ABSTRACT Introduction: Mycoplasma pneumoniae is a common cause of respiratory track infections in children and young adults. Macrolides are the first-line treatment. The rapid emergence of resistance to these antimicrobials has motivated the development of molecular methods for their detection in clinical samples positive for this pathogen. Objective: To implement a real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) method for the detection of macrolide resistance in M. pneumoniae positive clinical samples. Methods: An RT-PCR was implemented to detect mutations A2058G and A2059G in 23S rRNA of M. pneumoniae. M. pneumoniae positive clinical samples from 24 patients with respiratory symptoms were analyzed. Sensitivity, specificity, repeatability and reproducibility of the RT-PCR assays were evaluated. Results: The RT-PCR assays showed 100% specificity to M. pneumoniae, and 92% sensitivity with a detection limit of 2 copies/µL, equivalent to 10 copies/reaction. Moreover, the repeatability and reproducibility of these results were demonstrated. Wild and mutant genotypes associated to each control were properly identified. Of the clinical samples positive for M. pneumoniae, 77.3% (17/22) were macrolide-sensitive and 22.7% (5/22) were macrolide-resistant. Conclusions: The high sensitivity and specificity of the RT-PCR method implemented provides the National Reference Laboratory of Mycoplasmas of the Institute of Tropical Medicine Pedro Kourí with an effective method for the diagnosis of macrolide-resistant M. pneumoniae.

RESUMEN Introducción: Mycoplasma pneumoniae es causa frecuente de infecciones respiratorias en niños y jóvenes. Los macrólidos son la primera línea de tratamiento. La rápida emergencia de resistencia a estos antimicrobianos ha motivado el desarrollo de métodos moleculares para su detección en muestras clínicas positivas a este patógeno. Objetivo: Implementar un método de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR) para la detección de resistencia a macrólidos a partir de muestras clínicas positivas a M. pneumoniae. Métodos: Se implementó una RT-PCR para la detección de las mutaciones A2058G y A2059G en el ARNr 23S de M. pneumoniae. Se analizaron 24 muestras clínicas positivas a M. pneumoniae, que provenían de pacientes con síntomas respiratorios. Se evaluó la sensibilidad, especificidad, repetibilidad y reproducibilidad de la RT-PCR. Resultados: La RT-PCR mostró un 100 % de especificidad para M. pneumoniae y un 92 % de sensibilidad, con un límite de detección de 2 copias/µL, que equivale a 10 copias/reacción. Además, se demostró la reproducibilidad y repetibilidad de estos resultados. Se obtuvo una correcta identificación de los genotipos salvaje y mutante, correspondientes a cada control. De las muestras clínicas positivas a M. pneumoniae, el 77,3 % (17/22) se identificó como sensible a macrólidos y el 22,7 % (5/22) como resistente. Conclusiones: La alta sensibilidad y especificidad del método de RT-PCR implementado permite que el Laboratorio Nacional de Referencia de Micoplasmas del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí cuente con un método eficaz para el diagnóstico de M. pneumoniae resistente a macrólidos.

ABSTRACT Introduction. Mycoplasma pneumoniae is a common cause of respiratory tract infections in humans and, less frequently, extrapulmonary infections are described. In Cuba, the diagnosis of Mycoplasma pneumoniae is only done in the National Reference Laboratory of Mycoplasmas (NRL-M) at IPK and, until 2012, this species had only been detected in 2 studies. Methods. Methods were implemented for the Mycoplasma pneumoniae diagnosis, the antimicrobial susceptibility determination, and the antimicrobial resistance molecular detection. Descriptive studies were conducted for the Mycoplasma pneumoniae detection in patients with respiratory symptomatology, for the antimicrobial susceptibility patterns of clinical isolates, the macrolide resistance detection in positive clinical samples, and the detection of Mycoplasma pneumoniae genotypes. Results and Discussion. Mycoplasma pneumoniae was detected in 5.2 % (96/1836) of patients with Severe Acute Respiratory Infections and Influenza-like illness, all negative to respiratory virus. Mycoplasma pneumonia was demonstrated in 25.8 % (31/120) of children with coqueluchoid syndrome, 23 % (17/74) of children with interstitial pneumonia, and 60% (9/15) of children with non-controlled asthma. The macrolide resistance in Mycoplasma pneumoniae was showed in Cuba for the first time, detected in a 22.5%, and confirmed by the demonstration of the associated molecular mechanisms. The Mycoplasma pneumoniae genotypes circulating in the country were described and 5 new sequence types were identified. It was concluded that these pieces of scientific evidence support the pathogenic role of this species and suggest the necessity of an active surveillance.

RESUMEN Introducción. Mycoplasma pneumoniae constituye una causa frecuente de infecciones del tracto respiratorio en humanos, y en menor frecuencia, se describen infecciones extrapulmonares. En Cuba el diagnóstico de Mycoplasma pneumoniae solo se realiza en el Laboratorio Nacional de Referencia de Micoplasmas (LNR-M) del IPK, y hasta el año 2012 solo se habían realizado 2 estudios donde se detectó esta especie. Métodos. Se implementaron métodos para el diagnóstico de Mycoplasma pneumoniae, la determinación de la susceptibilidad antimicrobiana, así como para la detección molecular de resistencia antimicrobiana. Se realizaron estudios descriptivos para la detección de Mycoplasma pneumoniae en pacientes con sintomatología respiratoria, de los patrones de susceptibilidad antimicrobiana de aislados clínicos, la detección de resistencia a macrólidos a partir de muestras clínicas positivas, y la detección de genotipos de Mycoplasma pneumoniae. Resultados y Discusión. Se detectó Mycoplasma pneumoniae en el 5,2 % de pacientes con Infección Respiratoria Aguda Grave y Enfermedad Tipo Influenza, todos negativos a virus respiratorios. Se demostró Mycoplasma pneumoniae en el 25,8 % de niños con síndrome coqueluchoide, el 23 % de niños con neumonía intersticial y el 60 % de niños con asma no controlada. Se demostró por primera vez en Cuba la resistencia a macrólidos en Mycoplasma pneumoniae, detectándose en un 22,5 %, y se confirmó mediante la demostración de los mecanismos moleculares asociados. Se describieron los genotipos de Mycoplasma pneumoniae circulantes en el país, identificándose 5 secuencias tipo nuevas. Se concluyó que estas evidencias científicas confirman el papel patogénico de esta especie y sugieren la necesidad de una vigilancia activa.

Resumen OBJETIVO: Identificar los microorganismos vaginales más frecuentes en pacientes en trabajo de parto pretérmino, mediante el A.F. Genital System-Liofilchem®. MATERIALES Y MÉTODOS: Estudio descriptivo, prospectivo y transversal llevado a cabo en pacientes en trabajo de parto pretérmino atendidas en el servicio de Ginecología y Obstetricia de la Fundación Hospital Infantil Universitario de San José de Bogotá, entre julio de 2015 y febrero de 2016 de quienes se obtuvieron muestras de flujo del introito vaginal y se sembraron en el panel del A.F. Genital System-Liofilchem®, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Para el análisis de los datos se utilizó el programa estadístico Stata versión 13 (StataCorp®) y se implementó la prueba no paramétrica de Wilcoxon. RESULTADOS: Los microorganismos aislados con mayor frecuencia fueron: Staphylococcus aureus (89.1%), Ureaplasma urealyticum (43.4%) y Mycoplasma hominis (19.5%). De las muestras positivas para especies de micoplasma, 52.2% tuvo concentración mayor de 105 UFC/mL. De los agentes aislados, Ureaplasma urealyticum y Mycoplasma hominis mostraron resistencia de 100% para clindamicina y eritromicina, respectivamente. CONCLUSIONES: Los microorganismos vaginales representan un factor de riesgo de parto pretérmino. Ureaplasma urealyticum y Mycoplasma hominis muestran resistencia total a clindamicina y eritromicina.

Abstract OBJECTIVE: Determine the frequency of microorganisms present in the vagina of women in preterm labor. MATERIALS AND METHODS: Descriptive, prospective, cross-sectional study of a series of cases of 46 patients treated at the Fundación Hospital Infantil Universitario de San José de Bogotá for preterm labor, who were sampled from the vaginal introitus and planted on the A.F. Genital System-Liofilchem® panel. Genital System by Liofilchem®, according to the manufacturer's instructions. The statistical package Stata version 13 (StataCorp®) was used. The statistical analysis was descriptive, the nonparametric Wilcoxon test was run. RESULTS: The most isolated microorganism was Staphylococcus aureus with a frequency of 89.13%. Ureaplasma urealyticum was detected in 43.48% and Mycoplasma hominis in 19.57 Of the positive samples for genital Mycoplasmas, 52.2% showed a concentration >105 CFU/mL. Ureaplasma urealyticum isolates showed 100% resistance to clindamycin and 100% Mycoplasma hominis for erythromycin. CONCLUSIONS: Microorganisms that have been identified as risk factors for preterm delivery were identified in 93.5% of the vaginal discharge samples. For Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis, 100% resistance for clindamycin and erythromycin is identified.

En la modalidad de ensayos de aptitud, las comparaciones interlaboratorios son un requisito del sistema de gestión de la calidad que se utiliza para comprobar el desempeño y establecer la competencia de los laboratorios de ensayo. En tal sentido, el Laboratorio de Diagnóstico de Micoplasmas (MYCOLAB), perteneciente al Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, y el Laboratorio de Diagnóstico de Micoplasmas del Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kourí”, realizaron desde el año 2007 hasta 2014 rondas anuales de ensayos de aptitud. La actividad contó con un panel de muestras de referencia que representaron las cuatro principales matrices biológicas utilizadas por los clientes, contaminadas con cepas de referencia de micoplasmas. Como resultado de estas comparaciones se demostró la competencia técnica del laboratorio con resultados satisfactorios durante el periodo evaluado, se reforzó el control interno de los ensayos utilizados y se demostró la capacidad del sistema de diagnóstico para detectar muestras con bajas concentraciones de micoplasmas, lo que aumenta la confiabilidad en los resultados emitidos por el laboratorio. Esta actividad, mantenida como política del laboratorio MYCOLAB y los resultados satisfactorios obtenidos, fueron esenciales para alcanzar la acreditación de los ensayos microbiológicos destinados a la detección de micoplasmas

In the proficiency testing modality, interlaboratory comparisons are a requirement of the quality management system used to test performance and establish the competence of test laboratories. In that sense, the Mycoplasma Diagnostic Laboratory (MYCOLAB) belonging to the National Center for Animal and Plant Health, together with the Mycoplasma Diagnostic Laboratory of the Tropical Medicine Institute “Pedro Kourí”, conducted annual rounds of proficiency testing from 2007 to 2014. The activity had a panel of reference samples representing the four main biological matrices used by the clients, contaminated with reference strains of mycoplasmas. As a result of these comparisons, the technical competence of the laboratory was demonstrated with satisfactory results during the period evaluated, the internal control of the tests used was strengthened and the diagnostic system was able to detect samples with low concentrations of mycoplasmas, which increased reliability in the results obtained by the laboratory. This activity, maintained as a policy of the MYCOLAB laboratory and the satisfactory results obtained, were essential to achieve the accreditation of microbiological tests for the detection of mycoplasmas

El diagnóstico de las infecciones por Mycoplasmagenitalium mediante métodos bacteriológicos tradicionales resulta laborioso y poco práctico. Es por ello que los métodos moleculares basados en la amplificación del ADN se utilizan con fines diagnósticos de infecciones causadas por este microorganismo. En Cuba no existen informes de la implementación y utilización de los métodos de reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) para la detección y cuantificación de este patógeno. En este trabajo se implementó una qPCR para la detección y cuantificación de M. genitalium mediante la amplificación de un fragmento del gen mgpB que codifica para la proteína adhesina celular, mediante la tecnología LightCycler®(Roche), utilizando los métodos de qPCRSYBR Green I y TaqMan. Se evaluó la especificidad y sensibilidad de dicha PCR utilizando ADN de M. genitalium y de otros micoplasmas de origen humanos. Se logró la implementación de ambos métodos de qPCR con un límite de detección de 3,6 geq/µL, siendo la plataforma TaqManla que mostró mejor eficiencia. Ambos métodos mostraron una alta especificidad para la detección de M. genitalium y no se detectaron reacciones cruzadas con otros micoplasmas de origen humano. Se implementó por primera vez en Cuba una qPCR para la detección de M. genitalium. El método TaqMan mostró mejor desempeño parala futura aplicación de esta metodología en muestras clínicas. El presente trabajo permitirá realizar estudios de caracterización genética y antigénica de las cepas circulantes en Cuba, útiles para conformar un inmunógenovacunal.

The diagnosis of M. genitalium infections by bacteriological culture is not feasible due to slow growth and that is time-consuming. Consequently, molecular methods using DNA amplification are widely used in the infection diagnosis procedure. There are no reports in Cuba of the implementation and use of quantitative Polymerase Chain Reaction methods for the detection and quantification of this pathogen. The aim of this study was to implement a qPCR method for the detection of M. genitalium by the amplification of the mgpBadhesin gene using two LightCycler® (Roche) protocols, SYBR Green I and TaqMan. The specifity and sensitivity were evaluated by using DNA of M. genitalium as well as other mycoplasms of human origin. In both qPCR-protocols, a limit of detection of 3.6 genome equivalents per µL template (geq/µL) was reached. The TaqMan protocol showed better efficiency than the SYBR Green assay. Both protocols showed a high specificity for the detection of M. genitalium, without cross-reactions with other mycoplasmas of human origin. For the first time in Cuba, a qPCR for detection of M. genitalium was implemented. The TaqMan method showed a better performance than the SYBR method and should be used for future applications in clinical samples. The present work will allow performing future studies of genetic and antigenic characterization of the circulating strains in Cuba, useful as vaccine immunogen.

El diagnóstico de las infecciones por Mycoplasma genitalium mediante métodos bacteriológicos tradicionales resulta laborioso y poco práctico. Es por ello que los métodos moleculares basados en la amplificación del ADN se utilizan con fines diagnósticos de las infecciones causadas por este microorganismo. En Cuba se han realizado pocos estudios sobre la presencia de M. genitalium en el tracto urogenital. El objetivo de la presente investigación fue detectar M. genitalium en individuos cubanos sexualmente activos mediante la implementación de métodos de PCR simple. Se implementaron dos PCR simples para la detección de fragmentos de 427 pb del gen ARN ribosomal 16S y 281 pb del gen de la adhesina celular MgPa de M. genitalium, que se evaluaron en muestras de exudado endocervical provenientes de 300 mujeres con sintomatología urogenital y muestras de orina de 49 hombres asintomáticos sexualmente activos. Se logró un límite de detección de la PCR del ARNr 16S de aproximadamente 5 copias de genoma por reacción, mientras que para la PCR MgPa se logró la amplificación de solo 50 copias de genoma por reacción. El 3% (10/300) de los exudados endocervicales y el 24,5% (12/49) de las muestras de orina de hombres asintomáticos resultaron positivas mediante ambas PCR. El mayor porcentaje de muestras positivas correspondió a las muestras de orina provenientes de hombres asintomáticos, que resultó superior a lo esperado. El presente trabajo permitirá realizar estudios futuros de caracterización genética y antigénica de las cepas de Mycoplasma genitalium circulantes en Cuba, útiles para conformar un inmunógeno vacunal.

The diagnosis of Mycoplasma genitalium infections by bacteriological culture is not feasible due to slow growth and that is time-consuming. Consequently, molecular tools using DNA amplification are widely used in the infection diagnosis. There are few reports in Cuba on infections caused by this pathogen. The aim of this study was to detect M. genitalium in clinical samples from sexually active individuals, by two PCR assays. PCR-methods were implemented and evaluated on clinical samples for the detection of M. genitalium using fragments of the 16S rRNA (427 pb) and mgpB adhesion genes (281 pb) as targets. The PCR assays were used on 300 endocervical swabs from female patients with urogenital symptoms and on 49 first-void-urine samples from asymptomatic males. The limit of detection of 16S PCR and MgPa PCR-assays were of 5 and 50 geq/µL, respectively. For the analyzed clinical samples, 3% (10/300) of female swabs and 24.5% (12/49) of urine samples from asymptomatic men were positive for M. genitalium by the two PCR assays. In contrast to the anticipated results, male urine samples had the highest positive rate. Two PCR assays for the detection of M. genitalium were implemented and successfully used on clinical samples, with the unexpected finding of a high positive rate in specimens from asymptomatic men. The current work will allow performing future studies of genetic and antigenic characterization of the circulating Mycoplasma genitalium-strains in Cuba, useful as vaccine immunogen.

Introducción: Mycoplasma y Ureaplasma se asocian como agentes etiológicos de infecciones oportunistas en pacientes VIH-positivos. El diagnóstico microbiológico de las infecciones respiratorias causadas por micoplasmas es un tanto laborioso. La utilización de medios de cultivos específicos y selectivos para estos microorganismos constituye un paso decisivo en esos procederes. Objetivo: detectar la presencia de Mycoplasma spp. como agente etiológico de infecciones respiratorias en pacientes cubanos inmunocomprometidos. Métodos: se analizaron 54 muestras de esputos provenientes de pacientes VIH-positivos con síntomas respiratorios, mediante el cultivo bacteriológico en medio SP-4 modificado y la posterior identificación de los aislados por técnicas bioquímicas y moleculares. Resultados: el 16 % (9/54) de las muestras mostró crecimiento de Mycoplasma spp. Todos los aislamientos se confirmaron como pertenecientes a la clase Mollicutes mediante la reacción en cadena de la polimerasa, sin embargo, ninguno fue capaz de ser identificado mediante los juegos de cebadores ensayados para cada una de las especies estudiadas. Conclusiones: los resultados brindan evidencias sugestivas de la reemergencia de Mycoplasma spp. como patógeno responsable de manifestaciones respiratorias en los pacientes cubanos VIH-positivos, lo que sugiere la necesidad de tomar en cuenta a estos microorganismos en el momento de indicar los estudios microbiológicos a pacientes con manifestaciones respiratorias.

Introduction: Mycoplasma and Ureaplasma are recognized as etiologic agents of opportunistic infections in HIV-positive patients. The microbiological diagnosis of respiratory infections caused by mycoplasmas is an arduous task. The use of specific selective culture media for these microorganisms is a decisive step in the procedures to be followed. Objective: detect the presence of Mycoplasma spp. as an etiologic agent of respiratory infections in Cuban immunocompromised patients. Methods: 54 sputum samples from HIV-positive patients with respiratory symptoms were analyzed by bacteriological culture in modified SP-4 medium followed by identification of the isolates by biochemical and molecular techniques. Results: growth of Mycoplasma spp. was observed in 16 % (9/54) of the samples. Polymerase chain reaction confirmed that all isolates belonged to the class Mollicutes. However, none could be identified with the sets of primers assayed for each of the species studied. Conclusions: results provide evidence suggestive of the reemergence of Mycoplasma spp. as a pathogen responsible for respiratory manifestations in Cuban HIV-positive patients, which points to the need to take these microorganisms into consideration when indicating microbiological examinations to patients with respiratory manifestations.

OBJETIVO: El microorganismo Mycoplasma genitalium se ha relacionado con la uretritis no gonocócica (UNG). La técnica de PCR se ha convertido en el principal método de detección de este patógeno. En consecuencia, debe aplicarse un método de diagnóstico mediante la amplificación de fragmentos de ADN por la técnica PCR. MATERIAL Y MÉTODOS: Se seleccionaron los cebadores MGF-MGR y MgPaF-MgPaR, complementarios de los genes de ARNr 16S y MgPa de M. genitalium, respectivamente. Se efectuaron ensayos de especificidad y sensibilidad y se estudiaron muestras clínicas. RESULTADOS: La PCR con cada grupo de cebadores utilizado fue específica sólo para M. genitalium y la sensibilidad fue mayor con el grupo de cebadores MGF-MGR. En el estudio de 34 muestras clínicas, 18.5% fue positivo a M. genitalium y se encontró un mayor número de muestras positivas al utilizar los cebadores MgPaF-MgPaR. CONCLUSIONES: Debe aplicarse en la práctica clínica el diagnóstico de M. genitalium mediante la amplificación del ADN por PCR en los pacientes con UNG.

OBJECTIVE: Mycoplasma genitalium has been associated with nongonococcal urethritis (NGU). Diagnosis by PCR has become the primary detection method for this organism. Thus, diagnosis by DNA amplification using the PCR technique should be utilized. MATERIAL AND METHODS: GMF/GMR and MgpF/MgpR primer pairs, complementary to the M. genitalium 16S rRNA and MgPa genes, respectively, were selected. Specificity and sensibility assays were conducted and clinical samples were studied. RESULTS: The PCR with each primer pair was specific only for M. genitalium, and the sensibility was higher with the GMF/GMR primers. In the study of 34 clinical samples, 18,5% were positive for M. genitalium, with more positive samples when the MgpF/MgpR primers were used. CONCLUSIONS: DNA amplification by PCR should be applied in clinical practice to the diagnosis of M. genitalium in patients with NGU should using.

OBJETIVO: El microorganismo Mycoplasma genitalium se ha relacionado con la uretritis no gonocócica (UNG). La técnica de PCR se ha convertido en el principal método de detección de este patógeno. En consecuencia, debe aplicarse un método de diagnóstico mediante la amplificación de fragmentos de ADN por la técnica PCR. MATERIAL Y MÉTODOS: Se seleccionaron los cebadores MGF-MGR y MgPaF-MgPaR, complementarios de los genes de ARNr 16S y MgPa de M. genitalium, respectivamente. Se efectuaron ensayos de especificidad y sensibilidad y se estudiaron muestras clínicas. RESULTADOS: La PCR con cada grupo de cebadores utilizado fue específica sólo para M. genitalium y la sensibilidad fue mayor con el grupo de cebadores MGF-MGR. En el estudio de 34 muestras clínicas, 18.5% fue positivo a M. genitalium y se encontró un mayor número de muestras positivas al utilizar los cebadores MgPaF-MgPaR. CONCLUSIONES: Debe aplicarse en la práctica clínica el diagnóstico de M. genitalium mediante la amplificación del ADN por PCR en los pacientes con UNG.

OBJECTIVE: Mycoplasma genitalium has been associated with nongonococcal urethritis (NGU). Diagnosis by PCR has become the primary detection method for this organism. Thus, diagnosis by DNA amplification using the PCR technique should be utilized. MATERIAL AND METHODS: GMF/GMR and MgpF/MgpR primer pairs, complementary to the M. genitalium 16S rRNA and MgPa genes, respectively, were selected. Specificity and sensibility assays were conducted and clinical samples were studied. RESULTS: The PCR with each primer pair was specific only for M. genitalium, and the sensibility was higher with the GMF/GMR primers. In the study of 34 clinical samples, 18,5% were positive for M. genitalium, with more positive samples when the MgpF/MgpR primers were used. CONCLUSIONS: DNA amplification by PCR should be applied in clinical practice to the diagnosis of M. genitalium in patients with NGU should using.

Se realizó un estudio observacional descriptivo, para determinar la frecuencia de aislamientos de Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum y Ureaplasma urealyticum en pacientes con vaginosis bacteriana, donde se incluyeron 296 pacientes con secreción vaginal, atendidas en consultas médicas en 2 hospitales. El diagnóstico se llevó a cabo según los criterios Amsel, y a las mujeres positivas a esta enfermedad se les tomó muestra de exudado endocervical para el diagnóstico por métodos convencionales para M. hominis y Ureaplasma spp. Por la reacción en cadena de la polimerasa se identificaron U. parvum y U. urealyticum. Se diagnosticó vaginosis bacteriana en 30,1 % de las pacientes, y en 77,5 % se detectó la presencia de los micoplasmas urogenitales estudiados. M. hominis fue la especie más frecuente encontrada (71 %), mientras que U. parvum y U. urealyticum se identificaron en 23,2 y 5,8 %, respectivamente. En las mujeres con vaginosis bacteriana se debe realizar el diagnóstico de micoplasmas y ureaplasmas, lo que permitiría instaurar un adecuado control terapéutico, y ayudaría a evitar futuras enfermedades en el tracto genital.

An observational descriptive study to determine the frequency of Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum and Ureaplasma urealyticum isolates in patients with bacterial vaginosis was carried out in 296 patients who had vaginal secretion and were seen at two hospitals. The diagnosis was based on Amsel´s criteria. Endocervical swabs were taken from women positive to this disease for M. hominis and Ureaplasma spp. diagnosis by traditional methods. Polymerase chain reaction identified U. parvum and U. urealyticum. Bacterial vaginosis was diagnosed in 30.1 % of females, and in 77.5 % of them the studied urogenital mycoplasmas were present. M. hominis was the most common species (71 %) whereas U. parvum and Urealyticum were detected in 23.2 % and 5.8% of cases respectively. The diagnosis of Mycoplasmas and ureaplasmas should be performed in females with bacterial vaginosis, which will allow applying adequate therapeutic control and avoiding future pathologies in the genital tract.

Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum y Ureaplasma urealyticum son especies relacionadas con enfermedades del tracto genitourinario, y particularmente con la uretritis no gonocócica (UNG) en el hombre. Los cultivos de estos microorganismos resultan complicados, por lo que las técnicas moleculares, principalmente la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), se han convertido en el principal método de detección de estos organismos. Objetivo: Implementar un método molecular basado en tecnología de genes para el diagnóstico de estas cuatro especies de micoplasmas genitales, aplicándolo en muestras clínicas de pacientes con UNG. Material y métodos: Se crearon las condiciones para un PCR-Múltiple para identificar estas especies empleando como muestra ADN de referencia, utilizando los juegos de cebadores complementarios a fragmentos de los genes de la proteína adhesiva de M. genitalium (MgPa), ARN ribosomal 16S de M. hominis, región espaciadora entre los genes del ARN ribosomal 16S y 23S de U. parvum, y de la región espaciadora adyacente al gen de la ureasa y específico para U. urealyticum, siendo un método específico y sensible. Resultados: Al analizar 34 muestras de exudado uretral, 27 correspondieron a la clase Mollicutes, obteniéndose 14,8% de positividad a M. genitalium, 18,5% a M. hominis, 11,1% a U. urealyticum y 3,7%. a U. parvum. Con este trabajo se realizó por primera vez el diagnóstico de M. genitalium, M. hominis, U. parvum y U. urealyticum en muestras uretrales de pacientes cubanos. Conclusión: Se recomienda incluir el diagnóstico de estas especies en un mayor número de pacientes cubanos con síntomas uretrales, para validar el método propuesto y conocer la relación de estos microorganismos con la UNG.

Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum and Ureaplasma urealyticum are species related with some pathologies of the urogenital tract, and particularly with non gonococal urethritis (NGU) in men. The culture of these microorganisms is very dificult, that’s why the molecular techniques, mainly the polymerase chain reaction, have become in the main detection method of this organisms. Objectives: To improve a molecular method based in technology of genes for the diagnosis of this four genital micoplasma species, applying the same in clinical samples from patients with NGU. Materials and methods: The conditions were created for a Multiplex-PCR for identify this species, using as sample reference DNA, the pairs of primer complementary to the adhesion protein gene of M. genitalium (MgPa), the rRNA 16S of M. hominis, an specific region between rRNA 16S and rRNA 23S genes of U. parvum, and the adjacent region to the urease gene specific for U. urealyticum, being a specific and sensitive method. Results: When analyzing 34 urethral sawbs samples, 27 corresponded to the Mollicutes Class, being 14,8% positive to M. genitalium, 18,5% to M. hominis, 11,1% to U. urealyticum and 3,7% to U. parvum. It was realized for fist time the diagnosis of M. genitalium, M. hominis, U. parvum and U. urealyticum in urethral samples from Cuban patients. Conclusion: It is recommended to include the diagnosis of these species in other Cuban patients with urethral symptoms, to validate the proposed method and to know the relation of these microorganisms with the NGU.