ABSTRACT The aim of this study was to determine the effect of the type (dimethylacetamide [DMA] and dimethylformamide [DMF]) and concentrations (1, 3.5, 7%) of cryoprotective agents on three sperm parameters during the cryopreservation process of epididymal alpaca sperm. A 2x3 factorial design consisting of the two cryoprotectants and the three concentrations was used. The parameters of sperm viability (SYBR-14/PI) and mitochondrial membrane potential (MitoTracker Deep Red FM) of sperm of 40 epididymis were evaluated by flow cytometry and motility by microscopy after thawing. A higher percentage of motility after thawing was found with AMD (14%) than with DMF (10%) (p=0.001). In addition, there was a significant effect of the cryoprotectant concentration in all the parameters evaluated (p<0.001), being better at concentrations of 1 and 3.5% than with 7%. No significant effect of the cryoprotectant-concentration interaction was found.

RESUMEN El objetivo del presente estudio fue determinar el efecto de dos tipos (dimetilacetamida [DMA] y dimetilformamida [DMF]) y tres concentraciones (1, 3.5, 7%) de agentes crioprotectores sobre parámetros espermáticos durante el proceso de criopreservación de espermatozoides epididimarios de alpaca. Se empleó un diseño factorial 2 x 3 formado por los dos crioprotectores y las tres concentraciones. Se evaluaron los parámetros de viabilidad espermática (SYBR-14/PI) y potencial de membrana mitocondrial (MitoTracker Deep Red FM) mediante citometría de flujo y motilidad pos-descongelación por microscopía de muestras de material espermático de 40 epidídimos. Se encontró un ma- yor porcentaje de motilidad pos-descongelamiento con DMA (14%) que con DMF (10%) (p=0.001). Además, hubo efecto significativo de la concentración del crioprotector en todos los parámetros evaluados (p<0.001), siendo mejor en las concentraciones de 1 y 3.5% que con 7%. No se halló efecto significativo de la interacción crioprotector-con- centración.

Abstract. Tuberculosis is considered one of the most important epidemiological diseases worldwide. The current treatment for tuberculosis is a combination of antituberculosis drugs for at least 9 months. Nowadays, the search for new pharmacological agents for the treatment of tuberculosis is an urgent endeavor. Microalgae produce a wide variety of molecules that possess biological activities of pharmaceutical interest. Therefore, the objective of this work was to evaluate the antimycobacterial activity of hexane crude extracts of 6 microalgae: Chlamydomonas mexicana, Porphyridium cruentum, Isochrysis galbana, Rhodomonas sp., Aphanocapsa marina, and Nitzschia palea. All of the hexane extracts inhibited at least 90% of the growth of Mycobacterium tuberculosis H37Rv at a concentration of 100 μg ml-1. The hexane crude extract of I. galbana had the highest antimycobacterial activity displaying a percentage inhibition that was equal to that of the antituberculosis drug isoniazid and having a minimum inhibitory concentration of 50 μg ml-1. These findings demonstrate that microalgae are an excellent source for the search of novel antimycobacterial compounds.

Resumen. La tuberculosis es considerada una de las enfermedades epidemiológicas más importantes a nivel mundial. El tratamiento actual para la tuberculosis consiste en la combinación y uso de fármacos antituberculoso por al menos 9 meses. En la actualidad, la búsqueda de nuevos agentes farmacológicos para el tratamiento de la tuberculosis es una tarea urgente. Las microalgas producen una amplia variedad de moléculas que poseen actividades biológicas de interés farmacéutico. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad antimicobacteriana de los extractos crudos hexánicos obtenidos de 6 microalgas: Chlamydomonas mexicana, Porphyridium cruentum, Isochrysis galbana, Rhodomonas sp., Aphanocapsa marina y Nitzschia palea. Todos los extractos crudos inhibieron al menos el 90% del crecimiento de Mycobacterium tuberculosis H37Rv a una concentración de 100 μg ml-1. El extracto crudo obtenido de I. galbana presentó la mayor actividad antimicobacteriana con un porcentaje de inhibición igual al del fármaco antituberculoso isoniazida y con una concentración inhibitoria mínima de 50 μg ml-1. Estos hallazgos demuestran que las microalgas son una excelente fuente para la búsqueda de nuevos compuestos antimicobacterianos.

The aim of this study was to determine the optimal concentration of glycerol, ethylene glycol and dimethyl sulfoxide (DMSO) in the cryopreservation of epididymal spermatozoa of alpaca. The effect of different concentrations of glycerol, ethylene glycol and DMSO: T1 (0 M), T2 (0.25 M), T3 (0.5 M), T4 (0.75 M), T5 (1 M), T6 (1.25 M), T7 (1.5 M) and T8 (1.75 M) was evaluated. A polynomial regression model was used to determine the best concentration of each cryoprotectant, resulting 1.16, 1.02 and 0.9 M the optimal concentrations for glycerol, ethylene glycol and DMSO respectively. In Experiment 2, the effect of the optimal concentrations between glycerol, ethylene glycol and DMSO on motility, plasma membrane integrity, and acrosomal viability and integrity in alpaca epididymal spermatozoa were analyzed. The results showed a mean of 35.8, 51.8 and 38.3% for DMSO and 30.8, 45.0 and 33.8% for glycerol for motility, plasma membrane integrity and acrosome viability and integrity, respectively, and without significant differences between these cryoprotectants. However, the results were significantly better (p<0.05) than for ethylene glycol (1.02 M). It is concluded that the concentrations of 0.9 M DMSO and 1.16 M glycerol better preserved the functional characteristics of alpaca epididymal spermatozoa as compared to ethylene glycol (1.02 M).

El objetivo del presente estudio fue determinar la concentración óptima de glicerol, etilenglicol y dimetil sulfóxido (DMSO) en la criopreservación de espermatozoides epididimarios de alpaca. En el experimento 1 se evaluó el efecto de ocho concentraciones de glicerol, etilenglicol y DMSO: T1 (0 M), T2 (0.25 M), T3 (0.5 M), T4 (0.75 M), T5 (1 M), T6 (1.25 M), T7 (1.5 M) y T8 (1.75 M). Se utilizó un modelo de regresión polinomial quíntuple para determinar la mejor concentración de cada crioprotector, resultando concentraciones óptimas para glicerol, etilenglicol y DMSO de 1.16, 1.02 y 0.9 M, respectivamente. En el Experimento 2, se comparó el efecto de las concentraciones óptimas entre glicerol, etilenglicol y DMSO sobre la motilidad, integridad de membrana plasmática y viabilidad e integridad acrosomal en los espermatozoides epididimarios de alpaca. Los resultados mostraron promedios de 35.8, 51.8 y 38.3% para DMSO (0.9 M) y de de 30.8, 45.0 y 33.8% para glicerol para las variables motilidad, integridad de membrana plasmática y viabilidad e integridad acrosomal, respectivamente, y sin diferencias significativas entre estos crioprotectores. Sin embargo, fueron significativamente mejores (p<0.05) que para etilenglicol (1.02 M). Se concluye que las concentraciones de 0.9 M de DMSO y 1.16 M de glicerol conservaron mejor las características funcionales de los espermatozoides epididimarios de alpaca en comparación con etilenglicol (1.02 M).

En la Unidad Científico Tecnológica de Base Los Palacios, Cuba, a 22° 34’ 32.73” N y 83° 14’ 11.95” O, se evaluó el efecto de la inundación sobre la colonización de hongos micorrízicos arbusculares durante la fase vegetativa de plantas de arroz cultivar INCA LP-5. Se realizaron dos experimentos en condiciones de invernadero en macetas con una capacidad de 800 g de suelo, ambos experimentos en un diseño experimental completamente aleatorizado. Uno de ellos se realizó con Rhizophagus (=Glomus) intraradices (Ri), donde se evaluó la dinámica de colonización de la simbiosis micorrízica en condiciones de inundación y secano (no inundadas). En el segundo experimento se trabajó con Glomus cubense (Gc) y se evaluó la colonización micorrízica en plantas de arroz cultivadas con diferentes alturas de lámina de agua. En ambos experimentos se evaluaron altura de la planta, producción de masa seca y tasa absoluta de crecimiento. Como resultado se encontró que las plantas de arroz fueron colonizadas a partir del día 35 después de la germinación, tanto en condiciones inundadas como no inundadas, con una tendencia al incremento en el tiempo. Se comprobó que la colonización micorrízica disminuyó en condiciones de inundación y a medida que la altura de la lámina de agua fue superior se encontraron valores inferiores de este indicador. La colonización micorrízica incrementó el desarrollo de las plantas de arroz

The research was conducted in the Scientific Technological Base Unit Los Palacios, Cuba, located at 22° 34’ 32.73” N and 83° 34’ 32.73”14’ 11.95” W, with the objective of evaluating the effect of flooding on colonization by arbuscular mycorrhizal fungi during the vegetative phase of rice plants, cultivar INCA LP-5. Two experiments under greenhouse conditions in pots with a capacity of 800 g of soil, both experiments in a completely randomized design were performed. An experiment was performed with Rhizophagus (=Glomus) intraradices (Ri), where the dynamics of colonization of mycorrhizal symbiosis in flooded conditions was evaluated and not flooded. In the second experiment, we worked with Glomus cubense (Gc) and mycorrhizal colonization was evaluated in rice plants grown with different levels of water depth. In both experiments, plant height, the absolute dry weight and growth rate are evaluated. The results showed that the rice plants were colonized from 35 days after germination, both flooded and non-flooded conditions, with an increasing trend over time. It was found that mycorrhizal colonization decreased in flood conditions and as the height of the water level was higher, lower values of this indicator was found. Mycorrhizal colonization increased the development of rice plants

El movimiento e intercambio de individuos entre hábitats son aspectos críticos para la dinámica y el éxito de las poblaciones de peces arrecifales. La segregación de tallas entre hábitats puede ser considerada como evidencia para la conectividad de hábitats y esta podría ser el primer paso para la formulación de hipótesis sobre migraciones ontogenéticas entre hábitats. El objetivo principal de nuestra investigación fue encontrar evidencia de diferencias entre hábitats en la distribución de tallas y densidad de especies de peces de arrecifes, las cuales pueden ser clasificadas, a priori, como especies con cambios ontogénicos en el hábitat, en una área extensa (~600 km²) de plataforma en el Caribe. Se realizaron censos visuales (métodos estacionario y de recorrido) de especies de peces seleccionadas en 20 sitios localizados en raíces de mangle, arrecifes de parche, la zona interna de la cresta arrecifal y el arrecife frontal (12-16m de profundidad). Se hicieron diez censos en cada sitio de los cuatro tipos de hábitat y se repitió este esquema en junio y septiembre 2009. Fueron contados un total de 11 507 individuos de 34 especies en un total de 400 censos. Se encontraron diferencias significativas en la densidad y composición por tallas entre los hábitats de arrecife y manglar. Estas diferencias, indicaron un uso variable de los hábitats costeros dependiendo de la especie. Los adultos fueron encontrados en todos los hábitats. Los hábitats de arrecifes, principalmente los arrecifes de parche, parecen ser muy importantes para los juveniles de peces de la mayoría de las especies en nuestra área de estudio. Los manglares fueron especialmente importantes para dos especies (L. apodus y L. griseus), que a lo largo de la plataforma fueron las únicas que mostraron gradientes bien definidos en las tallas.

Movement and exchange of individuals among habitats is critical for the dynamics and success of reef fish populations. Size segregation among habitats could be taken as evidence for habitat connectivity, and this would be a first step to formulate hypotheses about ontogenetic inter-habitat migrations. The primary goal of our research was to find evidence of inter-habitat differences in size distributions and density of reef fish species that can be classified a priori as habitat-shifters in an extensive (~600km²) Caribbean shelf area in NW Cuba. We sampled the fish assemblage of selected species using visual census (stationary and transect methods) in 20 stations (sites) located in mangrove roots, patch reefs, inner zone of the crest and fore reef (12-16m depth). In each site, we performed ten censuses for every habitat type in June and September 2009. A total of 11 507 individuals of 34 species were counted in a total of 400 censuses. We found significant differences in densities and size compositions among reef and mangrove habitats, supporting the species-specific use of coastal habitats. Adults were found in all habitats. Reef habitats, mainly patch reefs, seem to be most important for juvenile fish of most species. Mangroves were especially important for two species of snappers (Lutjanus apodus and L. griseus), providing habitat for juveniles. These species also displayed well defined gradients in length composition across the shelf. Rev. Biol. Trop. 62 (2): 589-602. Epub 2014 June 01.

The study aimed to evaluate the superovulatory response and conception rate by applying the technique of non-surgical embryo transfer in dairy cows of a commercial farm in the Lima milkshed. Eight donor cows were used and distributed in two working years. Donors were synchronized with estrogens, progestagens and luteolitic agents, superovulated with 400 mg of FSH, and inseminated with two doses of frozen semen. The recipient animals (n=28) were also distributed in two years. The Pre-synch protocol was used for estrus synchronization in the first year and the CIDR-synch protocol in the second year. The expected day of heat presentation coincided for both donors and recipients. The recovery of embryos was done seven days post service where embryos were classified and immediately transferred. Pregnancy diagnosis by transrectal ultrasonography was done at day 28 post transfer. A total of 23 embryos were obtained. The embryo recovery rate was 36.5% with high variation between years. Seventeen embryos were transferred and the conception rate was 40% with high variation between years (22.2 and 66.7%). The varied individual response of the donors affected the embryo recovery rate and the synchronization protocol affected conception rate

El estudio tuvo como objetivo evaluar la respuesta superovulatoria y la tasa de concepción al aplicar la técnica no quirúrgica de transferencia de embriones en vacas lecheras de un establo comercial de la cuenca de Lima. Se utilizaron ocho vacas donadoras, distribuidas en dos años de trabajo. Estas fueron sincronizadas con estrógenos, progestágenos y agentes luteolíticos, superovuladas con 400 mg de FSH e inseminadas con dos dosis de semen congelado. Se utilizaron 28 receptoras, también distribuidas en dos años. En el primer año se sincronizaron con el protocolo Pre-synch y en el segundo año con el protocolo CIDR-synch. Se hizo coincidir el día esperado del celo de las donadoras y receptoras. Los embriones fueron recolectados en el día siete del servicio, se clasificaron y se transfirieron de inmediato a las receptoras. El diagnóstico de gestación se realizó mediante ultrasonografía transrectal al día 28 postransferencia. Se obtuvieron 23 embriones, siendo la tasa de recuperación de 36.5% con gran variación entre años. Se transfirieron 17 embriones obteniéndose una tasa de concepción de 40.0%, con gran variación entre años (22.2 y 66.7%). La variada respuesta individual de las donadoras afectó la tasa de recuperación de embriones y el protocolo de sincronización afectó la tasa de concepción

The objective of this study was to evaluate the effect of three semen extenders (skim milk, Tris, and Tes) on cryopreservation of epididymal alpaca sperm. Previously, the effect of timespan since slaughtering or castration to the recovery of epididymal sperm was evaluated. Twenty-four alpaca testicles were used to obtain sperm from the epididymis in a buffered saline solution (PBS). The recovery of spermatozoa was performed at 0, 35, 48, and 72 hours (6 testes per group) after slaughtering or castration. Sperm motility, concentration, and sperm membrane functional integrity were analyzed. Sperm recovered after 35 hours was not usable for cryopreservation. Sperm samples recovered at 0 hours were subjected to the process of freezing. Samples were diluted with skim milk, Tris, and Tes, cooled from 35 to 5 °C in 90 minutes, packed into 0.25 ml straws and frozen in liquid nitrogen. After thawing, straws were evaluated by motility, sperm membrane functional integrity and vitality/acrosome integrity. Motility was 17.0, 14.0, and 8.6% on skim milk, Tris and Tes groups respectively, where the skim milk group was significantly better than the Tes (p<0.05). Percentages of sperm membrane functional integrity and vitality/acrosomal integrity were similar among the three extenders. It was concluded that all three extenders provided similar effects for the cryopreservation of epididymal alpaca spermatozoa.

El estudio tuvo por objetivo evaluar el efecto de tres dilutores (Tris, Tes y leche descremada) en la criopreservación de espermatozoides obtenidos del epidídimo de alpaca. Previamente se determinó el efecto del tiempo entre el beneficio/castración y la recuperación de los espermatozoides del epidídimo. Se utilizaron 24 testículos de alpacas para la obtención de los espermatozoides directamente del epidídimo en una solución fisiológica buferada (PBS). La recuperación de espermatozoides se realizó a las 0, 35, 48 y 72 horas (6 testículos por grupo) y se evaluó la motilidad, concentración espermática e integridad funcional de membrana. Los espermatozoides recuperados a partir de 35 horas post beneficio/castración no fueron aptos para ser congelados. Las muestras recuperadas a las 0 horas fueron diluidas con Tris, Tes y leche descremada, enfriadas desde 35 a 5 oC en 90 minutos, envasadas en pajillas de 0.25 ml y congeladas en nitrógeno líquido. Se evaluó la motilidad, integridad funcional de membrana y vitalidad/integridad acrosomal en las muestras descongeladas. La motilidad fue de 14.0, 8.6 y 17.0% en los grupos Tris, Tes y leche descremada, respectivamente, donde el grupo leche descremada fue significativamente mejor que el grupo Tes (p<0.05). Los porcentajes de integridad funcional de membrana y vitalidad/integridad acrosomal fueron similares entre los tres grupos. Se concluye que los tres dilutores brindan efectos similares para la criopreservación de espermatozoides epididimarios de alpaca.

The effect of glucose, fructose, trehalose, and sucrose, as components of the extender, was evaluated on canine sperm viability during refrigeration at 5 °C. The spermatic fraction of 16 dog ejaculations were distributed in 5 aliquots containing an extender based on Tris - citric acid - egg yolk, but differing in the presence of one of the sugars, plus a control without sugar. The five treatments were evaluated after 24, 48, 72, and 96 hours of refrigeration in relation to progressive motility and functional integrity of the membrane by the hypoosmotic swelling test (HOS). All groups, with the exception of the control group, the sperm motility maintained within acceptable ranges during the study (90% on day 0 and 60% on day 4). The integrity of the membrane remained slightly superior in groups with sugar (87-90%) in comparison with the control group (83-85%). The glucose and sucrose showed the best results in motility and HOS. It is concluded that no significant damage occurred on the sperm membrane while keeping semen at 5 °C, and that the use of any of the tested sugars as energy-giving substrate for the sperm cells (especially glucose and sucrose) is of great importance for the maintenance of appropriate levels of sperm motility and functional integrity of the membrane.

Se evaluó el efecto la glucosa, fructosa, trehalosa y sacarosa, como componentes del diluyente, sobre la viabilidad espermática en semen canino refrigerado a 5 °C. La fracción espermática de 16 eyaculados de perro fue distribuida en cinco alícuotas conteniendo un diluyente a base de Tris - ácido cítrico - yema de huevo, pero con un azúcar distinto, además del control sin azúcar. Los cinco tratamientos se evaluaron a las 24, 48, 72 y 96 horas de refrigeración en base a motilidad progresiva e integridad funcional de membrana mediante la prueba hipoosmótica (HOS). En todos los grupos, a excepción del grupo control, la motilidad espermática se mantuvo dentro de rangos aceptables durante el estudio (90% en el día 0 hasta cerca de 60% en el día 4). Sin embargo, la integridad de membrana se mantuvo ligeramente superior en los grupos con azúcar (87-90%) en comparación con el grupo control (83-85%). La glucosa y sacarosa mostraron mejores resultados de motilidad y HOS. Se concluye que no se genera un daño significativo sobre la membrana espermática durante la refrigeración a 5 °C del semen canino, y que la utilización de cualquiera de los azúcares como sustrato energético para los espermatozoides, en especial glucosa y sacarosa, es de gran importancia para el mantenimiento de niveles apropiados de motilidad espermática e integridad funcional de membrana.

Thirty-two semen samples from four rams were frozed using two antioxidants, Tempo (2,2,6,6 tetramethyl-1-piperidinyloxyl) and Tempol (4-hidroxi 2,2,6,6 tetramethyl-1-piperidinyloxyl), each one in concentrations of 0.5, 1.0, and 2.5 mM, to evaluate the effects on post-thawing motility, viability, acrosomal integrity, and earlier sperm capacitation. Eight replications for each antioxidant concentration and control group, were done using four semen samples per replication. Semen samples were diluted on a Tris extender. Results showed that Tempo 0.5 mM improved frozen semen quality in comparison with control group (p<0.05), by increasing progresive motility (79 vs. 67%), viability and acrosomal integrity (70 vs. 58%), and decreasing earlier sperm capacitation (9 vs. 15%). On the other hand, Tempol decreased frozen semen quality. In conclusion, the use of Tempo 0.5 mM on a Tris extender, at the end of the cooling process, could be an alternative for improving the quality of frozed ram semen.

Se emplearon 32 muestras de semen procedentes de cuatro ovinos a fin de ser criopreservadas con la adición dos antioxidantes: Tempo (2,2,6,6 tetrametil-1-piperidiniloxil) y Tempol (4-hidroxi 2,2,6,6 tetrametil-1-piperidiniloxil), en concentraciones de 0.5, 1.0 y 2.5 mM, para evaluar el efecto postdescongelamiento que pudieran tener sobre la motilidad progresiva, la viabilidad e integridad acrosomal y la capacitación espermática prematura. En cada concentración de los dos antioxidantes y del grupo control se utilizó un dilutor en base a Tris, realizándose ocho repeticiones, cada una con cuatro muestras de semen. Los resultados obtenidos demuestran que la adición de Tempo a una concentración de 0.5 mM mejora significativamente la calidad del semen criopreservado en comparación con el grupo control (p<0.05), incrementado los porcentajes de motilidad progresiva (79 vs. 67%), viabilidad e integridad acrosomal (70 vs. 58%) y reduciendo la capacitación espermática prematura (9 vs.15%). Por otro lado, la adición de Tempol disminuyó la calidad seminal postdescongelamiento en comparación con el control. En conclusión, la adición de Tempo 0.5 mM en un dilutor en base a Tris, al finalizar la fase de enfriamiento, podría constituir una estrategia para mejorar la calidad de semen ovino criopreservado.

The objective of the study was to evaluate the effect of three extenders and four combinations of two permeant and two non permeant cryoprotectant agents on the quality of post thaw ram semen. In Experiment 1, three extender were evaluated (A, B, and C) in order to select the best for the next step. In Experiment 2, different combinations of cryoprotectant agents were evaluated as follow: 1) Glycerol-Trehalose, 2) Glycerol-Sucrose, 3) Ethylene glycol-Trehalose, and 4) Ethylene glycol-Sucrose. In experiment 1, motility, viability and acrosomal integrity in extender A were higher than in extender B and extender C, and therefore, extender A was used for experiment 2. In this assay, motility, viability and acrosomal integrity, thermoresistance, and plasmatic membrane integrity were higher in groups Glycerol-sucrose and Glycerol-trehalose in comparison with groups Ethilene glycol-sucrose and Ethilene glycol-trehalose. However, there were not significative differences between sucrose or trehalose. In conclusion, an extender with characteristics of extender A using glycerol plus trehalose or sucrose constitute a good alternative for cryopreservation of ram semen.

El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de tres dilutores y cuatro combinaciones de dos agentes crioprotectores permeantes más dos no permeantes sobre la calidad del semen ovino post-descongelamiento. Para esto, en una primera fase se evaluaron entre tres dilutores (A, B y C) y el más adecuado se usó en una segunda fase, donde se evaluaron las siguientes combinaciones de agentes crioprotectores permeantes y no permeantes: 1) Glicerol - Trehalosa, 2) Glicerol - Sacarosa, 3) Etilenglicol - Trehalosa y 4) Etilenglicol - Sacarosa. En el experimento 1, se encontró que el Dilutor A mantenía mejor la motilidad progresiva, viabilidad e integridad acrosomal post-descongelamiento en comparación con los dilutores B y C, por lo que el Dilutor A se empleó en el experimento 2. En este ensayo se encontró que la motilidad progresiva, la viabilidad e integridad acrosomal, la termoresistencia y la integridad de membrana plasmática post-descongelamiento fue mejor en los grupos con glicerol-sacarosa y glicerol-trehalosa en comparación con los grupos con etilenglicol-sacarosa y etilenglicol-trehalosa. Esto demuestra que el glicerol es un mejor crioprotector permeante en comparacion con el etilenglicol; sin embargo, no hubo diferencia en el uso de sacarosa o trehalosa. Se concluye que un dilutor con las características del dilutor A, utilizando glicerol más trehalosa o sacarosa, constituye una buena alternativa para la criopreservación de semen ovino.