RESUMO O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da suplementação com L-glutamina 2% na inervação mioentérica do íleo de ratos diabéticos, agrupados da seguinte forma: normoglicêmico (N); normoglicêmico suplementado com L-glutamina (NG); diabético (D); e diabético suplementado com L-glutamina (DG). Os íleos foram submetidos a técnicas imunohistoquímicas para localizar neurônios imunorreativos à proteína HuC/D (HuC/D-IR) e enzima óxido nítrico sintase neuronal (nNOS-IR) e para analisar varicosidades imunorreativas ao polipeptídeo intestinal vasoativo (VIP-IR) e peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP-IR). A L-Glutamina no grupo DG (i) preveniu o aumento na área do corpo celular de neurônios nNOS-IR, (ii) preveniu o aumento na área das varicosidades VIP-IR, (iii) não preveniu a perda de neurônios HuC/D-IR e nNOS-IR por gânglio, e (iv) reduziu o tamanho das varicosidades CGRP-IR. A L-Glutamina no grupo NG reduziu (i) o número de neurônios HuC/D-IR e nNOS-IR por gânglio, (ii) a área do corpo celular de neurônios nNOS-IR, e (iii) o tamanho das varicosidades VIP-IR e CGRP-IR. Suplementação com L-glutamina 2% exerceu efeitos neuroprotetores diferenciais na neuropatia diabética experimental que dependem do tipo de neurotransmissor analisado. Entretanto, os efeitos desta dose de L-glutamina em animais normoglicêmicos sugerem que existem ações adicionais desta além da sua capacidade antioxidante.

ABSTRACT The objective of this study was to investigate the effects of 2% L-glutamine supplementation on myenteric innervation in the ileum of diabetic rats, grouped as follows: normoglycemic (N); normoglycemic supplemented with L-glutamine (NG); diabetic (D); and diabetic supplemented with L-glutamine (DG). The ileums were subjected to immunohistochemical techniques to localize neurons immunoreactive to HuC/D protein (HuC/D-IR) and neuronal nitric oxide synthase enzyme (nNOS-IR) and to analyze varicosities immunoreactive to vasoactive intestinal polypeptide (VIP-IR) and calcitonin gene-related peptide (CGRP-IR). L-Glutamine in the DG group (i) prevented the increase in the cell body area of nNOS-IR neurons, (ii) prevented the increase in the area of VIP-IR varicosities, (iii) did not prevent the loss of HuC/D-IR and nNOS-IR neurons per ganglion, and (iv) reduced the size of CGRP-IR varicosities. L-Glutamine in the NG group reduced (i) the number of HuC/D-IR and nNOS-IR neurons per ganglion, (ii) the cell body area of nNOS-IR neurons, and (iii) the size of VIP-IR and CGRP-IR varicosities. 2% L-glutamine supplementation exerted differential neuroprotective effects in experimental diabetes neuropathy that depended on the type of neurotransmitter analyzed. However, the effects of this dose of L-glutamine on normoglycemic animals suggests there are additional actions of this beyond its antioxidant capacity.

Um método simples foi desenvolvido para se estudar a forma geométrica do Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus múltiplo, BmMNPV, para microscopia eletrônica de varredura. O vírus, pertencente à Família Baculoviridae, foi obtido do filtrado, do inóculo e da hemolinfa de lagartas de Bombyx mori (L.) (Lepidoptera: Bombycidae) infectadas. O material foi colocado diretamente sobre o suporte de varredura, onde previamente foi aderida uma fita de cobre. Após secagem e metalização com carbono e ouro, o vírus foi analisado ao microscópio de varredura. Os poliedros apresentaram-se com as faces lisas, perfeitamente definidas, possibilitando a análise matemática que o identificou como um octaedro truncado. A forma do poliedro pode apresentar valor taxonômico, uma vez que ela é específica para cada linhagem viral.

A simplified methodology was developed to study the geometric form of multiple Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus by scanning electron microscopy. The virus belongs to Baculoviridae family and was isolated from the silkworm Bombyx mori (L.) (Lepidoptera: Bombycidae). The polyhedra of Nucleopolyhedrovirus were obtained from the filtrate, inoculum and hemolymph of the silkworm experimentally infected with nuclear polyhedra. This material was placed on stubs, where a copper tape was previously adhered. After dry at room temperature the virus was covered with carbon and gold. Scanning electron microscopy analysis reveled a well defined morphology for the polyhedra of multiple Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus, making possible the mathematical study that identified it as a truncated octahedron. The form of the polyhedron can present taxonomic value, once it is specific for each viral lineage.

O Nucleopolyhedrovirus é um vírus que infecta uma série de insetos, como o bicho-da-seda, Bombyx mori (L.). Um isolado geográfico do vírus, o Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus múltiplo (BmMNPV), foi utilizado para se analisar a citopatologia em células do sistema nervoso central (SNC) de lagartas de B. mori. O BmMNPV foi inoculado experimentalmente e segmentos do tecido nervoso foram processados para microscopia de luz e microscopia eletrônica de transmissão. Células do SNC (nervosas, gliais e do perineuro) revelaram indícios de infecção no 5° dia pós-inoculação com o BmMNPV, cujas características citopatológicas foram: hipertrofia nuclear, presença do estroma virogênico, onde são sintetizados os virions, e formação dos poliedros. Não foi observada lise das células do SNC infectadas, uma característica das infecções pelo NPV; contudo, poliedros maduros foram evidenciados em espaços nos gânglios e conectivos nervosos. Esses poliedros possivelmente são oriundos das traquéias que penetram no sistema nervoso, e suas células, susceptíveis ao BmMNPV, sofrem lise após infecção. Os resultados indicam, ainda, que o sistema traqueal é responsável pela dispersão da infecção causada pelo BmMNPV no SNC de lagartas de B. mori. Neste sentido, os ramos que formam o sistema traqueal possibilitam o rompimento da barreira hemolinfa/sistema nervoso, permitindo que os virions tenham acesso 'a matriz extracelular do SNC e, conseqüentemente, às suas células constituintes.

BmMNPV, a Nucleopolyhedrovirus isolated from infected Bombyx mori (L.) larvae in Paraná State - Brazil, was used to inoculate healthy 5th-instar B. mori larvae and examine the infection on central nervous system (CNS) cells. Samples of nervous tissue were removed from the infected insects, at different sampling times, and processed for cytopathology studies by light and transmission electron microscopy using routine techniques. The experiment included both inoculated and non-inoculated larvae (control). BmMNPV infection was detected on the 5th day after inoculation in CNS cells. Initially, infection was characterized by nuclear hypertrophy and the presence of virogenic stroma, in which the progeny virions were produced. Virions are enveloped and occluded into protein crystal, the polyhedra. Lyses of infected CNS cells were undetected; however, free mature polyhedra were seen in spaces inside the CNS. These polyhedra possibly came from trachea that penetrate the CNS and its cells, which are susceptible to BmMNPV and lyses after infection. We conclude that the tracheal system is responsible for disseminating BmMNPV infection in B. mori CNS and that the tracheal branches allow non-occluded virions to pass through the blood-brain barrier.

Foram investigados os efeitos do diabetes agudo sobre a densidade e o tamanho dos neurônios mioentéricos do colo proximal de ratos adultos. À injeção de estreptozootocina seguiu-se um período de observação de sete dias, durante os quais os animais diabéticos apresentaram perda de peso, ingestão excessiva de alimento e água, grande débito urinário e hiperglicemia. Os preparados de membrana do colo proximal foram corados pelas técnicas de Giemsa e da NADH-diaforase. A aplicação dessas técnicas permitiu constatar uma redução da densidade neuronal e do tamanho do corpo celular dos neurônios mioentéricos no colo dos ratos diabéticos. Essas observações foram discutidas em termos da patofisiologia do diabetes e do protocolo experimental.

The effects of acute diabetes on the density and size of the myenteric neurons of the proximal colon of adult rats were investigated. The injection of streptozotocin was followed by a period of observation of seven days, during which the diabetic animals showed weight loss, excessive food and water intake, large urinary debt and hyperglicemia. The whole-mounts from the proximal colon were stained with the techniques of Giemsa and of the NADH-diaphorase, and the employment of these techniques made it possible to verify a decrease on the neuronal density and on the cell body size of the myenteric neurons in the colon of the diabetic rats. These observations were discussed in terms of the pathophysiology of the diabetes and the experimental protocol.

Este estudo comparou as áreas dos perfis dos corpos celulares e dos núcleos neuronais dos neurônios mientéricos nas regiões antimesentérica e intermediária do duodeno de ratos adultos. Cinco ratos machos foram usados. O duodeno foi removido e dissecado a preparados de membrana, os quais foram corados pela técnica de Giemsa. As áreas dos perfis dos corpos celulares e dos núcleos neuronais de 100 neurônios, 50 de cada região, de cada animal, foram avaliadas com analisador de imagens. Com base na média global±SD das áreas dos perfis dos corpos celulares, os neurônios foram classificados como pequenos, médios ou grandes. Foi observado que os neurônios não diferiram significativamente de tamanho ou incidência entre as regiões antimesentérica e intermediária. Contudo, os núcleos dos neurônios pequenos e médios foram significativamente menores na última. Discute-se que o menor tamanho nuclear poderia estar relacionado ao fato dos corpos celulares serem ligeiramente menores nesta região e a uma atividade biossintética possivelmente menor, que influenciaria o tamanho nuclear.

This study compared the areas of cell body and nucleus profiles of the myenteric neurons in the antimesenteric and intermediate regions of the duodenum of adult rats. Five male rats were used. The duodenum was removed and dissected to whole-mount preparations, which were stained by the Giemsa technique. The areas of cell body and nucleus profiles of 100 neurons, 50 from each region, of each animal, were assessed with image analyser. Based on the global mean±SD of the areas of cell body profiles, neurons were labelled as small, medium or large. It was observed that the neurons did not differ significantly in size or incidence between the antimesenteric and intermediate regions. However, the nuclei of the small and medium neurons were significantly smaller in the latter region. It is discussed that the smaller nuclear size could be related to the cell bodies being slightly smaller on this region and to a possible smaller biosynthetic activity which would influence nuclear size.

Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos do diabetes agudo induzido por estreptozootocina (35 mg/kg de peso corporal) sobre o número e tamanho dos neurônios mientéricos do duodeno de ratos adultos considerando de forma equivalente as regiões antimesentérica e intermediária da circunferência intestinal. O período experimental se estendeu por uma semana. As contagens neuronais foram feitas em igual número de campos nas duas regiões da circunferência duodenal e as mensurações das áreas neuronais e nucleares em igual número de células. O número e o tamanho dos neurônios corados por Giemsa não foram significativamente diferentes entre os grupos. Por outro lado, a proporção de neurônios NADH-positivos aumentou de 18,54% nos animais controles para 39,33% nos diabéticos. Os autores discutem que essa maior reatividade possivelmente resultou do aumento da proporção NADH/NAD+, descrita em diversos tecidos de animais diabéticos, que repercute na modulação das enzimas que utilizam esses cofatores e cuja atividade é detectada pela técnica da NADH-diaforase.

This study had as its purpose to assess the effects of acute diabetes induced by streptozotocin (35 mg/kg body weight) on the number and size of the myenteric neurons of the duodenum of adult rats considering equally the antimesenteric and intermediate regions of the intestinal circumference. Experimental period extended for a week. Neuronal counts were carried out on the same number of fields of both regions of the duodenal circumference and measurements of neuronal and nuclear areas on equal numbers of cells. Number and size of the myenteric neurons stained with Giemsa were not significantly different between groups. On the other hand, the proportion of NADH-positive neurons increased from 18.54% on the controls to 39.33% on the diabetics. The authors discuss that this increased reactivity probably results from a greater NADH/NAD+ ratio, described in many tissues of diabetic animals, which has consequences on the modulation of the enzymes that use these cofactors and whose activity is detected by the NADH-diaphorase technique.

Realizamos este estudo com o objetivo de comparar a densidade neuronal evidenciada nas regiões antimesocólica e intermediária do colo de ratos. Utilizamos o colo ascendente de 10 ratos Wistar com 7 meses de idade. Encontramos com o método de Giemsa 29046 neurônios/cm² na região antimesocólica e 30968 neurônios/ cm² nas regiões intermediárias. Com a técnica histoquímica da NADH-diaforase encontramos 12308 neurônios/ cm² na região antimesocólica e 8798 neurônios/cm² nas regiões intermediárias. O número de neurônios NADH-diaforase positivos é significantemente menor que o número de neurônios corados com o método de Giemsa, sendo que esta diferença se acentua nas regiões intermediárias da circunferência intestinal. Portanto, para comparar o número de neurônios de um segmento intestinal de uma mesma espécie e numa mesma idade, é necessário levar em consideração a técnica empregada e a região da circunferência intestinal em que se obteve a amostra.

We carried out this study with the purpose of comparing the neuronal density in antimesocolic and intermediate regions of the colon of rats. We used the ascending colon of ten seven-months old Wistar rats. With the Giemsa method we found 29046 neurons/cm² on the antimesocolic region and 30968 neurons/cm² on the intermediate regions. With the NADH-diaphorase technique 12308 neurons/cm² on the antimesocolic regions and 8798 neurons/cm² on the intermediate regions were evidenced. The number of NADH-diaphorase positive neurons is significantly less than the number of Giemsa-stained neurons, and that this difference is enhanced on the intermediate regions of the intestinal circumference. Therefore, to compare the number of neurons of an intestinal segment of a same species at the same age, it is necessary to take into consideration the technique employed and the region of the intestinal circumference from where the sample was obtained.

O objetivo deste trabalho foi estudar os aspectos morfológicos e quantitativos dos neurônios do plexo mientérico do colo proximal de ratos Wistar submetidos a desnutrição protéica, durante a gestação e lactação. Foram utilizados vinte animais, denominados de acordo com o período em que suas mães receberam ração com baixo teor de proteína: grupo NN (normoalimentados), grupo DN (ração hipoprotéica na gestação e normal na lactação), grupo ND (ração normal na gestação e hipoprotéica na lactação) e grupo DD (ração hipoprotéica na gestação e lactação). Amostras do colo proximal destinaram-se a cortes histológicos, corados pela hematoxilina-eosina e a preparados de membrana corados pelo método de Giemsa. O tratamento estatístico não demonstrou diferença significativa entre as médias referentes ao número de neurônios encontrados nos diferentes grupos nutricionais. Verificou-se que animais que sofreram deprivação protéica nos períodos de gestação e lactação apresentaram maior proporção de neurônios mientéricos grandes e fortemente basofílicos, indicando portanto que estes acumularam material protéico em seu citoplasma.

We have studied the morphological and quantitative aspects of the myenteric plexus neurons of the proximal colon in rats (Rattus norvegicus of Wistar strain) submitted to a protein deprivation during prenatal and lactation periods. Twenty pregnant dams were divided in four groups labeled according to the kind of nourishment they were given: Group NN, normal diet; Group DN, low protein diet during prenatal period, and normal diet during lactation period; Group ND, normal diet during prenatal period, and low protein diet during lactation period; Group DD, low protein diet during prenatal and lactation periods. Histological analyses were developed with proximal colon segments using the haematoxylin and eosin staining method. Membrane preparations were stained by Giemsa's method. The statistical analysis has demonstrated no significant difference among the means of neurons found in the four studied groups. It was noticed that the animals under protein deprivation during prenatal and lactation periods presented greater quantity of large and strongly basophilic myenteric neurons. This suggests that neurons have accumulated protein in the cytoplasm.

O propósito deste estudo foi investigar os efeitos da desnutrição proteica sobre os neurônios do plexo mientérico do duodeno de ratos Wistar. Vinte e quatro animais com 60 dias de idade foram divididos em 4 grupos e denominados de acordo com o período em que suas mães receberam ração hipoproteica (8%). Alguns segmentos de duodeno foram submetidos a tratamento histológico e corados com hematoxilina-eosinae alguns foram utilizados na elaboração dos preparados de membrana corados com Giemsa. Observamos neurônios pequenos, médios e grandes formando gânglios de formatos diversos. Concluiu-se que a desnutrição proteica materna não afeta a organização do plexo mientérico e que animais desnutridos na gestação e lactação quando voltam a receber dieta com teor proteico normal apresentam neurônios com citoplasma fortemente basofílico e geralmente maiores que o de animais normo-alimentados.

The purpose of this study was to verify the effects of proteic undernutrition on the neurons of the myenteric plexus from the duodenum of Wistar rats. Twenty-four animals at the age of 60 days were divided in four groups, which were named according to the period their mothers received hypoproteic ration (8%). Some segments of duodenum were subjected to histological treatment and stained with hematoxilin-eosin and some were used for whoie mount preparations stained with Giemsa. We observed small, medium-sized and large neurons grouped in ganglia of various shapes. It was concluded that the maternal proteic undernutrition does not affect the organization of the myenteric plexus and that animals submitted to undernutrition during gestation and lactation, when normally fed, show neurons with strongly basophilic cytoplasm and larger cellular bodies than those from control animals.