Nos procedimentos de detecção de allexivirus em bulbos de alho, tem-se como rotina o plantio de bulbilhos para obtenção de tecido foliar a ser analisado via testes sorológicos e/ou moleculares. A disponibilização das plantas em casa de vegetação implica em gastos com a manutenção e requer, em média, 30 dias. Em áreas isentas desses vírus, corre-se, ainda, o risco de sua introdução e disseminação. No presente trabalho buscou-se ajustar um protocolo para detecção rápida de allexivírus em alho a partir de primórdios foliares. Bulbilhos de alho para consumo, oriundos do Rio Grande do Sul e importados da Argentina foram dissecados para obtenção de primórdios foliares e extração de RNA total a partir de 0,1 g de tecido. A seguir foram conduzidas reações de RT-PCR com um par de oligonucleotídeos, capaz de gerar um fragmento de aproximadamente 500 pb relativo à porção interna do gene da capa protéica de várias espécies do gênero Allexivirus. Uma banda com tamanho aproximado de 500 pb foi visualizada, em gel de agarose e, posteriormente, confirmada por Southern Blot e por seqüenciamento como sendo Garlic vírus C (GarV-C, AY170322.1). A obtenção de RNA total diretamente de primórdios foliares de bulbilhos e seu uso em análise de RT-PCR, constituem-se em uma metodologia econômica, rápida e segura para a detecção de allexivírus em bulbos de alho.
Cloves crop is a routinely practice often used in procedures for detecting allexiviruses in garlic bulbs to obtainment foliar tissue to be analyzed by serological and/or molecular tests. The availability of the plants under greenhouse implies is expenses with the maintenance and requires abaut 30 days. In areas free of these viruses, there is also the risk of their introduction and dissemination. This study presents an adjustment of protocol aiming a fast detection of allexiviruses, using primordial leaves. Cloves of consumption-garlic, from Rio Grande do Sul, Brazil, and imported from Argentina were dissected for obtaining primordial leaves and total RNA extraction, using 0,1g of tissue of each sample. RT-PCR reactions were performed with a pair of primers able to amplify a 500 bp fragment, corresponding to the internal region of the coat protein gene from several species of Allexivirus genus. A band in the expected height (500 pb) was visualized in agarose gels and further confirmed using Southern Blot test and by sequencing as Garlic virus C (GarV-C, AY170322.1). Total RNA obtained from foliar primordia of cloves and its use in RT-PCR analysis is an economic, fast and secure methodology for allexivirus detection in garlic bulbs.