ABSTRACT This study aimed to describe the epidemiological indexes of mastitis, milk quality and udder hygiene in the Compost Barn system, as well as to search for associations between isolated pathogens from milk with compost characteristics. Three dairy herds participated in the study, and the samples were collected during different periods on each farm. Individual milk samples were collected in duplicate for SCC analysis and microbiological culture. Environmental pathogens caused most cases of clinical mastitis on farm 2, and contagious pathogens caused the most cases on farm 1. Bed moisture was not associated with the incidence of environmental pathogens. Most of the animals remained in good udder hygiene during the study. Poor udder hygiene contributed to the increased incidence of environmental pathogens in one of the farms. A higher number of animals with a hygiene score of ≥ 2 were observed during the warmer and rainfall periods. There was no association between hygiene scores and somatic cell counts. The results suggest that pathogens isolated from milk in animals confined in Compost Barn under tropical climate are like other confinement systems adopted elsewhere. The year period influenced the udder hygiene score, reinforcing the importance of bed management throughout the year.

RESUMO O objetivo deste estudo foi descrever os índices epidemiológicos da mastite, da qualidade do leite e da higiene do úbere em animais confinados no sistema Compost Barn, bem como buscar associações entre patógenos isolados do leite e características do composto. Três rebanhos leiteiros participaram do estudo e as amostras foram coletadas em diferentes períodos em cada fazenda. Amostras individuais de leite foram coletadas em duplicata para análise de CCS e cultura microbiológica. Patógenos ambientais causaram a maioria dos casos de mastite clínica na fazenda 2, e na fazenda 1 a maioria dos casos foi em decorrência de patógenos contagiosos. Amostras de material da cama foram coletadas em duas fazendas para análise da densidade bacteriana e da umidade. A umidade da cama permaneceu dentro da faixa de controle durante o estudo e não foi associada à incidência de patógenos ambientais. A maioria dos animais permaneceu com boa higiene de úbere durante o estudo. A falta de higiene do úbere contribuiu para o aumento da incidência de patógenos ambientais em uma das fazendas. Durante o período mais quente e mais chuvoso, um número maior de animais com escore de sujidade ≥ 2 foi observado em todos os rebanhos. Não houve associação entre escore de sujidade e contagem de células somáticas em qualquer uma das três fazendas. Os resultados indicam que o perfil de patógenos isolados do leite em animais confinados em Compost Barn sob clima tropical é semelhante a outros sistemas de confinamento adotados em outros lugares. O período do ano influenciou o escore de higiene do úbere, o que reforça a importância do manejo da cama ao longo do ano.

RESUMO Mycoplasma bovis é um agente altamente contagioso relacionado a várias patologias em bovinos. A detecção de anticorpos reativos a M. bovis por Ensaio de Imunoadsorção Enzimática Indireto (iELISA) identifica se houve exposição ao microrganismo. O presente estudo teve como objetivo otimizar um iELISA de antígeno celular total de M. bovis, aplicando-o a amostras de soro bovino, bem como avaliar fatores de risco. Amostras de soro foram obtidas de 400 vacas de 17 rebanhos da Região Sudeste do Brasil. Na otimização do iELISA foram obtidos: 2μg/mL de antígeno, diluição dos soros 1:300 e do conjugado 1:15000. A frequência de animais reativos foi de 62,3% (249/400) e de 100% (17/17) para os rebanhos. Os fatores de risco foram: rebanhos com mais de 100 animais (OR= 3,1; IC= 95%); raça Holandesa (OR= 72,5;IC= 95%); vacas (OR= 29,7;IC= 95%); sistema intensivo (OR= 3,3; C= 95%); produção de pequenos ruminantes (OR= 4,4;IC=95%); produção de leite acima de 500L (OR= 2,9;IC= 95%); sem quarentena (OR= 1,5;IC= 95%); ordenha mecânica (OR= 5,5;IC= 95%) e casos de mastite (OR= 5,5;IC= 95%). O iELISA proposto foi capaz de detectar anticorpos reativos a M. bovis no soro bovino. O conhecimento desses fatores de risco pode auxiliar na implementação de medidas profiláticas.

ABSTRACT Mycoplasma bovis is a highly contagious agent associated with several pathologies in cattle. The detection of reactive antibodies to M. bovis by Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (iELISA) identifies if there was an exposure to the microorganism. The current study aimed to optimize an iELISA from M. bovis total cell antigen, applying it to bovine serum samples, and to evaluate risk factors. Serum samples were obtained from 400 cows from 17 herds from Southeast Brazil. In the optimization of iELISA, the following was established: 2 μg/mL of antigen, sera dilution 1:300, and conjugate dilution 1:15000. The frequency was 62.3% (249/400) of reactive animals and 100% (17/17) of reactive herds. Risk factors were: herds with more than 100 animals (OR= 3.1; CI= 95%); Holstein breed (OR= 72.5; CI= 95%); cows (OR= 29.7; CI= 95%); intensive breeding system (OR= 3.3; CI= 95%); associated small ruminant production (OR= 4.4; CI= 95%); milk production above 500L (OR= 2.9; CI= 95%); no quarantine (OR= 1.5; CI= 95%); mechanical milking (OR= 5.5; CI= 95%) and cases of mastitis (OR= 5.5; CI= 95%). The proposed iELISA was able to detect antibodies reactive to M. bovis in bovine serum. Knowledge of these risk factors can assist in the implementation of prophylactic measures.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a variação do perfil proteico e do cálcio solúvel na coagulação do leite pelo etanol nas temperaturas de 4ºC, 10ºC, 15ºC e 20ºC. Amostras de leite de 61 animais foram avaliadas quanto à estabilidade ao etanol nas concentrações de 66 a 92% (v/v) nas temperaturas de 4ºC, 10ºC, 15ºC e 20ºC. Três amostras, após 24 horas de armazenamento a 4ºC, foram ultracentrifugadas em quadruplicata (40.000 x g) a 4ºC e a 20ºC, respectivamente, por 60 minutos. Em seguida, o sobrenadante foi retirado e submetido à análise do cálcio solúvel pela técnica via úmida (digestão nitroperclórica) e leitura em espectrofotômetro de absorção atômica. O perfil proteico foi analisado pela técnica de eletroforese capilar empregando kit específico para determinação proteica. Os resultados mostraram uma correlação positiva entre o aumento da temperatura das amostras e a estabilidade do leite frente às diferentes concentrações de etanol. A porcentagem de cálcio solúvel no sobrenadante após ultracentrifugação foi maior nas amostras tratadas a 4ºC (P<0,05). As amostras ultracentrifugadas na temperatura de 4ºC apresentaram quantidades superiores de β-caseína no sobrenadante em comparação com as amostras tratadas a 20ºC. O abaixamento da temperatura favoreceu a migração da β-caseína e do cálcio coloidal para a fase solúvel do leite, o que possivelmente favoreceu o aumento da instabilidade das amostras no teste do etanol. Os resultados sugerem que a temperatura ideal para a realização de teste de estabilidade do leite frente ao etanol deveria ser de 21ºC.

The aim of this study was to evaluate the variation in protein profile and soluble calcium in milk coagulation by ethanol at 4ºC, 10ºC, 15ºC and 20ºC. Milk samples from 61 dairy cows were evaluated for stability of ethanol concentrations from 66 to 92% (v/v) at temperatures of 4°C, 10°C, 15°C and 20°C. Three samples were ultracentrifuged (40,000 x g) after 24 hours of storage at 4°C and 20°C, respectively, for 60 minutes. Their supernatants were removed and subjected to analyses of soluble calcium through nitro-perchloric digestion and atomic absorption spectrophotometry. The protein profiles were determined by capillary electrophoresis using a specific kit for protein determination. The results showed a positive correlation between the increase in temperature of the samples and the stability of milk against various concentrations of ethanol. The percentage of soluble calcium in the supernatant after centrifugation was higher in samples treated at 4°C (P<0.05). The samples ultracentrifuged at 4°C showed higher amounts of β-casein in the supernatant compared with samples stored at 20°C. The lowering of the temperature favored the migration of β-casein and colloidal calcium to the soluble phase of milk, which may also have favored the instability of milk in the ethanol test. According to the results, the milk sample temperature for the ethanol stability test should be 21ºC.

Avaliou-se o efeito de patógenos da mastite sobre a contagem de células somáticas (CCS) em leite. Foram coletadas 3.987 amostras de leite de 2.657 animais oriundos de 24 rebanhos leiteiros localizados nos estados do Rio de Janeiro e Minas Gerais. As amostras de leite foram usadas para CCS e identificação de patógenos da mastite. Estatísticas descritivas, teste T para amostras independentes e modelo linear generalizado foram usados para análise dos dados. O modelo linear generalizado identificou os efeitos de rebanho, animal dentro de rebanho, ordem de parto, estação do ano e infecção intramamária causada por Streptococcus agalactiae e Streptococcus spp. que não S. agalactiae como significativos na variação da CCS. O efeito de animal dentro de rebanho foi maior que o efeito de rebanho. S. agalactiae foi o patógeno responsável pelo maior aumento da CCS em vacas e apresentou em média 1.520.000 células/mL. Foi observado efeito específico dos patógenos na variação da CCS.

The influence of mastitis pathogens on variation of milk somatic cell count (SCC) was evaluated. Three thousand nine hundred eighty-seven milk samples were colected from 2,657 dairy cows in 24 herds located in the states of Minas Gerais and Rio de Janeiro. The milk samples were used to SCC and identification of mastitis pathogens. Descriptive statistics, T test for independent samples, and generalized linear model were used to data analysis. The generalized linear model identified the effects of herd, animal within herd, parity, year season, intramammary infection, and infection caused by Streptococcus agalactiae and Streptococcus spp. except S. agalactiae as significant on SCC variation. The effect of animal within herd was higher than the effect of herd. S. agalactiae was the pathogen responsible for higher SCC increasing and presented the average of 1,520,000 cells/mL. The specific effect on SCC variation was observed in the study.

Os fatores de risco para mastite subclínica (CCS > 200.000 células/ml) foram estudados em 2.657 vacas, de 24 rebanhos de Minas Gerais. Cada rebanho foi visitado três vezes entre novembro de 2005 e junho de 2006. Amostras de leite (n=3.987) de vacas em lactação foram examinadas para contagem de células somáticas (CCS), e um questionário foi aplicado para obtenção de dados dos animais e do manejo do rebanho. Os valores para a média, mediana e desvio-padrão da CCS foram 608.000, 219.000 e 967.000 células/ml, respectivamente. Os fatores de risco para mastite subclínica foram: animais com a base do úbere junto ou abaixo do jarrete, rachaduras ou fissuras nas partes de borracha do equipamento de ordenha, inadequação das teteiras, deficiência de limpeza dos pulsadores, falta de treinamento dos ordenhadores, não-utilização de diagnóstico microbiológico para mastite, imersão do conjunto de teteiras em solução desinfetante entre a ordenha de animais distintos, e inserção total da cânula de antibiótico nos tetos na secagem da vaca. A alta variação da CCS (608.000± 967.000 células/ml) sugere que outros fatores, como o número de quartos mamários infectados e os patógenos envolvidos, podem ter influenciado os resultados. A metodologia utilizada não permitiu identificar todos os fatores que poderiam aumentar a CCS. Contudo, os resultados são úteis para aprimorar os programas de controle da mastite.

This study was carried out to identify risk factors for subclinical mastitis (SCC > 200,000 cells/ml). A total of 2,657 lactating cows from 24 herds in the State of Minas Gerais, Brazil, were included in the study. Each farm was visited three times in an 8-month period from November 2005 to June 2006. At each visit, all milking cows were examined for clinical mastitis by a single observer. A total of 3,987 milk samples were examined for somatic cell counts (SCC). The mean, median, and standard deviation values for SCC were, respectively, 608,000, 219,000, and 967,000 cells/ml. Risk factors for subclinical mastitis were: udder positioned at the same height or below the hock, presence of cracks or fissures in the rubber parts of the milking machine, inadequacy of teat cups, infrequent and unsuitable scheme for cleaning the pulsators, milkers unable to operate the milking equipments, no information about the mastitis pathogens present in the herd, immersion of teat cups in disinfectant solution between milkings, and total insertion of cannula in teats during antibiotic treatment. The high variation of the SCC values (608,000± 967,000 cells/ml) suggests that other factors such as number of infected mammary quarters and pathogens involved could have influenced the results. The used methodology did not allow to identify all risk factors that increase SCC. Therefore, the results can also be used to improve the currently mastitis control programs adopted by those herds.

Avaliaram-se a qualidade microbiológica do leite obtido mecanicamente e refrigerado durante 48 horas, em 24 rebanhos, e a associação entre a contaminação microbiana e os procedimentos de higienização dos equipamentos de ordenha e armazenamento do leite. Os procedimentos de higiene foram avaliados in loco com auxilio de questionários. Foram realizadas a contagem padrão em placas, a contagem de coliformes totais e a pesquisa de Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae. No leite de 14 rebanhos, foram pesquisadas Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. As médias geométricas da contagem padrão foram <1,0×10(6) UFC/ml em 20 rebanhos, e <7,5×10(5) UFC/ml em 19. Onze rebanhos apresentaram contagem média de <1,0×10(5) UFC/ml. Contagens médias de coliformes >10³ UFC/ml foram verificadas em sete rebanhos. S. aureus e S. agalactiae foram isolados em 22 e 12 dos 24 rebanhos, respectivamente, e não foram encontradas Salmonella spp. e L. monocytogenes. O uso de detergentes alcalino e ácido, mais o de sanitizante foi associado (P<0,05) à contagem padrão <1,0×10(5), e o emprego de apenas um ou de nenhum produto foi associado a contagens >5×10(5) UFC/ml.

The effect of bulk tank and milking machine cleaning procedures (determined from a questionnaire) on bacterial contamination of 48-hour refrigerated milk was examined in 24 herds. Milk samples were analyzed for standard plate count (SPC) and for total coliform, Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae contamination. Milk samples from 14 herds were cultured for Salmonella and Listeria monocytogenes. Geometrical means of SPC were <1.0×10(6) UFC/ml in 20 herds, <7.5×10(5) UFC/ml in 19 herds and <1.0×10(5) UFC/ml in 11 herds. Geometrical means >10³ UFC/ml of total coliforms were observed in seven herds. S. aureus and S. agalactiae were found in 22 and 12 herds, respectively. Salmonella and L. monocytogenes were not found in any of the samples. The use of alkaline and acid detergents plus sanitizing was associated (P<0.05) with SPC <1.0×10(5), and the use of either alkoline or acid detergent or sanitizing or no chemical product was associated with SPC >5.0×10(5) UFC/ml.

Avaliou-se o efeito da temperatura e do tempo de armazenamento sobre a contagem de células somáticas(CCS). Amostras de leite de 21 vacas, coletadas e armazenadas às temperaturas de 5, 27, 32 e 36ºC e analisadas no 1º, 3º, 5º e 7º dia após coleta, foram classificadas em três grupos (células/ml): baixa (236.000±164.000), média (624.000±356.000) e alta CCS (1.320.000±945.000). O delineamento experimental foi o de parcelas subdivididas. As médias da CCS foram iguais (P>0,05) para amostras mantidas à temperatura de 5ºC e analisadas entre o primeiro e o sétimo dias após a coleta e para aquelas mantidas às temperaturas 5, 27, 32 e 36ºC e analisadas no primeiro dia. Médias diferentes (P<0,05) da CCS foram observadas para amostras mantidas a 27, 32 e 36°C a partir do 5°, 5° e 3° dias, respectivamente. Foram observados decréscimos de 57,6%, 58,5% e 27,9% nos valores iniciais da CCS nas amostras classificadas como baixa, média e alta, respectivamente. Os resultados mostram a necessidade de se encaminhar as amostras de leite para CCS sob refrigeração e de ser feita análise até sete dias após a coleta.

Effects of temperature and storage duration on somatic cell counts (SCC) of milk samples were studied in a split plot design with seven replicates. Samples from 21 cows were maintained at 5, 27, 32 or 36ºC (plots) and analyzed after 1, 3, 5 and 7 days of storage (split plots). Based upon an initial analysis, samples were classified into three groups: low (236,000±164,000), medium (624,000±356,000) and high (1,320,000±945,000) SCC/ml. No significant differences in SCC (P>0.05) were observed among storage temperatures for milk samples tested after one day of storage. For milk samples stored at 5°C, SCC averages did not significantly change (P>0.05) until the seventh day after collection. On days 5, 5 and 3, respectively, average SCC decreased for milk samples stored at 27, 32 and 36°C. Reductions of 57.6% (from 236,000 to 100,000), 58.5% (from 624,000 to 259,000) and 27.5% (from 1,320,000 to 952,000) from initial numbers of somatic cells were observed for samples classified as low, medium and high, respectively. Milk samples must be kept under refrigeration until analysis, and SCC must be measured within 7 days of sample collection.

Características do rebanho e práticas de manejo associadas à contagem de células somáticas do leite do tanque (CCSLT) foram estudadas em 175 rebanhos envolvidos em programas de acompanhamento entre junho de 2000 e dezembro de 2001. Os dados foram obtidos por meio de aplicação de questionários. Os rebanhos foram classificados em dois grupos de acordo com a média geométrica de seis CCSLT mensais, consecutivas, tendo como referência o valor de 500.000 células/ml. Os métodos estatísticos utilizados foram a análise exploratória dos dados e os modelos logísticos de regressão. Procedimentos relacionados ao controle e à prevenção de mastite foram adotados por pequeno número de rebanhos. O tipo de ordenha (manual, mecânica canalizada e balde-ao-pé), a idade média dos rebanhos, o local de ordenha e a realização de exames dos primeiros jatos de leite não foram associados à alta CCSLT. Os fatores associados à alta CCSLT foram a não adoção de linha de ordenha, a alimentação durante a ordenha e a ausência de anti-sepsia dos tetos após a ordenha.

Herd features and management practices associated with high bulk milk somatic cell count (BMSCC) were studied in 175 dairy herds enrolled on BMSCC programs. Herds data were obtained from June/2000 to December/2001 by questionnaires application. Herds were classified according to the geometric mean of six consecutive BMSCC records. Exploratory analysis and logistic regression models were the statistical analysis applied. Procedures about mastitis control and prevention were adopted in a few herds. Type of milking (machine or hand milking), herd age, milking place (milking parlour, pen, corral) and strip test practice (first streams of milk) were not associated with high BMSCC. Factors associated with high BMSCC were the following: do not milk clinical mastitic cows at the end of milking, feeding cows at milking and absence of post milking teat disinfection.

A distribuição de anticorpos neutralizantes para o herpesvirus bovino 1 (HVB 1) foi estudada em quatro faixas etárias de bovinos, em 21 rebanhos de leite e de corte. Os resultados da sorologia foram analisados e relacionados com as respostas de questionários aplicados aos responsáveis pelos rebanhos. As taxas de freqüência de anticorpos neutralizantes para o HVB 1 foram comparadas segundo a aptidão e a faixa etária. Fatores como tipo de manejo e idade dos animais influenciaram na distribuição de anticorpos para o HVB 1.

The distribution of neutralizing antibodies to bovine herpesvirus 1 (BHV 1) was studied in 21 beef and dairy cattle herds, in four different age groups. The results were analyzed and related with answers given to a questionnaire proposed to the farmers. The frequency rates of neutralizing antibodies for the BHV 1 were compared according to the dairy or beef herds and age of the animals. The animal husbandry and age influenced the distribution of neutralizing antibodies to this virus.

Chi-square test and correspondence analysis were used to evaluate the relationship between class of milk somatic cells count (0-300,000; 301,000-600,000; and >600,000 cells/ml) and type of milking in data from 87 herds that comprised manual and machine milking. Chi-square test showed no relationship between process of milking and class of milk somatic cells count but the correspondence analysis showed higher relationship between manual milking and class of somatic cells count >600,000 cells/ml in comparison to the other classes of somatic cells count (0-300,000 and 301,000-600,000 cells/ml). The graphic representation of the correspondence analysis (dimension 1) showed similarity of somatic cells count for manual and pipeline milking systems.

Aiming to understanding the goat industry in the State of Rio de Janeiro, from 1998-2000, this study was carried out in 48 goat farms, 72.9% of which with an area of less than eight hectares. Also, 62.5% of the farms had irregular topography, and 69% of them kept Saanen breed in a confined system (93.7%). Animals were housed between 16 to 24 hours/day in suspended wooden stalls, and 83.3% were dairy goats.