Resumo A proantocianidina (PA) é um biomodificador dentinário promissor devido a sua capacidade de estabilizar as fibrilas colágenas contra a degradação por metaloproteinases da matriz (MMPs); no entanto, o protocolo mais eficaz para a incorporação de PA em procedimentos adesivos ainda não está claro. Este estudo avaliou o efeito da biomodificação da dentina com um condicionador ácido contendo PA na atividade de MMPs, morfologia da interface adesiva e resistência à microtração resina-dentina. Molares humanos extraídos foram lixados para exposição da dentina e condicionados com ácido por 15 s de acordo com os grupos: EXP - ácido fosfórico experimental; EXP+PA - ácido fosfórico experimental com 10% PA; TE - sistema total-etch; SE - sistema self-etch. As amostras foram restauradas com resina composta e armazenadas em água destilada (37ºC). A atividade de MMP e morfologia da interface foram analisadas após 24 h por zimografia in situ (n=6) e microscopia eletrônica de varredura (n=3), respectivamente. A resistência à microtração resina-dentina (μTBS) foi avaliada após 24 horas e 6 meses de armazenamento (n=6). Atividade de MMP detectada na dentina condicionada foi significativamente maior em comparação com a dentina não tratada (p <0,05), mas não houve diferenças entre os diferentes ácidos. Tags e microtags de resina, indicativos de uma penetração adequada do sistema adesivo nos túbulos e microtúbulos dentinários, foram observadas ao longo da camada híbrida em todos os grupos. Não houve diferença entre os valores de μTBS de 24 h e 6 meses para EXP+PA; além disso, EXP+PA apresentou maiores valores de μTBS após 6 meses em comparação com TE e EXP (p <0,05). Os resultados sugerem que a biomodificação por 15 s não foi suficiente para reduzir significativamente a atividade de MMP; apesar disso, EXP + PA foi capaz de melhorar a estabilidade da interface resina-dentina em comparação com sistemas total- e self-etch comerciais.

Abstract Proanthocyanidin (PA) is a promising dentin biomodifier due to its ability to stabilize collagen fibrils against degradation by matrix metalloproteinases (MMPs); however, the most effective protocol to incorporate PA into bonding procedures is still unclear. This study evaluated the effect of dentin biomodification with a PA acid etchant on MMP activity, adhesive interface morphology and resin-dentin microtensile bond strength. Sound extracted human molars were flattened to expose dentin and acid-etched for 15 s according to the groups: EXP - experimental phosphoric acid; EXP+PA - experimental phosphoric acid 10% PA; TE - total-etching system; SE - self-etching system. Samples were restored with composite resin and stored in distilled water (37ºC). MMP activity and interface morphology were analyzed after 24 h by in situ zymography (n=6) and scanning electron microscopy (n=3), respectively. The resin-dentin microtensile bond strength (μTBS) was evaluated after 24 h and 6 months storage (n=6). Significantly higher MMP activity was detected in etched dentin compared with untreated dentin (p<0.05), but no difference among acid groups was found. Resin tags and microtags, indicative of proper adhesive system penetration in dentinal tubules and microtubules, were observed along the hybrid layer in all groups. There was no difference in μTBS between 24 h and 6 months for EXP+PA; moreover, it showed higher long-term μTBS compared with TE and EXP (p<0.05). The results suggest that 15 s of biomodification was not sufficient to significantly reduce MMP activity; nonetheless, EXP+PA was still able to improve resin-dentin bond stability compared with total- and self-etching commercial systems.

FUNDAMENTOS - Anticorpos antifosfolípides (AAF), como antiβ2GP1 (β2-glicoproteína 1), são descritos na hanseníase multibacilar (MB) sem, contudo, caracterizar a síndrome do anticorpo antifosfolípide (SAF), constituída por fenômenos tromboembólicos (FTE). A mutação Val247Leu no V domínio da β2GP1 - substituição da leucina por valina - expõe epítopos crípticos com consequente formação de anticorpos antiβ2GP1. OBJETIVO: Avaliar a associação do polimorfismo Val247Leu do gene β2GP1 com títulos de anticorpos antiβ2GP1 na hanseníase. MÉTODO: O polimorfismo Val247Leu foi detectado por PCR-RFLP, e os títulos de anticorpos antiβ2GP1, por Elisa. RESULTADOS: O genótipo Val/Val estatisticamente predominou no grupo de hansênicos, em relação ao controle. Embora maiores títulos de anticorpos antiβ2GP1 IgM estivessem alocados no grupo MB com genótipos Val/Val e Val/Leu, não houve diferença estatística em relação ao genótipo Leu/Leu. Dos sete pacientes MB com FTE, quatro apresentaram heterozigose, e três Val/Val homozigose. CONCLUSÃO: A prevalência do genótipo Val/Val no grupo de hansênicos pode justificar parcialmente a presença de anticorpos antiβ2GP1 na forma MB. A heterozigose ou homozigose Val/Val nos sete pacientes com hanseníase MB e FTE corroboram a implicação de expressão fenotípica anômala da β2GPl e formação de anticorpos antiβ2GPl, com consequente FTE e SAF.

BACKGROUND - Multibacillary (MB) leprosy may be manifested with antiphospholipid antibodies (aPL), among which anti-β2GP1 (β2-glycoprotein 1). High titers of aPL are associated with APS (Antiphospholipid Syndrome), characterized by thrombosis. The mutation Val247Leu in the domain V of β2GP1 exposes hidden epitopes with consequent development of anti-β2GP1 antibodies. OBJECTIVE: To evaluate the Val247Leu polymorphism of β2GP1 gene and its correlation with anti-β2GP1 antibodies in leprosy patients. METHODS: The Val247Leu polymorphism was performed by PCR-RFLP and anti-β2GP1 antibodies were measured by ELISA. RESULTS: The genotypic Val/Val was more prevalent in the leprosy group, compared to controls. Regarding the 7 MB patients with APS, four presented heterozygosis and three, Val/Val homozygosis. Although higher titrations of anti-β2GP1 IgM antibodies were seen in MB leprosy group with Val/Leu and Val/Val genotypes, there was no statistical difference when compared to Leu/Leu genotype. CONCLUSION: The prevalence of Val/Val homozygosis in leprosy group can partially justify the presence of anti-β2GP1 IgM antibodies in MB leprosy. The description of heterozygosis and Val/Val homozygosis in 7 patients with MB leprosy and thrombosis corroborates the implication of anomalous phenotype expression of β2GP1 and development of anti-β2GP1 antibodies, with consequent thrombosis and APS.

Quando a fertilização de flores é necessária para o desenvolvimento de frutos, abelhas podem ser utilizadas como polinizadores sob cultivo protegido. No presente estudo, a efetividade das abelhas sem ferrão Scaptotrigona aff. depilis Moure e Nannotrigona testaceicornis Lepeletier como polinizadoras de pepino (Cucumis sativus var. caipira) foi investigada sob cultivo protegido durante o inverno. O estudo foi conduzido em quatro casas de vegetação (GH), das quais duas continham colônias de abelhas para averiguar a polinização dos pepinos (GH I, com S. aff. depilis, GH II, com N. testaceicornis), e duas (GH III, GH IV) não continham colônias e serviram como grupos controle. Além disso, pepinos foram plantados numa área aberta (AO) onde polinização por vários insetos poderia ocorrer. Sem polinização (GH III, GH IV), as plantas produziram menor número de pepinos, e os frutos eram menores e menos pesados do que aqueles nas áreas experimentais onde a polinizacão ocorreu. Na área aberta, não protegida contra condições climáticas desfavoráveis, as plantas produziram menos flores do que as plantas nas casas de vegetação. A maior produção de pepinos (com a maior quantidade de frutos perfeitos) foi encontrada nas casas de vegetação com as abelhas como polinizadoras (GH I, GH II). Os resultados demonstraram que abelhas sem ferrão podem ser usadas com sucesso e eficiência como polinizadoras de pepinos sob cultivo protegido durante o inverno.

When for a successful fruit development the fertilization of flowers is necessary, bees can be used as crop-pollinators in greenhouses. In the present study, we investigated the effectiveness of the stingless bees Scaptotrigona aff. depilis Moure and Nannotrigona testaceicornis Lepeletier as pollinators of cucumber plants (Cucumus sativus var. caipira) in greenhouses during the Brazilian winter season. The study was conducted in four greenhouses (GH), of which two greenhouses contained bee colonies to ascertain pollination of the cucumber plants (GH I, with S. aff. depilis, GH II, with N. testaceicornis), whereas the other two greenhouses (GH III, GH IV) had no bee colonies and served as control groups. Furthermore, we planted cucumbers in an open field plot (OA) where pollination by any/various visiting insects could occur. Each of the experimental areas measured 87.5 m². Without pollination (GH III, GH IV), the plants produced a low number of cucumbers, and the fruits were smaller and less heavy than in those experimental areas where pollination occurred. In the open field area, not protected against unfavorable climatic conditions, the plants produced fewer flowers than the plants in the greenhouses. The highest cucumber yield (with the highest amount of perfect fruits) was found in those greenhouses which housed the stingless bees as pollinators (GH I, GH II). Our results demonstrate that stingless bees can be successfully and efficiently used as pollinators of greenhouse cucumbers during the winter season.

FUNDAMENTOS: Métodos moleculares têm-se mostrados mais eficazes para o diagnóstico da LTA. OBJETIVOS: Comparar os resultados da intradermorreação de Montenegro (IRM), presença de leishmania em biópsia (Bc), reação de imunofluorescência indireta (Rifi), seqüenciamento de DNA e PCR-RFLP (-restriction fragment lenght polymorphism) para o diagnóstico da LTA. MÉTODOS: Foram estudados 152 pacientes com LTA. Para a PCR em Bc, utilizaram-se primers específicos para seqüência de 120bp do kDNA do minicírculo comum a todas as espécies de leishmanias. O produto da PCR, utilizado para seqüenciamento e para restrição enzimática com Hae III, foi comparado às culturas L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis. RESULTADOS: Houve predomínio do sexo masculino (75%), da cor branca (80%) e da profissão urbana (48%). A idade variou de três a 77 anos, com 56,5% entre 21 e 50 anos. 65,8% eram do Estado de São Paulo, prevalecendo a forma cutânea (79,6%). A IRM foi positiva em 73,4%, e a Rifi em 59,7%, enquanto a Bc evidenciou presença de leishmania em 30,6%. A PCR foi positiva em 81,6%, e a PCR-RFLP identificou L. (V.) braziliensis como espécie predominante (66%), o que também ocorreu com o seqüenciamento. Comparando PCR-RFLP e seqüenciamento, houve 61% de concordância entre os resultados, mostrando significância da PCR-RFLP para L. (V.) braziliensis. CONCLUSÕES: A IRM e a PCR foram estatisticamente equivalentes como métodos subsidiários para o diagnóstico da LTA, a PCR-RFLP e o seqüenciamento também o foram na identificação das espécies de leishmania, o primeiro apresentando menores custo e tempo de execução comparado ao seqüenciamento de DNA.

BACKGROUND: ATL is endemic in Brazil, and molecular methods have been shown more effective for its diagnosis. OBJECTIVES: Our purpose was to compare the results of Montenegro’s skin reaction (MR), presence of leishmania in skin biopsy (Bx), indirect immunofluorescence (IIF) for leishmania in sera samples, PCR, sequencing of DNA and PCR-RFLP (polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism) as subsidiary exams for ATL diagnose. METHODS: 152 patients were studied, with accomplishment of MR, Bx, IIF and PCR for leishmania in skin samples. For PCR, a specific pair of primers for a sequence of 120bp from kDNA minicircle, common to all leishmanias species, was used. The product of PCR was used for DNA sequencing and for RFLP with the enzyme Hae III. The analysis of the restriction pattern was compared to the cultures of L. (L.) amazonensis and L. (V.) braziliensis. RESULTS: The predominant sex was male (75%), the white color (80%) and urban professional occupation (48%). The age varied from 3 to 77 years, with prevalence from 21 to 50 years (56.5%). In relation to the origin, 65.8% was from the state of São Paulo, being the cutaneous form the more prevalent (79.6%). MR was positive in 73.4% and there was presence of leishmania in 30.6% of the samples, while IIF presented 59.7% of positivity. PCR was positive in 81.6% of skin samples, and PCR-RFLP identified L. (V.) braziliensis (66%) as predominant species, fact that also happened with DNA sequencing, with 64.4% of the positive results for L. (V.) braziliensis. Comparing PCR-RFLP and DNA sequencing there was 61% of agreement amongst the results, being significant in PCR-RFLP for L. (V.) braziliensis. CONCLUSION: MR and PCR were equivalent as subsidiary methods for the diagnosis of ATL, such as PCR-RFLP and DNA sequencing in the identification of the leishmania species. On the other hand, the method PCR-RFLP presented smaller cost and smaller time of execution compared to the sequencing of DNA.

FUNDAMENTOS: AA proteína MAX, componente salivar de Lutzomyia longipalpis, vetor do calazar ou leishmaniose sistêmica, tem sido empregada como vacina para leishmaniose tegumentar experimental, com funções de vasodilatação e imunomodulação. OBJETIVOS: Detectar anticorpos séricos antiMAX em pacientes com LTA e verificar a expressão de MAX em L. neivai, vetor da LTA na região em estudo. MÉTODOS: Anticorpos antiMAX foram detectados por Elisa em soro de 42 pacientes com LTA e 63 controles. A extração de proteínas e de DNA de L. longipalpis (controle positivo) e de L. neivai foi realizada pelo método Trizol e seguida pela detecção de proteínas por eletroforese e pela expressão gênica de MAX por PCR-RFLP (polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism) com as enzimas Hha I e Rsa I. RESULTADOS: Títulos maiores de anticorpos antiMAX foram observados na LTA (p=0,0132). A eletroforese de proteínas mostrou frações semelhantes para L. longipalpis e L. neivai, tendo-se observado para ambos fração protéica de peso molecular similar à proteína MAX. A expressão gênica de MAX em L. longipalpis e L. neivai foi confirmada por PCR-RFLP. CONCLUSÕES: A presença de antiMAX nos grupos em estudo tornou imprescindível a pesquisa de MAX no vetor de LTA da região, tendo sido registrada pela primeira vez expressão protéica e gênica de MAX em L. neivai. Detecção de antiMAX em controles confirma exposição a picadas de flebótomos. Títulos de anticorpos antiMAX maiores na LTA sugerem exposição prévia e natural à picada e, conseqüentemente, à proteína MAX, não protegendo da doença e desfavorecendo seu emprego em vacinação.

BACKGROUND: The protein MAX, salivary component of Lutzomyia longipalpis, vector of calazar or systemic leishmaniasis, has been used as vaccine for experimental tegumentar leishmaniasis, which vasodilatory and immunomodulatory functions are described. OBJECTIVES: Our purpose was to detect antibodies antiMAX in sera samples from patients with ATL and to verify the genetic and protein expression of MAX in L. neivai, phlebotomy vector of ATL in the area of study. METHODS: Antibodies antiMAX were detected by ELISA in sera from 42 patients with ATL and 63 controls. The extraction of proteins and of DNA from L. longipalpis (positive control) and L. neivai was accomplished by the method Trizol, following for the detection of proteins by electrophoresis, and genetic expression of MAX by PCR-RFLP (polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism) with the enzymes Hha I and Rsa I. RESULTS: Increased titles of antibodies antiMAX were observed in ATL, compared to controls (p=0,0132). Electrophoreses of proteins showed similar fractions for L. longipalpis and L. neivai, and for both a protein fraction with molecular weight similarity to MAX was observed. The genetic expression of MAX in L. longipalpis and L. neivai was confirmed by PCR-RFLP. CONCLUSIONS: The description of antibodies antiMAX in ATL patients and controls turned indispensable the research of MAX in the phlebotomy vector of ATL in the area of study. For the first time, it was registered protein and genetic expression of MAX in L. neivai. The antiMAX detection in controls confirms the previous exposition to prick of phlebotomies. Increased titles of antibodies antiMAX in ATL patients suggest previous and natural exposition to the bite and, consequently, to the protein MAX, not protecting them of disease and discouraging its employment in vaccination.