Resumo Butia yatay é uma palmeira nativa do Rio Grande do Sul que encontra-se em risco de extinção. Sua propagação é realizada por via sexuada, porém a germinação por sementes é baixa, lenta e desuniforme. Objetivou-se estabelecer um protocolo de criopreservação visando a conservação da espécie. Foram testadas concentrações de sacarose em pré-tratamento de embriões antes do congelamento. Embriões de Butia yatay podem ser criopreservados, com subseqüente retomada do crescimento, quando submetidos ao prévio tratamento com sacarose a 0,4 M. Neste estudo, os embriões foram congelados por 10 dias, indicando que o pré-tratamento possibilita a conservação de Butia yatay por longo tempo.

Abstract Butia yatay is a palm tree native of Rio Grande do Sul that is in danger of extinction. Its propagation is carried out sexually, however, the seed germination is low, slow and uneven. Thus, a cryopreservation protocol was established aiming at the conservation of the species. Concentrations of sucrose were tested on embryo pre-treatment before freezing. Butia yatay embryos can be cryopreserved, with subsequent growth recovery, when they are submitted to previous treatment with 0.4 M sucrose. In this study, the embryos were frozen for 10 days, indicating that pretreatment allows the conservation of Butia yatay for a long time.

A análise de calos que apresentem características embriogênicas é importante para posterior regeneração, in vitro, de espécies com características agronômicas desejáveis, como o maracujazeiro nativo Passiflora gibertii. Diante do exposto, objetivou-se, com este trabalho, analisar a indução de calos oriundos de explantes foliares de Passiflora gibertiiN. E. Brown, bem como caracterizá-los, morfológica e ultraestruturalmente. Para obtenção de calos, folhas cotiledonares foram inoculadas, em meio de cultura, suplementado com picloram e 2,4-D, combinados com cinetina. Após 30 dias em meio de cultura, no escuro, os calos obtidos foram preparados para a visualização em microscopia eletrônica (transmissão e varredura) e microscopia de luz. Os resultados permitem afirmar que a adição de picloram e cinetina ao meio de cultura promove maior formação de calos em explantes foliares de P. gibertii que 2,4-D e cinetina. O regulador 2,4-D proporciona a obtenção de calos com células de formato isodiamétrico, pequenas e com pequeno espaço intercelular, sistema celular organizado e predominância de mitocôndrias de formato arredondado. Já com a utilização do regulador de crescimento picloram, observa-se a predominância de células grandes e de formato alongado, de espaços intercelulares, de sistema celular desorganizado e de mitocôndrias de formato alongado.

Analysis of calluses with embryogenic characteristics is important for subsequent in vitro regeneration of species with desirable agronomic traits such as the Passiflora gibertii native passion fruit. In this context, the present study aimed to analyze the induction of calluses from leaf explants of Passiflora gibertii N. E. Brown, as well as their morphologic and ultra-structural characterization. Cotyledonary leaves were inoculated in culture medium containing 2,4-D and picloram in association with kinetin. After 30 days of cultivation in the dark, the obtained calluses were prepared for the visualization in electron microscope (transmission and scanning) and light microscope. The results allowed to infer that the addition of picloram and kinetin to the culture medium promotes higher callus formation in cotyledonary leaf explants of P. gibertii than 2,4-D and kinetin. The growth regulator 2,4-D provides the formation of calluses with small isodiametric cells and small intercellular spaces, an organized cellular system and the predominance of round shaped mitochondria. Predominance of large and elongated cells with intercellular spaces, a non-organized cellular system and predominance of elongated mitochondria was observed when picloram was used.

Byrsonima intermedia A. Juss. é uma planta medicinal e frutífera do Cerrado, cuja propagação convencional é difícil, devido à presença do endocarpo extremamente lignificado. Embora o hipoclorito de sódio (NaOCl) seja amplamente utilizado para a desinfestação superficial, existem poucos relatos de seus efeitos sobre o crescimento do explante. Neste trabalho, o objetivo foi estudar o efeito de diferentes pHs e períodos de exposição de sementes de B. intermedia em uma solução de NaOCl. As sementes foram submetidas a diferentes tempos de exposição (1, 5 e 10 minutos) numa solução de NaOCl com diferentes pHs (5, 7, 10 e 12) e, após o tratamento com hipoclorito de sódio, os embriões foram inoculados em meio WPM com a concentração de 50% de sais sem sacarose, ágar a 0,5% e pH 5,8 e, depois de 75 dias de cultivo, o crescimento das plântulas foi avaliado. A utilização de NaOCl é eficaz na desinfestação de sementes de B. intermedia, independente da variação do pH ou dos períodos de exposição. A porcentagem de plântulas normais, o comprimento da parte aérea e o número de folhas são positivamente afetados pela utilização de solução de NaOCl a pH de 8,5-8,9 ou pelo aumento do período de exposição, enquanto o número de raízes é afetado apenas pelo aumento do período de exposição na solução NaOCl

This work studied a new protocol for organogenic calli induction and characterization of the morphology and ultrastructure of callogenesis in leaf explants of Passiflora gibertii N. E. Brown, a native passion fruit species from Brazil. Calli induction was performed in different growth conditions (light and dark), different MS medium salt concentrations (MS and MS half strength) and the presence or absence of coconut water. The leaf explants maintained in the dark were more responsive to bud formation. In order to reduce spending on in vitro culture, the most suitable induction medium for P. gibertii organogenesis could, therefore be the MS half strength salt concentration medium maintained in the dark. The addition of coconut water to the culture medium was essential for both calli induction and bud formation. The morphological and ultrastructural features of the organogenic calli were isodiametric cells, characterized by an organized cellular system, nucleus with prominent nucleoli, presence of starch grains and dense cytoplasm rich in endoplasmic reticulum. The scanning electron microscopy demonstrated that buds were present on these calli.

A mangabeira destaca-se por possuir um grande potencial como planta frutífera. Suas sementes apresentam recalcitrância, dificultando sua propagação, o que torna evidente a necessidade da obtenção de mudas por via assexuada. Neste contexto, a cultura de tecidos apresenta-se como uma alternativa a ser utilizada. Entre os fatores que afetam a morfogênese in vitro, as citocininas merecem destaque, pois influenciam na diferenciação de gemas e no crescimento das brotações. Assim sendo, avaliou-se, neste trabalho, a influência de três diferentes fontes de citocinina (6-benzilaminopurina BAP, cinetina CIN e thidiazuron TDZ) na indução de brotações in vitro de mangabeira, bem como o efeito residual dessa classe de reguladores no enraizamento e na multiplicação em subcultivos sucessivos. Os resultados mostraram que, entre as citocininas testadas, a 6-benzilaminopurina foi a que induziu maior número de brotações (1,98), gemas (19,22) e folhas (18,86) por explante, tendo promovido a formação de brotos de maior comprimento (4,55 cm). As brotações oriundas de meio WPM basal apresentaram maior facilidade de enraizamento. A 6-benzilaminopurina foi responsável pela maior taxa de multiplicação (9,61) de brotações de mangabeira. Os subcultivos sucessivos diminuíram a capacidade de multiplicação de explantes caulinares da espécie.

The mangabeira stands out for having a strong potential for fruit production. Its seeds present recalcitrance, making its propagation difficult, which makes much clear the need to obtain seedlings through asexual methods. In this context, the tissue culture presents as an alternative to be used. Among the factors that affect in vitro morphogenesis, the cytokinins should be highlighted as it influences the differentiation of buds and shoot growth. In this context the influence of three different sources of cytokinins (6-benzylaminopurine BAP, kinetin CIN and thidiazuron TDZ) was evaluated on the induction of in vitro mangabeira shoots, as well as the residual effect of this type of regulator on rooting and multiplication in successive subcultures. The results showed that among the tested cytokinins, the 6-benzylaminopurine was the one that induced a higher number of shoots (1.98), buds (19.22) and leaves (18.86) per explant, promoting the formation of shoots with higher length (4.55 cm). The shoots from basal WPM medium rooted easier. The 6-benzylaminopurine was responsible for the highest rate of multiplication (9.61) of mangabeira shoots. Sucessive subcultures decreased the capacity of shoot multiplication.

A compreensão da organogênese e embriogênese de plantas, nos estágios iniciais de desenvolvimento das células, requer a observação das mudanças subcelulares. No entanto, a caracterização citológica durante o desenvolvimento desses estágios não tem sido realizada com frequência na cultura de tecidos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi caracterizar as diferenças ultraestruturais relacionadas a calogênese de anteras, ovários, folha e segmentos nodais de Inga vera Willd. subsp. Affinis (DC.) T.D. Penn. Para tanto, botões florais, segmentos nodais e folhas foram desinfestados e inoculados em tubos de ensaio contendo meio MS com 3% de sacarose e 4,5 µM de 2,4-D, exceto na calogênese de folhas, em que foram utilizados 9 µM dessa auxina, e na calogênese de anteras e ovários, cujo meio de cultura foi acrescido de 0,25% de carvão ativado e 90 µM de PVP. Após 45 dias em meio de cultura, os calos de anteras, ovários, folhas e segmentos nodais foram fixados em Karnovisky e preparados para a visualização em microscopia eletrônica de varredura e microscopia eletrônica de transmissão. Assim, foram observadas diferenças ultraestruturais entre as células dos calos provenientes de anteras, ovários, segmentos e folhas. Os calos de anteras, folhas e segmentos nodais não apresentaram evidências de formação de embriões somáticos, apesar de suas células possuírem algumas características embriogênicas. No entanto, os calos de ovários parecem ser a fonte de explante mais responsiva à embriogênese, mostrando indícios de formação de embriões.

Subcellular changes are relevant to understand plant organogenesis and embryogenesis in the early stages of cell development. The cytology during cell development in tissue culture is however still poorly characterized. This study aimed to characterize the ultrastructural differences related to callogenesis of anthers, ovaries, leaf and nodal segments of Inga vera Willd. subsp. Affinis (DC.) T.D. Penn. Flower buds, nodal segments and leaves were disinfected and inoculated in test tubes containing MS medium with 3% sucrose and 4.5µM 2.4-D, except for leaf callogenesis, where 9µM of this auxin was used, and for the callogenesis of anthers and ovaries, where the culture medium was enriched with 0.25% activated charcoal and 90µM PVP. After 45 days in culture medium, the anther, ovary, leaf and nodal segment calli were fixed in Karnovisky and prepared for visualization by scanning and transmission electron microscopy. Ultrastructural differences were observed among the callus cells of anthers, ovaries, segments and leaves. There was no evidence of somatic embryo formation in the anther, leaf and nodal segment calli, in spite of some embryogenic characteristics in the cells. The ovary calli, with indications of embryo formation, seem to be the most responsive explant source for embryogenesis.