Resumen: La pitiosis es una enfermedad ampliamente distribuida a nivel mundial causada por Pythium insidiosum. Esta es transmitida y propagada en ambientes semiacuáticos afectando principalmente a equinos, caninos, felinos, bovinos y el hombre. En el departamento de Paysandú, Uruguay, en el mes de Mayo 2017 se registró un caso de pitiosis en un equino hembra raza Criolla de 24 años. Se realizó la extirpación quirúrgica de una extensa lesión circular ubicada en zona abdominal. Macroscópicamente se observó tejido de granulación, áreas multifocales de necrosis con contenido supurativo hemorrágico, concreciones del tipo pastoso a gredoso de color blanco amarillento. Al examen histopatológico por medio de la tinción de H&E se destacaba ulceración difusa de la epidermis; con severa proliferación de tejido de granulación, abundante tejido conjuntivo, neovascularización, áreas multifocales de necrosis eosinofílica rodeada por abundantes polimorfonucleares, principalmente eosinófilos, y macrófagos en dermis superficial y profunda. Dentro de las áreas de necrosis se observó la presencia de hifas coloreadas positivamente con la coloración argéntica de Grocott. Se obtuvo inmunomarcación positiva para P. insidiosum. En el cultivo del material se aislaron colonias de color blanquecino y crecimiento radial con desarrollo de micelios aéreos luego de 48 horas. Se confirmó el aislamiento de P. insidiosum mediante la inducción de zooesporas y la caracterización de las mismas. Por medio de la reacción de PCR-anidado se amplificó la región ITS (ITS1, 5.8S, ITS2) y en una segunda reacción se amplió el gen específico para P. insidiosum de la región ITS1. La secuencia obtenida fue comparada con la registrada en el GenBank confirmando una homología de 100 % con P. insidiosum.

Summary: Pythiosis is a disease widely distributed worldwide caused by Pythium insidiosum. It is transmitted and propagated in semi-aquatic environments, mainly affecting equines, canines, felines, cattle and humans. In Paysandú County, Uruguay, in the month of May 2017, a case of pitiosis was registered in a 24-year-old Creole breed female equine. An extensive circular lesion located in the ventral abdominal area was surgically removed. Macroscopically, it was observed granulation tissue, multifocal areas of necrosis with suppurative hemorrhagic content and yellowish-white pasty to chalky concretions. At the histopathological examination with H&E stain there was of notice diffuse ulceration of the epidermis; in superficial and deep dermisthere were severe proliferation of connective tissue, neovascularization, multifocal areas of necrosis surrounded by infiltration of polymorphonuclears, mainly eosinophils, and macrophages. Inside of the areas of necrosis there was presence of hyphae stained positively by the argentic Grocott stain. Positive immunostaining was obtained for P. insidiosum. In the culture of the fresh material, colonies of whitish color and radial growth were isolated with the development of aerial mycelia after 48 hours. The isolation of P. insidiosum was confirmed by the induction of zoospores and the characterization of them. The ITS region (ITS1, 5.8S, ITS2) was amplified by the nested PCR reaction and in a second reaction the gene specific for P. insidiosum from the ITS1 region was amplified. The sequence obtained was compared with that registered in GenBank confirming a 100% homology with P. insidiosum.

Para avaliar se os níveis séricos de IFN-gama e TNF-alfa podem ser usados como marcadores da resposta terapêutica na leishmaniose cutânea, 54 pacientes com história de uma única lesão ulcerada com duração de até 30 dias foram arrolados para o estudo. IFN-gama e TNF-alfa foram mensurados por ELISA no sobrenadante de cultura de linfócitos, antes e 60 dias após início da terapia. Cicatrização completa da lesão 60 dias após o tratamento foi considerada critério de cura. Os níveis de IFN-gama e TNF-alfa foram similares em ambos os grupos antes da terapia. Houve tendência de aumento dos níveis de IFN-gama nos pacientes curados aos 60 dias, os valores não alcançam significância estatística. Em ambos os grupos de pacientes, os níveis iniciais de TNF-alfa foram semelhantes antes da terapia e caíram significantemente após tratamento independente da cura ou manutenção da lesão ativa.

To evaluate if IFN-gamma and TNF-alpha levels could be used as markers of therapeutic response in cutaneous leishmaniasis, 54 patients with history of one ulcerated cutaneous lesion, with up to 30 days onset, were enrolled in the study. IFN-gammaand TNF-alpha were measured by ELISA in lymphocyte cultures supernatant before and 60 days after initiating therapy. Cure was considered to be a complete healing of lesion 60 days after treatment. IFN-gamma and TNF-alpha levels were similar in both groups of patients before therapy. There was a tendency to increase IFN-gamma levels in patients that were cured in 60 days, however the values did not reach statistical significance. In both groups of patients, TNF-alpha levels were similar before therapy and fell significantly after treatment, irrespective of cure or maintenance of active lesion.

O teste de Montenegro, utilizado no diagnóstico da leishmaniose tegumentar, tem sido recentemente considerado marcador de imunogenicidade após vacinação. Neste estudo, avaliou-se o poder sensibilizante deste teste e a produção de y-IFN in vitro, em indivíduos não expostos a Leishmania. Utilizaram-se para o teste antígenos de L. amazonensis produzido em nosso laboratório (grupo I) ou produzido pela FIOCRUZ-RJ (grupo II). No dia 30, 33% dos indivíduos do grupo I e 42% do grupo II converteram o teste para positivo, comparando-se com 67% do grupo I e 50% do grupo II no dia 90. y-IFN foi detectado em 56% dos indivíduos do grupo I e 17% do grupo II no dia 30 (169±309 e 11±36pg/ml) e em 67% do grupo I e 58% do grupo II no dia 360 (69±107 e 18±20pg/ml). Estes dados demonstram que o teste de Montenegro induz, além de hipersensibilidade tardia, a produção de y-IFN.

The Montenegro skin test, used to diagnose cutaneous leishmaniasis, is now being considered to detect immunogenicity after vaccination. In this study, we evaluated the ability of this test to induce immune response and IFN-g production in subjects not previously exposed to Leishmania. The Montenegro skin test was performed using antigens of L. amazonensis produced by our laboratory (group I) or by FIOCRU-RJ (group II). At day 30, 33% of the subjects from group I and 42% from group II were positive, compared to 67% from group I and 50% from group II at day 90. IFN-y was detected in 56 % of subjects from group I and 17% from group II at day 30 (169±309 and 11±36pg/ml) and in 67% from group I and 58% from group II by day 360 (69±107 and 18±20pg/ml). These data demonstrate that the Montenegro skin test induces not only a delayed hypersensitivity reaction, but also IFN-y production.

A primeira síntese total da substância antitumoral de origem marinha metacromina-A (1) foi alcançada através de uma abordagem sintética convergente e aplicável a preparação de análogos para estudos biológicos. A síntese envolveu doze etapas na sua sequência mais longa e dezesseis no total, apresentando como destaques (1) a eficácia na síntese da quinona intermediária 11; (2) a preparação eficiente dos fragmentos chaves 5 e 6; (3) uma reação de acetoxilação do tipo Thiele-Winter altamente regiosseletiva e (4) uma reação de acoplamento do tipo Horner-Wadsworth-Emmons empregando o fragmento 6 como fosfonato não estabilizado capaz de atuar como um agente produtivo no acoplamento. Uma síntese formal e enantiosseletiva da metacromina-A também é descrita a partir da síntese assimétrica do fragmento 5, utilizando as metodologias desenvolvidas por Simpkins (desprotonação assimétrica com bases nitrogenadas quirais) e d’Angelo (alquilações desracemizantes). Este último processo forneceu o fragmento 5 com um excesso enantiomérico de ~85%, determinado por espectroscopia de RMN ¹H.

The first total synthesis of the antineoplastic marine natural product metachromin-A (1) was accomplished through a convergent synthetic approach amenable to the preparation of analogues for biological studies. The synthesis involved twelve steps in its longest sequence and sixteen steps overall. The total synthesis of the racemic metachromin-A features: (1) an efficient synthesis of the quinone intermediate 11; (2) efficient protocols for the preparation of the key fragments 5 and 6; (3) a highly regioselective Thiele-Winter acetoxylation step; and (4) a stereoselective Horner-Wadsworth-Emmons coupling reaction employing fragment 6 as a non-stabilized phosphonate as an effective partner. The metachromin-A synthesis was made formally enantioselective by the asymmetric synthesis of fragment 5 employing the methodologies developed by Simpkins (asymmetric deprotonation with a chiral nitrogenated base) and d’Angelo (enantioselective deracemization). This latter protocol furnished fragment 5 with an enantiomeric excess of ~85%, as determined by ¹H-NMR spectroscopy.