Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a relação entre severidade da entomosporiose, desfolha e variáveis vegetativas-reprodutivas de três cultivares de pera europeia no Sul do Brasil. As cultivares de pera Packham’s Triumph, Abate Fetel e William foram avaliadas quanto à severidade da entomosporiose, à desfolha e à queda natural de folhas a cada 15 dias, desde o surgimento dos primeiros sintomas no início de janeiro até o fim de abril, durante as safras de 2012/2013 e 2013/2014. As variáveis vegetativas e reprodutivas foram analisadas em julho, durante o período de dormência das plantas. Os dados da severidade da entomosporiose foram integrados ao longo do tempo e convertidos para área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD). O coeficiente de determinação (R2) da regressão linear da severidade da entomosporiose versus desfolha foi significativo para todas as cultivares e as safras estudadas. A desfolha em plantas infectadas pela entomosporiose foi significativamente maior do que a queda natural de folhas nas plantas-controle tratadas com fungicidas. Houve correlação negativa entre desfolha, índice de fertilidade dos ramos e altura de plantas, o que indica que, quanto maior a desfolha, menor é o desenvolvimento das variáveis vegetativas e reprodutivas altura de planta e vigor. A severidade da entomosporiose diferiu significativamente entre as cultivares avaliadas quando a AACPD foi considerada como a variável epidemiológica diferenciadora. As cultivares de pera Abate Fetel e Williams são as mais suscetível e resistente à entomosporiose, respectivamente.

Abstract: The objective of this work was to evaluate the relationship among Entomosporium severity, defoliation, and vegetative-reproductive variables of three European pear cultivars in Southern Brazil. The Packham’s Triumph, Abate Fetel, and Williams pear cultivars were assessed regarding Entomosporium severity, defoliation, and natural leaf fall every two weeks, from the appearance of the first symptoms at the beginning of January until the end of April, during the 2012/2013 and 2013/2014 crop seasons. The vegetative and reproductive variables were evaluated in July, during the dormant period. Data on Entomosporium severity were integrated over time and converted into the area under the disease progress curve (AUDPC). The coefficient of determination (R2) of the linear regression of Entomosporium severity versus defoliation was significant for all studied cultivars and crop seasons. Defoliation in trees affected by Entomosporium was significantly higher than natural leaf fall in the control trees protected by fungicides. A negative correlation was observed among defoliation, branch fertility index, and plant height, indicating that the higher the defoliation, the lower the development of the vegetative and reproductive variables plant height and vigor. Entomosporium severity differed significantly among cultivars when the AUDPC was considered the differentiating epidemiological variable. The Abate Fetel and Williams pear cultivars are the most susceptible and resistant to Entomosporium, respectively.

RESUMO: O cancro europeu (CE) da macieira é causado pelo fungo Neonectria ditissima e foi oficialmente registrado como praga quarentenária em 2012. Foram avaliados 35 isolados de N. ditissima provenientes de ramos de macieira com sintomas típicos de CE de diferentes regiões do sul do Brasil. Os isolados foram identificados pelos primers específicos Ch1 e Ch2 e analisados quanto as características morfofisiológicas e virulência na cultivar de macieira Gala. Os sintomas foram caracterizados e os isolados comparados com base no crescimento micelial médio (CMM), índice de crescimento micelial (ICM), coloração das colônias e tipos, dimensões e produção de conídios em meios de cultura batata-dextrose-ágar (BDA), malte-ágar (MA) e meio sintético SNAY (SS). Dezenove isolados tiveram os maiores CMM sobre BDA, formando três grupos de crescimento de 35.56 (GI), 52.71 (GII) e 62.67mm (GIII). Sete isolados tiveram ICM maior de 4mm de diâmetro sobre BDA quando comparados com os meios MA e SS. A maior produção de conídios ocorreu sobre o meio SS e a coloração predominante foi de branco-à-bege com pigmentação central marrom e bordas de colônia em tons de bege. Foram observadas diferenças significativas nas dimensões médias dos micro- e macroconídios sobre os meios de culturas BDA, MA e SS. Todos os isolados foram patogênicos na cultivar de macieira gala, independentemente das diferenças morfofisiológicas. Não foram observadas correlações entre a variabilidade morfofisiológicas, virulência e origem geográfica dos isolados.

ABSTRACT: European apple canker (EC) is caused by Neonectria ditissima, a pathogen officially registered as a quarantine pest in 2012. Thirty-five isolates of N. ditissima of different geographical regions of southern Brazil from apple branches showing symptoms of EC were identified by the specific pair primers Ch1 and Ch2 and analyzed concerning the virulence on Gala apple cultivar and morphophysiological characteristics. The disease symptoms were characterized and the isolates compared based on average mycelium growth (AMG), mycelium growth index (MGI), colony color, conidia type, dimensions and growth on potato dextrose agar (PDA), malt agar (AM), and synthetic SNAY (SN) culture media. Nineteen isolates showed the greatest AMG on PDA, forming three growth groups of 35.56 (GI), 52.71 (GII), and 62.67mm (GIII). Seven isolates showed MGI greater than 4.0mm diameter on PDA compared with that on AM and SN. The highest conidia production was on SN, and the predominant colony color in all media was white to beige with central pigmentation of brown and borders colored in shades of beige. There were significant differences among the average dimensions of micro- and macroconidia on PDA, AM, and SN. The pathogenicity was confirmed for all isolates despite of different morphophysiological characteristics. There was no correlation among isolates morphophysiological variability, virulence, and geographical origin.

O principal mecanismo que confere resistência do fungo Venturia inaequalis aos inibidores de oxidação (quinol QoIs) é a ocorrência de mutações no gene citocromo b CYTB (G143A). O objetivo do trabalho foi a implementação da metodologia RFLP-PCR para caracterizar a reação de isolados de V. inaequalis à presença de Qols. Foram utilizados sete isolados monospóricos de V. inaequalis, coletados em pomares comerciais de Santa Catarina e cedidos pela Estação Experimental da EPAGRI de São Joaquim, Santa Catarina. Os isolados foram classificados como sensíveis ou resistentes após crescimento em meio BDA contendo 10 µg.mL-1 de cresoxim metílico. Para determinação da presença da mutação G143A foram utilizados os marcadores específicos ViCytB-5F e ViCytB-6071R. O DNA dos isolados foi amplificado em reação de PCR e separado em gel de agarose 1,5%. Os fragmentos foram então digeridos com a enzima de restrição Fnu4HI identificadora da mutação e os produtos da digestão foram analisados por eletroforese num gel de agarose 1,0%. Os genótipos revelados estavam associados ao fenótipo estabelecido pelo crescimento dos isolados em presença do fungicida, mostrando que 6 isolados já apresentavam o alelo de resistência. O uso de técnicas de RFLP-PCR permitiram uma avaliação rápida e confiável na detecção da resistência de V. inaequalisao cresoxim metílico.

The principal mechanism in the fungus Venturiainaequalis which confers resistance to oxidation inhibitors (quinol QoIs) is the occurrence of mutations in the cytochrome b gene CYTB (G143A). The aim of this study was to implement the PCR-RFLP methodology to characterize the reaction of V. inaequalis isolates to the presence of QoIs. Seven monosporic isolates of V. inaequaliswere collected from commercial orchards in Santa Catarina and supplied by EPAGRI Experimental Station at São Joaquim, Santa Catarina. The isolates were classified as sensitive or resistant after their growth on PDA medium containing 10 μg.mL-1 kresoxim methyl. To determine the presence of G143A mutation, the specific markers ViCytB-5F and ViCytB-6071R were used. The DNA of isolates was amplified by PCR and separated on 1.5% agarose gel. The fragments were then digested with the restriction enzyme Fnu4HI, mutant identifier, and the digestion products were analyzed by means of electrophoresis on 1.0% agarose gel. The revealed genotypes were associated with the phenotype established by the growth of isolates in the presence of the fungicide, indicating that 6 isolates already had the resistance allele. The use of PCR-RFLP techniques allowed rapid and reliable assessment in the detection of V. inaequalis resistance to kresoxim methyl.

Estudos anatômicos e de ontogênese da abscisão foliar em pomáceas são escassos. A queda foliar promovida após formada a zona de abscisão é um processo natural nas pomáceas, e prolonga-se durante o outono, até que ocorram as primeiras geadas no Sul do Brasil. Ainda não se conhece até quando as folhas de macieiras permanecem funcionais. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma metodologia que permita estudar o início e o fim das zonas de abscisão foliar de macieiras. O trabalho foi realizado nas cultivares 'Galaxy' e 'Fuji' em pomares comerciais de macieira, de Vacaria, Rio Grande do Sul. O método proposto consistiu em coletar,ramos do ano, com 10cm a 20cm de comprimento, e utilizar um segmento contendo uma parte do caule, uma gema axilar e a base do pecíolo, descartando a parte das quatro folhas do ápice. Os segmentos foram fixados, seccionados e corados para a observação da zona de abscisão em microscopia óptica. Os resultados mostraram que a metodologia utilizada permitiu descrever a zona de abscisão em macieiras e que ela é formada por células alongadas com parede celular delgada, apresentando lignificação junto à parede celular. O processo manteve a gema intacta e ocorreu no sentido adaxial para o abaxial. A abscisão foliar natural, em plantas de Galaxy e Fuji em sintomas de doença e em condições ambientais favoráveis, pode ser acompanhada 7 e 14 dias antes e depois da colheita, e após, com intervalos de 14 e 21 dias até maio. A partir de maio, as coletas devem ser feitas semanalmente. Essas informações serão úteis na tomada de decisão para realizar práticas culturais e/ou de controle químico, para a manutenção das folhas sadias, resultando no maior acúmulo de reservas de carboidratos e/ou redução do número de aplicações de fungicidas.

Studies about anatomical and ontogeny of leaf abscission in pome fruit trees are scarce. The leaf fall occurs after the abscission zone is promoted, being a natural process in pome fruit, and it lasted from the fall until the first frost in southern Brazil. It is not known yet how long the leaves of apple trees remained functional. The aim of this study was to develop a methodology to study the beginning and the end zones of leaf abscission of Galaxy and Fuji apple trees. The study was conducted in commercial apple orchards in Vacaria, Rio Grande do Sul. The proposed method consisted of collecting branches to 10cm to 20cm in length, and use a segment containing a portion of the stem, an axillary bud and the base of the petiole, discarding the part of the four-leaf apex. The segments were fixed, sectioned and stained for observation of the abscission zone in optical microscopy. The methodology allowed the understanding of the abscission zone on apple trees. The abscission zone was formed by elongated cells with thin walls, presenting cell wall lignification. The process kept the bud intact and occurred from the adaxial to abaxial surface. The natural leaf abscission in Galaxy and Fuji plants without symptoms of disease and favorable environmental conditions , can be accompanied by 7 and 14 days before and after harvest, and after intervals of 14 and 21 days until May. From May, collections should be weekly. This information will be useful in making a decision to carry out cultural practices and / or chemical control, for the maintenance of healthy leaves, resulting in greater accumulation of carbohydrate reserves and / or reducing the number of fungicide applications.

O lenho mole da macieira é uma doença relevante em diversas partes do mundo. Sintomas típicos desta doença têm sido observados em pomares instalados em estados do sul do território brasileiro desde a década de oitenta. Enxertia tem revelado a natureza infecciosa da doença e a observação de corpúsculos filamentosos no floema tem evidenciado possível associação com fitoplasma. No presente trabalho plantas com sintomas de lenho mole foram coletadas em pomar comercial, visando demonstrar a presença de fitoplasma em tecido doente, bem como identificar molecularmente este fitoplasma. Através do emprego de duplo PCR com iniciadores universais R16mF2/R1 e R16F2n/R2, fitoplasma foi consistentemente detectado em plantas sintomáticas. A identificação conduzida com duplo PCR usando-se iniciadores específicos R16(III)F2/R demonstrou que o fitoplasma detectado pertencia ao grupo 16SrIII. Análises de RFLP conduzidas com as endonucleases AluI, KpnI, HinfI, HpaII, MseI, RsaI e SauIIIA confirmaram que o fitoplasma era um representante típico do grupo 16SrIII. A detecção e identificação molecular se constitui numa forte evidência que um fitoplasma está associado ao lenho mole da macieira no Brasil, complementando os trabalhos realizados anteriormente com transmissão por enxertia e observação por microscopia eletrônica .

Apple rubbery wood is an important disease occurring worldwide. Typical symptoms have been observed since 80' decade in orchards located in the South part of Brazil. In previous studies, grafting has evidenciated that the disease had infeccious etiology and visualization of filamentous bodies inside phloem had indicated that a phytoplasma could be associated with the disease. In the present study, plants with symptoms of rubbery wood were sampled in a commercial orchard in order to demonstrate the presence of phytoplasma in infected tissue and to identify molecularly that the organism. Using nested PCR with universal primers pairs R16mF2/R1 and R16F2n/R2, phytoplasma was consistently detected in symptomatic plants. Identification conducted with specific primer pair R16(III)F2/R1 in nested PCR demonstrated that the phytoplasma was a member of group 16SrIII. RFLP analyses with endonucleases AluI, KpnI, HinfI, HpaII, MseI, RsaI e SauIIIA confirmed that the phytoplasma was a representative of the group 16SrIII. The detection and molecular identification are strong evidences that a phytoplasma is associated with apple rubbery wood in Brazil and agrees with previous evidences using grafting and electron microscopy.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a distribuição da deposição de agrotóxicos pulverizados em duas cultivares de maçã (Malus domestica Borkh). Uma calda com traçador Rodamina B foi pulverizada, com equipamento do tipo carreta com cortina de ar, com dois tipos de calibrações. Em uma calibração foram utilizados bicos cones JA-1, JA-2 e JA-3 e na outra, bicos leque AVI 110 ISO-04 e bicos JA-1. Não houve diferenças entre as calibrações, mas a deposição nas plantas foi decrescente da região apical para a basal. Nas calibrações testadas, 25% do traçador aplicado perdeu-se no solo.

The objective of this work was to evaluate the distribution of pesticide deposition on two apple varieties (Malus domestica Borkh). Liquid spray with Rhodamine as tracer was sprayed by trailed aircarrier equipment, with two types of calibrations. In one of them it was used the JA-1, JA-2 and JA-3 cone nozzles, and in the other, AVI 110 ISO-04 fan nozzles and JA-1 cone nozzles. There were no differences among the calibrations, but the deposition on the plants decreased from the apical to the basal region. On all tested calibrations, 25% of the applied tracer was wasted on the soil.

A estrutura mais superficial da epiderme dos frutos é constituída por fina camada de cera, responsável por mecanismos de proteção, principalmente relacionados à evapotranspiração e ao ataque de patógenos. A visualização de cera por microscopia eletrônica de varredura apresenta dificuldades no processamento da amostra, pois os métodos rotineiramente utilizados ocasionam sérios danos a esta camada ou, simplesmente, provocam sua eliminação devido ao processo de solubilização causado pelos reagentes utilizados. Alguns autores têm utilizado temperaturas baixas (-90ºC) para o processamento de amostras. No Brasil, tentativas de observação de cera em maçãs, utilizando a microscopia eletrônica de varredura, têm sido realizadas; entretanto, os resultados não foram satisfatórios. No Laboratório de Microscopia Eletrônica da Embrapa Clima Temperado, foi adaptado um método simples e que tem apresentado bons resultados. Para este experimento, foram retiradas pequenas porções da casca de maçãs da região equatorial dos frutos. As amostras foram fixadas em lâminas histológicas, utilizando fita adesiva nas extremidades. Posteriormente, foram colocadas em dessecador contendo sílica gel, para que ocorresse a desidratação. Após 72 horas, foram retirados fragmentos para fixação em stubs e metalização com ouro. Foi usado um microscópio eletrônico ZEISS (DSM-940A), regulado à distância de trabalho de 15mm, voltagem de aceleração de 10 kV e ampliação de 3.000 X. As imagens obtidas permitiram avaliar a interferência dos fatores ambientais utilizados no processo de frigoconservação de maçãs.

The fruit epidermis is covered by a thin layer of wax which gives protection to the fruit, mainly against water loss and pathogenic organisms. Several studies using scanning electron microscope have been developed to study that wax. The wax layer visualization through the scanning microscope is difficult due to some problems of sample preparation. The usual procedures cause serious damages to the wax layer or even eliminate it because of its solubilization by some of the reagents. Several researchers have kept the samples at very low temperature (-90ºC) during the preparation. Wax observations in Brazil by using electronic scanning microscope have been performed, however in some of them results were not consistent. A relatively simple procedure at the Laboratory of Electron Microscopy at Embrapa Temperate Climate has been tried to overcome such difficulties. Such procedure consists of collecting a small piece of the fruit epidermis (1cm²) taken from the equatorial part of the apples. After sampling it the piece of epidermis is placed on a glass slide hold by the extremes with a sticky tape. The sample on glass slide is kept for 72 hours into a dessicator containing drierite for the sample dehydration. Then, small pieces of the sample (2 mm²) were taken and hold on stubs followed by metalization in gold. Following that, the sample is observed using a Zeiss (DSM - 940A) electronic microscope at a working distance of 15 mm and acceleration voltage of 10 KV. The obtained images made possible to evaluate the action of some experimental treatments which have been used on apples during cold storage.