Foram desenvolvidas metodologias para o estabelecimento e cultivo de raízes de Artemisia annua L. (híbrido CPQBA 2/39 x PL5). Estas raízes foram submetidas a diferentes condições de luz e a transformação genética com Agrobacterium rhizogenes (cepas 8196 e 15834). As raízes transgênicas e não-transgênicas (normais) foram cultivadas em meios de Murashige e Skoog (1962), mantidas sobre diferentes condições de fotoperíodo e analisadas para avaliação do conteúdo do composto antiulcerogênico dehidro-epideoxiarteanuína B (composto A). A confirmação do caráter transgênico das raízes foi obtida por Dot Blot. Os extratos dos materiais vegetais foram analisados por Cromatografia Gasosa acoplada a um Espectômetro de Massas (CG/EM). Os cromatogramas dos extratos das raízes normais revelaram a presença de dehidro-epideoxiarteanuína B e de um outro composto (composto B). As condições fotoperiódicas de cultivo influenciaram na produção destes dois compostos, sendo que sobre condição de escuro contínuo, dehidro-epideoxiarteanuína B foi intensamente produzido e o composto B foi detectado em pequenas proporções, enquanto que sob fotoperíodo de 16 horas, o inverso ocorreu. A quantificação de dehidro-epideoxiarteanuína B por Cromatografia Gasosa acoplada a um Detector de Ionização de Chamas (CG/FID) revelou um aumento de aproximadamente cinco vezes na produção deste composto pelas raízes normais cultivadas sobre escuro contínuo em relação às raízes cultivadas na presença de 16 horas de luz. O terpeno dehidro-epideoxiarteanuína B não estava presente nas raízes transgênicas.

Methodologies were developed for the establishment and cultivation of Artemisia annua L (CPQBA 2/39 x PL5 hybrid) roots submitted to light conditions and genetic transformation performed with Agrobacterium rhizogenes (15834 and 8196 strains). The transgenic and non-transgenic (normal) roots were cultured in Murashige and Skoog (1962) medium, kept under different photoperiodic conditions and analyzed for evaluation of the antiulcerogenic dihydro-epideoxyarteannuin B (compound A) contents. The Dot Blot technique was used to confirm the transgenic nature of the roots. The plants¢s crude extracts were analyzed by Gas Chromatography coupled to Mass Spectrum (CG/MS). The chromatograms of the extracts taken from normal roots revealed the presence of dihydro-epideoxyarteannuin B and other compound (compound B). Photoperiods during cultivation influenced the production of these two compounds: under continuous darkness dihydro-epideoxyarteannuin B was intensely produced and the compound B present in small amounts, while on 16 h photoperiod, the inverse occurred. The quantification of dihydro-epideoxyarteannuin B by Gas Chromatography coupled to Flame Detector Ionization (CG/FID) revealed an approximately fivefold increase in the production of this compound by normal roots kept under continuous darkness compared to roots kept under 16 h light period. The terpene dihydro-epideoxiarteannuin B was not present in transgenic hairy roots.

O estudo in vitro foi realizado a partir de sementes de S. allagophylla, colhidas de plantas crescidas na Reserva Biológica de Moji-Guaçu. Foram testadas duas interfaces da adaptação desta espécie às condições do cerrado: efeito do pH e das concentrações de nutrientes, utilizando o meio básico de Murashige & Skoog (MS) e o de Gamborg et al. (B5). Modificações do meio MS foram feitas em relação ao pH, com um gradiente de valores iniciais, indo do 4,2 ao 5,8 (intervalos de 0,2), e em relação aos nutrientes KNO3, KH2PO4 e MgSO4.7H2O, com concentrações progressivamente menores destes. Quanto ao meio B5 foi testada a composição nutricional nas concentrações totais e reduzidas à metade (B5 50%). Os resultados mostraram que as adaptações desta espécie do cerrado in vitro foram: todos os explantes, independente do valor inicial do pH, acidificaram o meio e o crescimento foi mais favorável em meios com menores valores iniciais de pH; o crescimento não foi afetado pela diminuição da concentração de nitrato e a redução da composição nutricional do meio B5 até promoveu o crescimento, principalmente quanto à expansão foliar; o crescimento foi similar tanto na presença como na ausência total de KH2PO4 e de MgSO4.7H2O (em relação ao meio MS). Estes resultados são consistentes com o conceito de uma planta bem adaptada em absorver nutrientes de solos de cerrado, solos estes ácidos, pobres em nutrientes e ricos em alumínio.

In vitro studies on S. allagophylla were carried out using, as a starting material, seeds collected from wild plants growing in "campo cerrado" vegetation at the Reserva Biológica e Estação Experimental de Moji-Guaçu, SP, Brazil. Two aspects of plant adaptation to cerrado conditions were tested in vitro: effect of pH and nutrient concentration, using the two traditional Murashige & Skoog (MS) e o de Gamborg et al. (B5) media. MS basic medium was modified in relation to pH by a gradient of initial pH values ranging from 4.2 to 5.8 at 0.2 pH unit intervals and with progressively lower concentrations of KNO3, KH2PO4 and MgSO4.7H2O. B5 medium was tested with standard or half-strength nutrients. Results shown that, in vitro, this material showed: increased growth in acid media and all explants cultivated in vitro regardless of the initial pH acidified the media; growth was not affected by the reduction of nitrate concentration and even B5 half-strength nutrients promoted growth, mainly in relation to leaf expansion; growth was the same in the complete presence or absence (in relation to the MS medium) of KH2PO4 and MgSO4.7H2O. These in vitro results are consistent with a plant well-adapted to absorbing nutrients in acid, nutrient-poor, aluminium-rich cerrado soils.