Abstract Ancylostoma spp. are found worldwide. Infected dog and cat feces can contaminate soil in public places. Despite prophylactic measures being available, studies on direct remediation of Ancylostoma-contaminated soils are scarce. This study aimed to determine the impact of heat treatment and liming on the viability of Ancylostoma spp. eggs in artificially contaminated sandy soil. Sterilized sand samples were contaminated with Ancylostoma spp. eggs extracted from infected dogs’ feces. Samples were heated (trial I) to 70 °C or 80 °C, then sieved after 24 hours (212, 90, 38, and 25 µm). Larval cultures were assessed for larval development following heat treatment. Five quicklime concentrations (trial II; 50, 30, 20, 10 and 5%) were used to treat sand. The effect of liming on larval cultures was assessed by measuring embryonic development. Filariform larvae were exposed to 20% quicklime (25 °C and 37 °C, 20 min). Heat treatment destroys Ancylostoma spp. eggs and prevents in vitro larval development. Liming at 50, 30, and 20% concentrations made embryonic development impossible. However, filariform larvae treated with 20% lime solution retained their motility. Heating at 70 °C and liming at 20% were sufficient to make Ancylostoma spp. egg embryogenesis impossible in experimentally contaminated sand samples. spp worldwide places available Ancylostomacontaminated scarce dogs trial I 7 C 8 2 212, 212 (212 90 38 µm. µm . µm) II 50 30 1 5% 5 (2 3 min. min min) However motility 21 (21 9 (

Resumo Ancylostoma spp. são nematódeos que infectam cães e gatos e podem contaminar locais públicos. Apesar da existência de medidas profiláticas, estudos sobre tratamento do solo são escassos. No presente estudo, foi avaliado o efeito do tratamento térmico e caleação na viabilidade de ovos de Ancylostoma spp., em solo arenoso estéril. Amostras de solo foram contaminadas com ovos de Ancylostoma spp. obtidos de fezes de cães naturalmente infectados, aquecidas a 70°C ou 80°C, e filtradas em tamises metálicas (212, 90, 38 e 25 µm) após 24 horas (Teste I). Cultivos de larvas foram realizadas para a avaliação do desenvolvimento larval. Na caleação (Teste II), cinco concentrações (50, 30, 20, 10 e 5%) de cal virgem foram utilizadas. O efeito da caleação foi avaliado com observação do desenvolvimento larval nos cultivos. Ainda, larvas foram expostas (20 minutos) ao leite de cal (20% a 25°C e 37°C). O tratamento térmico foi capaz de degenerar ovos de Ancylostoma spp. e impedir o desenvolvimento larval, enquanto a caleação (50, 30, e 20%) impossibilitou o desenvolvimento larval. Entretanto, as larvas filariformes, expostas ao leite de cal (20%) mantiveram motilidade. O aquecimento (70°C) e caleação (20%) impediram o embrionamento de ovos de Ancylostoma spp. em solo experimentalmente contaminado. spp públicos profiláticas escassos estudo estéril infectados 70C C 70 80C 80 80°C 212, 212 (212 90 3 2 µm Teste I. I . I) II, II , II) 50, 50 (50 30 20 1 5% 5 utilizadas cultivos Ainda (2 minutos 20% 25C 37°C. 37C 37°C 37 37°C) Entretanto filariformes motilidade (70°C contaminado 7 8 21 (21 9 (5 (

Resumo A finalidade do presente estudo foi avaliar a presença de anticorpos anti- Toxocara, em frangos de corte naturalmente infectados (n = 189), no Norte do Paraná, Sul do Brasil. Os frangos foram criados em sistema semi-intensivo, em pequenas propriedades rurais (n = 7). Os testes sorológicos foram realizados pela técnica de ELISA, para detecção de anticorpos IgY (IgG), com pré-adsorção do soro com antígenos de Ascaridia galli. Foi observada uma prevalência de 67,7% (128/189; IC 95% = 61,1-74,4). A frequência de animais soropositivos por propriedade variou de 29,6% a 100%. Os valores da Densidade Ótica e do Índice de Reatividade observados no teste de ELISA indicaram uma possível cronicidade de infecção dos frangos avaliados. Não foi observada correlação entre a positividade dos animais, quando comparada a área (p = 0,382) e a densidade populacional de cães por propriedade (p = 0,785). O presente estudo verificou uma alta prevalência de anticorpos anti-Toxocara em frangos de corte criados em sistema semi-intensivo e oferece dados que apontam esses animais como bons indicadores de contaminação ambiental por agentes de larva migrans . Estudos futuros são necessários para avaliar os fatores de risco associados e a possibilidade da transmissão de toxocaríase ao ser humano pela ingestão de carne de frango.

Abstract The aim of this study was to evaluate the presence of anti-Toxocara antibodies in naturally infected broiler chickens (n = 189) from the state of Paraná, southern Brazil. The chickens were reared in a semi-intensive system by small family farmers (n = 7). An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was performed to detect the presence of anti- Toxocara spp. IgY after serum adsorption with Ascaridia galli antigens. An overall seroprevalence of 67.7% (128/189; 95% CI = 61.1-74.4) was observed. The frequency of positive animals by farm ranged from 29.6% to 100%. The optical density and reactivity index values observed in ELISA test indicated the possible chronicity of infection of the evaluated chickens. Associations between the presence of antibodies and the area where the chickens were reared (p = 0.382) or the population density of dogs on the farm (p = 0.785) were not observed. This study shows a high prevalence of Toxocara spp. antibodies in broiler chickens reared in semi-intensive systems and provides evidence that chickens are a good indicator of environmental contamination by larva migrans agents. Further studies are necessary to assess the risk factors associated with poultry infection and the likelihood of toxocariasis transmission to humans via the ingestion of free-range chicken meat.

Resumo O objetivo deste estudo foi o de avaliar a cinética e a avidez de anticorpos anti-Toxocara canis, em coelhas infectadas experimentalmente com ovos embrionados de Toxocara canis. Foram utilizados 17 coelhos New Zealand de linhagem branca, com quatro meses de idade, distribuídos em dois grupos. No grupo experimental, doze coelhas foram infectadas, oralmente, com 1.000 ovos larvados de T. canis. Um segundo grupo (n=5), não infectado, foi utilizado como controle. Nos dias 7, 14, 21, 28 e 60 pós-infecção (DPI), foram coletadas amostras de soro para análise. O teste de ELISA indireto foi realizado para avaliar o índice de reatividade (IR) de anticorpos IgG anti-T. canis e para cálculo do índice de avidez (IA). A soroconversão nos animais ocorreu a partir do140 DPI, com verificação de alto IA (superior a 50%), com exceção de um animal, que apresentou médio IA. Aos 60 DPI, todos os animais foram soropositivos e mantiveram alto IA. Os dados mostram que em coelhos infectados por T. canis, anticorpos IgG específicos formam-se precocemente (14 DPI), apresentando alto índice de avidez e que se mantém durante o curso da infecção.

Abstract An evaluation was made of the kinetics and avidity of anti-Toxocara antibodies (IgG) in rabbits experimentally infected with embryonated Toxocara canis eggs. Seventeen four month old New Zealand White rabbits were distributed into two groups. In the experimental group, twelve rabbits were infected orally with 1,000 embryonated T. canis eggs. A second group (n = 5), uninfected, was used as a control. Serum samples were collected for analysis on days 7, 14, 21, 28 and 60 post-infection (DPI). An indirect ELISA test was performed to evaluate the reactivity index (RI) of IgG anti-T. canis antibodies and to calculate the avidity index (AI). The animals showed seroconversion from the 14th DPI, with high AI (over 50%) except for one animal, which presented an intermediate AI. At 60 DPI, all the animals were seropositive and maintained a high AI. The data indicated that specific IgG antibodies formed early (14 DPI) in rabbits infected with T. canis, with a high avidity index that persisted throughout the course of the infection.

O objetivo do presente estudo foi avaliar o perfil das enzimas creatinoquinase (CK), creatinoquinase-MB (CK-MB) e lactato desidrogenase (LDH) em ratos Wistar infectados com 250 (GI, n = 24) ou 1000 (GII, n = 24) ovos de Toxocara canis. Os animais foram avaliados nos dias 7, 15, 30, 60, 120 e 180 pós-infecção (DPI). Observou-se que apenas os animais do GI apresentaram aumento da atividade de CK e CK-MB aos 15 e 30 DPI, respectivamente. Anticorpos anti-T. canis foram detectados por ELISA nos animais infectados. Apesar da presença de infiltrado eosinofílico em três animais infectados, nenhuma larva foi recuperada do coração pela digestão ácida ou pela técnica de Baermann. Eosinofilia foi observada em todos os momentos em GI e GII, sem diferença significativa entre os grupos (p = 0,2239). Pode-se considerar que as lesões cardíacas foram um achado eventual no modelo murino para toxocaríase.

The aim of this study was to evaluate the profile of the enzymes creatine kinase (CK), creatine kinase MB (CK-MB) and lactate dehydrogenase (LDH) in Wistar rats infected with 250 (GI, n = 24) or 1000 (GII, n = 24) Toxocara canis eggs. Animals were evaluated on days 7, 15, 30, 60, 120 and 180 post-infection (DPI). Only the GI rats showed an increase in CK and CK-MB, at 15 and 30 DPI, respectively. Anti-Toxocara spp. antibodies were detected by ELISA in infected animals. Despite of the presence of eosinophilic infiltrate in the heart of three infected animals, none larva was recovered from the organ neither by acid digestion nor by Baermann procedure. Eosinophilia was observed in both groups but there was no significant difference in the eosinophil counts between GI and GII (p = 0.2239). It is possible to consider that cardiac lesion is an eventual finding in murine model for toxocariasis.

O objetivo do estudo foi avaliar a contaminação do solo de praças públicas por ovos de Toxocara spp. em Presidente Prudente, São Paulo. Amostras de solo (500 g) foram coletadas mensalmente, durante um período de 12 meses, de 25 praças de cinco diferentes setores da cidade (norte, sul, leste, oeste e central). Duas alíquotas de 10 g do material coletado foram submetidas ao método de centrífugo-flutuação (sulfato de zinco; d = 1.200 g/cm³), para recuperação dos ovos. Das 25 praças estudadas, 24 (96,0%) estavam contaminadas e o número variou de 1 a 398 ovos por amostra analisada. A recuperação foi verificada durante todos os meses do ano, sendo maior no outono (p < 0,001). Entretanto, não houve correlação entre o número de ovos e a temperatura média (r = -0,492; p = 0,148) e a precipitação pluviométrica (r = -0,299; p = 0,402) mensal. Não houve influência da localização dos parques sobre a quantidade de ovos (p = 0,7116). Devido ao alto nível de contaminação de parques públicos por ovos de Toxocara spp., a prevenção da contaminação de áreas públicas pelos agentes de larva migrans é indicada.

This study aims to evaluate soil contamination by Toxocara spp. eggs in public parks in Presidente Prudente, São Paulo, Brazil. Soil samples (500 g) were collected every month over a 12-month period, from 25 parks in different parts of the city (northern, southern, eastern, western and central areas). Two 10-g aliquots of the material collected from each park were subjected to the centrifuge-flotation method to recover Toxocara spp. eggs. Twenty-four out of the 25 squares studied (96.0%) were contaminated and the number of eggs recovered ranged from 1 to 398 per sample. Eggs were recovered all over the year. Despite the number being greater in autumn (p < 0.001), there was no correlation between number egg number and average monthly temperature (r = -0.492; p = 0.148) or between egg number and monthly rainfall (r = -0.299; p = 0.402). Park localization does not influence egg presence (p = 0.7116). Because of the high level of contamination of the parks by Toxocara spp. eggs, prevention of contamination of public areas by larva migrans agents is indicated.

A finalidade do presente estudo foi avaliar a prevalência de anticorpos anti-Toxocara spp. em crianças de duas diferentes classes sociais do município de Presidente Prudente, São Paulo, Brasil, e os fatores protetores e de risco associados à toxocaríase. Foram incluídas no estudo 126 crianças de classe média (CM) e 126 de baixa renda (BR). O teste ELISA foi realizado para avaliar a seroprevalência. Um questionário foi aplicado aos pais ou responsáveis pelas crianças para análise dos fatores protetores e de risco. A prevalência na população foi de 11,1%, sendo de 9,5% (12/126) e 12,7% (16/127) para os subgrupos CM e BR. A seropositividade foi inversamente proporcional à renda familiar. Observou-se que uma alta renda familiar foi considerado um fator de proteção tanto para a população total como para ambos os subgrupos CM e BR. Da mesma forma, ser criança do sexo feminino foi outro fator de proteção para a população total e para os dois subgrupos. Possuir gato foi um fator de risco para a população total e para os dois subgrupos estudados, enquanto que possuir cão foi considerado como fator de risco apenas para as crianças de classe média. Os fatores protetores e de risco podem ser diferentes em uma mesma população a depender do estrato social. Dessa forma, é relevante avaliar esses fatores independentemente para diferentes classes sócio-econômicas para elaboração de futuros estudos e programas de prevenção à infecção humana por Toxocara spp. e outros geohelmintos.

The aim of this study was to analyze the prevalence of Toxocara spp. antibodies in children from two different socioeconomic classes in the Presidente Prudente municipality, São Paulo State, Brazil, and the protective and risk factors associated with toxocariasis. One hundred and twenty-six middle-class (MC) and 126 disadvantaged children (DC) were included in this study. Anti-Toxocara ELISA test was performed in order to evaluate seroprevalence. A survey was applied to the children's guardians/parents in order to analyze the protective and risk factors. The overall prevalence was 11.1%, and of 9.5% (12/126) and 12.7% (16/126) for MC and DC subgroups, respectively. Toxocara seropositivity was inversely proportional to the family income. A high household income was considered a protective factor for toxocariasis in the total population and in both MC and DC subgroups. Being a girl was considered a protective factor for the total population and for both subgroups. Whilst being an owner of cat was a risk factor for children belonging to the total and for both MC and DC subgroups, having dog was considered as a risk factor for only the MC. Epidemiologic protective/factor risks can be distinct depending on the strata of the same population. Thus, it is relevant to evaluate these factors independently for different socioeconomic classes in order to design future investigations and programs for preventing the infection of human beings by Toxocara spp. and other geohelminths.

Com o objetivo de avaliar a influência de variáveis na técnica de centrífugo-flutuação para a recuperação de ovos de Toxocara canis em solo, amostras de solo foram previamente esterilizadas e divididas em alíquotas de um grama e contaminadas com 200 ovos. Após contaminação, foram comparadas, em etapas seriadas, as variáveis: filtragem, tipo de lavagem e ressuspensão do material. Como ponto de partida, utilizou-se técnica com lavagem de solo em Tween 80 (0,2%) e solução de hidróxido de sódio 0,1N; ressuspensão; e centrífugo-flutuação em solução de nitrato de sódio (d = 1,20 g/cm³). Os ovos recuperados foram contados com 10 repetições e três leituras para cada repetição. A filtragem reduziu significativamente a recuperação de ovos em relação ao material não filtrado (p < 0,001), enquanto o número de ovos foi significativamente maior quando da ressuspensão do material (p < 0,05). Após padronização, as soluções de cloreto de sódio, dicromato de sódio, nitrato de sódio, sulfato de zinco, sulfato de magnésio foram comparadas. O sulfato de zinco mostrou os melhores resultados. Dessa forma, as chances de recuperação de ovos de T. canis podem ser ampliadas com um processo duplicado de lavagem do solo com água destilada e ressuspensão do sedimento, sendo que a filtragem reduz consideravelmente o número de ovos.

The purpose of this study was to evaluate the influence of variables in a flotation technique for the recovery of Toxocara canis eggs from soil. The trials were done under standardized conditions on one gram of previously sterilized soil samples contaminated with 200 eggs of T. canis. The following variables were evaluated in serial steps: sieving; type of wash; time of stirring; resuspension of sediment; solution flotation. Centrifuge-flotation in sodium nitrate (d = 1.20 g/cm³) was adopted as an initial technique, using Tween 80 (0.2%) and decinormal sodium hydroxide as solutions for washing the samples. Ten tests were done to compare the variables, using counting in triplicate. The sieving of the material reduced significantly the recovery of eggs (p < 0.001) and the number of eggs recovered was higher when the sediment was resuspended (p < 0.05). After standardization, flotation solutions sodium chloride, zinc sulfate, sodium dichromate, magnesium sulfate, and sodium nitrate (d = 1.20g/cm³) were compared. The best results were obtained by using zinc sulfate solution. In conclusion, the chances of recovering T. canis eggs from samples using flotation solutions can be increased by washing of soil twice using distilled water, and resuspension of sediment. On the other hand, the sieving procedure can drastically reduce the number of eggs.

Com o objetivo de avaliar a contaminação ambiental por ovos de Toxocara spp. em assentamento rural da região do Pontal do Paranapanema, oeste do estado de São Paulo, Brasil, amostras de solo de oito diferentes pontos ao redor da casa de 31 dos 121 lotes do assentamento foram coletados. A recuperação de ovos foi realizada pela técnica de centrífugo-flutuação em solução de nitrato de sódio (d = 1,20g/cm³). Ovos de Toxocara spp. foram recuperados em nove (29,03%) dos 31 lotes. Em 27 das 31 casas amostradas (87,1%), havia pelo menos um cão e em 17 (54,84%) pelo menos um gato. O número de cães por lote variou de um a seis (media de 2,3). No caso dos gatos, o número variou de um a 14 (média de 1,29). Em 16 dos 31 lotes (51,61%), havia a presença de pelo menos um cão ou gato. Não houve relação entre a presença desses animais e a contaminação do solo (p > 0,05). Entretanto, a contaminação do solo por ovos de Toxocara spp. e as precárias condições de higiene tanto da população quanto dos seus animais compõem um ambiente favorável à infecção dos assentados por agentes de larva migrans/toxocaríase.

In order to study the environmental contamination by Toxocara spp. eggs in a rural community from the Pontal do Paranapanema region, São Paulo State, Brazil, soil samples from 31 out of 121 plots were collected in eight different places on each house. The samples were submitted to flotation technique in sodium nitrate (d = 1.20g/cm³). Eggs of Toxocara spp. were recovered in nine (29.03%) out of the 31 plots. At least one dog was registered in 27 of the 31 plots examined (87.1%) and at least one cat in 17 (54.84%). The number of pets per plot ranged from one to six (mean of 2.3) for dogs and one to 14 (mean of 1.29) for cats. In 16 plots (51.61%), the presence of both dogs and cats was observed. There was no relation between the presence of pets in the plots and soil contamination (p > 0.05). However, the environmental contamination by Toxocara spp. eggs associated to the poor conditions of the inhabitants may be an important risk factor for the human population to ocular or visceral larva migrans.

Descreve-se a ocorrência de larva migrans cutânea em crianças de Taciba, São Paulo, Brasil, pelo contato com areia de parques públicos, onde observou-se larvas de Ancylostoma spp. A enfermidade foi controlada após adotar-se medidas educacionais sanitárias, desativação e isolamento dos locais para reduzir acesso de animais e troca de areia.

Cutaneous larva migrans in children from Taciba, São Paulo, Brazil, was related to contact with sand in public squares, where Ancylostoma spp larvae were detected. The outbreaks were controlled by sanitary education, temporary deactivation and isolation of the squares in order to impede the access of animals and substitution of the sand.

A freqüência de contaminação de parques e praças públicas de Botucatu, São Paulo, Brasil, por ovos de Toxocara spp foi estudada durante 12 meses, com colheitas mensais de amostras de solo de dez praças, que foram processadas pela técnica de concentração em solução decinormal de hidróxido de sódio. Das 120 amostras analisadas, 21 estavam contaminadas, correspondendo a 17,5%, em um total de seis praças. A maioria desses ovos porém apresentaram características de inviabilidade infectiva. Embora a chance de aquisição dessa zoonose nas praças estudadas seja pequena, existe o risco de infecção da população.

The frequency of Toxocara spp eggs in public parks was determined from March 1995 to February 1996. One hundred and twelve samples were collected from 10 public parks in Botucatu, São Paulo State, Brazil. Samples were processed by the decinormal sodium hydroxide concentration method. Out of the 120 soil samples analyzed, 21 were contaminated with Toxocara spp eggs, corresponding to a 17.5% rate of infestation. Of the ten squares submitted to analysis during the year, six presented contamination. Most of the ova found presented characteristics of inviability, with a consequent low chance of human infection, although the population is not free from the risk of contracting this zoonosis.