RESUMO As culturas de soja produzidas nas planícies do leste da Colômbia vem sendo afetadas pela incidência de ferrugem. A doença, ainda considerada oficialmente, pelo Departamento de Agricultura da Colômbia (ICA) como ferrugem americana (ocasionada pelo fungo Phakopsora meibomiae), causa sérios danos à produção nas áreas de cultivo da soja. Os sintomas têm sido observados desde 2004 na metade superior das plantas durante os estágios vegetativos, como lesões marrom-avermelhadas. Em 2005 e 2018, tecidos foliares infectados e uredinosporos foram coletados em uma área experimental e cultivos comerciais dessa cultura. Uma vez que a identificação morfológica e os postulados de Koch confirmaram a presença de Phakopsora spp., foi realizada uma caracterização molecular para se identificar, a nível de espécie, o patógeno associado à ferrugem da soja. Estes foram baseados em procedimentos padrão com espaçadores de transcrição internos (ITS) do rDNA e amplificação por PCR com primers específicos para P. meibomiae e P. pachyrhizi. As sequências obtidas foram verificados por meio do Blast no site do GenBank/NCBI. Os resultados indicaram que Phakopsora pachyrhizi Sydow é, de fato, o agente causal da ferrugem da soja na Colômbia, considerando-se as amostras coletadas em 2005 e 2018. As sequências do ITS-rDNA de P. pachyrhizi foram depositadas com os números de acesso do GenBank MK933723 até MK933731. A informação foi repassada ao ICA, para que atualize oficialmente a situação fitossanitária desse patógeno da soja na Colombia.

ABSTRACT Soybean crops grown in the plains of eastern Colombia have been affected by the incidence of rust. This disease, still officially regarded as American soybean rust (caused by Phakopsora meibomiae) by the Colombian Department of Agriculture (ICA), causes serious damage to soybean growing areas. Symptoms of rust, such as reddish-brown lesions, have been observed since 2004 in the upper half of plants during vegetative stages. In 2005 and 2018, infected leaf tissues and uredinospores were collected from an experimental area and from commercial soybean fields. Once morphological identification and Koch’s postulates confirmed the presence of Phakopsora spp., molecular characterization was performed to identify the pathogen associated with the disease to species level. This was based on standard procedures using internal transcribed spacer (ITS) regions of rDNA and PCR amplification with specific primers for Phakopsora meibomiae and P. pachyrhizi. The obtained sequences were BLASTed against GenBank/NCBI data bank. Results indicated that P. pachyrhizi Sydow is in fact the causative agent of soybean rust in Colombia, considering the samples collected in 2005 and 2018. The ITS-rDNA sequences of P. pachyrhizi were deposited at GenBank under the accession numbers MK933723 to MK933731. This finding was reported to ICA, so that they could officially update the phytosanitary status of this soybean pathogen in Colombia.

RESUMO As duas doenças mais limitantes para o cultivo de borracha na Colômbia são o Mal das folhas causado por Microcyclus ulei e anthracnose, por Colletotrichum spp. Esses patógenos afetam os tecidos foliares, que em condições favoráveis podem resultar no desfolhamento total das árvores. Cortes histológicos de folhas saudáveis e doentes do clone GT1 em diferentes estágios foliares foram realizadas e submetidos a dupla coloração de safranina-green, antes de tirar fotografias ao microscópio de luz. Nas folhas saudáveis foi observada a organização dos tecidos, apreciando que as folhas adultas apresentam uma fina camada de ceras, ausentes nas folhas jovens. Os estágios juvenis das folhas infectadas por M. ulei apresentaram degradação e desorganização da epiderme, parênquima (paliçádico e lacunoso) e feixes vasculares, enquanto nas folhas adultas foi evidenciado a formação de estromas acompanhados pela perda da epiderme, alongamento e lignificação das células do parênquima paliçádico e lignificação parcial. As folhas em estágios juvenis infectadas por Colletotrichum spp. mostraram colapsos na epiderme, acompanhados pela presença de lignina; as folhas do estágio adulto mostraram depressões pronunciadas com forte lignificação e degradação do parênquima lacunoso ou paliçádico e, às vezes, ambas. Em algumas células do mesófilo foram observadas hifas e conídios do fungo. Em conclusão, observou-se que a infecção por os dois patógenos provoca danos histológicos de graus variados, que variam com a idade do tecido e de acordo com os sintomas visuais.

ABSTRACT The two main diseases affecting the rubber tree in Colombia are South American leaf blight caused by Microcyclus ulei and anthracnose caused by Colletotrichum spp. These pathogens affect the leaf tissue and, under favorable climate conditions, can lead to total defoliation of trees. Healthy and symptomatic leaves in different phenological stages of the GT1 clone were histologically sectioned and double stained with safranin-fast green, before pictures were obtained under a light microscope. Tissue organization was observed in healthy leaves, evidencing that mature leaves had a thin wax layer, which was absent in young leaves. Early stages of leaves infected by M. ulei showed degradation and disorganization of the epidermis, parenchyma (palisade and spongy) and vascular bundles, while mature leaves had formation of stromata together with epidermis loss, elongation and lignification of the palisade parenchyma cells, besides partial lignification. Young leaves infected by Colletotrichum spp. showed depressions in the epidermis, accompanied by the presence of lignin; mature leaves presented pronounced depressions with strong lignification and degradation of the spongy or palisade parenchyma and sometimes both processes occurred. Fungal hyphae and conidia were observed in some mesophyll cells. In conclusion, infection by both pathogens causes histological damage of varied degrees according to the age of the tissue and the visual symptoms.

RESUMEN Las dos enfermedades más limitantes para el cultivo del caucho en Colombia son el Mal Suramericano de las hojas, ocasionado por Microcyclus ulei y la antracnosis, por Colletotrichum spp. Estos patógenos afectan los tejidos foliares, que bajo condiciones favorables pueden llegar a ocasionar la defoliación total de los árboles. A hojas sanas y enfermas del clon GT1 en distintos estados fenológicos se les realizaron cortes histológicos, los cuales fueron sometidos a tinción doble de safranina-green, previo a la toma de fotografías bajo el microscopio de luz. En las hojas sanas se observó la organización de los tejidos, apreciándose que las hojas adultas presentan una capa fina de ceras, ausente en las hojas jóvenes. Los estados juveniles de las hojas infectadas por M. ulei presentaron degradación y desorganización de la epidermis, parénquima (empalizada y esponjoso) y haces vasculares, mientras que en las hojas adultas se evidenció la formación de estromas acompañada por la desaparición de la epidermis, alargamiento y lignificación de las células del parénquima de empalizada y lignificación parcial. Las hojas en estados juveniles infectadas por Colletotrichum spp. presentaron hundimientos en la epidermis, acompañado por la presencia de lignina; las hojas en estado adulto mostraron depresiones pronunciadas con fuerte lignificación y degradación del parénquima esponjoso o el de empalizada y en ocasiones ambos. En algunas células del mesófilo se observaron hifas y conidias del hongo. En conclusión, se observó que la infección por estos dos patógenos ocasiona daños histológicos de diferente grado, los cuales varían con la edad del tejido y en concordancia con los síntomas visuales.