas leiteiras com concentrações séricas maiores de proteína total e triglicérides têm maior chance de apresentar mastite durante o período de transição; em contraste, o uso da antimicrobianoterapia de vaca seca reduz esse risco.

ABSTRACT This study identified potential blood markers associated with mastitis in dairy cows under different dry therapies during the transition period, using a logistic regression model. Thirty-four Holstein dairy cows were divided into three groups: untreated controls (13 cows, 42 quarters); animals that received an antimicrobial at drying-off (10 cows, 40 quarters); and animals that were administered an internal teat sealant at drying-off (11 cow, 44 quarters). Blood and quarter milk samples were collected 60 days before the expected day of calving, on the day of calving, and three, seven, 15, 21, and 30 days after calving. Milk samples were submitted for bacteriological analysis and somatic cell count. Blood samples were collected for analyses of the following: the erythrogram and leucogram; plasm fibrinogen concentration; hepatic and renal functions; metabolic profile; serum calcium and phosphorous levels; total serum protein and albumin concentrations. The concentration of total serum proteins was associated with a high somatic cell count. Similarly, the concentrations of total serum proteins and triglycerides were associated to milk bacteriological positive samples during the transition period. Thus, the occurrence of mastitis in dairy cows during the transition period was greater in animals that showed higher concentrations of serum total proteins and triglycerides, in contrast to the use of dry cow therapy.

RESUMO O objetivo do presente estudo foi avaliar a associação das frações proteicas individuais e de outros componentes do leite com o tamanho das micelas de caseína (TMC) e a produção de matéria seca de queijo (MSQ) utilizando-se análise fatorial. Foram coletadas 140 amostras de leite de tanque provenientes de diferentes fazendas. A determinação da composição do leite foi determinada por espectroscopia no infravermelho com transformação de Fourier. As proteínas individuais (αS-caseína, β-caseína, κ-caseína, β-lactoglobulina e α-lactalbumina) foram quantificadas pelo perfil eletroforético. O tamanho médio das micelas de caseína foi analisado pelo princípio de espectroscopia de correlação de fótons e pela produção MSQ a partir do modelo de coagulação do leite em escala reduzida. A análise fatorial delimitou as variáveis em três fatores, que, juntos, responderam por 68,3% da variação total dos dados. No primeiro fator foram observadas as associações mais fortes com o TMC, enquanto no segundo fator as correlações foram mais significativas com a MSQ. O TMC foi associado positivamente com o conteúdo de proteína, caseína, sólidos desengordurados e αS-caseína, e negativamente com κ-caseína e β-lactoglubulina. MSQ foi associada positivamente com o teor gordura, proteína e caseína total, sólidos totais, e negativamente com o teor de αs-caseína. Esses resultados indicam que a variação quantitativa das proteínas do leite pode ser determinante da qualidade do leite na produção de queijo.

ABSTRACT The present study attempted to identify individual milk proteins and other milk components that are associated with casein micelle size (CMS) and dry matter cheese yield (DMCY) using factor analysis. Here, we used 140 bulk tank milk samples from different farms. Milk composition was determined using a Fourier transform infrared equipament. The individual milk proteins were (αS-casein, β-casein, κ-casein, β-lactoglobulin and α-lactoalbumin) measured by their electrophoretic profile. The CMS was estimated by photon correlation spectroscopy, and the DMCY was determined using reduced laboratory-scale cheese production. Factor analysis partitioned the milk components into three groups that, taken together, explain 68.3% of the total variance. The first factor was defined as “CMS”, while the second as “DMCY” factor, based on their high loadings. The CMS was positively correlated with protein, casein, non-fat solids and αS-casein and negatively associated with κ-casein and β-lactoglubulin. DMCY was positively correlated with fat, protein, casein, total solids and negatively correlated with αs-casein. These results indicate that the variation of individual milk proteins may be an important aspect correlated to milk quality and cheese production.

RESUMO A criopreservação é parcialmente prejudicial à fertilidade do sêmen de bovinos e induz mudanças semelhantes à capacitação em espermatozoides. O plasma seminal contém serina-proteases e inibidores de serina-proteases que estão envolvidos na fertilização de mamíferos, e os inibidores podem ser aplicados para evitar uma capacitação espermática induzida pelo frio. Analisaram-se os efeitos de diferentes concentrações de dois inibidores de serina-proteases, inibidor do ativador do plasminogênio 1 - PAI-1 (70ƞg, 140ƞg e 210ƞg) e antipaína (10µg, 50µg e 100µg) na suplementação ao diluidor de criopreservação de sêmen bovino. Trinta e seis ejaculados de quatro bovinos Curraleiro Pé-Duro foram usados para criopreservação. Os efeitos dos inibidores sobre os parâmetros dos espermatozoides (cinética espermática - CASA, integridade acrossomal, integridade da membrana plasmática, potencial de membrana mitocondrial, defeitos espermáticos e taxa de reação acrossomal) foram avaliados no sêmen pós-descongelamento. A criopreservação de espermatozoides com antipaína diminuiu os parâmetros cinéticos pós-descongelamento de MP, VSL, LIN, SRT e a porcentagem de espermatozoides hiperativados, PAI-1 (210ƞg) diminuiu VSL e LIN. Antipaína e PAI-1 não tiveram efeitos nos parâmetros de integridade da membrana plasmática, no potencial de membrana mitocondrial e nos defeitos espermáticos. Espermatozoides criopreservados na presença de antipaína e PAI-1 (70 e 140ƞg) preservaram a integridade acrossomal, assim como foram capazes de completar a reação acrossômica in vitro. Em conclusão, os inibidores de serina-proteases, antipaína e PAI-1 (70 e 140ƞg) são capazes de preservar a integridade acrossomal de espermatozoides criopreservados de bovinos.

ABSTRACT Seminal plasma contains serine proteases and serine protease inhibitor, which are involved in mammalian fertilization, and the inhibitors can be applied to prevent cold-induced sperm capacitation. The effects of different concentrations of two serine protease inhibitors were analyzed, Plasminogen activator inhibitor 1 - PAI-1 (70ƞg, 140ƞg and 210 ƞg) and Antipain (10µg, 50µg and 100µg) as supplementation to bovine semen cryopreservation extender. The effects of the inhibitors on the sperm parameters (sperm kinetics - CASA, acrosome integrity, plasma membrane integrity, mitochondrial membrane potential, sperm defects and acrosome reaction rate) were evaluated in the post-thaw semen. Cryopreservation of sperm with Antipain decreased post-thaw kinetic parameters of MP, VSL, LIN, SRT and the percentage of hyper-activated sperm while PAI-1 (210 ƞg) decreased VSL and LIN. Antipain and PAI-1 had no effect on the integrity parameters of the plasma membrane, mitochondrial membrane potential and sperm defects. Sperm cryopreserved in the presence of Antipain and PAI-1 (70 and 140 ƞg) preserved acrosome integrity, as they were able to complete the in vitro acrosome reaction. In conclusion, the serine protease inhibitors, Antipain and PAI-1 (70 and 140ƞg) are able to preserve the acrosome integrity of cryopreserved bovine sperm.

RESUMO O presente trabalho objetivou identificar fatores climáticos associados à ocorrência de resíduos de antimicrobianos e lactonas macrocíclicas em amostras de leite de tanque por análise multivariada de componentes principais (ACP). Para o presente trabalho, 132 amostras de leite cru foram coletadas em fazendas leiteiras localizadas no estado de Minas Gerais (Brasil) e analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência e espectrometria de massas in tandem para detecção de 35 analitos, incluindo antimicrobianos e lactonas macrocíclicas. Das 132 amostras de leite analisadas, detectou-se pelo menos um analito em 34 (25,76%) amostras. A ACP demonstrou que a presença de resíduos de antimicrobianos no leite de tanque ocorreu menos frequentemente nos dias com maior temperatura média, temperatura máxima e índice de temperatura e umidade. Por outro lado, a umidade relativa foi inversamente associada à presença de resíduos antimicrobianos no leite. A ACP demonstrou associação entre a presença de resíduos de lactonas macrocíclicas no leite e a produção diária de leite, e a presença de resíduos de lactonas macrocíclicas ocorreu menos frequentemente nos meses com maiores índices pluviométricos. Dessa forma, conclui-se que alguns índices climáticos, como temperatura média, temperatura máxima e índice de temperatura e umidade, podem predizer períodos com maior risco de ocorrência de resíduos de antimicrobianos, em contraste com a umidade relativa. Além disso, o risco de resíduos de lactonas macrocíclicas no leite de tanque foi maior nos meses com menores índices pluviométricos.

ABSTRACT The present study aimed to identify the climate condition parameters that are associated with the occurrence of antimicrobial and macrocyclic lactone residues in bulk tank milk using a multivariate principal components analysis (PCA). A total of 132 raw milk samples were collected at dairy farms in Minas Gerais State in Brazil and analyzed for 35 analytes, comprising macrocyclic lactones and antibacterials, using liquid chromatography coupled with mass spectrometry in tandem mode spectrometry. Of the 132 samples, 34 (25.76%) bulk tank milk samples were positive for at least one analyte. PCA showed that antimicrobial residues in bulk tank milk occurred less frequently on days with a higher average temperature, maximum temperature and temperature-humidity index. In contrast, relative humidity was inversely associated with antimicrobial residues in raw milk. The PCA showed that daily milk production was also related to macrocyclic lactone residues, while rainfall showed an inverse association. Thus, some climate conditions, such as average temperature, maximum temperature and temperature-humidity index, can predict the moments with lower risk of occurrence of antimicrobial residues in bulk tank milk, in contrast to relative humidity. Furthermore, the risk of macrocyclic lactone residues in bulk tank milk was higher in months with less rainfall.