As recentes ferramentas biotecnológicas para o melhoramento in vitro de citros incluem a hibridação somática por fusão de protoplastos. A otimização dos protocolos de isolamento, plaqueamento e cultura de protoplastos, fundamental para maior eficiência na produção de híbridos somáticos, foi avaliada em 11 variedades cítricas. As soluções enzimáticas testadas foram: 1. celulase Onozuka RS, 1%; macerase R-10, 1%, pectoliase Y-23, 0,2%; 2. celulase Onozuka R-10, 0,2 %; macerase R-10, 0,3%; driselase, 0,1%; 3. celulase Onozuka R-10, 1%; macerase R-10, 0,2%; driselase, 0,1%. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado em meio de cultura EME 0,7 M, nas densidades de 2 x 10(4); 5 x 10(4); 10(5); 2 x 10(5) e 3 x 10(5) protoplastos.mL-1, no escuro, a 25 ± 1°C. A solução enzimática 1 possibilitou melhor rendimento no isolamento de protoplastos para a maioria das variedades, exceto para o limão-'Cravo', onde o melhor rendimento foi obtido na solução enzimática 3, e para as laranjas-doces 'Valência' e 'Succari', que apresentaram maiores rendimentos na solução enzimática 2. A eficiência final de plaqueamento, avaliada aos 90 dias de cultivo, foi superior nas densidades de 10(5) e 2 x 10(5) protoplastos.mL-1, para todas as variedades. O desenvolvimento de embriões somáticos foi observado em todas as variedades, exceto para tangor 'Murcote'.
Recent biotechnological tools for citrus improvement include somatic hybridization by protoplast fusion. The optimization of protoplast isolation, platting and culture, essential for hybrid regeneration, was evaluated in 11 citrus varieties. The enzymatic solutions tested were: 1. cellulase Onozuka RS, 1%; macerozyme R-10, 1%, pectoliase Y-23, 0.2%; 2. celullase Onozuka R-10, 0.2 %; macerozyme R-10, 0.3%; driselase, 0.1%; 3. celulase Onozuka R-10, 1%; macerase R-10, 0.2%; driselase, 0.1%. Protoplasts were cultured in EME 0.7 M at densities of 2 x 10(4); 5 x 10(4); 10(5); 2 x 10(5) e 3 x 10(5) protoplasts.mL-1, in darkness, at 25 ± 1°C. The enzymatic solution 1 resulted in better protoplast isolation for most of the varieties studied, except for Rangpur lime, which presented higher isolation efficiency on enzymatic solution 3, and for 'Valencia' and 'Succari' sweet oranges, with better results were obtained on enzymatic solution 3. Final platting efficiency, evaluated 90 days after culture, was higher at the densities of 10(5) e 2 x 10(5) protoplasts.mL-1, for all varieties. Somatic embryogenesis was observed for all varieties, except for 'Murcott' tangor.