Nos últimos anos, o Ministério da Saúde do Brasil e a Organização Mundial da Saúde tem apoiado a investigação de novas tecnologias que possam contribuir para a vigilância, novos tratamentos e controle da leishmaniose visceral no país. Assim, o objetivo deste trabalho foi isolar compostos de plantas do bioma Caatinga, e investigar a toxicidade destes compostos contra as formas promastigotas e amastigotas de Leishmania infantum chagasi, principal parasita responsável pela leishmaniose visceral na América do Sul, e avaliar a sua capacidade para inibir a enzima acetil-colinesterase (AChE). Após a exposição aos compostos em estudo, foram realizados testes utilizando a forma promastigota que expressa luciferase e ELISA in situ para medir a viabilidade das formas promastigotas e amastigota, respectivamente. O ensaio colorimétrico MTT foi realizado para determinar a toxicidade destas substâncias utilizando células monocíticas murina RAW 264.7. Todos os compostos foram testados in vitro para as sua propriedade anti-colinesterásica. Um cumarina, escoparona, foi isolada a partir de hastes de Platymiscium floribundum, e os flavonóides, rutina e quercetina, foram isolados a partir de grãos de Dimorphandra gardneriana. Estes compostos foram purificados, utilizando cromatografia em coluna gel eluída com solventes orgânicos em misturas de polaridade crescente, e identificados por análise espectral. Nos ensaios leishmanicidas, os compostos fenólicos mostraram eficácia contra as formas extracelulares promastigotas, com EC50 para escoporona de 21.4µg/mL e para quercetina e rutina 26 e 30.3µg/mL, respectivamente. Os flavonóides apresentaram resultados comparáveis à droga controle, a anfotericina B, contra as formas amastigotas com EC50 para quercetina e rutina de 10.6 e 43.3µg/mL, respectivamente. Os compostos inibiram a enzima AChE com halos de inibição variando de 0,8 a 0,6cm, indicando um possível mecanismo de ação para a atividade leishmanicida.

In recent years, the Brazilian Health Ministry and the World Health Organization have supported research into new technologies that may contribute to the surveillance, new treatments, and control of visceral leishmaniasis within the country. In light of this, the aim of this study was to isolate compounds from plants of the Caatinga biome, and to investigate their toxicity against promastigote and amastigote forms of Leishmania infantum chagasi, the main responsible parasite for South American visceral leishmaniasis, and evaluate their ability to inhibit acetylcholinesterase enzyme (AChE). A screen assay using luciferase-expressing promastigote form and an in situ ELISA assay were used to measure the viability of promastigote and amastigote forms, respectively, after exposure to these substances. The MTT colorimetric assay was performed to determine the toxicity of these compounds in murine monocytic RAW 264.7 cell line. All compounds were tested in vitro for their anti-cholinesterase properties. A coumarin, scoparone, was isolated from Platymiscium floribundum stems, and the flavonoids rutin and quercetin were isolated from Dimorphandra gardneriana beans. These compounds were purified using silica gel column chromatography, eluted with organic solvents in mixtures of increasing polarity, and identified by spectral analysis. In the leishmanicidal assays, the compounds showed dose-dependent efficacy against the extracellular promastigote forms, with an EC50 for scoporone of 21.4µg/mL, quercetin and rutin 26 and 30.3µg/mL, respectively. The flavonoids presented comparable results to the positive control drug, amphotericin B, against the amastigote forms with EC50 for quercetin and rutin of 10.6 and 43.3µg/mL, respectively. All compounds inhibited AChE with inhibition zones varying from 0.8 to 0.6, indicating a possible mechanism of action for leishmacicidal activity.

Utilizando a técnica de imunofluorescência indireta, foram demonstradas imunoglobulinas G e M, no soro humano, contra o Cryptosporidium, coccídeo implicado recentemente como agente de doença intestinal humana, principalmente em pacientes imunocomprometidos. Foi obtida positividade de 62% para imunoglobulinas G e M nos soros das crianças immunocompetentes com oocistos nas fezes e, respectivamente, 20% e 40%, nos soros das crianças sem oocistos. Nos pacientes adultos , com o vírus da imunodeficiência humana e excreção fecal do parasita, foram encontrados índices de positividade de 57% da IgG mas apenas 2% para IgM e aqueles com excreção não determinada apresentaram 23% da IgG. Crianças com o vírus da imunodeficiência humana, apresentaram apenas 14% da IgG e foram negativas quanto à IgM. Os resultados apontaram para a utilidade do teste, associado a outras técnicas parasitológicas, em estudos populacionais retrospectivos ou diagnósticos na infecção aguda e, ainda, que a resposta imune humoral a este protozoário necessita de maiores investigações, nos pacientes imunocomprometidos, principalmente crianças.

Cryptosporidium sp., a coccidian parasite usually found in the faeces of cattle, has been recently implicated as an agent of human intestinal disease, mainly in immunocompromised patients. In the study realized, by an indirect immunofluorescence technique, specific immunoglobulins (IgG and IgM) have been demonstrated in human serum against Cryptosporidium oocysts. Purified oocysts were used as antigens in the indirect immunofluorecence assay. After analyzing this test in sera from selected groups of patients, the frequency of both specific IgG and IgM of immunocompetent children who were excreting oocysts in their faeces was 62% and in children with negative excretion of oocysts was 20% and 40%, respectively. In adults infected with the human immunodeficiency virus (HIV) and who were excreting Cryptosporidium in their stools, the frequency was 57% for IgG but only 2% for IgM. Twenty three percent of immunocompromised adults with not determined excretion of oocysts in their stools had anti-Cryptosporidium IgG in their sera. Children infected with human immunodeficiency virus had no IgM and only 14% had IgG detectable in their sera. The indirect immunoflorescence assay, when used with other parasitological techniques appears to be useful for retrospective population studies and for diagnosis of acute infection. The humoral immune response of HIV positive patients to this protozoan agent needs clarification.

Utilizando a técnica de imunofluorescência indireta, foram demonstradas imunoglobulinas G e M, no soro humano, contra o Cryptosporidium, coccídeo implicado recentemente como agente de doença intestinal humana, principalmente em pacientes imunocomprometidos. Foi obtida positividade de 62% para imunoglobulinas G e M nos soros das crianças immunocompetentes com oocistos nas fezes e, respectivamente, 20% e 40%, nos soros das crianças sem oocistos. Nos pacientes adultos , com o vírus da imunodeficiência humana e excreção fecal do parasita, foram encontrados índices de positividade de 57% da IgG mas apenas 2% para IgM e aqueles com excreção não determinada apresentaram 23% da IgG. Crianças com o vírus da imunodeficiência humana, apresentaram apenas 14% da IgG e foram negativas quanto à IgM. Os resultados apontaram para a utilidade do teste, associado a outras técnicas parasitológicas, em estudos populacionais retrospectivos ou diagnósticos na infecção aguda e, ainda, que a resposta imune humoral a este protozoário necessita de maiores investigações, nos pacientes imunocomprometidos, principalmente crianças.

Cryptosporidium sp., a coccidian parasite usually found in the faeces of cattle, has been recently implicated as an agent of human intestinal disease, mainly in immunocompromised patients. In the study realized, by an indirect immunofluorescence technique, specific immunoglobulins (IgG and IgM) have been demonstrated in human serum against Cryptosporidium oocysts. Purified oocysts were used as antigens in the indirect immunofluorecence assay. After analyzing this test in sera from selected groups of patients, the frequency of both specific IgG and IgM of immunocompetent children who were excreting oocysts in their faeces was 62% and in children with negative excretion of oocysts was 20% and 40%, respectively. In adults infected with the human immunodeficiency virus (HIV) and who were excreting Cryptosporidium in their stools, the frequency was 57% for IgG but only 2% for IgM. Twenty three percent of immunocompromised adults with not determined excretion of oocysts in their stools had anti-Cryptosporidium IgG in their sera. Children infected with human immunodeficiency virus had no IgM and only 14% had IgG detectable in their sera. The indirect immunoflorescence assay, when used with other parasitological techniques appears to be useful for retrospective population studies and for diagnosis of acute infection. The humoral immune response of HIV positive patients to this protozoan agent needs clarification.

A técnica de Dot-ELISA (DE) para detecção de anticorpos IgM e IgG anti vírus do sarampo foi padronizada e avaliada utilizando-se antígeno viral obtido por tratamento com desoxicolato de sódio (DOC). Foram estudadas 192 amostras de soros, compreendendo 47 amostras de 22 pacientes com sarampo nas fases aguda e convalescente, 55 amostras de soros de crianças antes da vacinação, tendo 9 meses de idade, 41 amostras de soros de crianças da mesma idade colhidas após vacinação e 49 amostras de soros de pacientes com outras patologias. O desempenho diagnóstico da técnica de Dot-ELISA-IgG foi semelhante ao de Imunofluorescência indireta (IFI) IgG cujos índices de sensibilidade variaram de 0,97 a 1,00 e os de especificidade sendo de valor máximo, 1,00. Contudo, a sensibilidade da técnica de Dot-ELISA IgM (0,85) foi mais alta que a de IFT IgM (0,63), embora ambos os ensaios apresentassem especificidades máximas (1,00). A técnica de Dot-ELISA IgM em particular mostrou-se mais sensível em relação a IFT, revelando anticorpos em 80% das crianças vacinadas (12/15), 15 dias após a imunização. Ao contrário, IFT IgM falhou em detectar anticorpos no mesmo grupo de crianças vacinadas. A estabilidade do antígeno viral obtido com detergente (DOC) foi maior que a do antígeno de IFT, e a reprodutibilidade da técnica de Dot-ELISA foi satisfatória.

A Dot-ELISA using a measles virus (MV) antigen obtained by sodium deoxycholate treatment was standardized and evaluated for IgM and IgG antibody detection in measles patients and measles-vaccinated subjects. A total of 192 serum samples were studied, comprising 47 from patients with acute and convalescent measles, 55 from 9-month old children prior to measles vaccination and 41 from children of the same age after vaccination, and 49 from patients with unrelated diseases. The diagnostic performances of the IgG Dot-ELISA and IgG immuno fluorescence test (IFT) were found to be close, varying from 0.97 to 1.00 in sensitivity and the specificities were maximum (1.00). Nevertheless, the sensitivity of the IgM Dot-ELISA (0.85) was higher than that (0.63) of the IgM IFT, although both assays had comparably high (1.00) specificities. The IgM Dot-ELISA in particular proved to be more sensitive in relation to other assays studied by revealing antibodies in 80.0% (12/15) of vaccinated children on the 15th day after immunization. In contrast the IgM IFT, failed to detect antibodies in the same group of vaccinated children. The stability of the MV antigen was longer than that of the IFT antigen, and the reproducibility of the Dot-Elisa was satisfactory.