RESUMO A diagnose das bacterioses causadoras de manchas foliares na cultura do cafeeiro (Coffea arabica), mancha aureolada (Pseudomonas syringae pv. garcae), mancha bacteriana (P. syringae pv. tabaci), crestamento bacteriano (P. cichorii) e mancha escura (Robbsia andropogonis) é considerada um desafio para os fitopatologistas. A identificação incorreta pode ocorrer quando o diagnóstico é baseado exclusivamente em sintomas e propriedades bioquímicas. Assim, o objetivo com este estudo foi identificar e diferenciar as espécies e patovares de Pseudomonas patogênicos ao cafeeiro, possibilitando um levantamento da ocorrência dessas bactérias nas principais regiões produtoras de Minas Gerais, Brasil. Primeiramente, a patogenicidade dos isolados foi confirmada por inoculação em C. arabica cv. Catuaí Vermelho IAC 99. Em seguida, análises bioquímicas, combinadas com PCR convencional, reação em cadeia de polimerase de elemento repetitivo (rep-PCR) e filogenia baseada em sequências do gene rpoD, foram usadas para caracterizar 84 isolados de Pseudomonas de lavouras de café e viveiros em Minas Gerais. Com base na filogenia do gene rpoD, 73 isolados foram identificados como P. syringae pv. garcae, cinco como P. syringae pv. tabaci e seis como P. cichorii. Os resultados de rep-PCR sugerem alta variabilidade genérica nas populações de Pseudomonas syringae pv. garcae e P. cichorii. Este é o primeiro relato da ocorrência de mancha foliar bacteriana (P. syringae pv. tabaci) em campo de produção de café no Estado de Minas Gerais. Os resultados confirmaram a prevalência de P. syringae pv. garcae em lavouras de café no Estado e o conhecimento gerado contribuirá para o desenvolvimento de primers espécie-específicos para identificação e detecção deste patógeno.

ABSTRACT The diagnosis of foliar bacterial diseases in coffee (Coffea arabica), such as halo blight (Pseudomonas syringae pv. garcae), bacterial leaf spot (P. syringae pv. tabaci), bacterial blight (P. cichorii), and dark leaf spot (Robbsia andropogonis), is considered a challenge for plant pathologists. The misidentification has been occurring when the diagnosis is solely based on symptoms and biochemical properties. Thus, the objective of this study was to identify and differentiate species and pathovars of Pseudomonas pathogenic to coffee plants, enabling a survey of the occurrence of these bacteria in the main producing regions of Minas Gerais state, Brazil. Firstly, the pathogenicity of the isolates was confirmed by inoculation in C. arabica cv. Catuaí Vermelho IAC 99. Then, biochemical analyses, combined with, repetitive element-polymerase chain reaction (rep-PCR) and phylogeny based on rpoD gene sequences were used to characterize 84 Pseudomonas isolates from coffee crops and nurseries. Based on rpoD-phylogeny, 73 isolates were identified as P. syringae pv. garcae, five as P. syringae pv. tabaci and six as P. cichorii. The rep-PCR results suggest a high genetic variability in populations of Pseudomonas syringae pv. garcae and P. cichorii. This is the first report of the occurrence of bacterial leaf spot (P. syringae pv. tabaci) in the coffee-producing filed in Minas Gerais State. The findings confirmed the prevalence of P. syringae pv. garcae in coffee production fields in the State and the generated knowledge will contribute for the development of species-specific primers for the identification and detection of this pathogen.

RESUMO A ramulose (Colletotrichumgossypii var. cefalosporioides) é uma importante doença do algodão no Brasil cujo controle depende do uso de químicos. Portanto, práticas alternativas para o manejo sustentável da doença são cada vez mais necessárias. Esse trabalho objetivou verificar o potencial de três isolados bacterianos: Bacillusamyloliquefaciens (UFLA285), Bacillusvelezensis (UFLA401) e Paenibacilluslentimorbus (MEN2) no controle de ramulose em algodoeiro. Três métodos de aplicação (tratamento de sementes (TS), pulverização foliar e aplicação no solo foram testados (separadamente ou combinados) em casa de vegetação e no campo. Fungicidas químicos e água foram usados como controles. Em casa de vegetação todos os isolados reduziram a severidade da ramulose, sendo que os isolados B. velezensis UFLA401 e P. lentimorbus MEN2 reduziram em 56.6% e 45.7%, respectivamente, independente do modo de aplicação. O isolado B.amyloliquefaciens UFLA285 reduziu a severidade em 62.1% pela pulverização foliar ou por TS + pulverização foliar. Dois ensaios de campo foram realizados e os três isolados testados reduziram a severidade da doença. No primeiro ano, B. velezensis UFLA401 reduziu a severidade em 22.3% por pulverização foliar e em 57% pot TS + duas pulverizações. A produtividade aumentou para todos os tratamentos comparados ao controle com água. A combinação B. velezensis UFLA401 and P. lentimorbus MEN2 em TS + duas pulverizações foliares aumentou a qualidade da fibra do algodão. Conclui-se que isolados de Bacillus sp. (UFLA285 e UFLA401) e P.lentimorbus MEN2 apresentam potencial para proteger o algodoeiro contra a ramulose e melhorar a produção e qualidade da fibra.

ABSTRACT Ramulosis (Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides) is an important fungal disease of cotton in Brazil, exclusively controlled by fungicide application. Therefore, sustainable management of ramulosis is essential. This work aimed to evaluate the potential of three bacterial strains, Bacillus amyloliquefaciens (UFLA285), Bacillus velezensis (UFLA401), and Paenibacillus lentimorbus (MEN2), for the biocontrol of ramulosis in cotton and their effects on yield and fiber quality. Seed treatment (ST), foliar spray, and soil drenching application methods were used (separately or combined) under greenhouse and field conditions. Chemical treatments recommended against ramulosis and water were used as controls. Under greenhouse conditions all strains reduced the disease incidence. While B. velezensis UFLA401 and P. lentimorbus MEN2 reduced the incidence by 56.6% and 45.7%, respectively, independent of the application method, B. amyloliquefaciens UFLA285 reduced the disease by about 60% when applied as a foliar spray or ST + foliar spray. Two field trials were performed and all bacterial strains reduced ramulosis incidence. In the first year, B. velezensis UFLA401 sprayed on the plants reduced incidence by 22.3% and ST + two foliar sprays resulted in the best performance, decreasing ramulosis by 57%. In both seasons the yield increased by using either bacterial or chemical treatments compared to the water control. The combination B. velezensis UFLA401 and P. lentimorbus MEN2 sprays provided better fiber quality than chemical treatment. Therefore, Bacillus sp. (UFLA285 and UFLA401) and P. lentimorbus MEN2 are potential tools to reduce ramulosis, increase cotton yield and fiber quality.

Tendo em vista as diversas atividades biológicas apresentadas pelos óleos essenciais e o potencial antibacteriano do óleo essencial de Lippia sidoides Cham., objetivou-se, com este trabalho, caracterizar o óleo essencial desta espécie coletada na região sul do estado de Minas Gerais-Brasil, bem como identificar as suas estruturas secretoras e avaliar sua atividade antimicrobiana sobre as fitobactérias Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis, Xanthomonas vesicatoria e Pseudomonas syringae pv. tomato. As plantas foram coletadas no município de Itumirim e os óleos essenciais de suas folhas, extraídos por hidrodestilação, utilizando-se um aparelho de Clevenger modificado. O óleo essencial apresentou como constituintes majoritários o carvacrol (26,44%) e o 1,8-cineol (22,63%). Nas superfícies foliares de L. sidoides foram encontrados tricomas glandulares e não glandulares. Entre os tricomas glandulares, encontram-se tricomas capitados do tipo I e tricomas peltados. Foram reveladas a presença de substâncias lipídicas e terpênicas no interior das células das cabeças dos tricomas peltados e capitados. apresentando as seguintes CMI: 7,81 µg mL-1 sobre C. michiganensis, 3,9 µg mL-1 sobre P. syringae e 15,62 µg mL-1 sobre X. vesicatoria. O carvacrol, seu constituinte majoritário, apresentou valores de CMI igual a 3,9 µg mL-1 sobre todas as três bactérias estudadas. Ambos demonstraram a capacidade de inibir o crescimento de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas.

Given the diverse biological activities presented by essential oils, and the antibacterial potential of the essential oil of Lippia sidoides Cham, the objective of this work was to characterise the essential oil of this species, collected in the southern part of the state of Minas Gerais, Brazil, as well as to identify its secretory structures and evaluate its antimicrobial activity on the phytobacteria, Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis, Xanthomonas vesicatoria and Pseudomonas syringae pv. tomato. Plants were collected in the town of Itumirim, and the essential oils of the leaves extracted by hydrodistillation using a modified Clevenger apparatus. The essential oil presented carvacrol (26.44%) and 1.8-cineole (22.63%) as major constituents. On the leaf surface of L. sidoides both glandular and non-glandular trichomes were found. Among the glandular trichomes are peltate trichomes and type I capitate trichomes. The presence of lipidic and terpenic substances within the head cells of both the peltate and capitate trichomes was found. The essential oil of L. sidoides was able to inhibit the growth of all the microorganisms studied, showing the following MIC: 7.81 µg mL-1 for C. michiganensis, 3.9 µg mL-1 for P. syringae and 15.62 µg mL-1 for X. vesicatoria. Carvacrol, the major constituent, showed MIC values equal to 3.9 µg mL-1 for all three bacteria studied. Both exhibited the ability to inhibit the growth of gram-positive and gram-negative bacteria.

O crestamento bacteriano comum, causado por Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (Xap), é a principal bacteriose do feijoeiro no Brasil, sendo transmitida principalmente por sementes. O presente trabalho teve como objetivo aperfeiçoar uma técnica, por meio de diferentes métodos de preparação do extrato, para a detecção de Xap, bem como sua detecção simultânea com Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff) nos extratos de sementes de feijão,via PCR. A partir de amostras de sementes de feijão inoculadas artificialmente com Xap e lotes comerciais, foram avaliados: extrato bruto obtido diretamente das sementes, extrato concentrado por filtração em membrana de 0,22µM de diâmetro, extrato concentrado por centrifugação e extrato plaqueado em meio semi-seletivo XCP1 com e sem antibióticos (BIO-PCR). Avaliou-se a presença simultânea de Xap e Cff em 10 lotes comerciais de sementes de feijão através da reação multiplex, utilizandos-se os primers X4c, X4e, CffFOR2 e CffREV4. A partir do extrato bruto, do extrato concentrado por centrifugação e por filtragem em membrana Millipore® não foi possível a detecção de Xap nas sementes de feijão artificialmente contaminadas nem nos 47 lotes comerciais de sementes/ grãos de feijão. A técnica de BIO-PCR permitiu a detecção de Xap a partir de extratos de sementes de feijão artificialmente contaminadas e em 18 dos 47 lotes comerciais. A técnica de detecção simultânea de Xap e Cff no mesmo gel é viável, por amplificar fragmentos de DNA típicos de cada fitobactéria. O uso do meio de cultura XCP1 sem adição de antibióticos permitiu detectar Xap com período de incubação menor em um dia em comparação à detecção utilizando-se o meio de cultura com antibióticos

Common bacterial blight, caused by Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (Xap), is the major bacteriosis affecting bean plants in Brazil and is mainly transmitted by seeds. This study aimed to improve a technique, using different methods of extract preparation, for the detection of Xap alone and simultaneously with Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff) in bean seed extracts, via PCR. Samples of bean seeds artificially inoculated with Xap and commercial batches were used to evaluate: crude extract obtained directly from the seeds, extract concentrated by filtration in 0.22ìM-diameter membrane, extract concentrated by centrifugation and extract plated on semiselective XCP1 medium with and without antibiotics (BIO-PCR). The simultaneous presence of Xap and Cff in 10 commercial batches of bean seeds was assessed through multiplex reaction, using the primers X4c, X4e, and CffFOR2 CffREV4. By using crude extract, extract concentrated by centrifugation and by filtration in millipore® membrane, detection of Xap in bean seeds artificially contaminated or in 47 commercial batches of bean seeds/grains was not possible. BIO-PCR technique allowed the detection of Xap in extracts from artificially contaminated bean seeds and in 18 of the 47 commercials batches. The technique of simultaneous detection of Xap and Cff on the same gel is feasible, for amplifying DNA fragments typical of each phytobacterium. The use of XCP1 culture medium without adding antibiotics allowed the detection of Xap with shorter incubation period in one day, compared to detection using the culture medium with antibiotics.

Atualmente, existe a necessidade de se desenvolver métodos sensíveis, baratos, reproduzíveis e rápidos para a detecção de fitobactérias em sementes. O objetivo deste trabalho foi otimizar um método de obtenção das células bacterianas e a técnica de PCR para detecção de Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff), em sementes de feijão. Foi utilizado o primer CffFOR2-REV4, desenhado a partir do fragmento amplificado via PCR baseado na seqüência repetitiva (Rep-PCR). Avaliaram-se também quatro métodos de preparação dos extratos de sementes de feijão para a obtenção células de Cff : 1) extrato bruto de sementes; 2 ) extrato concentra do por filtração em membra na milipore (0,22Mu de diâmetro) e ressuspensão em água; 3) extrato concentrado por centrifugação a 10 .00 0 xg por 15 minutos no volume de 20 ou de 80 mL e 4) Bio-PCR. Dentre esses métodos, tanto a Bio-PCR quanto a concentração do extrato por centrifugação, seja no volume de 20 ou de 80 mL, possibilitaram amplificar o segmento de DNA de 306 pb, característico de Cff. Essas duas técnicas, além de detectar a bactéria, apresentam alta sensibilidade, detectando até 1 semente inoculada artificialmente artificialmente com Cff em 999 sementes sadi as. Analisaram-se dezessete lotes comerciais de sementes de feijão pelo método de concentração de extrato por centrifugação, sendo qu e em doze detectou-se a bactéria Cff, observado pela presença de bandas com 306 pb. Portanto, foi possível otimizar um método de obtenção das células bacterianas e técnica de PCR para detecção de Cff em sementes de feijão, que seja sensível, reproduzível e de fácil execução, que poderá ser utilizado rotineiramente em laboratórios de análises de sementes.

Currently, there is a need to develop sensitive methods, inexpensive, reproducible and rapid detection of phytobacteria seeds. The objective of this study was to optimize a method for obtaining bacterial cells and the PCR technique to detect Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff), in bean seeds using PCR. It was used one pairs of primers CffFOR2-REV4, designed from an PCR amplified fragment of the conserved repetitive sequence (Rep-PCR). The primer pair CffFOR2-REV4 was selected in this study, because demonstrated higher reproducibility and efficacy in the detection of Cff strains in bean seeds. Four methods were also evaluated in the seed extract preparation for PCR: 1) rough seed extract; 2) millipore membrane filter (0.22Mu diameter) concentrated seed extract and subsequently ressuspended in water; 3) centrifuge concentrated seed extract 10.000 xg for 15 minutes for 20 and 80 mL; 4) Bio-PCR. Among those methods, either Bio-PCR or centrifuge concentrated extract, in a total 20 or 80 mL suspension volume, produced a 306bp DNA fragment, diagnostic for Cff. Those two techniques detected the bacterium and presented high sensitivity, detecting up to 1 Cff physiological conditioning artificially contaminated seed in a total 999 healthy ones. A total of seventeen commercial bean seed lots were analyzed by the method of concentration of the extract by centrifugation, and twelve detected in the bacterium Cff, observed by the presence of bands with 306 bp. Therefore, it was possible to optimize a method of obtaining the bacterial cells and PCR for detection of Cff in bean seeds, that is sensitive, reproducible and easy to perform, which can be used routinely in laboratories for seed.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de óleos essenciais (OEs) no crescimento de Xanthomonas vesicatoria, na morfologia e na ultraestrutura bacteriana, e na severidade da mancha-bacteriana do tomateiro. OEs de citronela, cravo-da-índia, canela, capim-limão, eucalipto, tomilho e árvore-de-chá foram avaliados in vitro nas concentrações de 0,1, 1,0, 10 e 100% em leite em pó a 1,0%. O efeito dos OEs, a 0,1%, na severidade da mancha-bacteriana do tomateiro foram avaliados em plantas de tomateiro em casa de vegetação. Os efeitos dos óleos de citronela, capim-limão, cravo-da-índia e árvore-de-chá, a 0,1%, nas células de X. vesicatoria foram avaliados por meio de microscopia eletrônica de transmissão. Todos os OEs apresentaram efeito tóxico direto sobre as bactérias na concentração de 10% in vitro. Em casa de vegetação, os OEs de cravo-da-índia, citronela, árvore-de-chá e capim-limão reduziram a severidade da doença. Os OEs de cravo-da-índia e árvore-de-chá, e o sulfato de estreptomicina promoveram perda de material eletro-denso e alterações no citoplasma, enquanto o OE de árvore-de-chá promoveu vacuolização do citoplasma, e os de citronela, capim-limão, cravo-da-índia e árvore-de-chá causaram danos à parede celular bacteriana. Os OEs, na concentração de 0,1%, reduzem a severidade da doença.

The objective of this work was to evaluate the effects of plant essential oils (EOs) on the growth of Xanthomonas vesicatoria, on bacterial morphology and ultrastructure, and on the severity of tomato bacterial spot. EOs from citronella, clove, cinnamon, lemongrass, eucalyptus, thyme, and tea tree were evaluated in vitro at concentrations of 0.1, 1.0, 10, and 100% in 1.0% powdered milk. The effect of EOs, at 0.1%, on the severity of tomato bacterial spot was evaluated in tomato seedlings under greenhouse conditions. The effects of citronella, lemongrass, clove, and tea tree EOs, at 0.1%, on X. vesicatoria cells were evaluated by transmission electron microscopy. All EOs showed direct toxic effect on the bacteria at a 10%-concentration in vitro. Under greenhouse conditions, the EOs of clove, citronella, tea tree, and lemongrass reduced disease severity. EOs of clove and tea tree, and streptomycin sulfate promoted loss of electron-dense material and alterations in the cytoplasm, whereas EO of tea tree promoted cytoplasm vacuolation, and those of citronella, lemongrass, clove, and tea tree caused damage to the bacterial cell wall. The EOs at a concentration of 0.1% reduce the severity of the disease.

Neste estudo foi testada a técnica de condicionamento fisiológico em meio agarizado para inoculação de Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff) em sementes de feijão. Na primeira etapa, avaliou-se o comportamento das sementes de feijão cultivar Pérola, durante o pré-condicionamento osmótico em substrato agarizado com restrição hídrica. Os tratamentos consistiram em expor, por diferentes períodos de tempo, sementes de feijão desinfestadas a quatro níveis de restrição hídrica do meio 523 (-0,55, -0,75, -0,95 e -1,15 MPa), com o uso de quatro substratos (meio 523, meio 523+KCl, meio 523+manitol e meio 523+sacarose). Como testemunha, utilizou-se o meio 523 sem restrição hídrica (-0,55 MPa). Decorridos os respectivos tempos, avaliou-se a percentagem de sementes com protrusão radicular e, posteriormente, o teor de água, a germinação e os padrões enzimáticos das sementes. Na segunda etapa do estudo, avaliou-se o crescimento de quatro isolados de Cff (Cff DF - Feij-2936, Cff PR - 12768, Cff SC - Feij-2928 e Cff SP - Feij-2634) em substrato agarizado com restrição hídrica. Os tratamentos da terceira etapa foram definidos com base na primeira etapa, em que o melhor tratamento foi o meio 523 com manitol no potencial hídrico de -0,95 MPa e com 48 horas de exposição das sementes no meio agarizado. Na segunda etapa, verificou-se que o isolado de Cff SC (Feij-2928), proveniente do estado de Santa Catarina, apresentou o melhor crescimento no substrato e no potencial hídrico definido na primeira etapa. Portanto, foi possível a inoculação artificial de sementes de feijão com Cff por meio da técnica de condicionamento fisiológico em substrato agarizado, sem o comprometimento de sua qualidade fisiológica.

This study used the physiological conditioning technique in an agar-based medium for Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff) to inoculate dry beans. The seed performance of the Pérola dry bean variety was evaluated after submitting it to physiological conditioning in a water restricted agar-based medium. The treatments consisted of exposing dry bean seeds to the bacteria for different time periods at four levels of water restriction in 523 medium (-0.55, -0.75, -0.95 and -1.15 MPa), and four substrates (523 medium, 523 medium+KCl, 523 medium+mannitol and 523 medium+sucrose) with an additional control treatment of 523 medium without any osmotic restriction (-0,55 MPa). After each time period, the number of germinated seeds in the medium was evaluated and the water content, germination and seed enzymatic patterns were assessed. In a second study, growth was assessed for four Cff strains (Cff DF - Feij-2936, Cff PR - 12768, Cff SC - Feij-2928 e Cff SP - Feij-2634) in different water restriction 523 media. The treatments in the third phase were defined on the basis of the results of the first stage, where the best combination was mannitol-amended 523 medium set for -0,95 MPa water potential and 48 hours exposure to the pathogen. In the second phase, the Cff SC (Feij-2928) strain from Santa Catarina state showed the best growth in an agar-based medium and water potential as defined in the first phase. Thus, Cff artificial inoculation in bean seeds was done by using the physiological conditioning technique in an agar-based medium without the occurrence of any detectable changes in the seed physiological quality patterns.

Neste trabalho, objetivou-se estudar o efeito do período de armazenamento no teor de lipídios de juvenis do segundo estádio (J2) de M. incognita com endósporos de P. penetrans na infectividade e reprodução em tomateiro. Suspensões de M. incognita contendo ou não endósporos de P. penetrans aderidos à cutícula foram armazenadas por 0, 3, 6, 9 e 12 dias, a 28ºC. Após cada período de estocagem, determinou-se a concentração de lipídios neutros corporais por meio da análise de imagem dos J2 coloridos com o corante "Oil Red O". Em seguida, 1.000 J2 foram inoculados em mudas de tomateiros. Após 28 dias, avaliou-se o número de fêmeas parasitadas, número de endósporos/fêmea, número de galhas, massas de ovos e de ovos/g de raiz. O teor de lipídio dos J2 reduziu-se com o aumento do período de estocagem. Porém, maiores perdas ocorreram nos J2 sem endósporos de P. penetrans. A proporção entre as perdas dos J2 com e sem P. penetrans foi pequena e decrescente com o período de estocagem. Entretanto, a desproporção foi grande entre 3 e 6 dias de armazenamento dos J2 com e sem P. penetrans com relação aos parâmetros reprodução e número de galhas, indicando consumo de fontes alternativas ao lipí dio neutro de energia p elo J2 parasitado. Mas o período de armazenamento sempre reduziu a reprodução e número de galhas formadas em tomateiros por J2 com e sem P. penetrans. A perda dessas fontes de energia, ao que tudo indica, leva muitos J2 a morrer antes de chegar ao estádio adulto, pois o número de fêmeas parasitadas reduz-se com o armazenamento, além de propiciar menor produção de endósporos por fêmea. O J2 parasitado por P. penetrans necessita encontrar rapidamente a raiz e não permanecer no solo por mais de 6 dias antes de parasitar a planta.

This work aimed to study the effect of storage period on lipid content of second stage juveniles (J2) of M. incognita with endospores of P. penetrans on infectivity and reproduction in tomato. Suspensions of M. incognita containing or not endospores of P. penetrans adhered to cuticle were stored by 0, 3, 6, 9 and 12 days at 28ºC. After each storage period, the concentration of neutral lipids in the body of J2 was determined by image analysis of J2 stained with "Oil Red O". After that, 1.000 J2 were inoculated in tomato seedlings. After 28 days, the number of infected females, number of endospores per females, number of galls, number of egg masses and number of eggs per gram of root were evaluated. The lipid content of J2 reduced with the increase of storage period. However, greater lost occurred on J2 without endospores of P. penetrans. The ratio between J2 lipid losses with and without P. penetrans was small and decreased with storage period. However, the ratio between J2 with and without P. penetrans was greatest between 3 and 6 days of storage in relation to parameters reproduction and number of galls, indicating consumption of alternative energy sources others than neutral lipids by infected J2. But the storage period always reduced the reproduction and number of galls formed in tomatoes by J2 with and without P. penetrans. The loss of those energy sources indicate that many J2 dye before adult stage, because the number of parasitized females reduced with storage, besides of smaller endospores production per female. The J2 infested by P. penetrans needs to find the root quickly and should not stay in the soil for more than 6 days before parasitizing the plant.

Para avaliar o potencial de 53 isolados de bactérias endofíticas no controle da pinta bacteriana do tomateiro (Lycopersicum esculentum Mill.), realizaram-se seleções massais em casa-de-vegetação e a seguir foi avaliado, in vitro, o antagonismo desses isolados sobre a bactéria desafiante Pseudomonas syringae pv. tomato (Pst). A inoculação das bactérias endofíticas foi feita por microbiolização das sementes de tomate cv. Santa Clara e da desafiante (Pst) por pulverização. Aos 7, 14 e 21 dias após a inoculação da Pst, foram realizadas as avaliações da severidade da pinta bacteriana, bem como da altura das plantas. As espécies e os isolados bacterianos mais eficazes na redução da severidade da pinta bacteriana foram: Acinetobacter johnsonii (isolado 10), Bacillus pumilus (isolados 3, 12, 20, 39, 51), Paenibacillus macerans (isolados 37 e 47), PIM 11, Bacillus sphaericus (isolado 45), B. amyloliquefaciens (isolado 50), TOM 2, TOM 24 e Staphylococcus aureus (isolado 18). Mais de 50% dos isolados eficazes na redução da severidade foram da espécie Bacillus pumilus. Das espécies endofíticas mais eficazes na redução da severidade da pinta bacteriana, Bacillus pumilus e B. amyloliquefaciens inibiram também o crescimento da Pst in vitro.Vários dos isolados promoveram também o crescimento das plantas.

To asses the potential of fifty three isolates of endophytic bacteria on the control of Pseudomonas syringae pv. tomato (Pst) in tomato (Lycopersicum esculentum Mill.), several screening were done in greenhouse followed by in vitro studies on antagonism of those isolates to Pst. The inoculation of endophytic bacteria was done by microbiolization of tomato cv Santa Clara seeds. The challenging bacterium (Pst) inoculation was done by spraying. At 7, 14 and 21 days after Pst inoculation the assessment of bacterial speck severity was done, and height of plants was also measured. The most efficient endophytic species and isolates in reducing disease severity were: Acinetobacter johnsonii (isolate 10), Bacillus pumilus (isolates, 3, 12, 20, 39, 51), Paenibacillus macerans (isolates, 37, 47), PIM 11, Bacillus sphaericus (isolate 45), B. amyloliquefaciens (isolate 50), TOM 2 , TOM 24 and Staphylococcus aureus (isolate 18). More than 50% of the endophytic isolates efficient in reducing disease severity belonged to Bacillus pumilus. From the most efficient endophytic species group, the species Bacillus pumilus and B. amyloliquefaciens inhibited the Pst growth in vitro. Several bacterial isolates promoted growth of tomato.

Bactérias endofíticas promotoras de crescimento podem aumentar a eficiência nutricional das plantas, favorecendo sua produção. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência de 10 isolados de bactérias endofíticas, previamente selecionados como agentes promotores do crescimento de plantas, sobre a eficiência de absorção, utilização e translocação de nutrientes em plantas de tomateiros em casa de vegetação. Para a introdução das bactérias endofíticas em plântulas de tomateiro cv. Santa Clara, utilizou-se o corte do hipocótilo. Cinqüenta e cinco dias após o transplantio das seções de parte área, as plantas foram coletadas para a determinação da matéria seca da parte aérea e dos teores de macro e micronutrientes. Os teores de N, P, K, Ca, Mg, Cu e Zn na parte aérea e os de N, P, Mg e Mn nas raízes das plantas inoculadas diferiram da testemunha sem inoculação. As bactérias endofíticas Micrococcus sp. (UFLA 11-LS) e Brevundimonas sp. (UFV-E49), identificadas por meio do seqüenciamento do gene 16S do DNA ribossômico, propiciaram a maior eficiência de absorção de P em relação à testemunha. A bactéria endofítica Micrococcus sp. apresentou maior eficiência na utilização de N, P, K, Ca, Mg, S, Cu, Fe e Zn. Os maiores teores de N, P, K, Mg e Zn foram encontrados na parte aérea das plantas inoculadas com Brevundimonas sp. Os resultados deste trabalho indicam que estes isolados de bactérias endofíticas podem aumentar a eficiência nutricional de plantas de tomate.

Plant growth-promoting endophytic bacteria can increase plant nutritional efficiency thus favouring its yield. With the purpose of evaluating the influence of 10 previously selected isolates of growth-promoting endophytic bacteria on the uptake, utilization and transport of nutrients by tomato plants, greenhouse experiments were installed. The hypocotyl was cut in order to apply the endophytic bacteria to tomato seedlings cultivar Santa Clara. Fifty five days after transplanting the upper portion of the cut seedlings, the plants were collected to determine the dry matter of the aerial parts and concentration of macro and micro nutrients. The concentration of N, P, K, Ca, Mg, Cu and Zn in the shoot and N, P, Mg and Mn in roots of inoculated plants differed from non-inoculated controls. Endophytic bacteria Micrococcus sp. (UFLA 11-LS) and Brevundimonas sp. (UFV-E49) were identified by sequencing of the 16S ribosomal DNA. The P uptake in plants inoculated with these isolates was higher than in the non-inoculated controls. Plants treated with the first isolate were more efficient in the use of N, P, K, Ca, Mg, S, Cu, Fe, and Zn. The highest concentration of N, P, K, Mg, and Zn were found in the shoot of plants inoculated with Brevundimonas sp. The results of this study indicate that these endophytic bacteria isolates may be employed to increase the nutritional efficiency of tomato plants.

A partir de 150 isolados de bactérias endofíticas obtidos de folhas, caules e raízes de tomateiros sadios, 53 destacaram-se quanto à habilidade em promover o crescimento de plantas de tomateiro (Solanum lycopersicum L.). Submetidos a uma nova seleção, os isolados UFV-E17, UFV-E22, UFV-E25, UFV-E26, UFV-E27, Bacillus cereus (UFV-E29), UFV-E49, UFLA 06-LS, UFLA 08-LS e UFLA 11-LS apresentaram maior promoção do crescimento. Avaliações semanais de altura e número de folhas e folíolos das plantas aconteceram durante 45 dias. Após a sexta avaliação, mensurou-se a área foliar e o peso da matéria fresca e seca da parte aérea e da raiz das plantas. O isolado UFV-E49 apresentou melhor resultado para altura, área foliar, número de folhas e peso da matéria fresca e seca, tanto da parte aérea quanto da raiz. Dos isolados selecionados, somente dois apresentaram efeito inibitório direto in vitro a Ralstonia solanacearum.

Out of one hundred and fifty isolates of endophytic bacteria from leaves, stems and roots of healthy tomatoes (Solanum lycopersicum L.), fifty three showed ability to promote tomato plant growth, among these, ten isolates UFV-E17, UFV-E22, UFV-E25, UFV-E26, UFV-E27, Bacillus cereus (UFV-E29), UFV-E49, UFLA 06-LS, UFLA 08-LS and UFLA 11-LS, provided the largest plant growth promotion. Weekly assessment of plant height and number of leaves and leaflets were carried out during 45 days. After the sixth evaluation, the leaf area and the fresh and dry weight of the aerial part of plants and of the roots were measured. Isolate UFV-E49 provided the largest values of height, leaf area, number of leaves and fresh and dry weight of the aerial part of plants as well as the root. From the selected isolates, only two presented antimicrobial activity against Ralstonia solanacearum.

Avaliou-se o potencial de rizobactérias na indução de resistência do algodoeiro à Xanthomonas axonopodis pv. malvacearum. Após o isolamento das rizobactérias, foram selecionados os isolados capazes de reduzir os sintomas da mancha angular bacteriana em casa de vegetação, os quais foram aplicados espacialmente separados do patógeno desafiador. Os melhores isolados foram testados quanto à capacidade de reduzir os sintomas da ramulose e da murcha de Verticillium e de inibir diretamente os patógenos in vitro. Do total de 123 isolados de rizobactérias foram selecionados cinco, L2-1 (Bacillus cereus), MT5-6 (Bacillus cereus), L2-2 (Achromobacter xylosoxidans), MT5-5 (Bacillus cereus) e MT5-11 (Brevibacterium sp.), os quais apresentaram controle da mancha angular acima de 40%, em relação à testemunha. Nenhum isolado reduziu a severidade da ramulose e da murcha de Verticillium em relação à testemunha, nem apresentou efeito inibitório direto in vitro a X. axonopodis pv. malvacearum e Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides. Para V. dahliae, apenas o isolado L2-1 apresentou efeito inibitório.

The potential of rhizobacteria was evaluated for resistance induction against Xanthomonas axonopodis pv. malvacearum. After isolation, the rhizobacteria were screened for the reduction of angular leaf spot severity under greenhouse conditions. They were spatially separated from the challenging pathogen. The best isolates were tested for the capacity to reduce ramulose and Verticillium wilt severity and directly inhibit pathogens in vitro. From a total of 123 rhizobacterial isolates, five were selected, L2-1 (Bacillus cereus), MT5-6 (Bacillus cereus), L2-2 (Achromobacter xylosoxidans), MT5-5 (Bacillus cereus) and MT5-11 (Brevibacterium sp.), which showed angular leaf spot control above 40% as compared to the control. The tested isolates neither reduced the severity of ramulose and verticillium wilt compared to the control nor showed in vitro direct inhibition to X. axonopodis pv. malvacearum and Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides. For V. dahliae, only isolate L2-1 showed direct inhibition.

A mancha manteigosa tem afetado um grande número de plantas de cafeeiro em condições de campo. Sua causa tem sido atribuída a Colletotrichum gloeosporioides, entretanto a sintomatologia da doença na folha não tem sido reproduzida. Neste estudo, relata-se pela primeira vez a associação de Xylella fastidiosa, agente da atrofia dos ramos de cafeeiro, com pecíolo de folhas e hipocótilos obtidos a partir de sementes de plantas com sintomas da mancha manteigosa, através de estudos ultra-estruturais em Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV), bem como por PCR (Polymerase Chain Reaction). Para o estudo foram realizados três ensaios. No primeiro, coletaram-se folhas com sintomas de mancha manteigosa e assintomáticas em duas localidades as quais foram preparadas para MEV. No segundo, pecíolos de 40 plantas sintomáticas e 40 assintomáticas foram coletados no campo experimental de café da UFLA. Os Pecíolos das folhas foram cortados e macerados para extração do DNA e analisados por PCR. Quatro pecíolos de cada uma destas amostras (plantas com e sem sintomas) também foram preparados para MEV. Em um terceiro ensaio, sementes obtidas de plantas com sintomas de mancha manteigosa, foram semeadas em bandejas de isopor contendo substrato Plantmax®. As bandejas permaneceram em câmara de crescimento e aos 30, 60 e 90 dias, após a semeadura, foram coletados hipocótilos para preparação e observação em MEV. Inicialmente uma bactéria semelhante à Xylella foi encontrada nos vasos do xilema de plantas sintomáticas das duas localidades estudadas. Pela análise por PCR constatou-se X. fastidiosa em 34% das plantas com sintoma da doença e 9,3% nas sem o sintoma da mancha manteigosa. Pecíolos de plantas Xylella positivas por PCR apresentaram obstrução dos vasos do xilema pelas bactérias. Das quatro plantas negativas por PCR, apenas uma teve o pecíolo com vasos obstruídos pela bactéria quando analisados em MEV. Em hipocótilos analisados em MEV verificaram-se células bacterianas semelhantes à X. fastidiosa nos vasos do xilema aos 60 e 90 dias após semeadura. Esse é o primeiro relato da associação de X. fastidiosa a pecíolos e hipocótilos de cafeeiros expressando sintomas de mancha manteigosa.

Buttery spot has greatly affected coffee plants in field conditions. Its cause has been attributed to Colletotrichum gloeosporioides. However, its symptoms in leaves have not been reproduced. In this study we reported for the first time the presence of X. fastidiosa, causal agent of the coffee atrophy in petiole and hypocotyls from coffee plants with buttery spot through PCR and ultrastructural studies by scanning electron microscopy (SEM). In this study three trials were developed. In the first we collected leaves from plant with and without buttery spot symptoms in two places which were prepared for SEM. In the second petioles of 40 symptomatic and 40 asymptomatic leaves were collected in a coffee experimental field of Federal University of Lavras. Petiole from these leaves were cut and macerated for DNA extraction and analyzed by PCR. Four petioles of each sample (plants with and without symptoms) were prepared for SEM. In a third trial, seeds from plants with battery spot were sowed in foam trays with Plantimax® substrate. The trays stayed in a growth chamber and after 30, 60 and 90 days of the germination hypocotyls were collected for preparation and observation in SEM. Initially a bacterium similar to X. fastidiosa was found in vessels of symptomatic plants studied. Through the analysis by PCR we verified X. fastidiosa in 34% of plants with the disease symptoms and 9,3% in those without symptom of buttery spot. Petioles of positives Xylella plants by PCR presented obstruction of vessels of xylem by bacteria. Out of four PCR-negatives plants, one had petioles with vessels clogged by bacteria when analyzed by SEM. In analyzed hypocotyls with SEM were observed bacterial cells like X. fastidiosa in xylem vessels at 60 and 90 days. This is the first report of the colonization of X. fastidiosa in coffee plant petiole and hypocotyls of seeds of plants expressed buttery spot symptoms.

Juvenis do segundo estádio (J2) de Meloidogyne incognita foram incubados nos exsudatos radiculares de soja (Glycine max), tomateiro (Lycopersicon esculentum), cafeeiro (Coffea arabica), feijoeiro (Phaseolus vulgaris), mostarda (Brassica rapa), Crotalaria juncea e C. spectabilis e em água por 12 h. Em seguida, realizou-se o teste de adesão por centrifugação ou por borbulhamento. Em outro ensaio, endósporos de Pasteuria penetrans foram incubados por quatro dias a 26 ºC nos exsudatos e submetidos à adesão em J2 de M. incognita, sob borbulhamento constante por 24 h em tubos contendo água. Os J2 com endósporos aderidos pelo teste de borbulhamento foram inoculados em mudas de tomateiro. Verificou-se que a incubação dos J2 por 12 h nos exsudatos radiculares testados reduziu o número de endósporos de P. penetrans por J2 independentemente do método de adesão empregado. Os J2 incubados nos exsudatos radiculares testados proporcionaram menor número de fêmeas parasitadas em tomateiro em relação à testemunha (água), bem como menor número de galhas com exceção dos J2 incubados em exsudato do próprio tomateiro. A reprodução dos J2 incubados nos exsudatos radiculares não foi afetada quando comparada à testemunha. A incubação dos endósporos nos exsudatos das plantas testadas reduziu a adesão e a infetividade em J2, em relação à testemunha. Após 28 dias da inoculação, observou-se redução no número de fêmeas parasitadas resultantes da infecção desses J2 com endósporos incubados em exsudatos radiculares comparada com aqueles incubados em água. O parasitismo do J2 com endósporos tratados com exsudatos radiculares e a reprodutividade de fêmeas oriundas da infetividade desses J2 foram semelhantes aos incubados em água.

In one assay, second stage juveniles (J2) of Meloidogyne incognita were incubated in root exudates of soybean (Glycine max), tomato (Lycopersicon esculentum), coffee (Coffea arabica), bean (Phaseolus vulgaris), mustard (Brassica rapa), Crotalaria juncea and C. spectabilis and in water for 12 h, followed by endospores adhesion by centrifugation or by air bubbling. In another assay, endospores of Pasterius penetrans were incubated for four days at 26 ºC in the exudates and submitted to adhesion on J2 of M. incognita by constant air bubbling for 24 h in tubes containing water. The J2 with endospore adhesion by air bubbling were inoculated in tomato seedlings. The incubation of J2 for 12 h in the root exudates reduced the number of P. penetrans endospore per J2, regardless of the adhesion test used, and resulted in fewer parasitized females when compared with the control, as well as a lower number of galls, except in the J2 incubated in exudate of tomato. The reproduction of incubated J2 in the root exudates was not affected when compared to the control. The endospore incubation in the exudates of the tested plants reduced the adhesion and the infectivity of these endospores to J2 in relation to the control. After 28 days from inoculation, reduction was observed in the number of parasitized females resulting from infection of those J2 with endospore incubated in exudates when compared with those incubated in water. The parasitism of J2 with endospore treated with exudates and the reproduction of infected J2 females were similar to those incubated in water.

Situada no sul de Minas Gerais, principal região cafeeira do país, a Clínica Fitossanitária da Universidade Federal de Lavras tem auxiliado os produtores, dando suporte na diagnose de doenças de origem biótica e abiótica, de modo a gerar subsídios para minimizar as perdas na produção. Nos últimos doze anos, foram analisadas 378 amostras de café. Em 78,6% das amostras, foram detectados fungos, destacando-se Colletotrichum sp. (29%), Rhizoctonia solani (18%), Cercospora coffeicola (13%), Phoma sp. (13%) e Fusarium sp (11%). Ocorreram ainda em números representativos casos de fitotoxidez, deficiência de nutrientes e problemas no sistema radicular. Devido à localização da Clínica, a maior parte das amostras foi proveniente de localidades na região sul do Estado (63%), seguido do Triângulo Mineiro (12%) e Zona da Mata (10%).

The Phytossanitary Clinic of the Federal University of Lavras, situated in the south of the State of Minas Gerais has given support to coffee producers providing diagnoses of biotic and abiotic diseases, to generate subsidies to minimize losses in production of this crop. During the last twelve years, 378 samples have been analyzed. Fungi were detected in 78,6% of the samples. The major fungi found were Colletotrichum sp. (29%), Rhizoctonia solani (18%), Cercospora coffeicola (13%), Phoma sp. (13%), e Fusarium sp (11%). Other incidences were caused by phytotoxity, mineral deficiency and bad formation of the roots. Due to the location of the Phytossanitary Clinic, most of the samples came from locations of South of Minas Gerais (63%), followed by Triângulo Mineiro (12%) and Zona da Mata (10%).