RESUMO Objetivo: Relatar dois casos de pneumotórax bilateral espontâneo múltiplo sucessivo em crianças com envolvimento pulmonar maciço por histiocitose de células de Langerhans (HCL), alertando para a possibilidade desse diagnóstico diferencial para o pediatra geral. Ademais, casos publicados que descrevem pacientes pediátricos com manifestações pulmonares de HCL foram revisados na literatura. Descrição do caso: Caso 1: Paciente masculino, três anos, com episódio súbito pneumotórax espontâneo à direita, drenado cirurgicamente. Após dois meses, apresentou dois novos episódios de pneumotórax contralateral. Biópsia linfonodal pulmonar revelou diagnóstico de HCL. Foi submetido a cirurgia torácica assistida por vídeo (VATS) bilateral e minitoracotomia com pleurodese mecânica, além de tratamento quimioterápico, necessitando de internação prolongada. Caso 2: Menino, quatro anos, apresentando dispneia progressiva e sibilância por cinco meses. Biópsia pulmonar revelou HCL. Evoluiu com importante desconforto respiratório e pneumotórax direito, necessitando drenagem. Foi realizada pleurodese com nitrato de prata e diferentes esquemas de quimioterapia. Ambos os pacientes evoluíram bem após tratamentos quimioterápicos múltiplos, cirurgias e suporte intensivo. Comentários: A HCL é uma doença desafiadora. Sua manifestação clínica é variável, e o envolvimento pulmonar ocorre em cerca de 10–15% dos casos. Consideram-se o manejo cirúrgico especializado e o suporte multidisciplinar essenciais para o tratamento de pacientes com HCL pulmonar maciça. Ainda que raro, o envolvimento pulmonar maciço por HCL deve ser considerado em quadros de pneumotórax recorrentes em crianças. Objetivo HCL, , (HCL) geral Ademais literatura caso 1 masculino anos direita cirurgicamente meses contralateral VATS (VATS mecânica quimioterápico prolongada 2 Menino direito drenagem quimioterapia múltiplos intensivo Comentários desafiadora variável 1015 10 15 10–15 Consideramse Consideram se maciça raro (HCL 101 10–1 10–

ABSTRACT Objective: The objective of this study was to report two cases of successive multiple spontaneous bilateral pneumothorax in children with massive lung involvement due to Langerhans cell histiocytosis (LCH), emphasizing the possibility of this differential diagnosis for the general pediatrician. Additionally, published cases describing pediatric patients with pulmonary manifestations of LCH were reviewed in the literature. Case description: Case #1: A 3-year-old male patient with a sudden episode of spontaneous right-sided pneumothorax, surgically drained. After 2 months, he experienced two new episodes of contralateral pneumothorax. A pulmonary lymph node biopsy revealed the diagnosis of LCH. He underwent bilateral video-assisted thoracic surgery and mini-thoracotomy with mechanical pleurodesis, in addition to chemotherapy, requiring prolonged hospitalization. Case #2: A 4-year-old boy with progressive dyspnea and wheezing for 5 months. A pulmonary biopsy revealed LCH. He developed significant respiratory distress and right pneumothorax, requiring drainage. Silver nitrate pleurodesis and different chemotherapy regimens were performed. Both patients responded well to multiple chemotherapy treatments, surgeries, and intensive care support. Comments: LCH is a challenging disease. Its clinical manifestation is variable, and pulmonary involvement occurs in about 10–15% of cases. We consider specialized surgical management and multidisciplinary support essential for the treatment of patients with massive pulmonary LCH. Although rare, massive pulmonary involvement by LCH should be considered in cases of recurrent pneumothorax in children. Objective LCH, , (LCH) pediatrician Additionally literature description #1 1 3yearold yearold 3 year old rightsided sided drained months videoassisted video assisted minithoracotomy mini thoracotomy hospitalization #2 4yearold 4 drainage performed treatments surgeries Comments disease variable 1015 10 15 10–15 rare (LCH # 101 10–1 10–

ABSTRACT Aberrant expression of long non-coding RNAs (lncRNAs) has been detected in several types of cancer, including acute lymphoblastic leukemia (ALL), but lncRNA mapped on transcribed ultraconserved regions (T-UCRs) are little explored. The T-UCRs uc.112, uc.122, uc.160 and uc.262 were evaluated by quantitative real-time PCR in bone marrow samples from children with T-ALL (n = 32) and common-ALL/pre-B ALL (n = 30). In pediatric ALL, higher expression levels of uc.112 were found in patients with T-ALL, compared to patients with B-ALL. T-cells did not differ significantly from B-cells regarding uc.112 expression in non-tumor precursors from public data. Additionally, among B-ALL patients, uc.112 was also found to be increased in patients with hyperdiploidy, compared to other karyotype results. The uc.122, uc.160, and uc.262 were not associated with biological or clinical features. These findings suggest a potential role of uc.112 in pediatric ALL and emphasize the need for further investigation of T-UCR in pediatric ALL.

CONTEXTO: Neurofibromatose tipo 1 (NF-1) é a doença genética autossômica dominante mais prevalente no ser humano. A doença de moyamoya é uma vasculopatia cerebral que raramente se encontra associada à NF-1, particularmente na faixa etária pediátrica. Este estudo descreve a ocorrência desta associação em um lactente. RELATO DE CASO: Paciente feminina, aos oito meses de idade, apresentou quadro de crise convulsiva com movimentos clônicos. Evoluiu com acidente vascular encefálico isquêmico e com hemiparesia à direita. Ressonância nuclear magnética mostrou achados compatíveis com a doença de moyamoya. O diagnóstico de NF-1 foi realizado aos 20 meses de vida. CONCLUSÃO: Apesar da raridade desta associação na faixa etária infantil, crianças com sintomas neurológicos focais e diagnóstico de NF-1 merecem ser investigadas para síndrome de moyamoya.

CONTEXT: Neurofibromatosis type 1 (NF-1) is the most prevalent autosomal dominant genetic disorder among humans. Moyamoya disease is a cerebral vasculopathy that is only rarely observed in association with NF-1, particularly in the pediatric age range. The present study reports an occurrence of this association in an infant. CASE REPORT: An eight-month-old female presented convulsive seizures with clonic movements. The patient suffered an ischemic stroke with hemiparesis. Magnetic resonance imaging revealed radiological findings compatible with moyamoya disease. The diagnosis of NF-1 was made at the age of 20 months. CONCLUSION: Despite the rarity of this association in childhood, children with focal neurological symptoms and a diagnosis of NF-1 deserve to be investigated for moyamoya syndrome.

Propolis is a resin formed by a complex chemical composition of substances that bees collect from plants. Since ancient times, propolis has been used in folk medicine, due to its biological properties, that include antimicrobial, anti-inflammatory, antitumoral and immunomodulatory activities. Glioblastoma is the most common human brain tumor. Despite the improvements in GBM standard treatment, patients' prognosis is still very poor. The aim of this work was to evaluate in vitro the Tubi-bee propolis effects on human glioblastoma (U251 and U343) and fibroblast (MRC-5) cell lines. Proliferation, clonogenic capacity and apoptosis were analyzed after treatment with 1 mg/mL and 2 mg/mL propolis concentrations for different time periods. Additionally, glioblastoma cell lines were submitted to treatment with propolis combined with temozolomide (TMZ). Data showed an antiproliferative effect of tubi-bee propolis against glioblastoma and fibroblast cell lines. Combination of propolis with TMZ had a synergic antiproliferative effect. Moreover, propolis caused decrease in colony formation in glioblastoma cell lines. Propolis treatment had no effects on apoptosis, demonstrating a cytostatic action. Further investigations are needed to elucidate the molecular mechanism of the antitumor effect of propolis, and the study of its individual components may reveal specific molecules with antiproliferative capacity.

CONTEXTO: Apesar dos avanços nos índices de cura da leucemia linfoblástica aguda (LLA) aproximadamente 25% das crianças sofrem recaídas da doença. A expressão dos genes de resistência múltipla a drogas (MDR-1), genes relacionados à proteína de resistência múltipla a drogas (MRP) e genes da proteína de resistência pulmonar (LRP) podem conferir o fenótipo de resistência ao tratamento das neoplasias. OBJETIVO: Analisar a expressão dos genes de resistência MDR-1, MRP e LRP em crianças diagnosticadas com LLA por meio da técnica da reação em cadeia da polimerase da transcriptase reversa (RT-PCR) semiquantitativa, associando estas expressões à sobrevida livre de eventos (SLE) e a variáveis clínico-laboratoriais. TIPO DE ESTUDO: Estudo clínico retrospectivo. LOCAL: Laboratório de Oncologia Pediátrica do Departamento de Puericultura e Pediatria da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - Universidade de São Paulo, Brasil. MÉTODOS: Amostras de medula óssea de 30 crianças com o diagnóstico de leucemia linfoblástica aguda foram avaliadas quanto à expressão do RNA-mensageiro para os genes MDR-1, MRP e LRP, pela reação em cadeia da RT-PCR semiquantitativa. RESULTADOS: Dos três genes estudados, somente a expressão aumentada de LRP esteve relacionada a uma pior SLE (p = 0.005). A presença do antígeno para leucemia linfoblástica aguda comum (CALLA) se correlacionou à expressão aumentada de LRP (p = 0.009) e a risco aumentado de ocorrência de recaída ou óbito (p = 0.05). O risco relativo de ocorrência de recaída ou óbito é seis vezes maior em crianças com alta expressão de LRP ao diagnóstico (p = 0.05), o que se confirma na análise multivariada dos três genes estudados (p = 0.035). DISCUSSÃO: A resistência celular a drogas é um determinante de resposta ao tratamento oncológico e sua avaliação por RT-PCR pode ser de importância. CONCLUSÕES: A avaliação da expressão dos genes de resistência a drogas antineoplásicas na leucemia linfoblástica aguda da criança ao diagnóstico, particularmente do gene LRP, pode ser de relevância clínica e deve ser objeto de estudos prospectivos.

CONTEXT: Despite the advances in the cure rate for acute lymphoblastic leukemia, approximately 25% of affected children suffer relapses. Expression of genes for the multiple drug resistance protein (MDR-1), multidrug resistance-related protein (MRP), and lung resistance protein (LRP) may confer the phenotype of resistance to the treatment of neoplasias. OBJECTIVE: To analyze the expression of the MDR-1, MRP and LRP genes in children with a diagnosis of acute lymphoblastic leukemia via the semiquantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), and to determine the correlation between expression and event-free survival and clinical and laboratory variables. DESIGN: A retrospective clinical study. SETTING: Laboratory of Pediatric Oncology, Department of Pediatrics, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Brazil. METHODS: Bone marrow aspirates from 30 children with a diagnosis of acute lymphoblastic leukemia were assessed for the expression of messenger RNA for the MDR-1, MRP and LRP genes by semi-quantitative RT-PCR. RESULTS: In the three groups studied, only the increased expression of LRP was related to worsened event-free survival (p = 0.005). The presence of the common acute lymphoblastic leukemia antigen (CALLA) was correlated with increased LRP expression (p = 0.009) and increased risk of relapse or death (p = 0.05). The relative risk of relapse or death was six times higher among children with high LRP expression upon diagnosis (p = 0.05), as confirmed by multivariate analysis of the three genes studied (p = 0.035). DISCUSSION: Cell resistance to drugs is a determinant of the response to chemotherapy and its detection via RT-PCR may be of clinical importance. CONCLUSIONS: Evaluation of the expression of genes for resistance to antineoplastic drugs in childhood acute lymphoblastic leukemia upon diagnosis, and particularly the expression of the LRP gene, may be of clinical relevance, and should be the object of prospective studies.

CONTEXTO: O gene supressor tumoral p16 codifica uma proteína inibidora da quinase ciclina dependente 4(cdk4) que bloqueia a divisão celular na fase G1 do ciclo celular. Alterações neste gene foram relatadas em várias neoplasias, incluindo as leucemias linfoblásticas agudas, principalmente da linhagem T. OBJETIVO: Verificar prováveis alterações do gene p16 em leucemias linfoblásticas agudas em crianças, utilizando o método de reação de polimerase em cadeia - polimorfismo conformacional em fita simples e seqüenciamento direto de nucleotídeos e comparar a sobrevida livre de eventos com a presença ou não de alterações (deleções ou substituições de bases) do gene p16, utilizando o método de Kaplan-Meir e teste log-rank. TIPO DE ESTUDO: Estudo retrospectivo. LOCAL: Departamento de Puericultura e Pediatria da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo. PARTICIPANTES: Foram estudadas 56 crianças (16 do sexo feminino e 40 do masculino) com leucemia aguda com idade média de quatro anos. Quarenta pacientes (71,43%) tinham leucemias linfoblásticas agudas de células B, 12 (21,43%) tinham leucemias linfoblásticas agudas de células T e 4 (7,1%) eram bifenotípicas. AMOSTRA: Amostras de DNA foram extraídas de medula óssea obtidas ao diagnóstico e/ou na recaída. Em dois casos de leucemias linfoblásticas agudas de células T, o DNA obtido do líquido céfalo-raquidiano foi analisado. VARIÁVEIS ESTUDADAS: Deleções ou substituições de bases nos éxones 1, 2 e 3 do gene p16 foram determinadas pela reação de polimerase em cadeia - polimorfismo conformacional em fita simples e seqüenciamento de nucleotídeos. A sobrevida livre de eventos foi determinada segundo o método de Kaplan-Meier e teste log-rank para pacientes com gene p16 normal e alterado. RESULTADOS: Em cinco casos (quatro leucemias linfoblásticas agudas pré B CALLA+ e uma leucemia linfoblástica aguda T) foram observadas deleções no éxon 3. Foram verificadas migrações anômalas no polimorfismo conformacional em fita simples em sete casos no éxon 1, seis no éxon 2 e cinco no éxon 3. A confirmação da mutação pelo seqüenciamento direto do DNA ocorreu em quatro casos no éxon 1 e 2 no éxon 2. Foram comparadas as curvas de sobrevida pelo método de Kaplan-Meier e teste log-rank e não se obteve diferença estatisticamente significativa da sobrevida livre de eventos em cinco anos entre os grupos de criança com leucemia linfoblática aguda com p16 normal e alterado e também entre os pacientes com leucemia linfoblástica aguda B com p16 normal e alterado. Não foi possível avaliar pelo método de Kaplan-Meier os pacientes com leucemia linfoblástica aguda T devido ao pequeno número de casos. CONCLUSÕES: Os resultados obtidos, principalmente em relação à freqüência de deleções, foram concordantes com vários autores que sugerem que deleções do gene p16 possam ser eventos iniciais da gênese leucêmica. Tendo em vista o pequeno número de amostras estudadas, não foi possível realizar a correlação entre leucemia linfoblática aguda na infância e as mutações de ponto no gene p16 encontradas neste estudo. Não se obteve significância estatística entre sobrevida livre de eventos e alterações do p16 em leucemia linfoblática aguda pelo método de Kaplan-Meier. A freqüência de alterações do p16 em leucemia linfoblástica aguda B e T foram concordantes com os estudos realizados em alguns centros mundiais. Sugerimos a realização de uma pesquisa multicêntrica com um maior número de casos, principalmente sobre leucemia linfoblástica aguda T, a fim que seja possível traçar um perfil de alterações do gene p16 em crianças brasileiras.

CONTEXT: The p16 tumor suppressor gene encodes a cyclin-dependent kinase 4 inhibitor that blocks cell division during the G1 phase of the cell cycle. Alterations in this gene have been reported for various neoplasia types, including acute lymphoblastic leukemias (ALL), especially T-cell acute lymphoblastic leukemias (ALL). OBJECTIVE: To determine probable alterations in the p16 gene in children with acute lymphoblastic leukemias using the polymerase chain reaction (PCR) and direct DNA sequencing and also to analyze event-free survival (EFS). DESIGN: Retrospective study. SETTING: Department of Child Care and Pediatrics, Faculty of Medicine of Ribeirão Preto, Universidade Federal de São Paulo. PARTICIPANTS: Fifty-six children with ALL (mean age 4 years). Forty (71.43%) had B-cell and 12 (21.43%) had T-cell ALL; 4 (7.1%) were biphenotypic. SAMPLE: DNA samples were extracted from bone marrow upon diagnosis and/or relapse. In 2 T-cell cases, DNA from cerebrospinal fluid (CSF) was analyzed. MAIN MEASUREMENTS: Deletions or nucleotide substitutions in exons 1, 2 and 3 of the p16 gene were determined by PCR and nucleotide sequencing. Event-free survival was determined by the Kaplan-Meyer and log-rank test for patients carrying normal and altered p16. RESULTS: Deletions in exon 3 were observed in five cases. Abnormal migration in PCR was observed in seven cases for exon 1, six for exon 2, and five for exon 3. Mutations in exon 1 were confirmed by direct DNA sequencing in four cases and in exon 2 in two cases. The Kaplan-Meyer survival curves and the log-rank test showed no significant differences in 5-year EFS between children with normal or altered p16, or between patients with B-ALL carrying normal or altered p16 gene. Patients with T-ALL could not be evaluated via Kaplan-Meier due to the small number of cases. CONCLUSIONS: Our results, particularly regarding deletion frequency, agree with others suggesting that deletions in the p16 are initial events in leukemia genesis. The small number of samples did not allow stablishment of correlation between childhood ALL and the p16 point mutations found in our study. Kaplan-Meier analysis revealed no significant correlation between EFS and alterations in ALL. The p16 alterations frequency observed for B and T-ALL agreed with reports from other centers.

CONTEXTO: Os genes supressores tumorais atuam no controle da progressão do ciclo celular. Em neoplasias pediátricas, alguns destes genes podem ser considerados marcadores de diagnóstico ou de recaída, sendo, portanto, prováveis indicadores prognósticos. OBJETIVO: Estudar a inativação do gene p15 em crianças com leucemia linfóide aguda. TIPO DE ESTUDO: Estudo retrospectivo. LOCAL: Laboratório de Biologia Molecular, Departamento de Puericultura e Pediatria, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo. PACIENTES: Foram estudadas 83 crianças e adolescentes com leucemia linfóide aguda, sendo examinadas 83 amostras de medula óssea ao diagnóstico, quatro também na recaída e duas amostras de líquido cefalorraquidiano em dois casos de recaída isolada em sistema nervoso central. VARIÁVEIS ESTUDADAS: Deleção homóloga do gene p15, por reação em cadeia de polimerase-multiplex e triagem para mutação de ponto por reação em cadeia de polimerase-polimorfismo conformacional em fita simples. RESULTADOS: Deleção do exon 2 do gene p15 foi observada em 15 crianças, incluindo um caso apenas na recaída isolada em sistema nervoso central. Nenhum caso de deleção do exon 1 foi verificado, bem como nenhum caso sugestivo de mutação de ponto. Não foi estabelecida associação entre inativação do gene p15 e fatores de riscos clássicos. CONCLUSÃO: De acordo com a literatura, a inativação do gene p15 por deleção do exon 2 em leucemia linfóide aguda encontrada na população estudada pode ser considerada um marcador molecular de diagnóstico ou de recaída. No entanto, não foi observada qualquer correlação entre deleção do gene p15 e indicadores clínicos prognósticos.

CONTEXT: Tumor suppressor genes act on the control of cell cycle progression. In pediatric neoplasias, some of these genes may be considered to be markers for diagnosis or relapse, thus probably representing prognostic indicators. OBJECTIVE: To study the inactivation of the p15 gene in children with acute lymphoblastic leukemia. TYPE OF STUDY: Retrospective study. SETTING: Laboratory of Molecular Biology, Department of Pediatrics, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo. PARTICIPANTS: Eighty-three children and adolescents with acute lymphoblastic leukemia were studied, with the examination of 83 bone marrow samples obtained at diagnosis, four obtained also during relapse, and two cerebrospinal fluid samples obtained from two cases of isolated relapse in the central nervous system. MAIN MEASUREMENTS: Homologous deletion of the p15 gene by multiplex polymerase chain reaction, and screening for point mutations by polymerase chain reaction/single-strand conformational polymorphism. RESULTS: Deletion of exon 2 of the p15 gene was observed in 15 children, including one case in which deletion was only verified during isolated central nervous system relapse. No case of exon 1 deletion, or that was suggestive of point mutations, was observed and no association between p15 gene inactivation and classic risk factors was established. CONCLUSION: According to the literature, inactivation of the p15 gene by deletion of exon 2 in acute lymphoblastic leukemia found in the population studied would be considered to be a molecular marker for diagnosis or relapse. However, no correlation between p15 gene deletion and clinical prognostic indicators was observed.

INTRODUÇÃO: A região CDR-3 da IgH têm sido usada com marcador clonal no estudo de doença residual mínima em crianças com leucemia linfóide aguda. Estudos por Southern blot e reação em cadeia da polimerase têm demonstrado bi/oligoclonalidade em um número variável de casos de leucemia linfóide aguda de linhagem B, o que pode interferir de forma importante na detecção de doença residual mínima. Oligoclonalidade também têm sido associada com pior prognóstico e maior chance de recidiva. OBJETIVOS: Correlacionar bi/oligoclonalidade detectada por reação em cadeia da polimerase em crianças brasileiras portadoras de leucemia linfóide aguda de linhagem B com chance de recaída, imunofenótipo, grupo de risco e sobrevida livre de doença. TIPO DE ESTUDO: Estudo prospectivo de seguimento de pacientes. LOCAL: Serviço de Oncologia Pediátrica do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto- USP. PARTICIPANTES: 47 crianças portadoras de leucemia linfóide aguda de linhagem B TESTE DIAGNÓSTICO: Reação em cadeia da polimerase, utilizando-se primers de consenso para região CDR-3 da IgH (FR3A, LJH e VLJH) para detecção de clonalidade. RESULTADOS: Bi/oligoclonalidade foi encontrada em 15 pacientes (31,9%). Não houve diferença estatística significativa entre os grupos com monoclonalidade e biclonalidade quanto a presença de recidiva (28,1% versus 26,1%) , presença de CALLA+ (81,2% versus 80%) ou grupo de risco (62,5% versus 60%). Sobrevida livre de doença foi similar em ambos os grupos, sem diferença significativa (p: 0,7695). CONCLUSÕES: Concluímos que bi/oligoclonalidade não esteve associada com fatores os analisados neste estudo e que sua detecção em 31,9% dos pacientes pode ser importante no estudo e seguimento de doença residual mínima

CONTEXT: The CDR-3 region of heavy-chain immunoglobulin has been used as a clonal marker in the study of minimal residual disease in children with acute lymphoblastic leukemia. Southern blot and polymerase chain reaction studies have demonstrated the occurrence of bi/oligoclonality in a variable number of cases of B-lineage acute lymphoblastic leukemia, a fact that may strongly interfere with the detection of minimal residual disease. Oligoclonality has also been associated with a poorer prognosis and a higher chance of relapse. OBJECTIVES: To correlate bi/oligoclonality, detected by polymerase chain reaction in Brazilian children with B-lineage acute lymphoblastic leukemia with a chance of relapse, with immunophenotype, risk group, and disease-free survival. DESIGN: Prospective study of patients’ outcome. SETTING: Pediatric Oncology Unit of the University Hospital, Faculty of Medicine of Ribeirão Preto, University of São Paulo. PARTICIPANTS: 47 children with acute lymphoblastic leukemia DIAGNOSTIC TEST: Polymerase chain reaction using consensus primers for the CDR-3 region of heavy chain immunoglobulin (FR3A, LJH and VLJH) for the detection of clonality. RESULTS: Bi/oligoclonality was detected in 15 patients (31.9%). There was no significant difference between the groups with monoclonality and biclonality in terms of the occurrence of a relapse (28.1% versus 26.1%), presence of CALLA+ (81.2% versus 80%) or risk group (62.5% versus 60%). Disease-free survival was similar in both groups, with no significant difference (p: 0.7695). CONCLUSIONS: We conclude that bi/oligoclonality was not associated with the factors investigated in the present study and that its detection in 31.9% of the patients may be important for the study and monitoring of minimal residual disease.