RESUMO: O objetivo do presente trabalho foi detectar a diversidade genética de cepas de Anaplasma marginale em bezerros naturalmente infectados oriundos de uma propriedade rural localizada na região nordeste do estado do Pará, Amazônia Oriental, a qual apresentava histórico de mortalidade devido à anaplasmose. Foram selecionados 14 bezerros positivos para A. marginale pela técnica de semi-nested PCR (nPCR) para o alvo no gene msp1α, com infecção assintomática (n=3) e sintomáticos (n=11). Após o sequenciamento das amostras foram verificados dois genótipos nas regiões E e C, e determinadas as estruturas em tandem repeats. Nove diferentes estirpes foram encontradas, sendo oito relacionadas ao genótipo E (α-β-β-Γ = um animal, assintomático; 16-F-17-F-F = dois animais, sintomáticos; α-β-F-F-F-F = um animal, assintomático; 31-62-62-61 = um animal, sintomático; τ-10-3 = três animais, dois sintomáticos e um assintomático; α-β-β-β = um animal, sintomático; τ-22-13-18 = dois animais, sintomáticos; β-β-β-BRA1-31 = dois animais, sintomáticos) e uma relacionada ao genótipo C (23-24-25-31-27-27 = um animal, assintomático). O genótipo E foi predominante em 92,86% das amostras (13/14), seguido pelo genótipo C (7,14%). O estudo possibilitou a detecção da diversidade genética de A. marginale em bezerros dessa propriedade leiteira, além de identificar a sequência BRA1 nos animais do presente estudo, a qual foi diagnosticada recentemente em Minas Gerais, o que demonstra a dispersão das estirpes de A. marginale nos rebanhos de diferentes estados brasileiros. A diversidade genética de A. marginale foi observada tanto em bezerros sintomáticos quanto em assintomáticos e não houve diferença significativa quando se comparou os sinais clínicos ao genótipo verificado no animal infectado, não observando a prevalência de patogenicidade de estirpes. RESUMO Pará Oriental anaplasmose 1 seminested semi nested nPCR (nPCR msp1α mspα msp α n=3 n3 n 3 (n=3 n=11. n11 n=11 . 11 (n=11) repeats encontradas αββΓ β Γ assintomático 16F17FF FFF 16 F 17 αβFFFF 31626261 31 62 61 31-62-62-6 sintomático τ103 τ 10 τ-10- αβββ τ221318 22 13 18 τ-22-13-1 βββBRA131 βββBRA BRA β-β-β-BRA1-3 232425312727 23 24 25 27 (23-24-25-31-27-2 assintomático. assintomático) 9286 92 86 92,86 13/14, 1314 13/14 , (13/14) 7,14%. 714 7,14% 7 (7,14%) leiteira Gerais brasileiros infectado n= (n= n1 n=1 (n=11 FF 3162626 6 31-62-62- τ10 τ-10 τ22131 2 τ-22-13- βββBRA13 β-β-β-BRA1- 23242531272 (23-24-25-31-27- 928 9 8 92,8 131 13/1 (13/14 71 7,14 (7,14% (n (n=1 316262 31-62-62 τ1 τ-1 τ2213 τ-22-13 βββBRA1 β-β-β-BRA1 2324253127 (23-24-25-31-27 92, 13/ (13/1 7,1 (7,14 31626 31-62-6 τ- τ221 τ-22-1 β-β-β-BRA 232425312 (23-24-25-31-2 (13/ 7, (7,1 3162 31-62- τ22 τ-22- 23242531 (23-24-25-31- (13 (7, 316 31-62 τ2 τ-22 2324253 (23-24-25-31 (1 (7 31-6 τ-2 232425 (23-24-25-3 ( 31- 23242 (23-24-25- 2324 (23-24-25 232 (23-24-2 (23-24- (23-24 (23-2 (23- (23 (2
ABSTRACT: The objective of the present study was to detect the genetic diversity of Anaplasma marginale strains in naturally infected calves from a rural property located in the northeastern region of the state of Pará, Eastern Amazon, which has a history of mortality due to anaplasmosis. Fourteen calves positive for A. marginale were selected using a semi-nested polymerase chain reaction for the target msp1α gene, with asymptomatic (n=3) and symptomatic (n=11) infections. After sequencing the samples, two genotypes were verified in the E and C regions and the structures in tandem repeats were determined. Nine different strains were found: eight related to the E genotype (α-β-β-Γ = one animal, asymptomatic; 16-F-17-F-F = two animals, symptomatic; α-β-F-F-F-F = one animal, asymptomatic; 31-62-62-61 = one animal, symptomatic; τ-10-3 = three animals, two symptomatic and one asymptomatic; α-β-β-β = one animal, symptomatic; τ-22 -13-18 = two animals, both symptomatic; β-β-β-BRA1-31 = two animals, both symptomatic), and one related to genotype C (23-24-25-31-27-27 = one animal, asymptomatic). Genotype E was predominant in 92.86% of the samples (13/14), followed by genotype C (7.14%). This study made it possible to detect the genetic diversity of A. marginale in calves from the selected dairy farm, in addition to identifying the BRA1 sequence in the animals of the present study, which was recently diagnosed in Minas Gerais, demonstrating the dispersion of A. marginale strains in herds from different Brazilian states. Genetic diversity of A. marginale was observed in both symptomatic and asymptomatic calves. There were no significant differences when clinical signs were compared to the genotype verified in the infected animals. The prevalence of pathogenicity was not observed. ABSTRACT Pará Amazon anaplasmosis A seminested semi nested mspα msp α gene n=3 n3 n 3 (n=3 n=11 n11 11 (n=11 infections determined found αββΓ β Γ animal 16F17FF FFF 16 F 17 αβFFFF 31626261 31 62 61 31-62-62-6 τ103 τ 10 τ-10- αβββ τ22 22 τ-2 1318 13 18 -13-1 βββBRA131 βββBRA BRA β-β-β-BRA1-3 symptomatic, , symptomatic) 232425312727 23 24 25 27 (23-24-25-31-27-2 asymptomatic. . asymptomatic) 9286 92 86 92.86 13/14, 1314 13/14 14 (13/14) 7.14%. 714 7.14% 7 (7.14%) farm Gerais states n= (n= n=1 n1 1 (n=1 FF 3162626 6 31-62-62- τ10 τ-10 τ2 2 τ- 131 -13- βββBRA13 β-β-β-BRA1- 23242531272 (23-24-25-31-27- 928 9 8 92.8 13/1 (13/14 71 7.14 (7.14% (n 316262 31-62-62 τ1 τ-1 -13 βββBRA1 β-β-β-BRA1 2324253127 (23-24-25-31-27 92. 13/ (13/1 7.1 (7.14 31626 31-62-6 -1 β-β-β-BRA 232425312 (23-24-25-31-2 (13/ 7. (7.1 3162 31-62- - 23242531 (23-24-25-31- (13 (7. 316 31-62 2324253 (23-24-25-31 (1 (7 31-6 232425 (23-24-25-3 ( 31- 23242 (23-24-25- 2324 (23-24-25 232 (23-24-2 (23-24- (23-24 (23-2 (23- (23 (2