Neste estudo, verificou-se a utilização de um filme de quitosana para o controle do crescimento e produção de aflatoxinas por A. parasiticus em amendoim. Os filmes foram aplicados sobre os grãos por meio de duas metodologias (aspersão e imersão). Os grãos recobertos foram inoculados com 2,5 ml de uma suspensão contendo 1,0×106 esporos/ml e incubados a 25 oC por 7 dias. A concentração de aflatoxinas foi determinada por cromatografia em camada delgada, utilizando a técnica de densitometria. A verificação da inibição do crescimento fúngico foi realizada por meio da inoculação do patógeno em placas de Petri contendo GYEP suplementado com quitosana a 2% e incubadas por 7 dias a 25 ºC. Após incubação, o diâmetro da colônia do patógeno foi estimado e comparado com o controle. Todos os testes foram realizados com cinco repetições. Para a verificação de alterações morfológicas, uma suspensão de esporos ou hifas incubados na presença de quitosana foi submetida à microscopia eletrônica de varredura. Foi observado que tanto o método de imersão quanto o de aspersão reduziram a produção de aflatoxina significativamente, 84,3% e 86,7% respectivamente. A presença de quitosana no meio de cultura reduziu o diâmetro das colônias e promoveu modificações morfológicas nos esporos de A. parasiticus. Com esse procedimento foi verificado que a utilização de quitosana a 2% na forma de filme, principalmente por aspersão, pode reduzir a concentração de esporos e aflatoxinas de A. parasiticus em amendoim, o que confere a essa substância uma grande perspectiva de utilização no controle de fungos aflatoxigênicos.

In this study, we evaluate the utilization on chitosan film to control the growth and aflatoxin production by A. parasiticus in peanut. The films were inoculated over the grains by aspersion or immersion methods. The chitosan coated grains were inoculated with 2.5 ml solution with 1.0×106spores/ml and incubated at 25 °C for 7 days. The aflatoxin concentration was estimated by thin layer chromatography and densitometry. The fungus growth inhibition was observed by pathogen inoculation in Petri dishes with GYEP media plus 2% chitosan and incubated by 7 days at 25 °C. After incubation the colony diameter was measured and compared with the control. All assays were repeated five times. To verify morphological alterations, a spore/hypha suspension was incubated in media with chitosan and observed in scanning electron microscopy.Both methods (immersion and aspersion) were able to reduce the aflatoxin production significantly, 84.3% and 86.7%, respectively. The chitosan reduced the colonies diameters and promoted morphological alterations in A. parasiticus spores. With this, was observed that a 2% chitosan film, specially inoculated by aspersion, can to reduce A. parasiticus spores and aflatoxins concentrations in peanuts. This characteristic gives to this substance an excellent perspective to be used in aflatoxigenic fungi control.

O aumento do consumo de produtos de origem natural tem ocasionado problemas de saúde pública devido ao risco da contaminação fúngica e a possível presença de micotoxinas. Objetivou-se, neste estudo, identificar as espécies fúngicas com potencial micotoxigênico e avaliar o efeito da irradiação gama (60Co) na destruição da microbiota fúngica natural de cinco plantas medicinais: Alcachofra (Cynara scolymus L.), Boldo (Peumusboldus Molina), Camomila (Matricaria recutita L.), Chapéu de couro (Echinodorusgrandiflorus Micheli) e Sene (Cassia acutifolia Delile). A quantificação de fungos filamentosos e leveduras foi efetuada pela Técnica de Diluição Seriada em meio DRBC. Em Camomila foram identificados 8 isolados de Aspergillus flavus, sendo 2 (25%) produtores de aflatoxina B1 e B2 e 5 isolados de Aspergillus ochraceus, sendo 2 (40%) produtores de ocratoxina A. Em Alcachofra foi identificado 1 isolado de Aspergillus ostianus produtor de ocratoxina A. Observou-se redução total da contagem de fungos em Boldo a partir de 3 kGy e em Chapéu de couro e Sene a partir de 5 kGy. Em Alcachofra, a contagem inicial de 5,0 x 10(6) UFC/g foi reduzida para 3,5 x 10² UFC com dose de 10 kGy. Nessa mesma dose a contagem fúngica em Camomila foi reduzida de 3,0 x 10(5) UFC/g para 2,2 x 10³ UFC/g.

The increasing consumption of natural products has brought about problems related to public health due to the risk of fungi contamination and the considerable possibility of mycotoxin presence. The aim of this work was to identify the fungi species with mycotoxigenic potential and to evaluate the effect of gamma irradiation (60Co) on killing the natural fungi microbiota of five medicinal plants: artichoke (Cynara scolymus L.), boldo (Peumusboldus Molina), chamomile (Matricaria recutita L.), burhead (Echinodorusgrandiflorus Micheli), and senna (Cassia acutifolia Delile). The qualification of filamentous fungi and yeast was carried out utilizing the Technique of Serial Dilutions on DRBC medium. Eight isolates of Aspergillus flavus were identified onchamomile, two (25%) beingproducers of aflatoxins B1 and B2 as well as five isolates of Aspergillus ochraceus, two (40%) being producers of ocratoxin. On artichoke, one isolate of Aspergillus ostianus was identified as ocratoxin A producer. A reduction on the total counting of fungi was observed in boldo with irradiation higher than 3 kGy, and in both burhead and senna with irradiation higher than 5 kGy. The initial counting on artichoke of 5.0 x 10(6) CFU/g experienced a reduction to 3.5 x 10² with doses of 10 kGy. With this same dose the fungi counting on chamomile was reduced from 3.0 x 10(5) CFU/g to 2.2 x 10³ CFU/g.

Aflatoxina M1 (AFM1) pode ocorrer em leite e produtos de leite, resultante da ingestão de aflatoxina B1 presente em rações de gado leiteiro. Um total de 88 amostras de queijo Parmesão, comercializadas no estado de Minas Gerais, Brasil, no período de março de 2004 a dezembro de 2004, foram analisadas para aflatoxina M1 por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector de fluorescência, precedida de purificação da amostra por coluna de imunoafinidade. AFM1 foi detectada em 40 das 88 amostras (46,4%). Entretanto, somente duas amostras entre estas estavam contaminadas em um nível acima do limite máximo permitido (250 ng kg-1), aceito pela Comunidade Européia para AFM1. O Brasil não apresenta tolerância máxima permitida para AFM1 em queijo.

Aflatoxin M1 (AFM1) may occur in milk and milk products, resulting from the ingestion of aflatoxin B1 in feedstuffs by dairy cow. A total of 88 samples of Parmesan cheese marketed in Minas Gerais state, Brazil, from March 2004 to December 2004, were analyzed for AFM1 by high-performance liquid chromatography (HPLC) with a fluorescence detector following sample clean-up using immunoaffinity columns. AFM1 was detected in 40 of the 88 samples (46.4%). However, only two samples among these were contaminated at a level above the maximum permissible limit (250 ng kg-1) accepted by European Union for AFM1. No AFM1 maximum tolerance limit in cheese has been established in Brazil.

An analytical study based on extraction with methanol-water, immunoaffinity cleanup and separation, identification and quantification of aflatoxin B1 by thin-layer chromatography,in ground black and white pepper and oregano was carried out. Validation of the applied methodology was done through accuracy and precision studies. Recoveries of aflatoxin B1 and relative standard deviations, from spice samples spiked at levels from 4.86 to 97.70 µg/kg, were, respectively, higher than 72% and lower than 20%. Application to spice samples available in Minas Gerais state, purchased at popular markets, showed no contamination with aflatoxin B1.

Foi verificado o efeito da irradiação gama (60Co) na capacidade de destruir a microbiota fúngica, em amendoim em grão, cultivar Tatu Vermelho, da safra 2003 (segundo semestre). Os grãos de amendoim, após a irradiação, foram mantidos à temperatura ambiente em embalagem plástica comercial, durante 180 dias. Para a determinação da porcentagem fúngica foi utilizada a técnica do plaqueamento direto utilizando o meio Ágar Dicloran Rosa de Bengala Cloranfenicol (DRBC), desinfetando ou não os grãos com solução de hipoclorito de sódio. Em grãos de amendoim irradiados e desinfetados externamente, observou-se redução da infecção fúngica a 5 kGy e destruição total de fungos a 10 kGy, após 180 dias de armazenamento à temperatura ambiente. Em grãos irradiados e não desinfetados externamente foram verificados, em função do tempo de armazenamento, aumento da população de fungos com a dose de 1 kGy, redução com a dose de 5 kGy e eliminação total com a aplicação de 10 kGy. A irradiação gama, na dose de 10 kGy ou superior, demonstrou ser um processo eficaz na redução da microbiota fúngica de amendoim em grão, cultivar Tatu Vermelho.

Gamma-irradiation effect was verified on the capability of destroying the mycoflora of peanuts grain, Tatu Vermelho cultivar, 2003 crop (second semester). The peanuts grains, after irradiation, were kept at room temperature in plastic bags during 180 days. To determine the percentage of fungi, the direct plating technique was used and the grains were plated out on mycological media dicholoran rose bengal chloranphenicol (DRBC), being desinfected or not with sodium hypochlorite solution. Irradiated and desinfected peanuts was observed a reduction of fungi infection at 5 kGy and total fungi destruction at 10 kGy, after 180 days in storage at room temperature. Irradiated and non desinfected grains showed a increase of fungi population with 1 kGy dose, reduction with 5 kGy dose and total destruction with 10 kGy dose. Gamma-irradiation in 10 kGy dose or higher, showed to be an efficient process to reduce the mycoflora of peanuts, Tatu Vermelho cultivar.

Análises de ocratoxina A em cervejas nacionais e importadas foram executadas por coluna de imunoafinidade e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detetor de fluorescência. Recuperações de ocratoxina A em amostras de cervejas contaminadas em níveis de 8.0 a 800pg/mL, foram de 81,2% a 95%, com coeficiente de variação entre 0% e 11%. O limite de detecção e o de quantificação foram 2.0pg/mL e 8.0pg/mL, respectivamente. De um total de 26 amostras fabricadas no Brasil, somente 6 (23%) apresentavam traços (pg/mL) de ocratoxina A. Das 4 amostras de cerveja importadas analisadas, em duas, Irlanda e Alemanha, foram detectadas ocratoxina A em níveis de 25pg/mL e 82pg/mL, respectivamente.

Analyses of ochratoxin A (OTA) in domestic and imported beers were perfomed by immunoaffinity column and high - perfomance liquid chromatography (HPLC) using a fluorescence detector. Recoveries of OTA from beer samples spiked at levels from 8.0 to 800pg/mL ranged from 81.2% to 95.0%, with coefficient of variation between 0% e 11.0%. Detection limit and quantification limit were 2.0pg/mL and 8.0pg/mL, respectively. Of the total of 26 samples produced in Brazil only 6 (23%), contained trace amounts of OTA. Of the 4 imported beers, in 2, Ireland and Germany, were detected OTA at levels of 25pg/mL and 82pg/mL, respectively.

O efeito da irradiação gama nos níveis de aflatoxina B1 e na infecção fúngica foram investigadas em amostras de amendoim, cultivar Tatu Vermelho. Dose de irradiação gama (60Co) de 10 KGy inibiu completamente o crescimento de fungos. Doses de 15, 20, 25 e 30 KGy foram suficientes para destruição de aflatoxina B1 de 55 a 74%. Pode-se concluir do presente trabalho, que a descontaminação de fungos por irradiação gama antes da produção de aflatoxina B1 é o método apropriado na preservação de amendoim.

The effect of gamma irradiation on aflatoxin B1 levels and fungal infection were investigated in peanut samples, Tatu Vermelho cultivar. At a radiation dose of 10 KGy, growth of molds was completely inhibited. Doses of 15, 20, 25 and 30 KGy were sufficient for destruction of aflatoxin B1 by 55-74%. The results suggested that the decontamination of molds by irradiation, before production of aflatoxin B1, is the most acceptable method in the preservation of peanut.

A comparação das técnicas de Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) e cromatografia em camada delgada (CCD) por quantificação visual e densitométrica foi utilizada na determinação de aflatoxina total, em amostras de milho naturalmente contaminadas. Os teores de aflatoxina total encontrados pelas técnicas de CCD e ELISA, apresentaram maior freqüência na faixa de 0-30 mig/kg e acima de 300 mig/kg. Os resultados das amostras apresentaram coeficiente de variação concentrados abaixo de 20, 30 e 40% para a técnica de ELISA e CCD com quantificação densitométrica e visual, respectivamente. Os coeficientes de correlação foram altamente significativos para as relações entre as quantificações visual e densitométrica (r = 0,9219; t = 26,36; p < 0,001), ELISA e visual (r = 0,8277; t = 17,58; p < 0,001), ELISA e densitometria (r = 0,7373; t = 13,01; p < 0,001), na determinação de aflatoxina total em todas as amostras de milho pesquisadas, confirmando haver equivalência das técnicas estudadas.

Two methods, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and thin layer chromatography (TLC) by visual and densitometric, were compared for determination of aflatoxins in corn samples. The highest incidence of total aflatoxin detected by those methods were ranged from 0-30 mug/kg and above 300 mug/kg. For aflatoxins B2, G1, G2 the levels were ranged from 0-30mug/kg. The samples results showed variation coefficient below of 20, 30 and 40% for ELISA and CCD with densitometric and visual quantification, respectively. The correlation coefficients were highly significative for the relation between visual quantification and densitometric (r = 0,9219; t = 28,36; p<0,001), ELISA and visual quantification (r =0,8277; t = 17,58; p< 0,001), ELISA e quantification densitometric (r = 0,7373; t=13,01; p< 0,001), in the total aflatoxin detemination of all corn samples. confirming the equivalence of the studied methods.

Produtos derivados de leite, como queijo, podem estar contaminados com aflatoxina M1 quando o gado leiteiro consome ração contaminada com aflatoxina B1. Amostras de queijo "Minas" ( frescal, canastra e padrão ) foram coletados pela Vigilância Sanitária de Minas Gerais - Brasil. Foi obtido um extrato purificado através de extração com diclorometano, seguido de lavagem com n-hexano e purificação em coluna de imunoafinidade. A quantificação da aflatoxina M1 foi feita por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) usando detetor de fluorescência. Os valores de recuperação foram em torno de 75%. A presença de aflatoxina M1 foi detectada em 56 das 75 amostras (74,7%) e a faixa de concentração observada foi 0,02 a 6,92ng/g de queijo. Dentre os valores positivos ( > ou = 0,02ng/g) a média de contaminação de aflatoxina M1 foi 0,08ng/g para queijo frescal, 0,36ng/g para queijo canastra e 0,62ng/g para queijo padrão. O Brasil não apresenta nível de tolerância máxima para aflatoxina M1 em queijo.

Milk products such as cheeses may be contaminated by aflatoxin M1 when dairy cattle have consumed feeds contaminated with aflatoxin B1. Samples of "Minas" cheeses (fresh, canastra and standard) were collected by the Inspection Service in the Mercado Central in Belo Horizonte city, Minas Gerais - Brazil. A purified extract was obtained by extraction with dichloromethane followed by a washing with n-hexane and immunoaffinity column purification. The quantification of aflatoxin M1 was done by high performance liquid chromatography (HPLC) using a fluorescence detector. Recoveries were about 75%. In 56 of the 75 samples (74.7%), the presence of aflatoxin M1 was detected in concentrations ranging between 0.02 and 6.92ng/g of cheese. In the positive cases ( > or = 0.02ng/g) the mean contamination level of aflatoxin M1 was 0.08ng/g in fresh cheese, 0.36ng/g in canastra cheese and 0.62ng/g in standard cheese. No aflatoxin M1 maximum tolerance level in cheese has been established in Brazil.

A ocorrência de ocratoxina A foi verificada em amostras de café solúvel e café torrado e moído, comercializados em Belo Horizonte/MG, no período de outubro/1998 a maio/1999. O método usado para a determinação de ocratoxina A foi a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em combinação com cromatografia de imunoafinidade. Os valores de recuperação e coeficiente de variação de ocratoxina A foram superiores a 73% e inferiores 15%, respectivamente. As amostras de café solúvel e café torrado e moído, continham níveis de ocratoxina A entre 0,31 e 1,78ng/g e 0,99 e 5,87ng/g, respectivamente. Os resultados revelaram que o café não apresenta níveis de contaminação significativos.

The occurrence of ochratoxin A was measured in soluble coffee samples and roast and ground coffee, market in Belo Horizonte / MG, between october/1998 and may / 1999. The method used for determining ochratoxin A was high performance liquid chromatography combined with immunoaffinity chromatography. Recoveries and coefficients of variation of ochratoxin A demonstrated levels above 73% and lower than 15%, respectively. Samples of soluble coffee and roast and ground coffee contained ochratoxin A at levels between 0,31 and 1,78ng/g and 0,99 and 5,87ng/g, respectively. The results showed that the contamination levels found in the coffee were not significant.

Foi verificada a incidência de aflatoxina M1 (AFM1) em 61 amostras de leite coletadas em Belo Horizonte / Minas Gerais - Brasil, no período de Agosto/ 98 - Abril/ 99. A quantificação foi feita por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) usando coluna de imunoafinidade como técnica de purificação. O limite de quantificação observado foi 6ng/L. As recuperações médias e coeficientes de variação foram superiores a 88,9% e inferiores a 22,4%, respectivamente. AFM1 foi encontrada em 50 (82%) das amostras analisadas, mas em níveis inferiores a 500ng/L, que é o limite máximo permitido no Brasil.

Sixty one samples of fluid and powder milk from Belo Horizonte / Minas Gerais - Brasil, period of August 98/April 99, were examined for aflatoxin M1. The quantification was done by high performance liquid chromatography using an immunoaffinity column for cleanup. The limit of quantification (LOQ) was 6 ng/L. Average recoveries and coefficients of variation were higher than 88,9% and lower than 22,4%, respectively. AFM1 was found in 50 (82%) of the analyzed samples, but at levels lower than 500 ng/L, which is the maximum limit permitted in Brazil.

Avaliou-se a produção de aflatoxina B1 pelo Aspergillus flavus IMI 190443, inoculado em sementes de genótipos de amendoim: Tatu Vermelho, VRR-245, 2117 e 2155, in natura e autoclavado a 1210 C por 20 minutos, previamente cultivados no Centro Experimental do Instituto Agronômico de Campinas, em 1995/96. A aflatoxina B1 foi quantificada por cromatografia em camada delgada, utilizando comparação visual com padrões. Os níveis de aflatoxina B1 das amostras autoclavadas e in natura dos genótipos Tatu Vermelho, VRR-245 e 2155 foram significativamente diferentes (p <0,05, Teste de Duncan) quando comparados aos níveis do genótipo 2117. O genótipo 2117, originário da Índia, apresentou independente do processo com e sem aquecimento os menores níveis de aflatoxina B1 em relação aos dos outros genótipos. Os resultados obtidos mostram perspectivas de exploração da resistência varietal no controle da aflatoxina.

The levels of aflatoxin B1 in postharvest peanuts were evaluated after inoculation of seeds of four different genotypes : Tatu Vermelho, VRR-245, 2117 e 2155 with Aspergillus flavus IMI 190443. Field trials were conducted in 1995/96 at the Experimenal Center of the Instituto Agronômico de Campinas. The postharvest seeds were used in natura or autoclaved at 121 oC for 20 minutes prior to inoculation with the mold. The aflatoxin B1 was quantified by thin layer chromatography (TLC) using a visual comparation with standards. The levels of aflatoxin B1 in autoclaved and in natura seeds were significantly different (p < 0,05) between the genotypes Tatu Vermelho, VRR-245, 2155 and the 2117. Samples of genotypes 2117, originating from India, presented the lowest levels of aflatoxin B1 irrespective of heating treatment or not, when compared with the others. The results show possibilities of doing explorations about the varietal resistance in the aflatoxin control.

Foi verificada a incidência natural de desoxinivalenol (DON) e toxina T-2 em 115 amostras de milho em grão, pós-colheita, procedentes de diferentes localidades do Brasil, Argentina e Paraguai, safra 1994/1995. Os grãos de milho foram obtidos da Associação Brasileira de Milho. DON foi extraído do grão com acetonitrila-água (84+16) e o extrato foi submetido a uma purificação em coluna de carvão ativo, alumina e Celite. A detecção foi feita por cromatografia em camada delgada, impregnando a placa com solução de cloreto de alumínio, aquecida após desenvolvimento e visualização em luz ultravioleta (366 nm). Para a toxina T-2, um método direto e competitivo de ELISA foi utilizado, após extração da amostra com metanol a 70%. As recuperações médias para o DON e toxina T-2 foram superiores a 70%. O limite de detecção foi cerca de 90 ng/g e 50 ng/g, para DON e toxina T-2, respectivamente. DON foi detectado em 7 das amostras (102-542 ng/g) e a toxina T-2 em uma amostra (104 ng/g).

One hundred and fifteen samples of postharvest corn from the 1994/1995 season, from different locations of Brasil, Argentina and Paraguay, were examined for deoxynivalenol (DON) and T-2 toxin. The samples were obtained from the Brazilian Corn Association. DON was extracted with acetonitrile - water (84 + 16) and the extract submitted to a cleanup on a charcoal - alumina - Celite colunm. The detection was performed on silica gel TLC plates impregnated with aluminum chloride solution. After development the plates were heated and examined under UV light (366 nm). An enzyme-linked immunoassay (ELISA), direct and competitive, was employed for the detection and quantitation of T-2 toxin. The average recoveries for DON and T-2 toxin were above 70%. The detection limits were 90 ng/g for DON and 50 ng/g for T-2 toxin. DON was found in 7 of the samples (102 - 542 ng/g) and T-2 toxin in one sample (104 ng/g).