Resumo: A germinação é influenciada por diversos fatores, entre eles o pH. Para conhecer o efeito do pH da água de embebição na curva de aquisição de água das sementes de chincuya, assim como na germinação e compará-lo com o efeito conhecido daembebição em ácido giberélico, foram realizados dois experimentos. Em um primeiro ano decoleta de frutos, construíram-se as curvas de embebição com os tratamentos. As sementesdesta avaliação foram divididas em dois lotes: o primeiro com o conteúdo de umidade inicial(39.9%),e o segundo com sementes secas por três dias em laboratório (34.1% deumidade). As sementes foram embebidas por 84 horas em água destilada com três diferentes níveis de pH (5, 7 e 9) e foram mantidas em banho-maria a 30°C. No segundo ano de coleta foram repetidos os tratamentos de pH e acrescentado o tratamento de embebição com ácidogiberélico a 350mg L-1 (com pH 3.9) e a testemunha com água destilada (pH6.1). Nos dois anos de avaliação, as sementes receberam os tratamentos, foram incubadas em toalhas depapel e mantidas em condições controladas de temperaturas alternadas de 30°C dia e25°C noite,com 12h de fotoperíodo. Observou-se que as três curvas de aquisição de águamostraram comportamento semelhante e sem significância estatística; as sementes não aumentaram de peso depois da imersão, pois o conteúdo inicial de umidade era elevado. Nassementes com 34.1% de umidade, as curvas de aquisição de água tiveram aumento constantee o peso das sementes aumentou até cerca de 46% com o pH 9. Não houve diferençaestatística entre os tratamentos. A maior velocidade de aquisição de água ocorreu nasprimeras seis horas nas sementes secas ao ambiente e depois de 72 horas o peso dassementes não aumentou. A cinética da germinação média diária apresentou um lento e escassoprocesso germinativo. O ácido giberélico aumentou significativamente a germinação, promovendo 43% de germinação, enquanto com a testemunha absoluta se alcançou 5.7%. Com osdemais tratamentos não se observou germinação. Resumo fatores chincuya comparálo compará lo experimentos frutos construíramse construíram lotes inicial39.9%,e inicial399e iniciale 39.9% ,e 39 9 341 34 1 (34.1 deumidade. deumidade . deumidade) 8 5, 5 (5 banhomaria banho maria 30C C 30 mg L1 L L- 3.9 3 pH6.1. pH61 pH6.1 pH6 (pH6.1) e25C eC e25 noitecom noite h fotoperíodo Observouse Observou estatística imersão elevado 34.1 46 germinativo 43 57 5.7% inicial39 399 39.9 (34. ( 3. pH6. (pH6.1 e2 34. 4 5.7 inicial3 39. (34 (pH6. 5. (3 (pH6 (pH

Abstract: Germination is influenced by several factors, among them pH. Two experiments were conducted to determine the effect of imbibition-water pH on the water absorption curve of chincuya seeds and germination. The results were contrasted to the known effect of gibberellic acid imbibition. In the first year of fruit collection and evaluation, imbibition curves were constructed per treatment. The seeds of this evaluation were divided into two lots: the first at the initial moisture content (39.9 %) and the second at the moisture content of 34.1 % after three days of drying in the laboratory. The seeds were imbibed for 84 h in distilled water at three pH levels (5, 7, and 9) and kept in a water bath at 30 °C. In the second year of collection and evaluation, the pH treatments were repeated, and an imbibition treatment with gibberellic acid at 350 mg L-1 (pH 3.9) was added. A control treatment contained distilled water at pH 6.1. For both years, treated seeds were incubated on paper towels and placed under controlled conditions at a 12-hour photoperiod and alternating day and night temperatures (30 °C:25 °C). The three imbibition curves showed similar behavior and no statistical significance. Seeds with a higher moisture content did not gain weight after imbibition. The imbibition curves increased constantly in the seeds at 34.1 % moisture, and weight gain reached almost 46 % with the pH 9 treatment. However, there were no statistical differences among treatments. The highest rate of water absorption occurred in the first six hours in the open-air, dehydrated seeds, and after 72 hours, the weight of the seeds did not increase. Average daily germination kinetics indicated a slow and poor germination process. Gibberellic acid significantly promoted germination, causing 43 % germination. The absolute control reached 5.7 %, while the rest of the treatments did not promote germination. Abstract factors imbibitionwater lots 39.9 399 39 (39. 341 34 1 34. laboratory 8 5, 5 (5 7 3 C °C repeated 35 L1 L L- 3.9 added 61 6 6.1 years 12hour hour 12 (3 °C25 C25 25 °C:2 . °C) significance 4 However openair, openair open air, air open-air increase process 57 5. 39. (39 ( 3. 6. °C2 C2 2 °C:

Resumo No México, Annona purpurea Moc. &Sessé ex Dunal, a chincuya é encontrada em montanhas e em pomares domésticos. É utilizada como alimento (frutas), na medicina tradicional (folhas, caules, raízes, sementes, casca), como madeira na construção, na fabricação de papel e de cordas, carpintaria e como combustível. Não há informações suficientes sobre a semente, nem sobre o manejo da germinação, que é reduzida, prolongada e errática. Considerando que a dormência morfo-fisiológica seja a provável causa da dormência, considerou-se necessário, dentro de um projeto mais amplo, começar pela caracterização das sementes e pela determinação do efeito do armazenamento a seco e a quente sobre elas. O perímetro e o comprimento dos embriões aumentaram durante o armazenamento devido ao aumento do comprimento dos cotilédones e do eixo do hipocótilo radicular, enquanto a área do hipocótilo médio diminuiu, formando um embrião em forma de ‘cintura’. Esses dados indicam que os embriões de chincuya são subdesenvolvidos, uma vez que crescem e mudam de forma durante os armazenamentos seco e quente, até ao sexto mês. Este desenvolvimento do embrião dentro da semente, durante o armazenamento, confirma a presença de dormência morfológica. Este é o primeiro relato de crescimento embrionário e da caracterização de sementes de chincuya em armazenamento. México Moc Sessé Dunal domésticos frutas, frutas , (frutas) folhas, folhas (folhas caules raízes casca, casca casca) construção cordas combustível semente germinação reduzida errática morfofisiológica morfo fisiológica considerouse considerou se necessário amplo elas radicular diminuiu ‘cintura. cintura ‘cintura . ‘cintura’ subdesenvolvidos mês morfológica (frutas

Abstract In Mexico, Annona purpurea Moc. &Sessé ex Dunal, chincuya is found in mountains and family gardens. It is used as food (fruits), traditional medicine (leaves, stems, roots, seeds, bark), wood in construction, papermaking, carpentry, rope making, and as fuel. There is not enough information on the seed, nor on germination management, which is scarce, prolonged and erratic. Considering that the morphophysiological dormancy is the probable cause, it was necessary, within a broader project, to start with the characterization of the seed and determine the effect of dry warm storage (DWS) on it. The perimeter and length of the embryos increased due to the increase in length of the cotyledons and the hypocotil root axis, while the middle hypocotyl area decreased, forming an acinturated embryo. These data indicate that the embryos of chincuya are underdeveloped since they grew and modified their shape, due to the effect of DWS, until the 6th month. This development of the embryo within the seed during dry warm storage confirms the presence of morphological dormancy. This is the first report of embryo growth and characterization of chincuya seeds. Mexico Moc Sessé Dunal gardens fruits, fruits , (fruits) leaves, leaves (leaves stems roots seeds bark, bark bark) construction papermaking carpentry making fuel management scarce erratic cause necessary project DWS (DWS axis decreased shape th month (fruits

Abstract Developing new varieties of anthurium (Anthurium andreanum L.) by hybridization can take 8-10 years; therefore, induced mutagenesis can be an alternative strategy to hybridization. The objective of this work was to induce mutations in anthurium by exposing explants obtained from vitroplants to colchicine. Explants of leaves, nodes and roots obtained from vitroplants were exposed to 0.1 % colchicine for 0, 2, 3 and 4 h. The mean lethal dose (LD50), survival, number of explants that generated callus, number of explants that formed shoots and the number of shoots per explant were evaluated. The karyotype of the presumed mutated regenerated plants was determined by the root apex squash technique. The leaves showed the highest sensitivity to cochicine. The survival of the root explants treated with colchicine was 100 %; 4 % of roots exposed for 2 and 3 h formed adventitious shoots (120 shoots). For nodes, the LD50 was found at 3.98 h; 76 and 56 % of the nodes cultivated for 2 and 3 h with colchicine formed adventitious shoots (4.4 and 3.6 shoots). The plants regenerated from the explants exposed to colchicine showed morphological changes. The chromosomal number of the regenerated vitroplants from the explants exposed for 2 and 3 h to colchicine was 2n = 29, while that of those obtained from the explants that remained on the colchicine for 4 h was 2n = 31. The sensitivity to colchicine was a function of the type of explant and the dose used. Colchicine caused the loss (monosomy) or gain of chromosomes (trisomy).

Resumen Desarrollar variedades nuevas de anturio (Anthurium andreanum L.) mediante hibridación puede llevar entre 8 y 10 años; por ello, la mutagénesis inducida puede ser una estrategia alterna a la hibridación. El objetivo de este trabajo fue inducir mutaciones en anturio mediante la exposición a colchicina de explantes obtenidos de vitroplantas. Explantes de hojas, nudos y raíces provenientes de vitroplantas se expusieron a 0.1 % de colchicina durante 0, 2, 3 y 4 h. Se evaluaron la dosis letal promedio (DL50), la supervivencia, el número de plantas que generaron callo, el número de plantas que formaron brotes y el número de brotes por explante. El cariotipo de las plantas regeneradas por presunta mutación se determinó mediante la técnica squash en ápice de raíz. Las hojas presentaron la mayor sensibilidad a la colchicina. La supervivencia de los explantes de raíz tratados con colchicina fue de 100 %, y 4 % de las raíces expuestas durante 2 y 3 h formaron brotes adventicios (120 brotes). En el caso de los nudos, la DL50 se encontró a 3.98 h; 76 y 56 % de los nudos cultivados con colchicina por 2 y 3 h, respectivamente, formaron brotes adventicios (4.4 y 3.6 brotes). Las plantas regeneradas a partir de explantes expuestos a colchicina mostraron cambios morfológicos. El número cromosómico de las vitroplantas regeneradas a partir de explantes expuestos a colchicina durante 2 y 3 h fue 2n = 29, mientras que el de aquellas obtenidas a partir de los explantes que permanecieron en colchicina por 4 h fue 2n = 31. La sensibilidad a la colchicina fue una función del tipo de explante y la dosis utilizada. La colchicina causó la pérdida (monosomía) o la ganancia de cromosomas (trisomía).

Summary Sideoats grama [Bouteloua curtipendula (Michx.) Torr.] is one of the most widely cultivated forage species in semi-arid areas of the USA and Northern Mexico; it is an apomictic recalcitrant species with great forage attributes. The objective of this study was to evaluate pre-regeneration treatments using cytokinins to increase the frequency of regeneration. Induced morphogenic calli from mature caryopses of sideoats grama cv. El Reno cultured on basal Murashige and Skoog (MS) medium and supplemented with three levels of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) (2, 3 and 4 mg L-1) in presence of 0.15 mg L-1 of 6-benzylaminopurine (BAP) were subjected to two cytokinins-based treatments prior to the regeneration process [BAP (MSB) and BAP-KIN-TDZ (MSBKT)] for 10 days, and subsequently transferred to regeneration medium MSBK (2 mg L-1 BAP and 1 mg L-1 kinetin) and sub-cultured every 20 days until completing the regeneration process. Data were analyzed by logistic regression, negative binomial and mixed model. Statistical differences (P ≤ 0.05) in callus induction frequency were recorded at different levels of 2,4-D, the highest being 2 mg L-1 showing the highest. Pretreatment based on MSB improved plantlet regeneration response as the level of 2,4-D increased in calli induction treatments, while lower levels increased the frequency of calli development. The highest regeneration response was observed in calli induced at 3 and 4 mg L-1 of 2,4-D (P ≤ 0.05). Pretreatments with cytokinins proved to be a key factor for regeneration of sideoats grama cv El Reno plantlets.

Resumen El pasto banderita [Bouteloua curtipendula (Michx.) Torr.] es una de las forrajeras más cultivadas en zonas semiáridas de EUA y norte de México; es una especie apomíctica recalcitrante con grandes atributos forrajeros. El objetivo del presente estudio fue evaluar tratamientos de pre-regeneración usando citocininas para incrementar la frecuencia de regeneración. Callos morfogénicos inducidos de cariópsides maduros de Banderita cv. El Reno, cultivados en medio basal de Murashige y Skoog (MS) y suplementados con tres niveles de ácido 2,4 diclorofenoxiacético (2,4-D; 2, 3 y 4 mg L-1) en presencia de 0.15 mg L-1 de 6-bencilaminopurina (BAP) se sometieron a dos tratamientos previos al proceso de regeneración con citocinina [(BAP (MSB) y BAP+KIN+TDZ (MSBKT)] durante 10 días, y posteriormente transferidos a medio de regeneración MSBK (2 mg L-1 BAP y 1 mg L-1 de cinetina) y subcultivados cada 20 días hasta completar el proceso de regeneración. Los datos se analizaron por regresión logística, binomial negativa y modelo mixto. Diferencias estadísticas (P ≤ 0.05) en frecuencia de inducción de callos se registraron a diferentes niveles de 2,4-D, siendo la más alta la de 2 mg L-1. El pretratamiento basado en MSB mejoró la respuesta de regeneración de plántulas conforme se incrementó el nivel de 2,4-D en los tratamientos de inducción de callos, mientras que niveles menores incrementaron la frecuencia de desarrollo de callos. La mayor respuesta de regeneración se observó en callos inducidos con 3 y 4 mg L-1 de 2,4-D (P ≤ 0.05). El pretratamiento con citocininas fue clave en la regeneración de plántulas en callos de pasto Banderita cv. El Reno.

RESUMEN La variedad de café Colombia (Coffea arabica L.) tiene alta resistencia a la roya y buenas características de producción y calidad de taza. Diversos protocolos para la propagación de café mediante embriogénesis somática han sido desarrollados; sin embargo, la tasa de maduración, germinación y conversión es baja. El objetivo de la presente investigación fue determinar el efecto de reguladores del crecimiento y agentes osmóticos en la maduración y germinación de embriones somáticos de café y evaluar, en condiciones ex vitro, las características fisiológicas de las plantas regeneradas. Para su maduración, embriones globulares y torpedo temprano se cultivaron en un medio Yasuda et al. (1985) con distintas concentraciones de ácido abscísico (ABA) (2-4 mg L-1), ácido salicílico (ASA) (1.38 g L-1), ácido giberélico (AG3) (0.7-1.0 mg L-1), ácido indolacético (AIA) (0.3-0.5 mg L-1), polietilenglicol 8000 (PEG 8000) (50-75 g L-1) o sacarosa (50-80 g L-1). Para su germinación, los embriones maduros fueron transferidos a un medio con 0.25 mg L-1 de AIA y 0.25 mg L-1 de 6-bencilaminopurina (BAP). Las plantas se aclimataron y crecieron en perlita:turba:tezontle (1:1:1) o turba:tezontle (2:1) en condiciones de invernadero. El valor máximo de maduración y germinación de los embriones globulares se observó al adicionar 50 g L-1 de sacarosa al medio (81.7 y 53.9 % respectivamente). Para los embriones torpedo temprano el porcentaje de maduración más alto se registró con 80 g L-1 de sacarosa (19.2 %) o una combinación de 1.0 mg L-1 de AG3 y 0.5 mg L-1 de AIA (45.0 %); sin embargo, los porcentajes de germinación no fueron significativamente distintos del testigo. El potencial osmótico de los embriones no estuvo directamente relacionado con su grado de madurez. La totalidad de las plantas cultivadas en las mezclas de sustratos sobrevivieron y mostraron ser morfológica y fisiológicamente normales bajo condiciones ex vitro.

SUMMARY The Colombia coffee variety (Coffea arabica L.) has high resistance to rust and good production characteristics and cup quality. Several protocols have been developed for the propagation of coffee by somatic embryogenesis; however, the rate of maturation, germination and conversion is low. The objective of this study was to determine the effect of growth regulators and osmotic agents on the maturation and germination of coffee somatic embryos and to evaluate, under ex vitro conditions, the physiological characteristics of the regenerated plants. For maturation, globular and early torpedo embryos were cultured on a Yasuda et al. (1985) medium with different concentrations of abscisic acid (ABA) (2-4 mg L-1), salicylic acid (SA) (1.38 g L-1), gibberellic acid (AG3) (0.7-1.0 mg L-1), indoleacetic acid (AIA) (0.3-0.5 mg L-1), polyethylene glycol 8000 (PEG 8000) (50-75 g L-1) or sucrose (50-80 g L-1). For germination, the mature embryos were transferred into a medium with 0.25 mg L-1 of IAA and 0.25 mg L-1 of 6-benzylaminopurine (BAP). The plants were acclimatized and grown on perlite:peat:volcanic rock (1:1:1) or peat:volcanic rock (2:1) under greenhouse conditions. The maximum value of maturation and germination of globular embryos was observed when 50 g L-1 of sucrose were added to the medium (81.7 y 53.9 % respectively). For early torpedo embryos, the highest percentage of maturation was recorded with 80 g L-1 of sucrose (19.2 %) or a combination of 1.0 mg L-1 GA3 and 0.5 mg L-1 of IAA (45.0 %):however, the germination percentages were not significantly different from the control. The osmotic potential of the embryos was not directly related to their degree of matu-rity. All the plants grown on the substrate mixtures survived and were morphologically and physiologically normal under ex vitro conditions.

Abstract The diversity of maize (Zea mays L.) in Mexico is wide and there is still a need to carry out works that allow to discern the variation within and between racial groups and establish collections of racial reference for their understanding. The morphological diversity of representative populations of 10 mexican maize races was assessed. In the spring-summer cycle of 2010, experiments were established with 88 representative accessions of Bofo, Celaya, Coscomatepec, Dulce de Jalisco, Elotes Occidentales, Mushito, Palomero de Jalisco, Serrano de Jalisco, Tablilla de Ocho, and Zamorano Amarillo races, in the localities of Roque, Guanajuato and Ciudad Guzmán, Jalisco, under an experimental design of incomplete blocks, 30 morphological characters were measured. The analysis of variance indicated significant differences among the accessions for all the characters (variables). The repeatability analysis showed that 16 characters had a coefficient ≥ 3.0, these were the least affected by the environment. In the analysis of main components and conglomerates, variation within and between races was observed, with a continuous dispersion, but which allowed the identification of four racial complexes. Group I was made up of accessions mainly from Bofo, Celaya II, Dulce de Jalisco III and Elotes Occidentales IV, the remaining races are mostly added in group II as subgroups. This study confirmed clustering of accessions in well-defined races and represented in germplasm banks. It is necessary to conduct deeper studies in races with few accessions to achieve a better racial definition.

Resumen La diversidad del maíz (Zea mays L.) en México es amplia y aún existe la necesidad de llevar a cabo trabajos que permitan discernir la variación dentro y entre grupos raciales y establecer colecciones de referencia racial para su entendimiento. Se valoró la diversidad morfológica de poblaciones representativas de 10 razas de maíz de México. En el ciclo primavera-verano de 2010 se establecieron experimentos con 88 accesiones representativas de las razas Bofo, Celaya, Coscomatepec, Dulce de Jalisco, Elotes Occidentales, Mushito, Palomero de Jalisco, Serrano de Jalisco, Tablilla de Ocho, y Zamorano Amarillo, en las localidades de Roque, Guanajuato y Ciudad Guzmán, Jalisco, bajo un diseño experimental de bloques incompletos, se midieron 30 caracteres morfológicos. El análisis de varianza indicó diferencias significativas entre las accesiones para todos los caracteres (variables). El análisis de repetibilidad reflejó que 16 caracteres presentaron un coeficiente ≥3, éstos fueron los menos afectados por el ambiente. En el análisis de componentes principales y conglomerados hubo variación dentro y entre razas, con una dispersión continua, que permitió identificar cuatro complejos raciales. El grupo I lo integraron accesiones de Bofo, el II de Celaya, el III de Dulce de Jalisco y el IV de Elotes Occidentales, las razas restantes se agregan en su mayoría en el grupo II como subgrupos. Este estudio confirmó agrupamientos de accesiones en razas bien definidas y representadas en los bancos de germoplasma. Es necesario realizar estudios más profundos en razas con pocas accesiones para lograr una mejor definición racial.

Resumen Para los próximos 100 años se pronostica un incremento en la temperatura del planeta de casi 4 °C, lo cual pondrá en riesgo las especies que no logren adaptarse. En esta investigación se determinaron las respuestas morfofisiológicas de F. mexicana y los cambios en la población de bacterias fijadoras de nitrógeno atmosférico (BFN) asociadas a sus raíces, debido a dos condiciones ambientales con diferencias medias de temperatura de 5.1 oC: invernadero (temperatura alta, TA) y campo abierto (temperatura baja, TB); y con cuatro tratamientos: sin inocular (T), inoculadas con la cepa ocho (CP8), cepa cuatro (CP4) y con ambas cepas (CP8 + 4). Las BFN fueron aisladas de la rizosfera de F. mexicana y transformadas genéticamente con reporteros, para cuantificar la población al final del experimento. Se midió el peso seco de la parte aérea y la raíz, la tasa de asimilación de CO2 (A), el inicio de la floración, el número de flores y frutos; y la persistencia de las bacterias fijadoras de N atmosférico (BFN). Además, se evaluó la concentración de NO3, NH4, P y materia orgánica (MO) en el sustrato, al inicio y final del experimento. Las plantas sometidas a alta temperatura presentaron mayor peso seco de la parte aérea y fotosíntesis; con una disminución en el peso seco de la raíz, y en el número de flores y frutos. La MO en el sustrato disminuyó, mientras que la disponibilidad de NO3, NH4 y P aumentó. El incremento de temperatura y la mayor presencia de N en el substrato provocaron reducción en la población de BFN. Estos resultados sugieren que temperaturas altas estimulan el crecimiento de F. mexicana y tienen un impacto negativo sobre su reproducción y en las BFN asociadas a sus raíces.

Abstract The earth could experience a warming of 4 °C in the next one hundred years. This would put at risk the plants that can´t adapt. Fragaria mexicana is an endemic plant of temperate forest of Mexico. The response of this wild strawberry to temperature increasing has not been studied and could play an important role for event of global warming. This study determinate the morphological and physiological responses of F. mexicana and changes in the N2-fixing bacteria (BFN) population on its roots, due to two environmental conditions with differences of temperature 5.1 °C: greenhouse (high temperature, TA) and open land (low temperature, TB); and with four free-living nitrogen-fixing bacteria (BFN) treatments: non-inoculated (T), inoculated with strain eight (CP8), strain four (CP4), and strains eight and four mixed (CP8 + 4). BFN were isolated from the rhizosphere of F. mexicana and were genetically transformed with reporters to quantify the population at the end of the experiment. NO3, NH4 and P and organic matter (MO) in the substrate were determined at beginning and finish of the experiment. Shoot and root dry weight, photosynthetic rate, flowering and fructification starting, flowers and fruits number, were measured. Shoot dry weight and photosynthetic rate were lower in TB than TA, decreasing 3.1 g and 0.94 µmol m-2 s-1, respectively. Root dry weight was 3.0 g less in TA compared with TB. Number flowers decrease in 40.89 % and number fruits in 38.11 % on TA than TB. F. mexicana plants start flowering 14 days previously in TB than TA. MO in the substrate decrease in TA, while the concentration of NO3, NH4 and P, increased. Population of BFN was lower in TA. Results obtained indicated that higher temperature promotes the growth of F. mexicana and reduce its reproduction and BNF population associated with its roots.

ABSTRACT Selenium decreases cellular damage caused by oxidative stress and improves the organism physiological response. Leukocytes were evaluated during embryonic development in ewes with consumption of organic selenium. A total of 27 local ewes at the municipality of San Andrés Chiautla, Mexico State, with an average age of 2.5 years, were randomly assigned in two groups, 11 in control group (without Selenium, S-Se) and 16 with oral selenium (C-Se; selenium-enriched yeast) addition at dose of 0.3 ppm, for a period of seven days before Artificial Insemination (AI) consuming a diet based on alfalfa and corn stubble. White cell differential counting was performed on blood smears. Samples were taken before, during and after selenium treatment. Data were analyzed by mixed model, showing significant differences by treatment and time (p ≤ 0.05) in neutrophils; day 9 of embryonic development (5.91 ± 0.89 y 2.11 ± 0.46; S-Se y C-Se, respectively) and basophils amount was at day -3 (1.85 ± 0.31 y 1.05 ± 0.23). Regarding lymphocytes and eosinophils, they showed a difference in time (p ≤ 0.05) but not by treatment (p ≥ 0.05). It is concluded that selenium decreases the number of neutrophils and basophils; after blastocyst formation and four days after starting organic selenium treatment.

RESUMEN El selenio contrarresta el daño celular causado por estrés oxidativo y mejora la respuesta fisiológica del organismo. En este estudio se evaluaron leucocitos durante el desarrollo embrionario de ovejas como respuesta al selenio orgánico. Veintisiete ovejas locales del municipio de San Andrés Chiautla, Estado de México, con edad promedio de 2.5 años, se asignaron al azar en dos grupos, 11 en grupo testigo (sin selenio; S-Se) y 16 con adición de levadura enriquecida con selenio (selenio orgánico; C-Se) a dosis de 0.3 ppm, vía oral por período de siete días antes de la Inseminación Artificial (IA) consumiendo una dieta a base de alfalfa achicalada y rastrojo de maíz. Se realizó conteo diferencial de células blancas; en frotis sanguíneos realizados antes, durante y después del tratamiento de selenio. Los datos se analizaron mediante modelo mixto, mostrando diferencias significativas por tratamiento y tiempo (p ≤ 0.05) en neutrófilos; el día 9 del desarrollo embrionario (5.91 ± 0.89 y 2.11 ± 0.46; S-Se y C-Se, respectivamente) y basófilos el día -3 (1.85 ± 0.31 y 1.05 ± 0.23). En cuanto a los linfocitos y eosinofilos mostraron diferencia por tiempo (p ≤ 0.05) pero no por tratamiento (p ≥ 0.05). Se concluye que el selenio disminuye el número de neutrófilos y basófilos; después de formarse el blastocisto y cuatro días después de iniciado el tratamiento con Selenio.

Abstract. Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas), causal agent of Huanglongbing disease (HLB), and the Citrus tristeza virus (CTV)constitute a serious threat to Mexican citriculture because its endemic status in limes in several regions of the Pacific coast and also for the recent detection of severe strains, respectively. The identification and cloning of some genes related to the Systemic Acquired Resistance (SAR) of the plant could help to confront the diseases as an integrated management strategy. This work had the objective of cloning specific genes inherent to the plant as a first step to obtain transgenic citrus plants putatively resistant to CLas. The genes were selected based on the response of citrus plants to a wide range of pathogens, they were; a regulating gene for salicylic acid signaling (SA) as the inducer gen Azelaic Acid Induced 1 (AZI-1), a Citrus Non-Race-Specific Disease Resistance 1 (CsNDR-1) and a pathogenesis related protein 1 gen (PR-1). These three genes (AZI-1, PR-1 and CsNDR-1) were independently inserted into pUC118-FMV-Poly-2-1, subsequently they were subcloned individually into the vector pCAMBIA 2301 while gene AZI-1 was only cloned into pCAMBIA 2201. The CsNDR-1 construct was cloned into Agrobacterium tumefaciens strains EHA5 and AgL1 while genes AZI-1 and PR-1 could not be inserted into these strains of Agrobacterium. These constructions are the first step to be able to generate transgenic citrus as an alternative to face the HLB.

Resumen. Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas), agente causal del huanglongbing (HLB), y el Citrus tristeza virus (CTV) constituyen amenazas para la citricultura mexicana por su condición endémica en cítricos agrios de algunas regiones del pacífico y de focos recientes de razas severas, respectivamente. La identificación y clonación de genes relacionados con la Resistencia Sistémica Adquirida (RSA) de la planta podrían coadyuvar como parte de una estrategia de manejo integrado. Este trabajo tuvo como objetivo desarrollar construcciones con genes específicos inherentes a la planta como primera etapa en la generación de plantas transgénicas resistentes a CLas. Los genes seleccionados con base a la respuesta de cítricos a una amplia gama de patógenos, fueron AZI-1, 1-inductor del ácido ‘Azelaic’ y CsNDR-1, 1-resistencia no específica a enfermedades en cítricos, ambos genes reguladores de la señalización del ácido salicílico (SA), y el gen asociado con la síntesis de proteína 1 relacionada con la patogenicidad (PR-1). Los tres genes (AZI-1, PR-1 y CsNDR-1) se insertaron independientemente en pUC118-FMV-Poly-2-1. Posteriormente estos tres genes fueron subclonados individualmente en el vector pCAMBIA 2301, mientras que en pCAMBIA 2201 se clonó el gen AZI-1. La clonación de los genes en los vectores pCAMBIA2301 y pCAMBIA2201 permitió incorporar a las construcciones un gen de selección de transformación (35S-nptII-35S) y un gen reportero (35S-GUS-NOS). La construcción CsNDR-1 fue clonada en las cepas EHA5 y AgL1 de Agrobacterium tumefaciens. Los genes AZI-1 y PR-1 no se lograron integrar a estas cepas de Agrobacterium. Estas construcciones representan el primer paso para generar cítricos transgénicos como una alternativa para enfrentar a CLas y CTV.

Abstract The in vitro culture is a technique that has allowed the spread of different species of orchids, but the slow growth of this group of plants, and the cost of the minerals and the gelling agent (agar) used in the culture media, can limit its application. The aim of this research was to understand the effect of the composition of the culture medium and the use of substrates as agar substitutes for in vitro growth of Laelia anceps Lindl. And Epidendrum sp. Adventitious buds of both species were cultured in vitro in different substrates mixtures (perlite, volcanic rock and coir) and agar with different concentrations of Murashige and Skoog basal salts (50 and 100%) and gibberellic acid (AG3) (0 and 1 mg L-1) to evaluate its length, number of leaves, number of roots and fresh weight in an experimental design with three factors and 15 repetitions, each repetition consisted in a flask with 5 adventitious shoots. The in vitro behavior was based on the genotype L. anceps Lindl. that responded better tan Epidendrum sp. Outbreaks grown on perlite-volcanic rock or coir-volcanic rock, and médiums with 50% salts and AG3 showed no significant difference in terms of length, number of leaves, number of roots and fresh weight, with respect to those grown in agar, 100% salts without AG3. The culture médium with diluted with salts without AG3 and substrates as substitutes for agar, allowed the in vitro growth of L. plants anceps Lindl. And Epidendrum sp. plants with a significant 60% costs reduction.

Resumen El cultivo in vitro es una técnica que ha permitido la propagación de distintas especies de orquídeas, pero el lento crecimiento de este grupo de plantas, así como el costo de las sales minerales y del agente gelificante (agar) empleados en los medios de cultivo, pueden limitar su aplicación. El objetivo del presente trabajo, fue conocer el efecto de la composición del medio de cultivo y el uso de sustratos como sustitutos del agar en el crecimiento in vitro de Laelia anceps Lindl. y Epidendrum sp. Brotes adventicios de ambas especies se cultivaron in vitro en distintas mezclas de sustratos (perlita, tezontle y fibra de coco) y agar con diferentes concentraciones de las sales basales de Murashige y Skoog (50 y 100%) y ácido giberélico (AG3) (0 y 1 mg L-1) para evaluar su longitud, número de hojas, número de raíces y peso fresco en un diseño experimental con tres factores y 15 repeticiones, cada repetición consistio en un frasco con 5 brotes adventicios. El comportamiento in vitro, estuvo en función del genotipo; L. anceps Lindl. respondió mejor que Epidendrum sp. Los brotes crecidos sobre perlita-tezontle o fibra de coco-tezontle, y medios con sales al 50% y AG3 no mostraron diferencias significativas en cuanto a su longitud, número de hojas, número de raíces y peso fresco, con respecto a aquellos que lo hicieron en agar, sales al 100% y sin AG3. Los medios de cultivo con sales diluidas sin AG3 y sustratos como sustitutos del agar, permitieron el crecimiento in vitro de las plantas de L. anceps Lindl. y Epidendrum sp. con una reducción significativa del 60% de los costos.

Several basal MS culture media added with different auxins were tested on induced calli to promote normal plant regeneration, using mature caryopsis of sideoats grama Bouteloua curtipendula (Michx.) Torr. as explants. The induction media was supplemented with 2,4-diclorophenoxiacetic acid and several cytokinins. Basal MS + 2,4-D + BAP media supplemented with sorbitol (MI-13, MI-14) produced morphologically-viable regeneration calli. Potential highly embryogenic calli obtained from MI-14 were placed on different regeneration media. Medium MR-2 induced the highest plant regeneration frequency (95.8 %) as well as conversion efficiency (13.9 %). Green morphologically-normal plants were obtained on supplemented media added with kinetin (1 mg L-1), naphtalenacetic acid (0.2 mg L-1), and giberellic acid (0.2 mg L-1). Osmotic stress or hormonal balance due to sorbitol addition produced pro-embryo within soft calli and induced somatic embryos in sideoats grama. This is the first report of a plant regeneration protocol for this apomictic species.

En el presente estudio varios medios de cultivo con diferentes auxinas fueron establecidos para la regeneración de plantas normales en pasto Banderita Bouteloua curtipendula (Michx.) Torr., a partir de callos inducidos en cariópsides (explantes) maduros cultivados en medio MS basal suplementado con 2,4-ácido diclorofenoxiacético y varias citocininas. Los medios MS+2,4-D+BAP suplementados con sorbitol (MI-13, MI-14) dieron origen a callos con características morfogénicas con potencial de regeneración. Los callos embriogénicos obtenidos a partir de MI-14 fueron colocados en diferentes medios de regeneración, entre los que MR-2 mostró la mayor frecuencia de regeneración (95.8 %) y eficiencia de conversión (13.9 %). Plántulas verdes, morfológicamente normales, fueron obtenidas con medio suplementado con cinetina (1 mg L-1), ácido naftalenacético (0.2 mg L-1) y ácido giberélico (0.2 mg L-1). El estrés osmótico y el balance hormonal resultante de la adición de sorbitol, estimuló la formación de proembroides en callos friables y de embriones somáticos en pasto Banderita. Se presenta aquí el primer protocolo de regeneración en esta especie apomíctica recalcitrante, que pueda ser útil en trabajos futuros basados en técnicas de cultivo de tejidos.

Stevia rebaudiana Bertoni produce glucósidos diterpenoides (steviósidos) que pueden ser utilizados como edulcorantes dietéticos. La creciente demanda de esta planta requiere buscar nuevas alternativas de producción, tales como el cultivo de tejidos mediante micropropagación. Para la regeneración in vitro se utilizaron segmentos nodales como explantes, los cuales fueron cultivados en medio basal de Murashige y Skoog suplementado con distintas combinaciones de 6-benciladenina (2,0 a 4,0 mg·L-1), cinetina (1,3 a 8,0 mg·L-1) y ácido 3-indolacético (0,3 a 1,0 mg·L-1). El análisis estadístico mostró diferencias para el porcentaje de explantes que formaron brotes y el número de brotes formados, resultando inferior la combinación que contenía 2,0 mg.L-1 de cinetina y 0,5 mg·L-1 de AIA, en la cual sólo se obtuvo 29,41 % explantes con brotes y 1,40 brotes por explante. Las plantas lograron aclimatarse a las condiciones de invernadero en los primeros 15 días; después de 60 días el 81 % de ellas sobrevivieron, y cuatro meses más tarde formaron semillas. Asimismo, extractos obtenidos a partir de tejidos de plantas madre, plantas micropropagadas cultivadas en el invernadero y micropropagadas cultivadas in vitro se analizaron por cromatografía en capa fina para detectar la presencia de steviósidos. Se identificaron steviósido, steviol y rebudiósido A en la planta madre de Stevia, así como steviol y steviósido en plantas micropropagadas cultivadas en el invernadero y steviósido y rebaudiósido A en plantas cultivadas in vitro.

Stevia rebaudiana Bertoni produces diterpenoid glycosides (steviosides) which can be used as dietetic edulcorants. The growing demand for the plant requires the search of new production ways, such as tissue culture through micropropagation. For in vitro regeneration, nodal segments were used as explants which were cultured on Murashige and Skoog medium supplemented with different combinations of 6-benzyladenine (2.0-4.0 mg·L-1), kinetin (1.3- 8.0 mg·L-1) and 3-indoleacetic acid (0.3-1.0 mg·L-1). There were significant differences in the percentage of explants with shoots and number of shoots per explant, being the lowest the combination containing 2.0 mg·L-1 kinetin and 0.5 mg·L-1 IAA, which only showed 29,41 % explants with shoots, and 1.40 shoots per explant. The plants were able to acclimate to greenhouse conditions in the first 15 days; after 60 days 81 % of plants survived, and four months later those plants produced seeds. Extracts obtained from stock plant tissues, micropropagated plants cultured in the greenhouse and micropropagated plants cultured in vitro were analyzed by thin layer chromatography to detect the presence of steviosides. Stevioside, steviol and rebaudioside A were identified in extracts from stock plants, steviol and stevioside in micropropagated plants cultured in the greenhouse and stevioside and rebaudioside A in in vitro cultured plants.

Heliconias are asexually propagated through rhizomes and thus only few studies on their seed biology have been carried out so far. In this research we studied the anatomy of seeds and determined their abscisic acid and nutrient content, as well as their in vitro germination in four heliconia species: Heliconia bourgaeana, H. collinsiana, H. latispatha and H. psittacorum. The microscopical analyses of H. collinsiana and H. latispatha showed that, the seeds embryos appear without damages after a year of storage; conversely, the embryonic tissues of H. bourgaeana and H. psittacorum presented alterations. In these species we detected the presence of tannins and starch in endosperm, with tannins being more abundant in H. bourgaeana and H. psittacorum. ABA content was much higher in H. collinsiana (7.8 µg g-1 DM) than in the other species which had 0.26 µg g-1 DM or less. Contents of B, Ca, Fe, Mg, Mn and Zn were also higher in H. collinsiana, whereas the lowest contents of B, Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P and Zn were found in H. psittacorum. At 85 d after sowing the in vitro germination was 18, 30, 3 y 32 % in H. bourgaeana, H. collinsiana, H. latispatha and H. psittacorum, respectively. We conclude that the four species vary in the level of reserve consumption from endosperm, in the presence of tannins and starch, in ABA, and macro and micronutrients contents and in the percentage of in vitro germination.

Las heliconias se propagan asexualmente a través de rizomas y en consecuencia hay pocos estudios sobre la biología de sus semillas, las cuales son necesarias para generar variabilidad genética. En esta investigación se estudió la constitución interna de las semillas, los contenidos de ácido abscísico y de nutrimentos, y la germinación en cuatro especies de heliconias: Heliconia bourgaeana, H. collinsiana, H. latispatha y H. psittacorum. En semillas de H. collinsiana y H. latispatha analizadas al microscopio, los embriones aparecen sin daños después de un año de almacenamiento, mientras que en H. bourgaeana y H. psittacorum se observaron alteraciones del tejido embrionario. En las cuatro especies se detectaron taninos y almidón en endospermo, con mayor presencia de taninos en H. bourgaeana y H. psittacorum. El contenido de ABA fue mayor en H. collinsiana (7.8 µg g-1 MS) que en las demás especies que presentaron 0.26 µg g-1 MS o menos. El mayor contenido de B, Ca, Mg, Mn, Fe y Zn también se registró en H. collinsiana, y las menores concentraciones de B, Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P y Zn las presentó H. psittacorum. A 85 d después de la siembra la germinación in vitro fue de 18, 30, 3 y 32 % para H. bourgaeana, H. collinsiana, H. latispatha y H. psittacorum, respectivamente. Se concluye que las semillas de las cuatro especies de heliconias analizadas difieren en niveles de consumo de sustancias de reserva del endospermo, en presencia de taninos y de almidón, en contenido de ABA y nutrimentos, y en porcentaje de germinación.

During storage, seeds deteriorate due to mechanisms that reduce their germination rate, seedling growth rate and tolerance to adverse conditions. Seed deterioration can be measured by means of artificial aging tests (AA). In this research the artificial deterioration of husk tomato seeds (Physalis ixocarpa Brot.) var. 'CHF1-Chapingo' was evaluated, and the germination rate was correlated with fatty acids content and respiratory activity. In a first experiment, seeds were artificially aged by applying 55, 65 and 75 % of relative humidity (RH) at 45 and 50 °C, for 30 d and germination rate (G, %), seed vigor (radical emergence rate, RER) and fatty acids content (quantified by means of a gas chromatograph connected to a mass spectrometer) were evaluated. In a second experiment, seeds were aged by imposing 50, 55, 60, 65, 70, 75 and 80 % of RH at 50 °C for 30 d; G, RER and respiration rate (measured after 72 h of imbibition) were measured as response variables. It was found that linoleic acid was the most abundant fatty acid (87-93 % of the total content) in these seeds, and the increase of heat and relative humidity caused a significant reduction (P ≤ 0.05) in G and SER without affecting fatty acids content. Compared to untreated seeds (control), the combined effect of 50 °C and 65 % RH produced losses of 53 % in G and of 92 % in RER, in Experiment 1. The same treatment (50 °C and 65 % RH) induced losses of 21 % in G and of 78 % in RER when compared to responses at 50 °C and 50 % RH. The respiratory rate correlated with the losses in G (r = 0.88) and RER (r = 0.99), thus indicating that loss of physiological quality in deteriorated seeds can be attributed to the reduction in respiratory activity.

Durante el almacenamiento, mecanismos de deterioro de la semilla disminuyen la germinación, la velocidad de crecimiento de la plántula y la tolerancia a condiciones adversas. El deterioro se puede evaluar con pruebas de envejecimiento artificial (EA). En este trabajo se evaluó el deterioro artificial de semilla de tomate de cáscara (Physalis ixocarpa Brot.) de la variedad 'CHF1-Chapingo', y la respuesta germinativa se correlacionó con el contenido de ácidos grasos totales y la tasa de respiración de semillas completas. En un primer experimento se utilizaron semillas envejecidas artificialmente en 55, 65 y 75 % de humedad relativa (HR) a 45 y 50 °C, durante 30 d; se evaluó la germinación (G, %), el vigor (velocidad de emergencia de radícula, VER, radículas d-1), y el contenido de ácidos grasos cuantificado mediante cromatografía con espectrómetro de masas. En un segundo experimento se utilizaron semillas envejecidas artificialmente en 50, 55, 60, 65, 70, 75 y 80 % de HR a 50 °C, durante 30 d y se evaluó germinación, VER, y actividad respiratoria a 72 h de imbibición. Se encontró que el ácido linoleico fue el de mayor concentración (87-93 % del total de ácidos grasos) en estas semillas, y que el aumento de calor y humedad redujo (P ≤ 0.5) la G y la VER, pero no al contenido de ácidos grasos. En el Experimento 1 la combinación de 50 °C y 65 % de HR disminuyó la G en 53 % y a la VER en 92 %, con respecto al testigo no tratado. En el experimento 2, el tratamiento de 50 °C con 65% de HR disminuyó la G en 21 % t la VER en 78 %, con respecto al tratamiento de 50 °C con 50 % de HR. La actividad respiratoria correlacionó con la disminución de germinación (r = 0.88) y de VER (r = 0.99), por lo cual la pérdida de la calidad fisiológica de la semilla se atribuye a la disminución en la tasa de respiración.

Haploid plant regeneration is an important tool in breeding programs and genetics studies, since it helps obtain pure lines faster than conventional methods by the duplication of haploid plants. The aim of this study was to establish a methodology to regenerate haploid Miahuateco chili pepper plants (Capsicum annuum L.). Anthers were grown on Murashige and Skoog (1962); Chu et al. (1975) basal media, supplemented with 6-furfurylaminopurine (0.1-1 mg L-1), naphthaleneacetic acid (0.1 mg L-1), indolacetic acid (1 mg L-1), and 2-4 dichlorophenoxyacetic acid (1 mg L-1). Embryogenesis was induced in 2.23% of anthers grown in a combination of 6-furfurylaminopurine with 2-4 dichlorophenoxyacetic acid (1 mg L-1, of each), or indolacetic acid with 6-furfurylaminopurine (0.1 mg L-1 of each). Chromosome analysis of regenerated plants showed that they were haploids with a chromosome number of 2n= x= 12.

La regeneración de plantas haploides, es una herramienta importante en los programas de mejoramiento y estudios genéticos, ya que permite obtener líneas puras más rápido que los métodos convencionales a través de la duplicación de plantas haploides. El objetivo de este trabajo fue establecer una metodología que permita la regeneración de plantas haploides de chile tipo miahuateco (Capsicum annuum L.). Las anteras se cultivaron en los medios basales de Murashige y Skoog (1962); Chu et al. (1975), suplementados con 6-furfurilaminopurina (0.1-1 mg L-1), ácido naftalenacético (0.1 mg L-1), ácido indolacético (1 mg L-1) y ácido 2-4 diclorofenoxiacético (1 mg L-1). La embriogénesis se indujo hasta en 2.23% de anteras cuando se cultivaron en una combinación de 6-furfurilaminopurina con 2-4, diclorofenoxiacético (1 mg L-1 de ambos) o de ácido indolacético con 6-furfurilaminopurina (0.1 mg L-1 de ambos). El análisis cromosómicos de las plantas regeneradas mostró que eran haploides con número cromósomico 2n= x= 12.