ABSTRACT This short-term study evaluated the effect of non-lethal high CO2 concentration on the transcriptional response of immune-related genes of Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) cultured in recirculating aquaculture systems (RAS). Two experimental groups were created: high CO2 (47.67±2.04 mg L−1) and low CO2 (2.0±1.93 mg L−1). Shrimp of 8.85±1.20 g were placed randomly at a density equivalent to 100 individuals m−3 and were monitored at 6, 12, 18, and 24 h. The transcriptional response of immune-related genes was analyzed by qPCR. Gene expression of hemocyanin, prophenoloxidase, and heat shock protein 60 was downregulated at 24 h, suggesting affectations on oxygen transportation, melanization, and protein functioning of L. vannamei under high CO2 concentrations. Also, gene up-regulation of lipopolysaccharide- and β-glucan-binding protein and cytosolic manganese superoxide dismutase can impair the bacterial recognition and antioxidant defense of shrimp exposed to high CO2 concentrations. These results suggest that concentration at about 47 mg L−1 of CO2 can significantly influence the transcriptional response modulation of immune-related genes.

Abstract The Chapala Lake is one of the most polluted lakes in Mexico, due to the in flow of effluents from several industrial plants, the lake accumulates pollutants such as chromium(VI) which is considered important for aquatic ecosystem. This study aimed was to evaluate the ability to decrease the concentration of chromium (VI) by Lysinibacillus macroides 2(1B)104A, isolated from sediments of the Chapala Lake. The strain was identified through 16S rRNA sequencing and phylogenetic analysis. Results showed that this strain grows in concentrations of 50, 100, 200 and 300 mgL-1 Cr(VI), in pH ranging 6 to 7, showing 79.508% reduction in concentration 50 mgL-1, determining that the reduction occurs extracellularly. Likewise, it was observed that Lysinibacillus macroides reduced the concentration of Cr(IV) in the broth, it was not observed that the bacteria could sequester Cr(VI) in the membrane or intracellularly. However, it reduced the concentration of Cr(VI) in the broth. Lysinibacillus macroides 2(1B)104A isolate showed having the ability that decrease the concentration of Cr(VI), which makes it a viable options for bioremediation of water polluted with this metal.

Abstract In Zapotlán el Grande (ZEG) the production of berries has increased drastically, while traditional crops has decreased. The availability of these new foods may change eating habits (EH) of the population. The objective of this study was to assess the frequency and amount of berry consumption in the adult population of Ciudad Guzmán (ZEG, Jalisco, Mexico), and to identify if these have become part of their EH. A total of 384 adults, from 18 to 65 years old, residents of Ciudad Guzmán, were surveyed with an adapted version of a food consumption frequency questionnaire. The 34% of participants reported never consuming blueberries, raspberries or blackberries, while 39% eat them occasionally. On average, none of the berries was consumed in the amount proposed by the Mexican System of Equivalent Foods (SMAE), and only accounted 18% of the ration suggested by the World Health Organization (WHO). It is concluded that although the amount of berries consumed is less than the recommended by the WHO or SMAE, a quarter of the population assessed has incorporated berries into their usual diet, which shows that their availability is generating a change in the EH of the population.

Resumen En Zapotlán el Grande (ZEG) la producción de berries ha aumentado drásticamente, mientras que la de cultivos tradicionales ha disminuido. La disponibilidad de estos nuevos alimentos puede generar cambios en los hábitos alimentarios (HA) de la población. El objetivo del presente estudio fue evaluar la frecuencia y la cantidad de consumo de berries en población adulta de Ciudad Guzmán (ZEG, Jalisco, México), e identificar si estos han pasado a formar parte de sus HA. Participaron 384 adultos, de 18 a 65 años, residentes de Ciudad Guzmán, quienes fueron encuestados por medio de una versión adaptada de un cuestionario de frecuencia de consumo de alimentos. El 34% de los participantes refirió nunca consumir arándanos, frambuesas o zarzamoras, mientras que 39% los ingería ocasionalmente. En promedio, ninguno de los berries fue consumido en la ración propuesta en el Sistema Mexicano de Alimentos Equivalentes (SMAE), y solo representó 18% de la ración sugerida por la Organización Mundial de la Salud (OMS). Se concluye que aunque en cantidad inferior a la recomendada por la OMS o el SMAE, una cuarta parte de la población evaluada ha incorporado los berries a su dieta habitual, lo que demuestra que su disponibilidad está generando una modificación en los HA de la población.

Representatives of the Argentine Society of Infectious Diseases (SADI) and the Argentine Society of Intensive Therapy (SATI) worked together on the development of specific recommendations for the diagnosis, treatment and prevention of ventilator-associated pneumonia (VAP). The methodology used was the analysis of the literature published in the last 15 years, complemented with the opinion of experts and local data. This document aims to offer basic tools to optimize diagnosis based on clinical and microbiological criteria, orientation in empirical and targeted antibiotic schemes, news on posology and administration of antibiotics in critical patients and to promote effective measures to reduce the risk of VAP. It also offers a diagnostic and treatment algorithm and considerations on inhaled antibiotics. The joint work of both societies -infectious diseases and intensive care- highlights the concern for the management of VAP and the importance of ensuring improvement in daily practices. This guideline established recommendations to optimize the diagnosis, treatment and prevention of VAP in order to reduce morbidity and mortality, days of hospitalization, costs and resistance to antibiotics due to misuse of antimicrobials.

Representantes de la Sociedad Argentina de Infectología (SADI) y la Sociedad Argentina de Terapia Intensiva (SATI) se unieron para trabajar en la elaboración de recomendaciones de diagnóstico, tratamiento y prevención de la neumonía asociada a ventilación mecánica (NAVM). La metodología utilizada fue el análisis de la bibliografía publicada en los últimos 15 años, complementada con la opinión de expertos y los datos locales. En este documento se pretende ofrecer herramientas básicas de optimización del diagnóstico en base a criterios clínicos y microbiológicos, orientación en los esquemas antibióticos empíricos y dirigidos, novedades en posología y administración de antibióticos en pacientes críticos y promocionar las medidas efectivas para reducir el riesgo de NAVM. Asimismo, ofrece un algoritmo de diagnóstico y tratamiento y consideraciones sobre antibióticos inhalados. El trabajo conjunto de ambas sociedades, infectólogos y terapistas, pone en evidencia la preocupación por el manejo de la NAVM y la importancia de velar por la mejora en las prácticas cotidianas. A través de esta recomendación se establecen pautas locales para optimizar el diagnóstico, tratamiento y prevención de la NAVM con el objeto de disminuir la morbimortalidad, días de internación, costos y resistencia a antibióticos debida al mal uso de los antimicrobianos.

Resumen Los derrames recientes de hidrocarburos en plataformas petroleras mar adentro han puesto de relieve la necesidad de desarrollar regímenes de responsabilidad e indemnización por daños ocasionados por actividades de exploración y explotación en los fondos marinos sujetos a la jurisdicción nacional. En la actualidad no existe ningún convenio internacional que aborde el tema, y la comunidad internacional se ha inclinado a favor del desarrollo de instrumentos regionales o bilaterales. La región del Gran Caribe se caracteriza por poseer un frágil ecosistema marino, que se encuentra amenazado por el riesgo de contaminación de petróleo producto de actividades de extracción en el lecho marino. Pese a ello, el único convenio regional para la protección y preservación del mar Caribe, conocido como Convenio de Cartagena, solo incluye principios generales sobre responsabilidad por actividades en los fondos marinos, sin desarrollar hasta la fecha los protocolos o acuerdos que garanticen su aplicación. Este estudio realiza una descripción y comparación de los esfuerzos llevados a cabo en el plano internacional y regional para desarrollar estas reglas y sugiere tres opciones para alcanzar un marco legal eficiente, exhaustivo y uniforme que garantice la pronta y adecuada indemnización de las víctimas y la reparación de todos los daños.

Abstract The recent oil spill incidents arising from activities in offshore platforms have highlighted the need to develop liability and compensation regimes for all damages caused by the exploration and exploitation of the seabed under national jurisdiction. At the present time there are not any international conventions that address this issue, and the international community has opted in favoured of the development of regional or bilateral instruments. The Wider Caribbean region has a fragile marine ecosystem, which is threatened by the high risk of oil pollution posed by mining activities. Despite this, the only regional convention for the preservation and protection of the Caribbean Sea, known as the Cartagena Convention, includes general principles of liability for activities on the seabed that need to be further developed in protocols or agreements in order to ensure their application. This study provides a description and a comparison of the efforts made at the international and regional levels to develop these rules and suggests three options to achieve an efficient, comprehensive and consistent legal framework to ensure prompt and adequate compensation to victims and to repair all damages.

El estrés oxidativo constituye un factor importante en el desarrollo de Enfermedades Cardiovasculares (ECVs) debido a los daños graves que provocan las especies reactivas de oxígeno en las biomoléculas, por lo que el consumo adecuado de vitaminas con propiedades antioxidantes podría prevenir o retrasar la aparición de estas enfermedades. El objetivo de este trabajo fue determinar la relación entre la ingesta de antioxidantes, factores nutricionales y marcadores bioquímicos en un grupo de individuos sanos de Caracas, Venezuela. El estudio incluyó 29 participantes entre 18-40 años de edad a los cuales se les realizó tres recordatorios dietéticos de 24h, mediciones antropométricas [peso, estatura, circunferencia de cintura (CC), índice cintura cadera (ICC) y % grasa corporal (% GC)] según normativa del Programa Internacional de Biología (IBP). Adicionalmente, se determinó el perfil lipídico y la concentración de 8-isoprostano como marcador de estrés oxidativo. Los participantes tomaron 1 cápsula diaria de vitaminas antioxidantes por 30 días. Posterior al tratamiento con antioxidante, no hubo cambios significativos en las concentraciones de triglicéridos (TG), colesterol total (CT), colesterol de las lipoproteínas de baja densidad (c-LDL) y colesterol de las lipoproteínas de alta densidad (c-HDL). Por su parte, el 8-isoprostano registró una correlación significativa entre antes y después del tratamiento (r=0,374; p<0,05); siendo el mayor descenso en los individuos que presentaron mayor % GC y CC. Los hallazgos sugieren que el suplemento de antioxidantes tiende a disminuir el estrés oxidativo en un corto período de tiempo, particularmente en individuos con mayor % GC, previniendo el desarrollo de ECVs.

Oxidative stress is an important risk factor for the development of cardiovascular diseases (CVD) due to the serious damage caused by reactive oxygen species to biomolecules, thus, adequate intake of vitamins with antioxidant properties could prevent or delay the onset of these diseases. The aim of this study was to determine the relationship between antioxidant intake, nutritional factors and biochemical markers in a group of healthy individuals in Caracas, Venezuela. The study included 29 participants between 18-40 years of age who underwent three 24-hour dietary recalls, anthropometric measurements [weight, height, waist circumference (WC), waist-hip ratio (WHR) and % body fat (% BF)] according to the International Biology Program (IBP) methodology. In addition, the lipid profile and the concentration of 8-isoprostane as a marker of oxidative stress was determined. The participants took one daily capsule of antioxidant vitamins for 30 days. After treatment with antioxidants, no significant changes in triglyceride (TG), total cholesterol (TC), low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) and high density lipoprotein cholesterol (HDLC) levels were observed. Meanwhile, the 8-isoprostane recorded a significative correlation between before and after treatment (r=0.374; p<0.05). The decline in 8-isoprostane levels was more evident in those individuals with the highest % BF and WC. These findings suggest that antioxidant supplementation decreases oxidative stress in a short period of time, particularly in higher % BF individuals, and might help prevent CVDs.

Antecedentes: La leucemia linfoblástica aguda (LLA) es un padecimiento oncológico importante en la población pediátrica mexicana, cuya base genética pudiera modificar la efectividad de la quimioterapia del antifolato metotrexato (MTX) y el tiempo de sobrevida libre de enfermedad y la sobrevida total. Objetivos: Determinar la asociación de 10 polimorfismos genéticos de la vía del folato: en transportadores celulares (COL18A1, SLC19A1, ABCB1 y ABCC5) y las enzimas folilpoliglutamil sintetasa (FPGS) y xantina oxidasa (XO), con la sobrevida de los niños con leucemia linfoblástica aguda. Métodos: En el Centro Estatal de Cancerología de Durango- México, se estudiaron 39 niños con leucemia linfoblástica aguda tratados con MTX y 102 controles sin la enfermedad, a quienes mediante qPCR, se les determinaron 10 polimorfismos en la vía del folato. Durante 5 años de seguimiento se determinó la sobrevida libre de enfermedad y la sobrevida total, y su relación con su genotipo. Resultados: Cuatro polimorfismos no estuvieron en equilibrio de Hardy-Weinberg COL18A1(rs2274808), ABCC5(rs9838667 y rs3792585) y XO(rs17011368). Únicamente el rs17011368 de XO se asoció con riesgo de estar presente en los pacientes con leucemia linfoblástica aguda cuyo OR fue 9.771(IC95% 4.974-19.196, p=0,001). El FPGS(rs1544105) afectó la sobrevida libre de enfermedad y la sobrevida total (Log Rank p<0.05). Conclusiones: El polimorfismo (rs17011368) de la XO presentó riesgo para leucemia linfoblástica aguda; así mismo, se encontró una asociación importante entre los portadores del polimorfismo FPGS(rs1544105) que modificaría la sobrevidas de los pacientes tratados con MTX.

Background: Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is a major cancer disease in Mexican pediatric population, were the genotype could affect the effectiveness of chemotherapy in which the methotrexate (MTX) is involved and consequently the time of disease free survival and overall survival. Objectives: Determine the association of 10 genetic polymorphisms of the folate pathway: in cellular carriers (COL18A1, SLC19A1, ABCB1 and ABCC5) and in enzymes such as folylpolyglutamate synthetase (FPGS) and xanthine oxidase (XO), with survival of children with acute lymphoblastic leukemia. Methods: Thirtynine children with acute lymphoblastic leukemia from the State Cancer Center in Durango (Mexico) treated with MTX and 102 healthy controls, were qPCR analyzed for 10 polymorphisms in the folate pathway. During 5 years of follow up, the disease-free survival and overall survival rates were investigated in relation with their genotypes. Results: Four polymorphisms were not found in Hardy-Weinberg Equilibrium COL18A1(rs2274808), ABCC5(rs9838667 and rs3792585) and XO(rs170113685). Only XO(rs170113685) was associated with risk of being present in patients with ALL whose odds ratio was 9.771 (95% 4.974-19.196, p=0.001). The polymorphism rs1544105 for FPGS affected disease free survival and overall survival (Log Rank test p<0.05). Conclusions: Polymorphism (rs17011368) of XO showed risk association for acute lymphoblastic leukemia; likewise, an important association was found between carriers of the FPGS(rs1544105) and increased survival times of patients treated with methotrexate.

La leishmaniasis es una enfermedad con diversidad clínica y epidemiológica, producida por varias especies de protozoarios parásitos del género Leishmania. Estos parásitos infectan una amplia variedad de hospedadores mamíferos y son transmitidos por insectos del género Lutzomyia, en nuestro país. Los caninos han sido implicados como posibles reservorios del parásito. Para el diagnóstico de leishmaniasis se utilizan técnicas parasitológicas que generalmente tienen baja sensibilidad e inmunológicas, con pobre especificidad. Debido a las limitaciones en el diagnóstico, y lo difícil de la obtención, transporte y almacenamiento de las muestras, en este trabajo se planteó estandarizar de una técnica de PCR anidada (Leishmania nested PCR, Ln-PCR) para la detección de ADN de Leishmania sp. en muestras de sangre de caninos colectadas en papel de filtro. Para ello se titularon las concentraciones de reactivos de la PCR para la amplificación del ADN del parásito y se determinó la sensibilidad analítica y la especificidad de la técnica. Se evaluaron 36 muestras de sangre de caninos (6 infectados y 30 no infectados). Las condiciones óptimas de reacción fueron 0,2 mM de dNTPs, 0,4 µM de cada cebador y 1 U de Taq polimerasa. La sensibilidad analítica de Ln-PCR fue de 10 fg y la especificidad fue de 100% en la detección de ADN de Leishmania sp., ya que no se observó amplificación con ADN de otros parásitos, ni con ADN humano, ni de perro. De las muestras de caninos evaluadas los seis controles infectados todos amplificaron por la PCR, mientras que los 30 no infectados, en ninguno se observó amplificación. La extracción de ADN de muestras de sangre colectadas en papel de filtro fue eficiente para la amplificación por la PCR, técnica que puede ser muy útil para el diagnóstico de leishmaniasis en animales y su implicación como posibles reservorios.

Leishmaniasis is a disease with clinical and epidemiological diversity, caused by several species of protozoan parasites of the genus Leishmania. These parasites infect a wide variety of mammalian hosts, and are transmitted by insects of the genus Lutzomyia in our country. Canines have been implicated as potential reservoirs of the parasite. For the diagnosis of leishmaniasis, parasitological techniques generally with low sensitivity and immunological techniques, with poor specificity, are used. Because of limitations in the diagnosis, and the difficulty to obtain, transport, and store samples, the aim of this research was to standardize a Leishmania nested PCR test (Ln-PCR), for the detection of Leishmania sp. DNA in blood samples from dogs collected in filter paper. For that purpose, concentrations of the PCR reagent for DNA parasite amplification were titrated and the analytical sensitivity and specificity of the technique were determined. A total of 36 canine blood samples (6 infected and 30 uninfected) were evaluated.  The optimal reaction conditions were: 0.2 mM dNTPs; 0.4 µM of each primer; and 1 U of Taq polymerase. The analytical sensitivity of the Ln-PCR was 10 fg and the specificity was 100% in detecting Leishmania sp. DNA, since no amplification was observed with DNA from other parasites, human DNA or canine DNA. The six samples from infected canines evaluated amplified Leishmania sp. DNA by PCR, whereas in none of the 30 samples from uninfected canines the amplification was observed. The DNA extraction from blood samples collected in filter paper was efficient for the PCR amplification, a technique that can be very useful for the diagnosis of leishmaniasis in animals and their involvement as potential reservoirs.

La toxocariasis es la infección producida por Toxocara canis y T. cati, parásitos de perros y gatos, respectivamente. El hombre es un hospedador accidental, al infectarse con los huevos de esos parásitos. Las larvas invaden vísceras o el globo ocular, produciéndose dos síndromes: larva migrans visceral y larva migrans ocular. El diagnóstico presenta dificultades debido a sintomatología inespecífica y que las larvas solamente pueden ser evidenciadas por biopsias. Los métodos inmunológicos son una alternativa, pero puede presentar reacciones cruzadas con otras parasitosis, por lo que en este trabajo se planteó la identificación de antígenos inmunodominantes específicos en productos de excreción/secreción de larvas de T. canis mediante la técnica de Western blotting. Para ello se estandarizó la técnica determinando diluciones y concentraciones óptimas de antígeno y reactivos y posteriormente se empleó la técnica utilizando sueros de individuos con toxocariasis, de individuos con otras infecciones parasitarias y de individuos sanos. Se obtuvo como concentración óptima de antígeno 10 μg/ tira, y las diluciones 1/100 y 1/5.000 para el suero y conjugado, respectivamente. Se observó reconocimiento de bandas inmunodominantes de 26, 40 y 57 kDa sólo por los sueros de individuos con toxocariasis, no observándose reconocimiento ni en los sueros de pacientes con otras enfermedades parasitarias, ni en individuos sanos. Los antígenos de 26 y 57 kDa han sido descritos como específicos para el diagnóstico de toxocariasis, mientras que la banda de 40 kDa no había sido identificada anteriormente. La técnica de Western blotting permitió un diagnóstico sensible y específico de la toxocariasis humana.

The toxocariasis is the infection caused by Toxocara canis and T. cati, parasites of dogs and cats, respectively. Man is an accidental host, when is infected with eggs from these parasites. The larvae invade organs or the eyeball, producing two syndromes, visceral larva migrans and ocular larva migrans. The diagnosis presents difficulties due to non-specific symptoms and the larvae can only be evidenced by biopsies. Immunological methods are an alternative, but may have cross-reactions with other parasites. Due to limitations in the diagnosis of the disease, the main objective of this work was to identify the specific immunodominant antigens in excretion/secretion products of T. canis larvae, by Western blotting technique. The reaction conditions were standardized, by determining optimal antigen concentration and dilutions of reagents and sera. Subsequently, the standardized technique was performed using sera from individuals with toxocariasis, individuals with other parasitic infections and healthy individuals. The results showed that the optimal concentrations of excretory/ secretory antigen was 10 μg/strip, and dilutions of 1/100 and 1/5,000 for serum and conjugate, respectively. Recognition of immunodominant bands of 26, 40 and 57 kDa was observed only by sera from individuals with toxocariasis, while patients with other parasitic diseases and healthy individuals did not recognize any of these bands. Antigens of 26 and 57 kDa have been described as specific for the diagnosis of toxocariasis, while the 40 kDa band had not been previously identified. The Western blotting technique allowed a sensitive and specific diagnosis of human toxocariasis..

Objectives. To compare two extraction protocols of Trypanosoma cruzi DNA for use in DNA amplification of kinetoplast minicircles (kDNA) through the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR). Materials and methods. Epimastigotes of T. cruzi were cultured in axenic conditions and masses from 1.5 to 100 x 106 parasites were obtained. DNA extraction was performed using two protocols: extraction with organic solvents (phenol/chloroform), and with resin (Chelex®100), from different parasitic sediments. Concentration and purity of DNA was determined by spectrophotometry, and integrity was assessed by agarose gel electrophoresis. Analysis of variance and comparisons of means were performed through Tukey’s test, using the Statistix 8.0 software. Results. Ten DNA extractions were done of each one of the different amounts of parasitic sediments. In the DNA extraction with Chelex®100 resin, a higher performance was obtained but a lower purity and integrity compared to the extraction with organic solvents. However, it allowed a product amplification of 330 bp of T. cruzi kDNA. Conclusions. Although the technique of Chelex®100 provided less purity and integrity of DNA, it allowed a successful amplification of kDNA by PCR, avoiding the use of laborious techniques and toxic organic solvents

Objetivos. Comparar dos protocolos de extracción de ADN de Trypanosoma cruzi para su uso en la amplificación de ADN de minicírculos de kinetoplasto (ADNk) mediante la técnica de Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR). Materiales y métodos. Se cultivaron epimastigotas de T. cruzi en condiciones exénicas obteniéndose masas entre 1,5 hasta 100 x 10(6) parásitos. A partir de estas se procedió a la extracción de ADN mediante dos protocolos: extracción con solventes orgánicos (fenol/cloroformo), y empleo de resina (Chelex®100), a partir de los diferentes sedimentos parasitarios. La concentración y pureza del ADN se determinó por espectrofotometría y la integridad se evaluó mediante electroforesis en geles de agarosa. Se realizó el análisis de varianza y comparaciones de medias mediante la prueba de Tukey, utilizando el software Statistix 8.0. Resultados. Se realizaron diez extracciones de ADN de cada una de las diferentes cantidades de parásitos sedimentados. En la extracción de ADN con la resina Chelex®100 se obtuvo mayor rendimiento, pero menor pureza e integridad respecto a la extracción con solventes orgánicos. Sin embargo, permitió la amplificación del producto de 330 pb de ADNk de T. cruzi. Conclusiones. Aun cuando la técnica de Chelex®100 proporcionó menor pureza e integridad del ADN, permitió la amplificación con éxito de ADNk por PCR, evitando el uso de técnicas laboriosas y solventes orgánicos tóxicos

Introducción. La enfermedad de Chagas es causada por el parásito Trypanosoma cruzi y su diagnóstico inmunológico se basa principalmente en la detección de anticuerpos contra T. cruzi mediante pruebas tales como ELISA, inmunofluorescencia indirecta (IFI) y hemaglutinación indirecta (HAI). Esta última tiene el inconveniente de requerir la preparación de eritrocitos de carnero, difíciles de obtener y de poca duración. Sin embargo, existen pruebas alternativas, como la técnica de aglutinación directa. Objetivo. Estandarizar la técnica de aglutinación directa para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas. Materiales y métodos. Se prepararon parásitos epimastigotes de T. cruzi mediante dos protocolos, con tratamiento con tripsina y sin él. Los parásitos se colorearon, y se determinaron las condiciones óptimas de concentración parasitaria y diluciones de suero. Se utilizaron sueros de pacientes con enfermedad de Chagas, de individuos sanos y con otras parasitosis. Resultados. La concentración parasitaria óptima fue de 500 x10 6 parásitos/ml, utilizando parásitos coloreados y sin tratamiento con tripsina. Las diluciones de suero óptimas fueron de 1/25, 1/50 y1/100, y el punto de corte, la dilución de 1/50. La técnica estandarizada mostró índices diagnósticos de sensibilidad de 94,3 % (IC 95% 79,5-99,0) y de especificidad de 96,3 % (IC 95% 88,8-99,0); se encontró reacción cruzada en tres sueros de individuos con leishmaniasis visceral, con valores pronósticos positivo y negativo de 91,7 % (IC 95% 76,4-97,8) y de 97,5 % (IC 95% 90,4-99,6), respectivamente. Se compararon los resultados con los obtenidos por HAI, ELISA e IFI y la concordancia fue de 96 % con un índice kappa de 0,90 (IC 95% 0,81-0,99). Conclusión. La técnica de aglutinación directa estandarizada podría ser útil para el inmunodiagnóstico de la enfermedad de Chagas.

Introduction: Chagas´ disease is caused by the parasite Trypanosoma cruzi and its immunological diagnosis is mainly based on the detection of antibodies against T. cruzi using tests such as the ELISA, the indirect fluorescence antibody test (IFAT) and the indirect hemagglutination test (IHAT). The main disadvantage of the IHAT is the need to prepare sheep erythrocytes, whose availability is limited and they have a short duration once prepared. However, there are alternative tests, such as the direct agglutination test (DAT). Objective: To standardize the direct agglutination test for the diagnosis of Chagas disease. Materials and methods: Trypanosoma cruzi epimastigotes were prepared using two protocols, with and without trypsin treatment. The parasites were stained and optimal conditions for parasitic concentration and serum dilutions were determined. We evaluated the technique using sera from patients with Chagas disease, from healthy individuals and from individuals with other parasitic diseases. Results: The optimal parasitic concentration was 500 x 10 6 parasites/ml using stained parasites without trypsin treatment. The optimal serum dilutions were 1/25, 1/50 y 1/100 and the cut-off point was the 1/50 dilution. The diagnostic indices for the standardized technique were as follows: Sensitivity, 94.3% (95% CI: 79.5-99.0) and specificity, 96.3% (95% CI: 88.8-99.0), with positive and negative predictive values ?? of 91.7% (95% CI: 76.4-97.8) and 97.5% (95% CI: 90.4-99.6), respectively. Cross-reaction was observed only in three sera from individuals with visceral leishmaniasis. The results were compared with those obtained by IHA, ELISA, and IFA, and the concordance rate was 96% and the kappa index, 0.90 (95% CI: 0.81-0.99). Conclusion: The standardized direct agglutination test could be useful for immunodiagnosis of Chagas disease.

Objectives. To compare two extraction protocols of Trypanosoma cruzi DNA for use in DNA amplification of kinetoplast minicircles (kDNA) through the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR). Materials and methods. Epimastigotes of T. cruzi were cultured in axenic conditions and masses from 1.5 to 100 x 106 parasites were obtained. DNA extraction was performed using two protocols: extraction with organic solvents (phenol/chloroform), and with resin (Chelex®100), from different parasitic sediments. Concentration and purity of DNA was determined by spectrophotometry, and integrity was assessed by agarose gel electrophoresis. Analysis of variance and comparisons of means were performed through Tukey’s test, using the Statistix 8.0 software. Results. Ten DNA extractions were done of each one of the different amounts of parasitic sediments. In the DNA extraction with Chelex®100 resin, a higher performance was obtained but a lower purity and integrity compared to the extraction with organic solvents. However, it allowed a product amplification of 330 bp of T. cruzi kDNA. Conclusions. Although the technique of Chelex®100 provided less purity and integrity of DNA, it allowed a successful amplification of kDNA by PCR, avoiding the use of laborious techniques and toxic organic solvents

Objetivos. Comparar dos protocolos de extracción de ADN de Trypanosoma cruzi para su uso en la amplificación de ADN de minicírculos de kinetoplasto (ADNk) mediante la técnica de Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR). Materiales y métodos. Se cultivaron epimastigotas de T. cruzi en condiciones exénicas obteniéndose masas entre 1,5 hasta 100 x 10(6) parásitos. A partir de estas se procedió a la extracción de ADN mediante dos protocolos: extracción con solventes orgánicos (fenol/cloroformo), y empleo de resina (Chelex®100), a partir de los diferentes sedimentos parasitarios. La concentración y pureza del ADN se determinó por espectrofotometría y la integridad se evaluó mediante electroforesis en geles de agarosa. Se realizó el análisis de varianza y comparaciones de medias mediante la prueba de Tukey, utilizando el software Statistix 8.0. Resultados. Se realizaron diez extracciones de ADN de cada una de las diferentes cantidades de parásitos sedimentados. En la extracción de ADN con la resina Chelex®100 se obtuvo mayor rendimiento, pero menor pureza e integridad respecto a la extracción con solventes orgánicos. Sin embargo, permitió la amplificación del producto de 330 pb de ADNk de T. cruzi. Conclusiones. Aun cuando la técnica de Chelex®100 proporcionó menor pureza e integridad del ADN, permitió la amplificación con éxito de ADNk por PCR, evitando el uso de técnicas laboriosas y solventes orgánicos tóxicos

La toxocariasis o síndrome de larva migrans visceral es causada por un nemátode del género Toxocara, parásito de animales domésticos (perros y gatos). El hombre es un hospedador accidental, al contaminarse con huevos embrionados del parásito. Las larvas invaden la pared intestinal y son transportadas a vísceras, musculatura o globo ocular, donde son atacadas por una reacción granulomatosa del hospedador. El diagnóstico de la enfermedad es complicado debido a la sintomatología inespecífica y que las larvas solo pueden ser evidenciadas por biopsias, que es un método invasivo. Los métodos inmunológicos son una alternativa, en tal sentido en esta investigación se planteó como objetivo estandarizar una técnica inmunológica para la determinación de anticuerpos anti-T.canis para el diagnóstico de toxocariasis humana. Los parásitos adultos expulsados por cachorros infectados se identificaron por microscopia óptica y electrónica, se obtuvieron los huevos, los cuales se hicieron embrionar para la liberación de las larvas, y éstas se mantuvieron en cultivo, para luego obtener y purificar los antígenos de excreción/secreción. Se estandarizaron las condiciones de reacción de la ELISA, obteniéndose como concentraciones óptimas 2 μg/mL de antígeno, dilución de suero y conjugado fueron de 1/400 y 1/20000 respectivamente. Los índices diagnósticos fueron: sensibilidad 100%, especificidad 98,9%, valor predictivo positivo 94,4% y valor predictivo negativo 100%. Con la técnica estandarizada se pudieron diferenciar los sueros de pacientes con Toxocariasis, con respecto a los de pacientes con otras helmintiasis y muestras de suero de individuos sanos, logrando el diagnóstico de Toxocariasis humana.

The toxocariasis or visceral larva migrans syndrome is caused by a nematode of the genus Toxocara, a parasite of domestic animals (dogs and cats). Man is an accidental host, by oral contamination with embryonated eggs of the parasite. The larvae invade the intestinal wall and are transported to the viscera, muscle or eyeball, where they are attacked by a granulomatous reaction of the host. The diagnosis of the disease is complicated by nonspecific symptoms and the larvae can only be demonstrated by biopsy which is an invasive method. Immunological methods are an alternative. The objective of this study was standardizing an immunological technique for the determination of anti-T. canis antibodies for diagnosis of human Toxocariasis. We identified by optical and electron microscopy, adult worms expelled by infected pups and we obtained eggs, which became embryos that released the larvae. These were maintained in culture. Excretion/secretion antigens (E/S) were purified from the culture. Subsequently, we standardized reaction conditions of the ELISA technique, obtaining as optimal concentrations 2 mg/mL of antigen, serum dilution and conjugate 1/400 and 1/20000 respectively. With the standard technique we evaluated 17 serum samples from patients with confirmed Toxocariasis, 50 patients with other helminth infections and 40 healthy individuals. The diagnostic indexes were sensitivity 100%, specificity 99%, 94% positive predictive value and negative predictive value 100%. The diagnostic indexes obtained show that the ELISA using excretion/secretion antigen of the parasite is suitable for immunodiagnosis of human Toxocariasis.

Introduction: Although Buenos Aires is the biggest province in Argentina, there was no program for Travel Medicine in any public hospital until 2008, when the Travel Medicine Center (CEMEVI) was established in our hospital. Objective: To analyze the first 24 months of experience in the CEMEVI. Results: A total of 278 travelers were assisted. Most of them consulted before traveling (pre-travel visits). The most common destinations were countries in South America and urban as well as rural areas. Travelling to malaria and yellow fever endemic countries represented 35% and 16% of the total of destinations, respectively. Only 4% were post-travel interviews. Conclusion: It is feasible and frutful to implement a Travel Medicine Center in the public health system.

Introducción: La Provincia de Buenos Aires, a pesar de ser la mayor de nuestro país, no contaba con ningún sitio de asesoramiento al viajero instalado en un hospital público, hasta que en el año 2008 se crea el Centro de Medicina del Viajero (CEMEVI) en nuestro hospital. Objetivo: analizar de manera retrospectiva los primeros 24 meses de experiencia en el CEMEVI. Resultados: Recibimos un total de 278 consultas, la mayoría durante el pre-viaje, a países de América del Sur, a sitios urbanos- rurales, de los cuales 35 y 16% de los viajeros visitaron zonas de riesgo para malaria y fiebre amarilla, respectivamente. Sólo 4% de las consultas fueron en el post-viaje. Conclusión: Es posible y fructífero implementar un Centro de Medicina del Viajero en el sector público de salud.

La Enfermedad de Chagas, es producida por el parásito Trypanosoma cruzi. Los métodos de diagnóstico inmunológico son los más utilizados, pero presentan problemas de reacciones cruzadas con Leishmaniasis y Rangeliosis, por lo cual la Organización Mundial de la Salud (OMS) sugiere la ejecución de tres pruebas inmunológicas diferentes. En Venezuela la disponibilidad de las tres pruebas sólo se encuentra en centros de investigación y en laboratorios de referencia. Debido a esto, las muestras deben ser transportadas bajo estrictas condiciones de conservación y aún así pueden llegar deterioradas. El uso del papel de filtro podría ser una alternativa para la recolección y transporte de las muestras. El objetivo del presente trabajo fue comparar los resultados de las técnicas de ELISA, HAI e IFI utilizando muestras de sangre colectadas en tubo y en papel de filtro. Las muestras se procesaron mediante las técnicas de Inmunoensayo Enzimático (ELISA), Hemaglutinación Indirecta (HAI) e Inmunofluorescencia Indirecta (IFI). Para las muestras de papel se hicieron eluciones de 1/50 a diferentes tiempos para ELISA e IFI, y de 1/25 para HAI. Se obtuvo una sensibilidad de 91% y una especificad de 100% en el diagnóstico de las muestras colectadas en papel de filtro a través de las tres técnicas inmunológicas. Al compararlo con los resultados de las muestras colectadas en tubo se encontró un índice de kappa 0,91 (P<0,001), lo que indica una alta concordancia entre las dos técnicas de recolección de muestras y la confiabilidad de los resultados.

Chagas disease is produced by the parasite Trypanosoma cruzi. Immunological diagnosis methods are the most used, but they present problems of cross reactions with Leishmaniasis and Rangeliosis. For this reason, the World-Health-Organization (WHO) suggests the use of three different immunological tests. In Venezuela, the three tests are only available in research centers and laboratories of reference. Consequently, many samples must be transported under strict conditions of conservation, and despite this, they may become spoiled before arriving at the mentioned centers. The use of the filter paper could be an alternative for the collection and transportation of the samples. The aim of the present work was to compare the results of ELISA, HAI and IFI techniques using blood samples collected in tubes and in filter paper. The samples collected in tubes and filter paper were processed by ELISA, HAI and IFI techniques. For the filter paper samples elutions of 1/50 were done at various times for ELISA and IFI, and of 1/25 for HAI. Was obtained a sensibility of 91 % and specificity of 100 % in the final diagnosis of the samples collected in filter paper using the three techniques before mentioned, finding a kappa index of 0.91 (P <0.001) in both types of samples, indicating a high concordance between the two sample collection techniques and thus the reliability of the results obtained by means of three immunological techniques.