ABSTRACT Introduction: The validation of analytical methods ensures the reproducibility of data, when it is desired to perform the quantification of a product, using methodologies different from those established in official documents. Objective: Validate an analytical method by UV Vis spectrophotometry for the quantification of total alkaloids. Methods: A galenic preparation containing 0.1% of belladonna extract was used to determine the validation parameters using a UV-visible spectrophotometric method at 435 nm, based on the precipitation of alkaloids by interaction with the Dragendorff's reagent. Specificity used a concentration of 100%, while linearity required samples of 80%, 90%, 100%, 110% and 120%; and, in the case of the range, at 80% and 120%. Precision evaluated repeatability at 80%, 100% and 120%, and intermediate precision required a 100% sample considering inter-analyst, inter-team and inter-day conditions. Finally, in accuracy, concentrations of 80%, 100% and 120%; and, for robustness, a 100% sample was analyzed to determine pH variation and centrifugation speed. Results: The selectivity obtained acceptable values in both the matrix and the elaborated product, the linearity presented correlation and determination coefficients close to 1, and the concentration range was between 40 - 60 mg/L. Accuracy, precision and robustness had a variability of less than 2%. Conclusions: The UV Vis spectrophotometric method is selective, linear, exact, precise and robust; it is reliable in the determination of precipitable alkaloids.
RESUMEN Introducción: La validación de métodos analíticos asegura la reproducibilidad de datos cuando se desea realizar la cuantificación de un producto, mediante metodologías diferentes a las establecidas en documentos oficiales. Objetivo: Validar un método analítico por espectrofotometría ultravioleta-visible para la cuantificación de alcaloides totales. Métodos: Se utilizó un preparado galénico que contiene 0,1 % de extracto de belladona para determinar los parámetros de validación mediante un método espectrofotométrico ultravioleta-visible a 435 nm, a partir de la precipitación de alcaloides por la interacción con el reactivo de Dragendorff. La especificidad utilizó una concentración de 100 %, mientras, linealidad requirió muestras de 80 %, 90 %, 100 %, 110 % y 120 %; y, en el caso del rango, al 80 % y 120 %. La precisión evaluó la repetibilidad al 80 %, 100 % y 120 %, y, la precisión intermedia requirió una muestra al 100 % considerando condiciones interanalistas, interequipos e interdías. Finalmente, en exactitud, concentraciones de 80 %, 100 % y 120 %; y, en robustez se analizó una muestra al 100 % para determinar variación de pH y velocidad de centrifugación. Resultados: La selectividad obtuvo valores aceptables tanto en la matriz como el producto elaborado, la linealidad presentó coeficientes de correlación y determinación próximos a 1, y el rango de concentración se encontró entre 40 - 60 mg/L. Exactitud, precisión y robustez tuvieron una variabilidad menor al 2 %. Conclusiones: El método espectrofotométrico ultravioleta-visible es selectivo, lineal, exacto, preciso y robusto; es confiable en la determinación de alcaloides precipitables.