AbstractLupinus synthesizes quinolizidine alkaloids (AQ) as a defense strategy against herbivores. These compounds have a wide variety of applications; however, it is necessary to have a sufficient amount of raw material to satisfy market needs. The species rich in these compounds are wild species, which limits the obtaining of the raw material. One of the strategies for obtaining raw material and producing secondary metabolites is the use of biotechnological tools such as plant tissue culture. In this work we report the characterization of germination, callus induction of Lupinus bilineatus and L. montanus and the characterization of in vitro growth and AQ production. The culture medium and seed scarification protocol allowed the germination of seeds of both species with percentages at 12 days of 100% for L. bilineatus and 74% for L. montanus. With respect to callus induction, a sweep of indolbutyric acid (2,4-D) and cinetin (CIN) concentrations was employed using leaf, stem and root as explants. The best response for callus induction for both species was presented using root with a combination of 2 mg L-1 of 2,4-D and 1 mg L-1 of CIN for L. bilineatus and 1 mg L-1 of 2,4-D and 0.5 mg L-1 of CIN for L. montanus, in both cases friable callus was obtained with two colorations: green and beige. Growth and AQ production were characterized for green callus, since AQ are synthesized in photosynthetic tissues. The growth kinetics shows a characteristic three-phase curve, an adaptation phase extending to day seven, the fastest growth phase and finally a senescence phase starting on day 18. AQ production was observed on day 21. This work contributes to the knowledge of germination behavior, the induction of dedifferentiated tissue and the growth and production of alkaloids in a callus culture in two species of Lupinus, L. montanus and L. bilineatus, both with potential in the chemical and agrochemical industry.

Resumen Lupinus sintetiza alcaloides quinolizidínicos (AQ) como estrategia de defensa en contra de herbívoros. Estos compuestos tienen una amplia variedad de aplicaciones; sin embargo, es necesario contar con la suficiente cantidad de materia prima para satisfacer las necesidades del mercado. Las especies ricas en estos compuestos son especies silvestres, lo que limita la obtención de la materia prima. Una de las estrategias para la obtención de materia prima y la producción de metabolitos secundarios es el uso de herramientas biotecnológicas como el cultivo de tejidos vegetales. En este trabajo se reporta la caracterización de la germinación, la inducción de callo de Lupinus bilineatus y L. montanus y la caracterización del crecimiento in vitro y producción de AQ. El medio de cultivo y el protocolo de escarificación permitieron la germinación de las semillas de ambas especies a los 12 días con porcentajes de 100% para L. bilineatus y de 74% para L. montanus. Con respecto a la inducción de callo, se empleó un barrido de concentraciones de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) y cinetina (CIN) utilizando como explante cotiledón, hipocótilo y raíz. La mejor respuesta para la inducción de callo para ambas especies se presentó usando raíz con una combinación de 2 mg L-1 de 2,4-D y 1 mg L-1 de CIN para L. bilineatus y 1 mg L-1 de 2,4-D y 0.5 mg L-1 de CIN para L. montanus, en ambos casos se obtuvo callo friable con dos coloraciones: verde y beige. El crecimiento y la producción de AQ se caracterizaron para el callo verde, pues los AQ se sintetizan en tejidos fotosintéticos. La cinética de crecimiento muestra una característica curva de tres fases, una fase de adaptación que se alarga hasta el día siete, la fase de crecimiento más rápido y finalmente una fase de senescencia que inicia el día 18. La producción de AQ se observó el día 21. Este trabajo contribuye al conocimiento del comportamiento de la germinación, la inducción de tejido desdiferenciado y el crecimiento y producción de alcaloides en un cultivo de callo de dos especies de Lupinus, L. montanus y L. bilineatus, ambas con potencial en la industria química y de agroquímicos.

Abstract Background: Currently, no standardized treatment for severe alopecia areata (AA) exists. Numerous successful cases of the use of tofacitinib have been reported in the world literature, but not in Mexico. Four Mexican adolescents with severe AA treated with oral tofacitinib are reported in the present work. Methods: Series of cases of adolescents with severe AA treated with oral tofacitinib. The severity of alopecia tool was used to determine the response to treatment. Results: Four patients from 13 to 19 years old, were included. In all cases, hair growth was observed, and the alopecia severity decreased after the treatment with tofacitinib. In two patients, an intermediate response (from 51 to 90%) was observed; in the other, a moderate response (from 6 to 50%) was observed, without serious adverse effects. The limitations of the study were the small sample size and the retrospective nature of data collection. Conclusions: Tofacitinib showed to be a good treatment alternative for AA, total and universal, refractory to other therapies.

Resumen Introducción: Actualmente no existe un tratamiento estandarizado para la alopecia areata (AA) grave. Se han reportado numerosos casos exitosos del uso de tofacitinib; sin embargo, no existen publicaciones en México. En este trabajo se reportan cuatro casos de pacientes mexicanos con AA grave tratados con tofacitinib oral. Métodos: Serie de casos de adolescentes con alopecia grave tratados con tofacitinib oral. Para determinar la respuesta al tratamiento se utilizó la Escala de gravedad de alopecia (Severity of alopecia tool). Resultados: Se incluyeron cuatro pacientes de entre 13 y 19 años con AA. En todos los casos se observó crecimiento de cabello y disminución de la gravedad de la alopecia después del tratamiento con tofacitinib. En dos pacientes se observó una respuesta intermedia (del 51 al 90%), y en los otros, moderada (del 6 al 50%), sin efectos adversos serios. Las limitaciones del estudio fueron el tamaño reducido de la muestra y la naturaleza retrospectiva de la recolección de los datos. Conclusiones: El tofacitinib demostró ser una buena alternativa de tratamiento para la AA, total y universal, refractarias a otras terapias.

A comparative study of thiamine mononitrate and thiamine hydrochloride potentiometric titrations with a strong base in water was performed. The analysis of resulting curves allowed associating particular reactions to each observed pH break point. The corresponding pKa values were calculated by using the program SUPERQUAD and they were subsequently used to simulate titration curves. The pKa values obtained in the conditions of the present work are: pKa1 = 4.80 ± 0.05, pKa2, > 10.40 ± 0.04, pKa3 < 8.10 ± 0.04. The system behavior mainly depends on parameters such as the time for measuring pH, NaOH concentration and particularly on the stability of one of the two ampholytes. Comparison of calculated and experimental curves revealed the existence of a dismutation reaction which showed that under steady state conditions and the waiting time between two successive pH measurements, the intermediate "pseudobase (B)", called like this by several researchers, practically does not exist. The results led to find the optimal conditions to propose quantitative alkalimetric titrations. The end-points for the assay of thiamine hydrochloride and thiamine nitrate in raw material were detected by potentiometry. This involves the use of reagents and solvents that are environment-friendly.

Se llevó a cabo un estudio comparativo de las titulaciones potenciométricas del mononitrato de tiamina y del clorhidrato de tiamina con una base fuerte en agua. El análisis de las curvas resultantes permitió asociar las reacciones particulares a cada salto de pH observado. Los valores de pKa se calcularon usando el programa SUPERQUAD y posteriormente fueron usados para simular las curvas de titulación. Los valores de pKa obtenidos en las condiciones del presente trabajo son: pKa1 = 4.80 ± 0.05, pKa2 > 10.40 ± 0.04, pKa3 < 8.10 ± 0.04. El comportamiento del sistema depende principalmente de parámetros tales como el tiempo de medida del pH, la concentración de NaOH y particularmente de la estabilidad de uno de los dos anfolitos. La comparación entre las curvas experimentales y simuladas reveló la existencia de una reacción de dismutación la cual mostró que bajo condiciones de estado estacionario y un tiempo de espera entre dos medidas sucesivas de pH, la "pseudobase (B)" intermediaria, llamada así por varios autores, prácticamente no existe. Los resultados llevaron a encontrar las condiciones óptimas para proponer titulaciones álcali-métricas cuantitativas. Los puntos de equivalencia para la determinación de clorhidrato de tiamina y nitrato de tiamina en materia prima fueron detectados por potenciometría. Esto implica el uso de reactivos y disolventes de poco impacto al medio ambiente.