Abstract Ectothermic animals present melanin-containing cells in their integument and viscera. Besides cutaneous melanophores, amphibians have melanomacrophages in the hepatic parenchyma and melanocytes in the viscera, which are also present in their testicular stroma. The native melanocyte stimulating hormone (α-MSH) is the main hormone that modulates the color change in melanophores. However, we still know too little about how the α-MSH acts in vivo on visceral melanin-containing cells. In this study, we collected 30 adult males of Physalaemus nattereri (Anura, Leptodactylidae) to evaluate the short-term effects of α-MSH on melanophores, melanocytes and melanomacrophages under light microscopy. For this, we injected 0.05 ml of a single intraperitoneal dose containing 2.5x10-7 mmol/10g of α-MSH, diluted in ringer solution, in five experimental groups with five individuals each one. The different groups were analyzed after 1, 3, 6, 12 and 24h. The control group with five other individuals received only 0.05 ml of ringer solution. The skin pigmentation increased quickly after animals received the hormone α-MSH with the consequent darkening of the body (body darkness). Melanophores, melanocytes and melanomacrophages responded similarly to the test, with an increase in the area containing melanin. However, melanophores and melanomacrophages reached their darkest pigmentation in a shorter period of time in comparison to the testicular melanocytes, probably due to specific metabolic characteristics of each organ. Thus, we verified that the three types of cells, although present in different organs, are responsive to the native hormone α-MSH, which enables us to treat them as a pigmentary system. melanincontaining melanin viscera stroma αMSH α MSH (α-MSH However study 3 Anura, Anura (Anura Leptodactylidae shortterm short term microscopy 005 0 05 0.0 2.5x107 25x107 x 2.5x10 7 2 5x10 2.5x10- mmol10g mmolg mmol 10g g αMSH, MSH, solution one 1 6 24h h darkness. darkness . darkness) Melanophores test organ Thus organs system 00 0. 5x107 25x10 2.5x1 5x1 25x1 2.5x 5x 25x

The greatest diversity of anurans in the world is in Brazil and one of the major challenges is to reconcile the accelerated economic development with strategies that aim to maintain this diversity in forest fragments, often representing ESUs of some biomes. This study aimed to obtain data that will support conservation projects through the pioneering use of ISSR analysis in Neotropical anurans, estimating the intra- and interpopulation genetic diversity of four populations of P. cuvieri (Paraná and São Paulo regions). Of the 65 loci scored 58 were polymorphic, with 0.797 intrapopulation variation and 0.203 interpopulation variation. The index of interpopulation genetic differentiation (Fst) proved to be high among the population of Marmeleiro-PR and the three populations of SP (Fst > 0.288); genetic dissimilarity was related to the geographical distance. The ISSR proved to be efficient and useful molecular markers in comparison with other markers most widely used for preliminary diagnosis of genetic diversity in populations of amphibians, and could be applied as a tool for future conservation projects, since they could identify potential ESUs and influence decisions on the preservation of fragments.

Stevia is used as a sweetener due to its low calorific value and its taste, which is very similar to that of sucrose. After extraction from dried leaves, stevia extract is dark in colour, and therefore needs to be whitened to increase acceptance by consumers. In this study we tested chitosan, a cationic polyelectrolyte, as flocculant agent for the whitening of the Stevia extract. Positive charges of chitosan can interact electrostatically with a counter-ion, sodium tripolyphosphate (TPP), and then chitosan precipitates. A factorial design was used to study the whitening process, in which Glycosides Removal, Colour Removal, Turbidity Removal and Soluble Solids Removal were evaluated. The studied factors were Chitosan Mass and pH of the TPP solution. The results showed that chitosan is a good flocculant agent, being able to flocculate both the glycosides and the pigments that make the extract coloured.

A maturação dos espermatozóides envolve um extenso e complexo processo que começa com a proliferação e diferenciação das espermatogônias, passa pela meiose e finaliza com a espermiogênese. Nessa fase, eventos envolvendo alterações morfológicas e bioquímicas transformam espermátides em espermatozóides. Aspectos ultra-estruturais da espermiogênese e do espermatozóide do anuro Eupemphix nattereri (Steindachner, 1863) foram analisados através de microscopia eletrônica de transmissão. A espermiogênese envolve condensação da cromatina e alongamento nuclear, com visível eliminação de citoplasma. Nesse estágio, grande quantidade de microtúbulos e glicogênio podem ser visualizados no citoplasma das células de Sertoli, rodeando cada espermátide. O espermatozóide é fusiforme e o acrossomo forma uma capa na região anterior do núcleo. A bainha mitocondrial é encontrada ao redor da porção proximal da cauda. A cauda apresenta o axonema com o modelo 9+2, uma fibra axonemal, a membrana ondulante e ausência de bastão axial. Esta organização apresenta algumas similaridades com espécies do gênero Physalaemus (Leiuperidae) como P. biligonigerus (Cope, 1861), P. gracilis (Boulenger, 1883) e P. fuscomaculatus (Steindachner, 1864).

Spermatozoon maturation involves an extense and complex process beginning with proliferation and differentiation of spermatogonia, passing through meiosis, and ending with spermiogenesis. The later event involves morphological and biochemical changes in order to transform spermatids into spermatozoa. Ultrastructural aspects of the spermiogenesis and testicular spermatozoa of the anuran Eupemphix nattereri (Steindachner, 1863) were analyzed by transmission electron microscopy. Spermiogenesis involves chromatin condensation and nuclear elongation, with visible cytoplasmic elimination. At this stage, a large amount of microtubules and glycogen can also be seen in Sertoli cell cytoplasm, surrounding each spermatid. The spermatozoon is fusiform and the acrossome forms a cap in the anterior region of the nucleus. A mitochondrial sleeve is found around the proximal portion of the tail. The tail presents an axonema with a 9+2 pattern, a justaxonemal fiber, an undulating membrane, and the absence of axial rod. This organization shows some similarities with species of the genus Physalaemus (Leiuperidae) such as P. biligonigerus (Cope, 1861), P. gracilis (Boulenger, 1883) and P. fuscomaculatus (Steindachner, 1864).

Este estudo descreve o ciclo reprodutivo de machos de Dendropsophus minutus (Peters, 1872) com base na análise da morfometria testicular e a correlação com parâmetros climáticos. Cinqüenta indivíduos foram coletados em São José do Rio Preto, São Paulo. Após as análises macroscópicas, os testículos foram encaminhados à rotina histológica, fixados com Bouin e incluídos em historesina. Cortes de 2 µm foram corados com azul de toluidina 1% e observados ao microscópio. Testículos de D. minutus são órgãos pequenos (comprimento 1,90 ± 0,13 mm), esbranquiçados, com forma oval e encontrados na cavidade abdominal. Estão localizados na extremidade cranial dos rins e apresentam assimetria quanto a sua posição. Estatisticamente não há variação intra-individual no comprimento e no peso dos testículos, bem como na área e diâmetro dos lóculos seminíferos. Quanto à histologia testicular, foi possível identificar ao longo do ano nos lóculos seminíferos, todos os tipos celulares da linhagem espermatogênica, caracterizando uma gametogênese contínua, corroborada por fatores ecológicos e comportamentais. Informações sobre a morfometria testicular e ciclo reprodutivo tem importante valor biológico para anuros de regiões neotropicais.

This study describes the male reproductive cycle of Dendropsophus minutus (Peters, 1872) based on testicular morphometric analysis, related to climatic conditions. Fifty individuals where collected in São José do Rio Preto, São Paulo. After macroscopic analysis, the testes were submitted to histological routine, fixed with Bouin, embedded in historesin. Sections of 2 µm were stained with 1% toluidine blue and observed to the microscope. The testes of D. minutus are small organs (length 1.90 ± 0.13 mm), whitish, oviform and found in the abdominal cavity. They are located in the cranial extremity of the kidneys and present asymmetry as far as position. According to statistical analyses, there is no intra-individual variation in length and weight of the testes, as well as in the area and diameter of the seminiferous locules. Concerning the testicular histology, it was possible to identify, throughout the year, in seminiferous locules, all the cellular types from the spermatogenic lineage, characterizing a continuous gametogenesis, corroborated by ecological and behavioral factors. Information about testicular morphometry and reproductive cycle has important biological value for anurans in the neotropics.

Este trabalho descreve variações morfológicas nos órgãos e estruturas do aparelho reprodutor masculino em Chaunus ornatus, analisados independentemente das alterações promotoras de variações estruturais. Foram utilizados sete exemplares adultos da espécie, coletados no Município de Botucatu (São Paulo, Brazil) na época de atividade reprodutiva. Os espécimes foram dissecados e medidas do comprimento rostro-cloacal, análises anatômicas descritivas e biométricas foram obtidas. Três destes animais foram encaminhados à rotina histológica para a análise da arquitetura testicular e esquematizada em papel vegetal com caneta nanquim. Análises estatísticas (média, desvio-padrão, teste de Shapiro-Wilk, teste t de Student e Regressão Linear Simples) foram empregadas para interpretação dos resultados. Os testículos de C. ornatus são cilíndricos com coloração branco-leitosa e possuem uma estrutura ovariana rudimentar, o órgão de Bidder, em sintopia com a extremidade testicular cranial. O aparelho reprodutor masculino de C. ornatus apresenta conspícuas variações anatômicas intra e interindividuais, especialmente no que concerne à forma e tamanho dos testículos e dos órgãos de Bidder, os quais não apresentaram relação com o tamanho do indivíduo. Quanto à localização, os testículos dispõem-se ventralmente aos rins, mas ocorrem em alturas diferentes, acompanhando diferenças atribuídas à própria posição dos rins. Nos corpos adiposos abdominais, a disposição e número de prolongamentos que o constitui é variável entre os membros do par, e conseqüentemente entre indivíduos. Histologicamente não foram observadas diferenças quanto ao arranjo do epitélio germinativo na constituição do lóculo seminífero, portanto estas características parecem seguir o padrão da descrição para os demais anuros. A heterogeneidade morfológica quanto às variações anatômicas nessa espécie teve uma constatação pouco significativa. Assim, outros estudos ainda são necessários para o estabelecimento de relações morfológicas e suas implicações filogenéticas, bem como para compreender como as pressões evolutivas atuam moldando a anatomia dessas estruturas nos anuros.

This work describes morphologic variations in the organs and structures of the male reproductive system in Chaunus ornatus, analyzed independently from the alterations that promote structural variations. Seven adult samples were used, they were collected in Botucatu (São Paulo State, Brazil) during reproductive activity period. The specimens were dissected and rostrum-cloacal length measures were taken. Descriptive and biometrics anatomical analyses were also obtained. Three of these animals were sent to histological routine for the analysis of the testicular architecture, where it was schematized in vegetable paper with pen Indian ink. Statistical analyses (mean, standart deviation, Shapiro-Wilk test, Student's t and Simple Lineal Regression) were used for interpretation of the results. The testes of C. ornatus are cylindrical with white coloration and they possess a rudimentary ovarian structure, the Bidder's organ, in the testicular cranial extremity. The male reproductive system of C. ornatus presents conspicuous anatomical variations intra and interindividuals, especially to the form and size of the testes and of the Bidder's organ, which did not present relationship with the size of individual. As for the location, the testes are disposed ventral to the kidneys, but they are in different levels, accompanying differences attributed to the kidneys levels. The disposition and number of extensions in the abdominal fatty bodies is variable among the pair's members, and consequently among individuals. Histologically differences regarding the germ epithelium arrangement were not observed. The germ epithelium is arranged in seminiferous locule, therefore these characteristics seem to follow the pattern of the description for the other anurans. The morphologic heterogeneity for anatomical variations in that species were few significant. Thus, other studies are still necessary for the establishment of morphologic relations and its phylogenetic implications, as well as to understand how the evolutionary pressures act modeling this anuran structures anatomy.

O presente estudo foi realizado com o intuito de relatar a ocorrência e morfologia de células pigmentares viscerais constituintes do "sistema pigmentar extracutâneo" em Physalaemus nattereri (Steindachner, 1863) (Leptodactylidae). Foram utilizados dez exemplares machos para a análise macroscópica e obtenção de fragmentos testiculares incluídos em resina e corados com H/E. Os anuros, dentre outros animais exotérmicos, possuem células especiais, os melanócitos, que se caracteriza por intensa pigmentação e sintetiza melanina, além de melanomacrófagos, que se caracteriza por atividade fagocítica e muitas vezes apresentam intensa pigmentação. A nomenclatura destas células não é consensual e, por isso, várias denominações são apresentadas, principalmente nos seguintes órgãos: fígado (como sinônimo de células de Kupffer), rins, baço e menos freqüentemente em outras localizações, com os termos - células pigmentares, células pigmentares extracutâneas, macrófagos pigmentados, melanomacrófagos, melanófagos, melanóforos e melanócitos. Para os anuros os estudos são recentes e relatam células pigmentares em poucas espécies. Em Physalaemus nattereri e alguns anuros, os pigmentos melânicos são encontrados, além da cútis, em outros órgãos constituindo um sistema pigmentar extracutâneo, com diferentes ocorrências, tipos e quantidade em distintas espécies. Associados ao aparelho reprodutor de P. nattereri, os melanócitos foram observados nas gônadas, na albugínea e no interstício, especialmente associado com vasos sangüíneos. A notória presença de numerosas células com pigmento distribuídas no testículo confere uma coloração que varia do preto mesclado com branco ao preto intenso. Trata-se de uma rara peculiaridade e não há informações sobre seu significado funcional ou valor biológico.

The testes in the anurans are paired ovoid organs constituted by seminiferous structures surrounded by the fibrous connective tissue, commonly unprovided of pigments. This study tried to analyze the morphological characteristics of rare and conspicuous pigment-containing cells and their relationship with other structures. The pigment cells are variously and indistinctly also termed Kuppfer cells in the liver, pigment cells, extracutaneous pigment cells, pigmented macrophages, melanomacrophages, melanophage, melanophores and melanocytes in the liver, spleen and kidney and other visceral structures of exothermic vertebrates. Ten male samples of Physalaemus nattereri (Steindachner, 1863) (Leptodactylidae) were used. After macroscopic analyses, the testicular fragments were submitted to the histological routine, fixed with karnovisky, embedded Historesin and coloration with Haematoxylin/Eosin. A rare peculiarity was the presence of numerous pigment-containing cells (melanocytes) randomly distributed in the albuginea tunic and testicular interstitium, giving the testes a dark brown coloration. This unusual characteristic has been rarely described and in other lower vertebrates, the pigment cells can be found in different organs, constituting an extracutaneous pigmentary system of unknown function. Further, it was identified a conspicuous variation, as to presence and distribution pattern due to possible species-specific aspects. However, histologically there is no difference in the germ epithelium arrangement. Between the seminiferous locules, there is an inter-locular tissue composed by Leydig interstitial cells, fibroblasts, efferent ductules, melanocytes and blood vessels. This inter-locular tissue is relatively scarce, presenting melanocytes in all specimens analyzed intimate associated with blood vessels. They are irregular cells with numerous melanosomes and long cytoplasmic processes.

O estudo apresenta algumas características histológicas das células germinativas ovarianas de Scinax fuscovarius (Lutz, 1925) após análise com colorações pelo H/E e Tricrômico de Mallory. O ovário apresenta as células germinativas primordiais, as ovogônias, as quais passam por uma citodiferenciação e, juntamente com células somáticas associadas, constitui estruturas foliculares, os folículos ovarianos, que são os ovócitos envolvidos por células foliculares. Ovogônias: formam ninhos perifericamente localizados, contendo células com núcleo grande e oval associadas com uma única célula folicular. Ovócitos I: o citoplasma é discretamente basófilo; seu núcleo é esférico e apresenta poucos nucléolos, geralmente se observa um ou dois; as células foliculares se apresentam em uma camada (epitélio pavimentoso simples) que circunda a célula germinativa em estado pré-vitelogênico. Ovócitos II: a célula é maior que a anterior e o citoplasma torna-se mais basófilo; o núcleo apresenta raros nucléolos na periferia e muitos cromossomos constituindo arranjos irregulares, é quando se inicia o estádio perinucleolar. Ovócitos III: o citoplasma adquire intensa acidofilia; a região periférica do citoplasma é preenchida por inclusões vitelínicas que ainda não ocorrem na região interna; inicia-se a síntese de pigmentos; o envoltório folicular apresenta três camadas: uma interna acelular (envoltório vitelínico) e duas camadas de células foliculares. Ovócitos IV: uma característica deste estádio é a diferenciação entre o pólo animal e o vegetal; o núcleo ou vesícula germinativa se desloca para o hemisfério animal e os pigmentos conferem uma cor marrom escura; a vitelogênese é intensa e o vitelo ocupa todo o citoplasma.

This paper describes morphological characteristics of the ovarian germinative cells of the Scinax fuscovarius (Lutz, 1925). The ovary is organized in primordial germinative cells (oogonia) and follicular structures (ovarian follicle) - oocytes surrounded by follicular cells. Oogonia: their nests are peripherically localized, containing cells with large and oval nucleus. Oocytes I: basophilic cytoplasm; the spherical nucleus presents few nucleoli, one or two; the follicular cells (one tenuous layer) surround these previtellogenic cells. Oocytes II: the cell is larger and the cytoplasm becomes more basophilic; the nucleus presents few nucleoli and contains many chromosomes in the periphery (beginning the perinucleolar stage). Oocytes III: the cytoplasm acquires an intense acidophilia; the peripherical region of cytoplasm is filled with yolk and the internal region has no yolk at all; pigment synthesis begins; the follicular envelope presents three tenuous layers: an inner acellular (vitelline envelope) and two cellular layers (follicle cells). Oocytes IV: a characteristic of this stage is the differentiation between the animal and the vegetal poles; the nucleus in the animal hemisphere and the pigments give the oocyte a color dark brown; the vitellogenesis is intense and the yolk occupies the whole cytoplasm.

In general, the testes in the anurans are paired ovoid organs, constituted by a mass of seminiferous structures surrounded by a layer of fibrous connective tissue, which holds a germ epithelium with characteristic cellular types. This study describes the testicular histological architecture and anatomy, as well as the organization and morphology of germ cells. Five male samples, from the Botucatu area (São Paulo State, Brazil), of Physalaemus cuvieri (Leptodactylidae) were used. After macroscopic analyses and obtainment of the testicular fragments, the material was submitted to the histological routine to inclusion in paraffin and coloration with haematoxylin/eosin. A rare peculiarity is the presence of numerous pigment-containing cells randomly distributed in the albuginea tunic and testicular interstitium, giving the testis a dark brown coloration. In the germ tissue the spermatogonia I are biggest spermatogenetic cells. With the cellular differentiation and proliferation, succeded the other cellular types (spermatogonia II, spermatocytes I and II, spermatids I and II, and spermatooza) with a cystic organization, that is, groups of cells associated with Sertoli cells, forming the spermatogenetic cysts or spermatocysts. The spermatogenetic lineage cells were differentiated and identified according to the cellular and cystic morphology.

Generalmente, los testículos de anuros constituyen órganos ovoides, pares, formados por masa de estructuras seminíferas, envueltas en una capa de tejido conjuntivo fibroso, que contiene un epitelio germinativo provisto de tipos celulares característicos. En este trabajo se describe la anatomía y la arquitectura histológica de los testículos, así como también la organización y morfología de las células germinativas. Se utilizaron cinco ejemplares machos de la especie Physalaemus cuvieri (Leptodactylidae), provenientes de la zona de Botucatu (São Paulo, Brasil). Tras el análisis macroscópico y la obtención de los fragmentos testiculares, el material se sometió a las técnicas histológicas rutinarias para su inclusión en parafina y coloración con hematoxilina/eosina. Se constató como rara peculiaridad la presencia de numerosas células con pigmento distribuidas de forma aleatoria en la túnica albugínea e intersticio testicular, las cuales otorgan al testículo una coloración marrón oscura. En el tejido germinativo las espermatogonias I son las mayores células espermatogenéticas. En la secuencia de la diferenciación y proliferación celulares, se siguen los demás tipos de células (espermatogonias II, espermatocitos I y II, espermátidas I y II, y espermatozoides) que presentan una organización cística, es decir, grupos de células se asocian a las células de Sertoli, formando los cistos espermatogenéticos o espermatocistos. Se diferenciaron e identificaron las células del linaje espermatogenético, según la morfología de las células y del propio cisto.