Resumen Introducción y objetivos: Los hongos micorrícicos arbusculares (HMA) son simbiontes obligados de las raíces de las plantas y se desarrollan en el suelo y hojarasca. Hasta el momento, se ha empleado una única técnica de clarificación en hojarasca para el estudio de los HMA, pero, es necesario analizar otras metodologías de acuerdo con las diferencias anatómicas y bioquímicas de las hojas. En este trabajo se evaluaron y ajustaron tres técnicas de clarificación en hojarasca de distintas especies arbóreas para la detección de HMA. M&M: Se recolectó hojarasca de Quercus robur, Tipuana tipu, Ulmus minor, Fraxinus pennsylvanica, Platanus acerifolia, Laurus nobilis, Populus alba and Melia azedarach de la superficie del suelo en dos parques de la ciudad de Buenos Aires. Además, se inoculó hojarasca de F. pennsylvanica con Rhizoglomus intraradices en un cultivo bajo condiciones semicontroladas. Se evaluaron tres técnicas de clarificación: “5-55” de Arambarri, Phillips & Hayman, y Peterson et al., y se ajustaron modificando la duración y temperatura de exposición a los reactivos. Resultados: La técnica de clarificación propuesta por Peterson et al. fue la más apropiada para todas las hojarascas evaluadas. Se obtuvo una eficaz clarificación, conservación de la estructura foliar y visualización de esporas e hifas de HMA. Conclusión: La selección adecuada de la técnica depende de la calidad de la hojarasca. La optimización del método de Peterson et al. permitió detectar estructuras de HMA en la hojarasca de F. pennsylvanica y T. tipu.

Summary Background and aims: Arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) are obligate symbionts with plant roots, and they colonize the surrounding soil and leaf litter. A unique clarification technique has been used for studying AMF in decomposing leaves, but it is not optimal for all types. This study aimed to evaluate and adjust three clearing techniques on leaf litter of diverse plant species for the detection of AMF structures. M&M: We collected leaf litter of Quercus robur, Tipuana tipu, Ulmus minor, Fraxinus pennsylvanica, Platanus acerifolia, Laurus nobilis, Populus alba and Melia azedarach from soil surface of two parks in Buenos Aires (Argentina). Also, we inoculated leaf litter of F pennsylvanica with Rhizoglomus intraradices in a pot culture under semi-controlled conditions. Three clarification techniques were tested: the “5-5-5 staining technique” by Arambarri, the root clarification technique by Phillips & Hayman, and Peterson et al. The time and temperature to reagent exposure were adjusted according to each decomposing leaf. Results: The clarification technique of Peterson et al. was the most appropriate for all the tested leaf litters. An effective clarification, conservation of leaf structure and visualization of extraradical spores and mycelia of AMF was achieved. Conclusions: The selection of the appropriate technique greatly depends on the quality and composition of leaf litter. By the optimization of Peterson et al. technique, we were able to detect structures of AMF on decomposing leaves of F. pennsylvanica and T. tipu.

Abstract The Riachuelo river basin (RRB) is considered one of the most polluted environments in the world. Knowledge of arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) adapted to this extremely polluted environment is important for the establishment of future soil restoration projects. This work aims to make a first list of AMF species present on the RRB. Soil and root samples were randomly taken in an area of approximately 1500 m2, mycorrhization percentages were evaluated. AMF species were detected by molecular and morphological techniques. Sixteen AMF morphological species and 64 molecular species were reported in this work. Dominikia iranica, Funneliformis constrictum, Funneliformis mosseae, Rhizophagus intraradices, Rhizophagus irregularis and Septoglomus viscosum were detected by both techniques while Claroideoglomus sp. was only detected by pyrosequencing. The list of species reported in this work represents the first description of the RRB AMF community.

Resumen La cuenca del río Riachuelo (CRR) es considerada uno de los ambientes más contaminados del mundo. Conocer los hongos formadores de micorrizas arbusculares (HFMA) adaptados a este ambiente extremadamente contaminado es importante para el establecimiento de futuros proyectos de restauración de suelos. Este trabajo se propuso hacer una primera lista de especies de HFMA presentes en la CRR. Se tomaron muestras de suelo y raíces al azar en un área de aproximadamente 1500 m2 y se evaluaron los porcentajes de micorrización. La identificación de especies de HFMA se basó en técnicas moleculares y morfológicas. Se detectaron 16 especies morfológicas y 64 especies moleculares de HFMA. Dominikia iranica, Funneliformis constrictum, Funneliformis mosseae, Rhizophagus intraradices, Rhizophagus irregularis y Septoglomus viscosum se detectaron mediante ambas técnicas, mientras que Claroideoglomus sp. solo fue detectado por pirosecuenciación. La lista de especies reportada en este trabajo representa la primera descripción de la comunidad de HFMA de la CRR.

Microbial interactions: effect of biocontrol and P solubilizing fungi in pre-symbiotic stages of arbuscular mycorrhizal fungi. Phosphorus (P) is an essential macronutrient with a low bioavailability in soils, thus limiting the plant growth. The use of P solubilizing fungi (HS) is a promising alternative to increase the efficiency of P-fertilizers. However, it is not fully understood if HS have antagonist effects on beneficial soil microbiota, such as arbuscular mycorrhizal fungi (HMA). This work studies the effect of HS with biocontrol abilities against phytopathogenic fungi on the pre-infective stages development of HMA, the frst step in mycorrhizal root colonization. Spores of the HMA Gigaspora rosea were exposed in vitro to different exudate concentrations (0; 0,01; 0,1; 1; 3%) of different HS fungal strains (Talaromyces helicus strain L7B, T. helicus strain N24, T. diversus and Penicillium purpurogenum) in a system containing semiliquid medium. Spores germination, elongation, ramification and morphology of the pre-infective mycelium of HMA were evaluated. We observed that only T. diversus increased germination while T. helicus L7B promoted the elongation, ramification and produced changes in the mycelial morphology without affecting spores' germination. These results showed that germination and pre-infective development of G. rosea can be modifed in length and ramification as a function of the identity of the HS strain used, suggesting that microbial interactions can positively impact on plant P nutrition through the modification of the previous stage to mycorrhizal symbiosis.

El fósforo (P) es un macronutriente poco biodisponible para las plantas y por lo tanto, limitante para su crecimiento. El uso de hongos solubilizadores de P (HS) es una alternativa prometedora en el aprovechamiento de la fertilización fosforada. Sin embargo, aún no se ha establecido si los HS tienen efectos sobre la micobiota benéfica del suelo, como los hongos micorrícico-arbusculares (HMA). Este trabajo estudia el efecto de HS con capacidad biocontroladora de ftopatógenos fúngicos sobre el desarrollo micorrícico pre-infectivo de HMA, el primer paso en la colonización de la raíz, de los HMA. Se expusieron esporas del HMA Gigaspora rosea a distintas concentraciones de exudados (0; 0,01; 0,1; 1; 3%) de distintos HS: Talaromyces helicus cepa L7B, T. helicus cepa N24, T. diversus y Penicillium purpurogenum, en un sistema in vitro con medio semilíquido. Se evaluó la germinación de las esporas y la elongación, ramificación y morfología del micelio pre-infectivo. Se observó que solo T. diversus incrementó la germinación y que T. helicus L7B promovió la elongación, ramificación y modificó la morfología del micelio pre-infectivo del HMA sin afectar la germinación. Estos Resultados demuestran que el desarrollo pre-infectivo de G. rosea (germinación, elongación, ramificación y morfología) puede ser modulado en función de la cepa de HS estudiada, sugiriendo que las interacciones microbianas podrían impactar positivamente sobre la nutrición fosforada vegetal mediante la modificación del estadio previo a la simbiosis micorrícica.

Plant roots can be colonized by asymptomatic fungal strains belonging to several taxa, among them, the group defined as Dark Septate Endophytes (DSE). Microdochium bolleyi commonly colonizes wheat roots and other crops. It is considered a weak pathogen or even a non-pathogenic fungal species, which has also been considered as a potential biocontrol agent against aggressive soil-borne pathogens in cereal crops. We isolated a strain of M. bolleyi from wheat roots sampled in a crop feld in Argentina, and characterized its abilities to grow in different carbon and nitrogen sources, to produce indole and to solubilize phosphorus; also several enzymatic activities were evaluated. In addition, resynthesis was performed under controlled conditions in order to characterize root fungal colonization under both, optical and transmission microscopy. The strain 22-1 colonized wheat root parenchymal tissue, forming chlamysdospores inside parenchymal cells and root hairs, and poorly grew in carbon and nitrogen sources. This fungus also synthesized indoles in in vitro culture, but it cannot solubilize phosphorus. Only amylase activity was detected out of seven enzymatic activity measured. Microdochium bolleyi (strain 22-1) colonized the roots, it formed typical DSE fungal structures and behaved like a "true endophyte"; however further studies are necessary to elucidate its role in the association with wheat.

Microdochium bolleyi (Ascomycota: Xylariales): Caracterización fsiológica y caracteres estructurales de su asociación con trigo. Las raíces de las plantas hospedan una gran diversidad de hongos, entre ellos, se encuentran los Endoftos Septados Oscuros (ESO). Microdochium bolleyi coloniza las raíces de trigo y otros cereales, aunque algunos autores lo han considerado un patógeno débil, otros han demostrado su acción biocontroladora contra patógenos agresivos del suelo. En el presente trabajo, se aisló una cepa de M. bolleyi (22-1) de raíces de trigo. Esta cepa fue metabólicamente caracterizada y se realizó un ensayo de resíntesis bajo condiciones controladas con el fin de caracterizar la colonización del hongo en la raíz bajo microscopía óptica y de transmisión. Su crecimiento fue escaso en las fuentes de carbono y nitrógeno evaluadas, sintetizó indoles en cultivo in vitro, pero no mostró habilidades para solubilizar el fósforo, por último, solo se detectó actividad amilasa. La cepa 22-1 coloniza la corteza radicular del trigo, formando clamidosporas melanizadas inter e intracelularmente y en el interior de los pelos radiculares. Microdochium bolleyi (cepa 22-1) coloniza la raíz de trigo formando las típicas estructuras de los ESO y comportándose como un "verdadero endófto", sin embargo, se necesitan más estudios para terminar de dilucidar su papel en la asociación con el trigo.

La Familia Orchidaceae se encuentra estrechamente relacionada con hongos micorrízicos que pertenecen al complejo Rhizoctonia, e incluyen los géneros Ceratorhiza, Moniliopsis, Epulorhiza y Rhizoctonia. Esta asociación es esencial para el desarrollo de nuevas plantas ya que favorecen el proceso de germinación de las semillas. Por lo tanto, el conocimiento de la naturaleza de esta interacción es importante para que los resultados de los programas de conservación de orquídeas sean efectivos. La fragmentación del bosque Chaqueño Serrano en el centro de Argentina, ha alcanzado un punto crítico en los últimos años, afectando el funcionamiento del ecosistema. El objetivo de este trabajo fue: a) aislar y caracterizar hongos micorrízicos presentes en orquídeas terrestres de la provincia de Córdoba (Argentina) y b) conocer el hábitat natural y las asociaciones fúngicas que se establecen en esta región prístina. A partir de las raíces de orquídeas terrestres, se obtuvieron 23 aislamientos de hongos micorrízicos que pertenecen al complejo Rhizoctonia. Estos aislamientos fueron caracterizados con base en caracteres morfológicos y moleculares. Las características morfológicas (color y textura de las colonias, cinética de crecimiento, diámetro y largo de la hifa y presencia de esclerocios) fueron observados en PDA y MEA a 25ºC. El número de núcleos por célula se observó en cultivos crecidos en AA (agar-agua) y teñidos con una solución de Safranine-O. La región ITS se amplificó usando los primers ITS1 e ITS4. Con base en las características morfológicas de la colonia, los aislamientos fueron agrupados en binucleados (MSGib) y multinucleados (MSGim). De acuerdo al cladograma obtenido con las secuencias de ADN, los aislamientos Q23 y Q29 están relacionados a especies de Ceratobasidium, aisladas de raíces de orquídeas. Los aislamientos Q24 y Q4 se asocian con el grupo de anastomosis de Rhizoctonia AG-C. Finalmente, se observó una alta variabilidad en el grado de especificidad existente en la simbiosis que se establece entre las raíces de estas orquídeas terrestres y los aislamientos obtenidos a partir de ellas. Este es el primer reporte de la asociación entre el grupo de anastomosis AG-C y orquídeas terrestres. Dado que estos aislamientos se obtuvieron de orquídeas terrestres nativas, podrían ser incorporados como nuevos patrones para micorrizas de orquídeas terrestres en Argentina. Este trabajo contribuye al conocimiento de la relación simbiótica que se establece entre orquídeas y hongos micorrízicos, así como también al desarrollo de estrategias de conservación de orquídeas terrestres nativas del bosque Chaco Serrano.

Orchidaceae is a highly dependent group on the Rhizoctonia complex that includes Ceratorhiza, Moniliopsis, Epulorhiza and Rhizoctonia, for seed germination and the development of new orchid plants. Thus, the isolation and identification of orchid mycorrhizal fungi are important to understand the orchid-fungus relationship, which can lead to the development of efficient conservation strategies by in vivo germination of seeds from endangered orchid plants. The aim of our work was to isolate and characterize the different mycorrhizal fungi found in roots of terrestrial orchids from Córdoba (Argentina), and, to learn about the natural habit and fungal associations in the Chaco Serrano woodland pristine region. In this study, bloomed orchid root and rhizosphere soil samples were obtained in two times from Valle de Punilla during spring of 2007; samples were kept in plastic bags until processed within 48 hours, and mycorrhizal condition confirmed assessing peloton presence. A total of 23 isolates of the orchideous mycorrhizal Rhizoctonia complex were obtained. The isolates were studied based on morphological characters and ITS-rDNA sequences. Morphological characteristics as color of colonies, texture, growth rate, hyphal diameter and length and presence of sclerotia were observed on culture media. To define the number of nuclei per cell, the isolates were grown in Petri dishes containing water-agar (WA) for three days at 25°C and stained with Safranine-O solution. The mycorrhizal fungi were grouped into binucleate (MSGib, 10 isolates) and multinucleate (MSGim, 13 isolates) based on morphological characteristics of the colonies. We obtained the ITS1-5.8s-ITS4 region that was amplified using primers ITS1 and ITS4. Based on DNA sequencing, isolates Q23 and Q29 were found to be related to species of Ceratobasidium. Isolates Q24 and Q4 were related to the binucleated anastomosis group AG-C of Rhizoctonia sp. The rest of the isolates grouped in the Ceratobasidium clade without grouping. From our knowledge this is the first report of the association of the AG-C testers with terrestrial orchids. A high specificity was observed in the symbiotic relationship. As the mycorrhizal fungal isolates were obtained from native orchids, they could be incorporated in conservation programes of endangered orchids in Argentina.