RESUMO O vírus da imunodeficiência bovina é o agente causador da imunodeficiência viral bovina que é conhecido por infectar bovinos em todo o mundo. Como em outras infecções por retrovírus, os hospedeiros desenvolvem uma infecção de longo prazo e a maioria dos animais infectados permanece assintomática. O objetivo deste estudo foi detectar DNA proviral BIV em amostras de sangue de bovinos e estimar a ocorrência de infecção no estado de Minas Gerais, Brasil. Amostras de sangue de 391 bovinos foram coletadas de duas regiões do estado, Zona da Mata e Central. O DNA proviral foi detectado por reação em cadeia da polimerase semi-nested (SN-PCR). Os resultados de SN-PCR indicaram uma ocorrência de BIV de 12,5% no estado. Os produtos amplificados foram confirmados como BIV por sequenciamento e a similaridade da sequência de nucleotídeos com a estirpe de referência (R-29) foi de 99%. Este é o primeiro estudo que relata a presença do BIV em Minas Gerais, Brasil. Os resultados indicam a necessidade de realizar um estudo detalhado sobre a prevalência da infecção por BIV no Brasil.

Brucella ovis é uma das principais causas de epididimite em carneiros sexualmente maduros, resultando em subfertilidade e infertilidade e consequentes perdas econômicas para a ovinocultura em todo o mundo. O objetivo deste estudo foi desenvolver ELISA indireto (ELISAi), utilizando como antígeno proteínas recombinantes BoP59r e BP26r para diagnóstico da infecção por B. ovis. BoP59r e BP26r foram expressas em E. colie purificadas por cromatografia de afinidade e a antigenicidade testada por Western blot e ELISAi. A padronização do ELISAi foi realizada testando 500 ng e 1 µg de BoP59r e BP26r por poço e soros de carneiros infectados e não infectados. A BP26r foi eficiente em diferenciar ovinos negativos de positivos. O ELISAi com BP26 desenvolvido neste estudo foi o primeiro a utilizar BP26 completamente purificada como antígeno, resultando em elevada sensibilidade (100%) e sensibilidade (90,2%), com acurácia igual a 1,0.

Brucella ovis is a major cause of epididymitis in sexually mature rams, resulting in subfertility, infertility, and economic losses for the sheep industry worldwide. The aim of this study was to develop an indirect ELISA (iELISA) using recombinant proteins, namely rBoP59 and rBP26, as antigens for serological diagnosis of B. ovisinfection. The BoP59 and BP26 recombinant proteins were expressed in E. coli and purified by affinity chromatography. Antigenicity was tested by Western blot and iELISA. Standardization of iELISA was performed with 500ng and 1µg BoP59 and rBP26 per well, testing serum from uninfected and experimentally infected rams. rBP26 was effective in distinguishing positive from negative rams. The rBP26 iELISA developed in this study is the first to use a completely purified rBP26 as antigen resulting in high sensitivity (100%) and specificity (90.2%), and an overall accuracy equal to 1.0.

O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma PCR em tempo real (qPCR) para o diagnóstico rápido e sensível da doença de Aujeszky. Os iniciadores amplificaram um fragmento de 123 pares de base do gene codificante da glicoproteína D. A qPCR foi testada em 25 amostras de cérebro de suíno positivas e 85 amostras negativas para DA no isolamento viral e na soroneutralização. A sensibilidade analítica foi calculada com acréscimo de um isolado brasileiro do SuHV-1 titulado em amostras de cérebro de suíno negativas na soroneutralização e na PCR. A técnica apresentou sensibilidade analítica de 10-0,5 TCID50/50µL. A qPCR foi capaz de distinguir reações inespecíficas devido a dímero de oligonucleotídeos iniciadores ou amplificações, além do alvo designado (evitando, assim, os falso-positivos), e de obter resultados rápidos.

The aim of this study was to validate a low-cost real-time PCR for a quick and sensitive diagnosis of the disease. The fluorofore used was a DNA intercalating agent, one of the cheaper detection systems. Primers amplified a 123 base pairs fragment of the gene coding for glycoprotein D. PCR was tested on 25 samples of pig brain positive for AD and 85 samples negative in viral isolation and serum neutralization. The detection limit was calculated on samples of pig brain contaminated with a Brazilian isolate of SuHV-1. The technique had a detection limit of 10-0,5 TCID50/50µL. PCR was able to distinguish nonspecific reactions due to primer dimers (thus avoiding false positives) and get faster results.

Desenvolveu-se uma PCR multiplex (mPCR) para diagnóstico diferencial de encefalite bovina causada por herpesvírus suíno 1 (SuHV-1), herpesvírus bovino 1 (BoHV-1), herpesvírus bovino 5 (BoHV-5) e herpesvírus ovino 2 (OvHV-2). Os iniciadores foram projetados após alinhamento de sequências disponíveis no banco de genomas (GenBank) e a reação foi padronizada levando-se em consideração a concentração dos reagentes e os tipos diferentes de DNA polimerase. Após determinação da especificidade e sensibilidade, 65 amostras de encéfalo de bovinos com síndrome neurológica foram submetidas à análise. A sensibilidade analítica para detecção de BoHV-1, BoHV-5 e SuHV-1 foi, respectivamente, 10(1,2) TCID50/50µL, 10(1,0) TCID50/50µL, 10(1,3) TCID50/50µL na reação multiplex. Das 65 amostras analisadas, 10 foram positivas para BoHV-5, uma para BoHV-1 e cinco para OvHV-2. A mPCR descrita neste trabalho mostrou-se uma técnica útil para o diagnóstico diferencial de enfermidades relacionadas ao sistema nervoso central de bovinos.

The aim of this study was to develop a multiplex PCR (mPCR) for the differential diagnosis of bovine encephalitis caused by the suid herpesvirus 1 (SuHV-1), bovine herpesvirus 1 (BoHV-1), bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) and ovine herpesvirus 2 (OvHV -2). The primers were designed after alignment of sequences available in GenBank and the reaction was developed by taking into account the concentration of reagents and different types of DNA polymerase. After determining the specificity and sensitivity to PCR, 65 brain samples from cattle with neurological syndrome were submitted to the reaction. The analytical sensitivity for detection of BoHV-1, BoHV-5 and SuHV-1 was, respectively, 10(1,2) TCID50/50µL, 10(1,0) TCID50/50µL, 10(1,3) TCID50/50µL. Ten samples were positive for BoHV-5, one for BoHV-1, one for SuHV-1 and five for OvHV-2. The mPCR described here is a useful technique for the differential diagnosis of diseases related to the central nervous system of cattle.

Comparou-se a técnica nested PCR (nPCR) com os testes sorológicos IDGA e ELISA para o diagnóstico da anemia infecciosa equina. Amostras do DNA provenientes das células mononucleares do sangue periférico foram submetidas à amplificação do gene gag pela nPCR, que apresentou valores de sensibilidade e especificidade relativas de 90% e 52,9%, respectivamente, em relação à IDGA, e valores de 85,7% e 49%, respectivamente, em relação ao ELISA. Considerando-se os fatores referentes às limitações de cada técnica, pode ser sugerido o uso da nPCR como teste de diagnóstico complementar para AIE em amostras brasileiras.

The nested polymerase chain reaction (nPCR) technique was compared to AGID and ELISA serological tests for the diagnosis of Equine Infectious Anemia. DNA samples from the peripheral blood mononuclear cells were subjected to the amplification of the gag gene by nPCR, which showed relative sensibility and specificity values of 90.0% and 52.9% respectively, compared to the AGID and values of 85.7% and 49.0%, respectively, as compared to ELISA. Considering the factors concerning the limitations of each technique, the use of nPCR can be suggested as a complementary diagnostic test for EIA in Brazilian samples.

Investigou-se a ocorrência da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV) e pelo vírus da leucemia felina (FeLV) em gatos domésticos, provenientes de dois abrigos, no município de Belo Horizonte. Amostras de sangue de 145 animais foram coletadas e testadas para detecção do FIV pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Destas amostras, 40 foram testadas para o antígeno p26 de FeLV por meio de ELISA. Observaram-se duas fêmeas (1,4%) e quatro machos (2,8%) positivos para FIV e nove fêmeas (22,5%) e quatro machos (10,0%) positivos para FeLV.

The occurrence of the feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV) was investigated in domestic cats from two shelters of Belo Horizonte. Samples from 145 cats were collected and tested for FIV by the polymerase chain reaction (PCR). Forty out of 145 samples were tested for FeLV p27 antigen by a commercial ELISA kit. Two females (1.4%) and four males (2.8%) were positive for FIV. For FeLV tests, 13 cats (32.5%) were positive, being nine females (22.5%) and four males (10.0%).

Verificou-se a freqüência e a distribuição de eqüídeos soropositivos para arterite viral eqüina (AVE) em 10 Delegacias Regionais do IMA no estado de Minas Gerais, por meio da técnica soroneutralização. A taxa de animais reagentes foi 0,85% (7/826) e em cada Delegacia Regional: Almenara (0,77%), Montes Claros (1,09%), Oliveira (2,12%), São Gonçalo do Sapucaí (2,22%), Teófilo Otoni (1,36%) e Viçosa (1,72%). O presente estudo indica a presença de animais soropositivos para AVE em diferentes regiões do estado de Minas Gerais.

Estimaram-se, no estado de Minas Gerais, a prevalência e a distribuição espacial da anemia infecciosa eqüina (AIE) em propriedades com eqüídeos de serviço. As amostras de sangue, de 6540 eqüídeos de 1940 rebanhos foram coletadas no período de setembro de 2003 a março de 2004, nos 853 municípios do estado. Utilizaram-se dois testes de laboratório em seqüência: ELISA, usando-se antígeno recombinante gp90, e imunodifusão em gel de ágar (IDGA). As prevalências foram de 5,3% [IC=4,3 a 6,3%] para rebanhos e de 3,1% [IC=2,2 a 3,9%] para animais. O estado de Minas Gerais foi considerado área endêmica para AIE. As mais altas prevalências para rebanhos e para animais foram encontradas na região Norte/Noroeste, seguida pela região Vale do Mucuri/Jequitinhonha.

The prevalence and spatial distribution of equine infectious anemia (EIA) were estimated in livestock herds where equids were used as draft power and for transportation in the State of Minas Gerais, Brazil. Serum samples were collected from September/2003 to March/2004 in 853 municipalities of the state. The sample comprised 6,540 equids from 1,940 herds. Two laboratorial tests were performed in sequence: ELISA using a recombinant gp90 protein, following by the AGID. The prevalence in the herds was estimated in 5.3% [CI = 4.3 to 6.3%], and 3.1% [CI = 2.2 to 3.9%] of the animals tested were positive. Minas Gerais was considered an endemic region for EIA. The highest prevalence for herds and animals was found in North/Northwest region (strata) followed by Vale do Mucuri/Jequitinhonha region.

Foram analisadas as fichas de 9.963 eqüídeos do Acre, submetidos ao teste de imunodifusão em gel de ágar (IDGA) para anemia infecciosa eqüina (AIE), no período de 1986 a 1996. As regiões sócio-ecológicas da Bacia do Alto Juruá, Alto Acre e Alta Bacia do Purus apresentaram os maiores índices da doença, o que caracteriza a associação entre região e positividade. Essas áreas são fronteiriças com o Peru, Bolívia e o Estado do Amazonas, são distantes de Rio Branco, capital do Estado, onde muitas vezes é difícil o acesso pelas estradas, revelando serem áreas de risco. As regiões Oriental e Rio Branco apresentaram baixos índices de positividade. Não se observou diferença estatística entre animais positivos e negativos quanto à espécie, sexo, raça e idade.

Data from 9,963 formularies of equines from Acre State (1986-1996) examined for equine infectious anemia (EIA) by the AGID test were analyzed. The socio-ecological regions in Alto Juruá, Alto Acre and Alto Purus rivers basins showed the highest levels of disease, characterizing an association between these regions and positivity. These risk regions are border areas with the State of Amazonas, Peru and Bolivia, far from the capital city of the State of Acre (Rio Branco) and access by roads is often difficult. The regions Oriental and Rio Branco showed low levels of positivity. No differences were found regarding to animal species, sex, race and age.