ABSTRACT Introduction: Acute graft-versus-host disease (GVHD) is one of the major causes of morbidity and mortality in patients undergoing allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (AHSCT) and has become the subject of several studies to understand and treat it. Objective: This study does a descriptive analysis of the apoptotic index (AI) evaluation and intestinal permeability (IP) alterations in association with the clinical, endoscopic and histopathological data on patients undergoing AHSCT, with emphasis on acute intestinal graft-versus-host disease (GVHD) diagnosis. Methods: Thirty-one patients were divided into two groups—one of patients with a clinical GVHD diagnosis and one of those without GVHD diagnosis. Results: Thirteen deaths (41.9%) occurred during the study period, thereby reaffirming the severity of the alterations found in the patients. Fifteen patients subjected to 21 esophagogastroduodenoscopy procedures prior to D + 90 post-transplant had visible endoscopic alterations and 19 biopsies revealed histological alterations to the stomach and duodenum. Higher apoptotic indices, not reaching statistical significance, were observed in patients who died of graft versus host disease (GVHD), in the more acute forms of GVHD and where clinical GVHD was present. The intestinal permeability evaluation was performed on nine patients able to undergo it in the three proposed study periods, which showed alterations, some of which were pronounced even during pre-transplant and, therefore, the pre-conditioning phase. Conclusion: Clinical judgment remains a fundamental tool in the diagnosis of GVHD. This study points to the known limitations of traditional diagnostic aids (endoscopy and histology) and points to new methods not usually employed in clinical practice.

RESUMO: A avaliação das propriedades histológicas e da expressão de genes e proteínas em biópsias tem sido determinante para o entendimento da fisiopatologia, o diagnóstico e o prognóstico das enfermidades. Entretanto, a obtenção de biópsias do casco é um procedimento com limitações devido à ausência de técnicas e instrumentos específicos. O objetivo foi desenvolver e testar, na espécie bovina, um instrumento cirúrgico especificamente desenvolvido para realização de biópsias de casco nominado lamelótomo de Falcão-Faleiros (INPI, BR102013018765-8). Utilizaram-se cinco bovinos adultos que foram sedados, contidos em decúbito lateral e tiveram dois dígitos anestesiados. Em seguida, uma serra circular acoplada a uma microretífica foi usada para o desgaste do estrato córneo na parede dorsal até próximo do estrato lamelar. Após incisões retilíneas delimitando a borda interna da área desgastada, utilizou-se o lamelótomo para obtenção da amostra. Os fragmentos de 16mm de comprimento e 6mm de profundidade foram fixados em formalina e processados para histologia com colorações HE, PAS, Shorr e tricrômico de Masson. Nenhum dos animais apresentou claudicação ou complicação relevantes no período pós-opertório. As amostras foram consideradas adequadas quanto à integridade das lâminas e à preservação de sua arquitetura. Obtiveram-se média de 85 lâminas epidérmicas viáveis por biópsia. Conclui-se que o lamelótomo de Falcão-Faleiros é apropriado e seguro para a obtenção de biópsias de casco em bovinos, se mostrando promissor para uso em estudos clínicos e na rotina de diagnóstico de problemas podais em bovinos.

ABSTRACT: The histological and molecular analysis of biopsy samples are fundamental steps for the understanding of physiopathology, diagnosis and prognosis of the diseases. However, harvest of tissue biopsies from hoof lamellar tissue is a procedure with limitations due to lack of effective surgical instruments and techniques. The aim of the current study is to develop and test in vivo a surgical instrument with the specific purpose of harvesting lamellar tissue in cattle. A prototype called Falcão-Faleiros’ lamellotome (INPIBR102013018765-8) was designed, produced and tested. After sedation, five adult cattle were restrained in lateral recumbency and locally anesthetized in two digits. The stratum corneum was worn down using a rotary tool coupled to a 3/8” high-speed cutter until the soft tissue proximity was reached. Next, the inner edge of the worn area was bounded with a scalpel. The lamellotome was introduced to obtain and hold the sample. The histological specimens of 16mm length by 6mm depth were stained with HE, PAS, Masson’s thricome and Shorr. The structures of interest were differentiated in the histological analysis without technical artifacts and a mean number of 85 epidermal laminae per sample were counted. No relevant lameness or wound complication were seen following the procedure. In conclusion the technique using the lamellotme was effective in obtaining lamellar tissue biopsy samples without causing clinical harm in cattle. The procedure showed potential to be used in clinical research or even as a supplementary diagnosis method for routine bovine podiatry.

Resumo: A liberação da placenta após o parto envolve a perda da adesão materno-fetal e ocorre somente após a maturação completa do placentoma, que está relacionada com a diminuição da celularidade dos tecidos fetal e materno. A apoptose é requerida tanto para a maturação quanto para a liberação normal da placenta após o parto. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de apoptose em amostras de placenta de vacas em diferentes fases de gestação. Amostras de placentomas de 15 vacas saudáveis com 4 (n=5), 6 (n=5) e 9 (n=5) meses de gestação foram colhidas e processadas rotineiramente para a histologia, imunoistoquímica e histoquímica. As lâminas obtidas foram coradas em HE, Picrosirius Red e submetidas à análise imunoistoquímica das proteínas Caspase 3, Caspase 8, Bax e Bid. O aumento no número de vasos não necessariamente se associou ao aumento do calibre destes durante a evolução da gestação. Os resultados de histomorfometria revelaram aumento da marcação para Bax e Caspases 3 e 8 em células trofoblásticas binucleadas no final da gestação, enquanto o Bid se manteve sem alteração significativa. A histomorfometria das células trofoblásticas mononucleadas revelou expressão alta para Bax no início de gestação, com diminuição aos 6 meses de gestação e aumento das imunomarcações para Caspases 3 e 8, e Bid com o avanço gestacional. Os colágenos tipo I e III não aumentaram do terço médio ao final da gestação, o que é importante para a diminuição da adesão materno-fetal. Esses resultados confirmam que as Caspases 3 e 8, e o Bax estão envolvidos nos mecanismos de ativação da apoptose pela via intrínseca mitocondrial e/ou extrínseca ao longo da gestação em células trofoblásticas binucleadas, e que nas células trofoblásticas mononucleadas o Bax deixa de ser importante, enquanto o Bid e as Caspases 3 e 8 se tornam os mais significativos.

Abstract: Placental release after birth involves loss of maternal-fetal adhesion and occurs only after complete maturation of the placentoma related to the decrease in cellularity of fetal and maternal tissues. Apoptosis is required for both the normal maturation and release of the placenta after birth. The aim of this study was to evaluate the occurrence of apoptosis in samples of the placenta of cows in different stages of gestation. Samples of 15 healthy cow placentomas at 4 (n=5), 6 (n=5) and 9 (n=5) months of gestation were harvested and processed for routine histology, immunohistochemistry and histochemistry. The slides were stained with HE, PicroSirius Red and subjected to immunohistochemical analysis of proteins Caspase 3, Caspase 8, Bax and Bid. Increase in number of vessels was not associated with increase in vascular area during progression of gestation. The results of histomorphometry revealed increased labeling for Bax and Caspases 3 and 8 in trophoblastic binucleated cells in late pregnancy, where the Bid remained without significant change. Histomorphometry analyzing the mononuclear trophoblast cells showed a high expression for Bax in early pregnancy, but decreased at 6 months of gestation. Immunolabeling revealed increased Caspases 3/8 and Bid with advancing of gestation. Further evaluation of type I and III collagen showed a decrease of both types of collagens at the end of gestation, what is very important for the reduction of maternal-fetal adhesion. These results confirm that Caspases 3 and 8 and Bax are involved in the mechanisms of activation of apoptosis through mitochondrial intrinsic and/or extrinsic pathway during pregnancy in trophoblastic binucleated cells. In mononuclear trophoblast cells Bax looses importance in the apoptosis process, awhile Bid and caspases 3 and 8 become the most significant.

O presente estudo teve como objetivo investigar alterações comportamentais e processos inflamatórios na isquemia cerebral induzida pela oclusão unilateral da carótida comum esquerda (UCCAO) em camundongos. As alterações comportamentais foram avaliadas após 15 minutos de isquemia e 24 horas de reperfusão. O teste de reconhecimento de objetos foi utilizado para avaliação da memória e do aprendizado. Em seguida, os animais foram mortos e os encéfalos foram coletados e processados para avaliação das alterações patológicas pelas técnicas de TTC e H&E, assim como da dosagem de mediadores inflamatórios por ELISA. A UCCAO promoveu alterações de memória após a reperfusão. Foram visualizadas áreas de infarto cerebral pela coloração de TTC e cavidades necróticas circundadas por neurônios isquêmicos no cérebro e neurodegeneração hipocampal. A UCCAO causou aumento dos níveis encefálicos de TNF-a, IL-1b e CXCL1. Estes achados demonstraram o envolvimento dos mediadores inflamatórios no sistema nervoso central e da neurodegeneração no déficit cognitivo após isquemia cerebral aguda.

The present study aimed to investigate behavioral changes and neuroinflammatory process following left unilateral common carotid artery occlusion (UCCAO), a model of cerebral ischemia. Post-ischemic behavioral changes following 15 min UCCAO were recorded 24 hours after reperfusion. The novel object recognition task was used to assess learning and memory. After behavioral test, brains from sham and ischemic mice were removed and processed to evaluate central nervous system pathology by TTC and H&E techniques as well as inflammatory mediators by ELISA. UCCAO promoted long-term memory impairment after reperfusion. Infarct areas were observed in the cerebrum by TTC stain. Moreover, the histopathological analysis revealed cerebral necrotic cavities surrounded by ischemic neurons and hippocampal neurodegeneration. In parallel with memory dysfunction, brain levels of TNF-a, IL-1b and CXCL1 were increased post ischemia compared with sham-operated group. These findings suggest an involvement of central nervous system inflammatory mediators and brain damage in cognitive impairment following unilateral acute ischemia.

INTRODUÇÃO: A ocorrência de apoptose e a expressão de marcadores proliferativos são ferramentas poderosas no estabelecimento do prognóstico do câncer.OBJETIVO: Avaliar a fração de crescimento de papilomas e carcinomas laríngeos de células escamosas, com três graus de diferenciação, através da apoptose e expressão de regiões organizadoras de nucléolo.MÉTODO: Estudo retrospectivo, cujo material em blocado em parafina foi submetido à microtomia e coloração em hematoxilina-eosina, e pela prata. As lâminas coradas foram utilizadas para quantificar o índice apoptótico e o número de regiões organizadoras de nucléolo (NORs) através da morfometria.RESULTADOS: A apoptose foi significativamente mais frequente em carcinomas bem diferenciados e em papilomas; enquanto que uma maior fração de crescimento, de NORs expressos e de células que expressaram maior número de NORs, foram mais frequentes nos carcinomas indiferenciados.CONCLUSÕES:Foi possível verificar que o índice apoptótico elevado indica menores chances de diferenciação tumoral nos carcinomas, enquanto que um maior número de NORs totais e células expressando NORs acima da média, e uma maior fração de crescimento, determinam maiores chances de proliferação celular anormal e maior diferenciação tumoral.

INTRODUCTION: Occurrence of apoptosis and expression of proliferative markers are powerful tools to establish a prognosis in the follow-up of cancer.OBJECTIVE: To evaluate the growth fraction in papillomas and laryngeal squamous cell carcinomas with three degrees of differentiation through apoptosis and the expression of nucleolus organizer regions.METHODS: Retrospective study from which paraffin material was submitted to microtomy and hematoxylin-eosin and silver staining. Stained slides were used to quantify the apoptotic index and the number of nucleolus organizer regions by morphometry.RESULTS: Apoptosis was significantly more frequent in well differentiated carcinomas and in papillomas, and a higher growth fraction of expressed nucleolus organizer regions and cells that expressed a greater than average number of nucleolus organizer regions were more frequently noted in undifferentiated carcinomas.CONCLUSIONS: Thus, it was possible to verify that a high apoptotic index was associated with a lower chance of tumor differentiation in carcinomas, while a greater number of total nucleolus organizer regions, cells expressing nucleolus organizer regions above average and a higher growth fraction were associated with greater likelihood of abnormal cell proliferation and increased tumor differentiation.

O objetivo deste trabalho foi investigar as alterações histológicas no casco de vacas leiteiras sem e com lesões de laminite, naturalmente, adquirida. Utilizaram-se animais de descarte sem lesões macroscópicas no casco (G1 n=9) e com lesões macroscópicas associadas à laminite sem (G2 n=23), ou com claudicação (G3 n=7). Após o abate, amostras da junção derme-epiderme das regiões solear, axial e dorsal do casco foram obtidas e processadas, histologicamente, nas colorações de HE e PAS. Avaliou-se, semiquantitativamente, às cegas e por um mesmo pesquisador, congestão, hemorragia e infiltrado inflamatório na derme das regiões solear, axial e dorsal. Avaliou-se infiltrado inflamatório na lâmina dermal das regiões axial e dorsal. A morfologia das células epidermais e a presença de irregularidades em três regiões do comprimento da membrana basal (MB) foram examinadas na coloração de PAS. Os escores das lesões nas diferentes regiões do casco no mesmo grupo e nos diferentes grupos para cada região do casco foram comparados através de análises não paramétricas (P<0,05). Infiltrado inflamatório na derme de todas as regiões do casco foi detectado em todos os grupos sem diferença estatística (P>0,05). Vacas sem lesões macroscópicas secundárias à laminite (G1) apresentaram escores de inflamação e alteração de células epidermais semelhantes aos dos grupos com lesões de laminite, sugerindo a existência de fase prodrômica para a doença em bovinos. A MB apresentou irregularidades com intensidade variável ao longo de seu comprimento (P<0,05), porém, sem diferença entre grupos (P>0,05). O padrão de irregularidades na MB encontrado não foi relatado até o momento e não se assemelha ao colapso de MB descrito em equinos e bovinos com laminite induzida. Concluiu-se que, mesmo na ausência de lesões macroscópicas no casco causadas por laminite, vacas leiteiras apresentam lesões histológicas compatíveis com inflamação da junção derme-epiderme como em animais afetados. A membrana basal de bovinos sem e com lesões de laminite apresenta irregularidades com distribuição irregular ao longo de seu comprimento que precisam ser melhor estudadas.

The purpose of this study was to investigate histological changes in dairy cows' hooves with or without injuries from naturally acquired laminitis. Cull cows with no clinical signs of hoof abnormalities (G1, n=9) and those with macroscopic lesions associated with laminitis without (G2, n=23) or with lameness (G3, n=7) were used in the study. After slaughter, samples of dermo-epidermal junctions of sole, axial and dorsal regions of the hoof were obtained and histologically processed using HE and PAS staining. Congestion, hemorrhage and inflammatory infiltrate in the dermis of sole, axial and dorsal regions were blindly and semiquantitatively evaluated by the same researcher. Inflammatory infiltrate was evaluated in the dermal laminae of axial and dorsal regions. The morphology of epidermal cells and the presence of irregularities in three regions of the basement membrane (BM) length were examined using PAS staining. Scores of lesions in different regions of the hoof in the same group and in different groups for each region of the hoof were compared using non-parametric analyses. Inflammatory infiltrate in the dermis of all regions of the hoof was detected in all groups with no significant statistical difference. Cows with no clinical signs of hoof abnormalities secondary to laminitis (G1) have inflammation scores and epidermal cell changes similar to those of groups with laminitis injuries, suggesting the existence of a prodromal phase for this disease in bovines. BM had irregularities with a variable intensity along its length, however, with no difference among groups. The pattern of BM irregularities found has not been reported so far and does not resemble the BM collapse described in horses and cattle with induced acute laminitis. Is it concluded that even in the absence of macroscopic hoof signs associated to laminitis, dairy cows have histological injuries compatible with inflammation of the dermo-epidermal junction as in affected animals. Basement membrane of cows with or without laminitis associated lesions had irregularities with an irregular distribution along its length which need to be further studied.

O líquen plano oral (LPO) é uma doença crônica inflamatória, provavelmente auto-imune, com diferentes formas clínicas. Os tipos mais comuns são o reticular e o erosivo. A apoptose participa da destruição dos ceratinócitos basais, no entanto o seu papel na perpetuação do infiltrado linfocitário subepitelial ainda não foi investigado. Para avaliar o envolvimento da apoptose no epitélio e no infiltrado linfocitário subepitelial, quinze amostras de LPO reticular, quinze de LPO erosivo e dez amostras de mucosa oral saudável foram coletadas e processadas histologicamente. A apoptose foi quantificada no epitélio e nas células do infiltrado inflamatório. A reação de TUNEL foi usada para mensurar a apoptose no infiltrado. A intensidade da apoptose no epitélio mostrou ser maior no LPO erosivo que no LPO reticular e estes foram maiores que no controle. Em contraste, a apoptose nas células do infiltrado inflamatório foi mais freqüente no LPO reticular que no LPO erosivo. Os linfócitos foram as células predominantes dentro do infiltrado inflamatório e foram mais freqüentes no tipo erosivo de LPO que no tipo reticular. Estes resultados sugerem que diferentes níveis de apoptose estão envolvidos no tipo erosivo e reticular de LPO, determinando as diferenças nas apresentações clínicas. Em conclusão, a diminuição da apoptose no infiltrado inflamatório pode contribuir para a persistência dos linfócitos T, piorando o ataque ao epitélio no LPO erosivo.

The oral lichen planus (OLP) is a chronic inflammatory disease, probably autoimmune, with different clinical forms. The most common types are the reticular and the erosive ones. Apoptosis participates in the destruction of basal keratinocytes, but its role in the perpetuation of the subepithelial lymphocytic infiltrates was not yet investigated. To evaluate the involvement of apoptosis in the epithelium and in subepithelial lymphocytic infiltrates, 15 samples of reticular and erosive OLP and 10 samples of healthy oral mucosa were collected and processed histologically. Apoptosis was quantified in the epithelium and in inflammatory cell infiltrates. TUNEL reaction was used to measure apoptosis in the infiltrates. Erosive OLP showed more intense epithelial apoptosis than reticular OLP and controls. In contrast, apoptosis in the inflammatory cell infiltrates was more frequent in reticular than in erosive OLP. Lymphocytes were the predominant cells within the inflammatory cell infiltrates and were more frequent in erosive OLP than in reticular type. These results suggest that different apoptotic levels are involved in the erosive/reticular switch in OLP, determining different clinical presentations. In conclusion, decreased apoptosis in inflammatory infiltrates may contribute to the persistence of T lymphocytes, worsening the attack to the epithelium in erosive OLP.

A Erliquiose canina é uma zoonose causada pela Ehrlichia canis, bactéria Gram negativa de distribuição mundial. Alguns cães com erliquiose se tornam portadores assintomáticos enquanto outros desenvolvem uma doença aguda com morte rápida. A apoptose pode ser importante na eliminação de patógenos intracelulares, podendo, nas infecções por Ehrlichia sp. e Anaplasma sp., ocorrer modulação da apoptose celular para prolongar a sobrevivência desses organismos. Para avaliação do papel da apoptose na erliquiose canina, sete cães foram distribuídos em dois grupos. No Grupo inoculado, realizou-se a infecção por via intravenosa com sangue infectado com E. canis (isolado Jaboticabal), sendo realizada a inoculação com PBS estéril nos animais pertencentes ao Grupo Controle. Semanalmente e até 35 dias pós-inoculação, amostras de sangue foram coletadas e submetidas a n-PCR e reação de imunofluorescência (RIFI) para confirmação da infecção. No 36° dia pós-inoculação, os animais foram eutanasiados, sendo as amostras de baço, linfonodo, rim e fígado coletadas e processadas para as técnicas de TUNEL e imunohistoquímica (Bcl-2, Bax). Verificou-se pela n-PCR que os animais inoculados se tornaram positivos para E. canis a partir da segunda semana. Pela RIFI, verificou-se animais com sorologia positiva a partir da terceira semana pós-inoculação. No grupo controle, todos os testes realizados foram negativos para E. canis. Apesar da reação de TUNEL mostrar maior incidência de apoptose no Grupo Inoculado, sendo o baço e os linfonodos os órgãos que apresentaram maior marcação, os resultados da imunohistoquímica para Bcl-2 e Bax indicam que a via intrínseca de apoptose não é importante nos órgãos analisados.

Some dogs infected with Ehrlichia canis become asymptomatic while others develop an acute illness followed by quick death. Apoptosis may be an important mechanism for elimination of intracellular pathogens. Also, Ehrlichia sp. and Anaplasma sp. can modulate apoptosis to extend their survival. To evaluate the role of apoptosis in canine ehrlichiosis, 7 dogs were assigned into 2 groups, one with 4 animals inoculated intravenously with blood infected with Ehrlichia canis (Jaboticabal isolate) and a control with 3 dogs, inoculated with sterile PBS. Blood samples were collected weekly and 35 days post-inoculation to confirm the infection by nPCR and immunofluorescence. Thirty-six days after inoculation the animals were euthanized and samples from spleen, lymph nodes, kidney and liver were collected to carry out the TUNEL technique and immunohistochemistry (Bcl-2, Bax). Inoculated animals became positive for E. canis by nPCR already in the second week and by immunofluorescence in the third week after inoculation. The control group showed negative for E. canis in all tests. The TUNEL reaction showed a higher incidence of apoptosis in the inoculated group, with stronger labeling in the spleen and lymph nodes. The results of immunohistochemistry for Bcl-2 and Bax suggest that the intrinsic pathway of apoptosis is not important in the analyzed organs.

A etiopatogênese da polipose nasal eosinofílica ainda não foi esclarecida. Os eosinófilos constituem as principais células do infiltrado inflamatório e estão relacionados com a perpetuação do processo inflamatório na rinossinusite crônica com pólipos nasais. OBJETIVO: Avaliar a ação in vitro da mitomicina no índice apoptótico de pólipos nasais eosinofílicos. MATERIAL E MÉTODO: Estudo prospectivo experimental autopareado com amostra de biópsia de 15 pacientes com polipose nasal eosinofílica. Cada fragmento foi dividido em dois grupos. No grupo experimental aplicou-se mitomicina por cinco minutos, na dosagem de 400 µg/ml. O grupo controle foi submetido às mesmas manipulações, mas utilizando-se somente meio de cultura. Os fragmentos contidos nos dois primeiros compartimentos, controle e experimento, foram imediatamente submetidas ao preparo para histopatologia. O outro par de amostra, contendo controle e experimento, foi incubado por 12 horas. Após 12 horas, os fragmentos foram retirados para exame histopatológico. O índice apoptótico foi determinado pela morfometria na coloração hematoxilina-eosina e pela análise da fragmentação do DNA. RESULTADO: A comparação do dois grupos demonstrou diferença significativa (p < 0,001) no índice apoptótico das culturas incubadas por 12 horas. CONCLUSÃO: A mitomicina induz in vitro o aumento do índice apoptótico dos eosinófilos dos pólipos nasais eosinofílicos.

The etiopathogenesis of eosinophilic nasal polyps is yet to be explained. Eosinophils are key components in the inflammatory infiltrate and are related to the perpetuation of the inflammatory process in chronic rhinosinusitis with nasal polyps. OBJECTIVE: This paper aims to evaluate the in vitro action of mitomycin upon the apoptotic index of nasal polyps. MATERIALS AND METHODS: This is a self-paired prospective experimental study using biopsy fragments from 15 patients with eosinophilic nasal polyps. Biopsy fragments were divided into two groups. In the case group, the fragments were treated with 400 µg/ml of mitomycin for five minutes. The control group fragments were treated with culture medium. The pair of fragments contained in the two first compartments - control and case - were immediately sent to the histopathologist. The other pair of samples containing control and case fragments was incubated for 12 hours. The fragments were then taken to the histopathologist for testing. The apoptotic index was determined by the morphometry in hematoxylin and eosin staining and DNA fragmentation analysis (TUNEL reaction). RESULTS: The comparison between the two groups showed a statistically significant difference (p < 0,001) in the apoptotic index of the 12-hour incubated cultures. CONCLUSION: Mitomycin acts in vitro upon the eosinophilic nasal polyps inducing the rise of the eosinophilic apoptotic index.

RACIONAL: O controle do sangramento na hepatectomia é um desafio para os cirurgiões. A clampagem do pedículo hepático é manobra cirúrgica que pode promover redução do sangramento, mas provoca isquemia hepatocelular. Isso, junto com a reperfusão depois que a clampagem termina, leva à lesão de isquemia e reperfusão. OBJETIVO: Examinar os efeitos da lesão de isquemia e reperfusão no fígado após clampagem contínua e intermitente do pedículo hepático, usando a quantificação de apoptose como ferramenta. MÉTODO: Vinte coelhos New Zealand foram divididos em grupos 1 (controle), 2 (60 minutos de isquemia contínua) e 3 (60 minutos de isquemia intermitente alternando 12 minutos de isquemia e três minutos de reperfusão). Biópsias hepáticas foram colhidas antes e ao fim da isquemia e após seis horas de reperfusão, quando os animais eram sacrificados. Os fragmentos obtidos foram submetidos à análise histológica e histoquímica (reação de Tunel). Campos microscópicos foram analisados para caracterização e quantificação de apoptose. RESULTADOS: A isquemia levou à elevação do índice apoptótico em ambos os grupos experimentais em relação aos controles, mas similar entre eles. Depois da reperfusão os índices voltaram aos valores iniciais. CONCLUSÃO: A clampagem do pedículo hepático, tanto contínua quanto intermitente, induz a apoptose em células hepáticas de modo igual.

BACKGROUND : The control of bleeding in hepatectomy is a challenge for surgeons. The hepatic pedicle clamping is a surgical maneuver that can provide reduction in bleeding, but it provokes a hepatocellular suffering. This, along with reperfusion after the clamping finishes, leads to an injury known as ischemia/reperfusion injury. AIM: To examine the effects of the ischemia/reperfusion injury on the liver after continuous and intermittent hepatic pedicle clamping in an animal model, using the quantification of apoptosis for evaluation. METHOD: Twenty New Zealand rabbits were assigned to groups 1 (control), 2 (60 minutes of continuous ischemia) and 3 (60 minutes of intermittent ischemia alternating 12 minutes of ischemia and three minutes of reperfusion). Liver biopsies were collected before ischemia, at its end and after six hours of reperfusion, when the animals were killed. The liver fragments were subjected to histological analysis (paraffinization and hematoxilin-eosin staining) and histochemical (Tunel reaction). Microscope fields of view were scanned for characterization and quantification of apoptosis. RESULTS : Ischemia led to an increased apoptotic index in both experimental groups in comparison to controls, but similarly between them. After the reperfusion, the indexes returned to baseline values. CONCLUSION: Clamping of the hepatic pedicle, either continuous or intermittent, induces apoptosis in liver cells in a similar way.

INTRODUÇÃO: As displasias do colo uterino são precursoras do carcinoma de células escamosas. Mutações induzidas por carcinógenos correlacionam-se com alterações proliferativas. O acúmulo dessas mutações e o descontrole da homeostase genômica permitem mudanças na expressão de determinados genes e geram desequilíbrios na proliferação celular e na apoptose. Marcadores imuno-histoquímicos de proliferação celular, de apoptose e de sobrevivência celular em lesões intraepiteliais cervicais ainda necessitam de estudo morfométricos para definir seus papéis na evolução das displasias ao carcinoma invasivo. OBJETIVOS: Para melhor entender os processos de proliferação celular, apoptose e renovação epitelial nessas lesões, foram realizadas histomorfometria para mitose e apoptose e reações imuno-histoquímicas das proteínas Bax, Bcl-2 e Ki-67 (reatividade, localização e intensidade) em biópsias cervicais. MÉTODOS: As amostras foram divididas em quatro grupos: 1. cervicite (n = 20); 2. displasia leve (n = 20); 3. displasia moderada (n = 20); 4. displasia acentuada (n = 20). RESULTADOS: Foram verificadas intensa proliferação celular e apoptose nas lesões de alto grau e ampla, intensa e difusa imunomarcação para Ki-67 e Bax. Esses achados foram encontrados de maneira discreta ou nula nos grupos cervicite e displasia leve. A marcação para Bcl-2 foi mais intensa nas lesões de alto grau, tendo sido discreta nas demais. A ampla marcação imuno-histoquímica de Ki-67 e Bax é sugestiva de elevado grau de renovação celular, o qual também é sustentado pela histomorfometria. A expressão do Bcl-2 aumenta com a gravidade da displasia. CONCLUSÃO: Esses achados indicam que o processo pré-neoplásico é dinâmico, com apoptose e mitose ocorrendo concomitantemente.

INTRODUCTION: Cervical dysplasias are precursor to squamous cell carcinoma of the uterine cervix. Carcinogen induced mutations correlate with proliferative alterations. Accumulation of such mutations and unbalance of genomic homeostasis induce changes in certain genes as well as affect cell proliferation and apoptosis. Immunohistochemical markers of cellular proliferation, apoptosis and cell survival in cervical intraepithelial lesions still require morphometric studies in order to define their role in the development of dysplasias caused by invasive carcinoma. OBJECTIVES: In order to better understand the processes of cellular proliferation, apoptosis and epithelial turn over in such precursory lesions, histomorphometric evaluation for mitosis and apoptosis as well as immunohistochemical reactions for Bax, Bcl-2 and Ki-67 proteins (reactivity, localization and intensity) were carried out in cervical biopsies. METHODS: Samples were split into four groups: 1. cervicitis (n = 20); 2. light dysplasia (n = 20); 3. moderate dysplasia (n = 20); 4. severe dysplasia (n = 20). RESULTS: Intense proliferation and apoptosis were observed in lesions with high, extensive, intense, and diffuse Ki-67 and Bax immunolabeling. Proliferation and apoptosis were mild or null in groups 1 and 2. Bcl-2 immunolabeling was more intense in high degree lesions and mild in the other groups. Extensive Ki-67 and Bax immunolabeling suggests an increased cellular turn over, which was also corroborated by histomorphometry. The more severe the dysplasia is the higher Bcl-2 expression. CONCLUSION: These data indicate that the pre-neoplastic process is dynamic and is concomitant with apoptosis and mitosis.

Apoptose tem um papel importante na manutenção da homeostase placentária, e o desequilíbrio desse processo pode comprometer a gestação. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrencia de apoptose em amostras de placenta de vacas em diferentes fases de gestação. Amostras de placentomos de 15 vacas saudáveis com 4 (n=5), 6 (n=5) e 9 (n=5) meses de gestação foram colhidas e processadas rotineiramente para a histologia, imuno-histoquímica e isolamento de DNA. As lâminas obtidas foram coradas em HE, ou submetidas à análise imuno-histoquímica das proteínas pró-apoptóticas caspase-3 e Bax, e da proteína anti-apoptótica Bcl-2. O DNA isolado foi submetido à eletroforese em gel de agarose para detecção da fragmentação internucleossômica do genoma. Os resultados de histomorfometria revelaram que as células apoptóticas aumentaram progressivamente com o avanço da gestação. Confirmou-se a apoptose pela fragmentação característica do DNA genômico, visualizada pelo clássico "padrão em escada" na eletroforese em gel de agarose. Adcionalmente, a imunoexpressão de caspase-3, Bax e Bcl-2 foram observadas em todas as amostras. Entretanto, a proteína caspase-3 apresentou marcação mais intensa em todos os tempos gestacionais, quando comparada com a marcação das proteínas Bcl-2 e Bax. Esses resultados confirmam e reforçam a importância da apoptose na maturação placentária. Além disto, indica que caspase-3, Bax e Bcl-2 estão envolvidas nos mecanismos de ativação da apoptose pela via intrínseca mitocondrial ao longo da gestação, contribuindo para o equilíbrio fisiológico da celularidade e renovação celular na placenta bovina.

Apoptosis is important for placental homeostasis maintenance, and a misbalance in this process may compromise the success of pregnancy. The aim of this study is to evaluate apoptosis in bovine placental samples at different stages of pregnancy. Placentome samples from 15 healthy cows, at gestational ages of 4 (n=5), 6 (n=5) and 9 (n=5) months were collected and routinely processed for histological and immunohistochemical analysis, and for DNA isolation. Histopathology sections were stained with HE. Others were submitted to immunohistochemistry, using pro-apoptotic caspase-3 and Bax protein, and anti-apoptotic Bcl-2 specific antibodies. Isolated DNAs were processed for electrophoresis in agarose gel, for detection of internucleosomal fragmentation. Histomorphometry results demonstrated that apoptotic cells gradually increase with the advance of the gestation. Also, the DNA ladder pattern was observed in all groups. In addition, caspase-3, Bax and Bcl-2 were all expressed in the three different gestation periods. However, caspase-3 presented a higher expression in all groups, in comparison to Bcl-2 and Bax. These results confirm the importance of the apoptosis in the placental maturation. Also, these results indicated that caspase-3, Bcl-2 and Bax are involved in apoptotic activation mechanisms by mitochondrial intrinsic pathway during placental maturation, contributing for physiological cellularity and cellular turn over balance in bovine placenta.

Com o objetivo de avaliar o efeito da hidrocortisona sobre a apoptose no jejuno de equinos submetidos à is-quemia e reperfusão, dez cavalos foram agrupados em dois grupos: tratado (n=5) e não-tratado (n=5). Foi utilizado um segmento do jejuno como controle (C) e outro foi submetido a isquemia venosa (VIsc) por 2h seguida de 2 ou 12 h de re-perfusão. Amostras de C foram coletadas no tempo zero (antes da isquemia) e amostras de VIsc foram coletadas após 2h de isquemia e a 2 e 12h de reperfusão. Células apoptóticas TUNEL positivas foram contadas em 10 campos microscópicos da mucosa na região das criptas de cada animal em cada tempo. Após 12h de reperfusão, o número de células apoptóticas no grupo tratado foram significativamente menores do que no grupo não-tratado, indicando que a hidrocortiso-na inibe a apoptose. Esses resultados mostram que a hidro-cortisona tem efeito benéfico favorecendo a manutenção da integridade do jejuno em cavalos com lesão de isquemia e reperfusão por prevenir a morte celular por apoptose.

In order to evaluate the effect of hydrocortisone on apoptosis in the jejunum of horses subjected to ischemia and reperfusion, ten horses were paired and grouped into two groups - treated (n=5) and non treated (n=5). Segments of the jejunum were used as controls (C), or as venous ischemia (VIsc), which were subjected to 2h of ischemia followed by 2 or 12h of reperfusion. C samples were collected at time zero (prior to ischemia) and VIsc samples were collected at 2h of ischemia and at 2 and 12h of reperfusion. TUNEL positive apoptotic cells were counted in 10 microscopical fields in deep mucosa from each horse throughout the time course. After 12h of reperfusion, the number of apoptotic cells in treated group were significantly lower than in untreated animals, indicating that hydrocortisone inhibits apoptosis. These results indicate that hydrocortisone has a beneficial effects favoring the maintenance of jejunal integrity in horses with ischemia and reperfusion injuries by preventing apoptotic cell death.

OBJETIVO: Avaliar o efeito da finasterida no PSA sérico e na próstata do hamster-Mesocricetus auratus (hMa). MÉTODOS: 20 hMa adultos machos foram divididos em grupos de 10 animais. No experimento foram administrados 7,14 ng/mL de finasterida, subcutâneo (SC), no dorso, três vezes por semana, por 90 dias, dose equivalente a 5,0 mg usada em homem de 70Kg. Ao final da pesquisa, grupo experimento apresentou idade média de 17,7 ± 0,67 meses. O grupo controle apresentou idade média de 15,2 ± 1,13 meses. O valor de t na comparação das médias das idades entre os dois grupos foi de 5,98 e p=0.0001. Os animais-controle pesaram em média 129,0 ± 18,8g e o experimento 145,0 ± 15,5g; t=1,88 e p=0,0514. Na microscopia óptica de luz e estudo morfométrico: avaliaram-se o diâmetro dos ácinos e epitélio acinar prostáticos, a apoptose, a expressão AgNORs e a celularidade. RESULTADOS: O grupo-experimento apresentou média de PSA de 0,003 ng/mL e o grupo-controle de 0,763 ng/mL, H=7,982 e p=0,0047. A área dos ácinos do grupo-experimento foi de 238,000±24,600 μm² versus 398,600±55,320 μm²; t= 2,653; p= 0,0122. A área do epitélio acinar no grupo-experimento foi de 111,900±12,820 μm² versus 160,400±18,430 μm² t= 2,162; p= 0,0361. A expressão de AgNORs foi menor no grupo-experimento 2,846±0,877 versus 3,68 ±1,07 grumos argilófilos por μm², p= < 0,0001. A apoptose foi mais freqüente no grupo-experimento, 53,62±1,389 versus controle, 14,76 ± 2,137, p= 0,0408. Não houve diferença na celularidade entre os grupos de animais, 74,75±5,5 células no grupo-controle versus 65,07±13,24, no grupo-experimento, p= 0,5105. CONCLUSÕES: A finasterida diminuiu o PSA sérico, a área do lúmen, o epitélio acinar, a expressão de AgNORs e promoveu a apoptose nos ácinos da próstata dos hamsteres experimento e não houve diferença na celularidade acinar entre os animais estudados.

PURPOSE: Evaluate the effects of finasteride on the serum PSA and on the prostate of hamster-Mesocricetus auratus(hMa). METHODS: Twenty hMa male adults were split in groups control and experimental (n=10). Animals of the experimental group received 7.14ng/mL of finasteride, subcutaneously (SC) on the back three times per week, during 90 days. The finasteride dose was equivalent to 5.0mg administered to a 70kg man. At the end of the experiment the mean age for the animals in the control group was 15.2±1.13months and for the experimental group was 17.7±0.67 months. There was a statistically significant difference between mean ages of both groups (t value=5.98; p=0.001). The animals of the control group weighted 129.0±18.8g and the experimental group weighted 145.0±15.5g, t=1.88 e p=0.0514. The serum PSA was assessed through ELISA method. Prostates of those animals were collected and processed to histology and morphometry: the diameter of the acinous glands and the acinous epithelium, apoptosis, AgNORs and cellularity were assessed in both groups. RESULTS: Serum PSA decreased in the experimental group, 0.003ng/mL versus 0.763ng/mL, H= 7.982 e p= 0.0047. Decrease in the acinous area occurred in animals that received finasteride, 238.000±24.600 μm² versus 398.600±55.320 μm²; t= 2.653; p= 0.0122. A remarkable decrease in the area of the acinous epithelium occurred in the animals that received finasteride, 111.900±12.820 μm² versus 160.400±18.430 μm² t= 2.162; p= 0.0361. AgNORs were less expressed in finasteride treated animals, 2.846±0.877 versus 3.68 ±1.07 argyrophilic clusters for μm², p= < 0.0001. Apoptosis was more intense in the experimental group, 53.62±1.389 than in controls, 14.76 ± 2.137, p= 0.0408. However, there was no statistical difference in the cellularity between both groups, 74.75±5.5 cells, in controls versus 65.07±13.24, in treated animals, p=0.5105. CONCLUSIONS: Use of finasteride decreased serum PSA and several histological parameters of the Hamster's prostate, such as lumen area, acinous and epithelium area, and AgNORs expression. Finasteride increased apoptosis in the prostate acinous cells although no significant difference in the cellularity could be found between the two groups of animals under study.

A reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real revelou a presença do vírus da cinomose canina em amostra de sangue de cães assintomáticos e não vacinados. Amostra de onze cães domésticos sem nenhum sinal clínico de cinomose e que não foram vacinados no mês da coleta de sangue foram utilizados para análise. Amostra vacinal do vírus da cinomose canina em células VERO foi utilizada como controle positivo. O RNA total foi isolado utilizando-se Trizol®, e tratadas com o Kit TURBO DNA-free. Os iniciadores foram desenhados para amplificar a região do nucleocapsídeo viral com 319pb e 84pb para a PCR convencional e PCR em tempo real, respectivamente. O fragmento alvo da b-actina canina com 93pb foi utilizado como controle endógeno e normalizador. Resultados quantitativos da PCR em tempo real gerados pelo programa ABI Prism 7000 SDS demonstraram que 54,5% dos cães assintomáticos foram positivos para o vírus da cinomose canina. As curvas de dissociação confirmaram a especificidade dos fragmentos da PCR em tempo real. A detecção precoce do RNA viral é importante para a identificação de cães subclinicamente infectados e limitar a difusão da doença.

A quantitative real time polymerase chain reaction (PCR) revealed canine distemper virus presence in peripheral blood samples from asymptomatic and non vaccinated dogs. Samples from eleven domestic dogs with no signs of canine distemper and not vaccinated at the month of collection were used. Canine distemper virus vaccine samples in VERO cells were used as positive controls. RNA was isolated with Trizol®, and treated with a TURBO DNA-free kit. Primers were designed for canine distemper virus nucleocapsid protein coding region fragment amplification (84 bp). Canine b-actin (93 bp) was utilized as the endogenous control for normalization. Quantitative results of real time PCR generated by ABI Prism 7000 SDS Software showed that 54.5% of dogs with asymptomatic canine distemper were positive for canine distemper virus. Dissociation curves confirmed the specificity of the real time PCR fragments. This technique could detect even a few copies of viral RNA and identificate subclinically infected dogs providing accurate diagnosis of this disease at an early stage.