ABSTRACT Acute kidney injury (AKI) induced by renal ischemia-reperfusion (I/R) generally leads to glomerular damage associated with the tubular injury characteristic of this disease. D-005, a lipid extract obtained from the fruit of Acrocomia crispa, prevents renal I/R-induced tubular injury. The aim of this work was to evaluate the effect of D-005 on histomorphometric changes in glomeruli of rat kidneys subjected to renal I/R. Forty-two male Sprague-Dawley rats were distributed into seven groups: a non-damaged group (negative control) and six groups subjected to renal I/R, previously treated with: vehicle (positive control), D-005 (25, 100, 200 and 400 mg/kg) and Dexamethasone (3 mg/kg). Renal I/R consisted on 30 min of bilateral ischemia and 24 h of reperfusion. Kidneys were processed according to the general histological technique. Glomerular morphology and morphometry were studied using Image J software. Negative control group was characterized by the presence of a glomerular structure within normal parameters, while positive control group showed thickening of the Bowman's capsule parietal layer, vascular dilation with segmentation of the capillary tuft, synechiae and narrowing of Bowman's space; as well as decrease of glomerular area. D-005 (25-400 mg/kg) diminished glomerular injuries caused by renal I/R and induced restoration of glomerular area. In conclusion, single oral treatments with D-005 prevented glomerular histopathological changes induced by renal I/R, which could be associated with previous findings of tubular protection, as well as the antioxidant and anti-inflammatory properties of this substance.

RESUMEN La lesión renal aguda (LRA) inducida por isquemia-reperfusión (I/R) renal generalmente conlleva a un daño a nivel glomerular asociado a la lesión tubular característica de esta enfermedad. El D-005, extracto lipídico obtenido del fruto de Acrocomia crispa, previene la lesión tubular inducida por I/R renal. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del D-005 sobre los cambios histomorfométricos en glomérulos de riñones de ratas sometidas a I/R renal. Se emplearon 42 ratas machos Sprague-Dawley distribuidas en siete grupos: un grupo sin daño (control negativo) y seis grupos sometidos a I/R renal, tratados previamente con: vehículo (control positivo), D-005 (25, 100, 200 y 400 mg/kg) y Dexametasona (3 mg/kg). La I/R renal consistió en 30 min de isquemia bilateral y 24 h de reperfusión. Los riñones se procesaron según la técnica histológica general. Se estudió la morfología y morfometría glomerular usando el programa Image J. El grupo control negativo se caracterizó por presentar una estructura glomerular dentro de los parámetros normales, mientras que el control positivo presentó engrosamiento de la capa parietal de la cápsula de Bowman, dilatación vascular con segmentación del penacho capilar, sinequias y estrechamiento del espacio de Bowman; así como disminución del área glomerular. El D-005 (25-400 mg/kg) disminuyó los daños glomerulares causados por la I/R renal e indujo la restauración del área glomerular. En conclusión, los tratamientos orales únicos con D-005 previnieron los cambios histopatológicos glomerulares inducidos por I/R renal, lo que puede estar asociado a los hallazgos previos de protección tubular, así como a las propiedades antioxidantes y antiinflamatorias de esta sustancia.

Resumo Introdução: Lesão renal aguda induzida por aminoglicosídeos é uma patologia intimamente ligada a reações oxidativas e inflamatórias. Considerando efeitos antioxidantes e anti-inflamatórios relatados anteriormente do D-005, um extrato lipídico de frutos da palmeira cubana Acrocomia crispa (Arecaceae), este trabalho avaliou efeitos do D-005 na LRA induzida por canamicina. Métodos: Dividiu-se ratos Wistar machos em 7 grupos: controle negativo (veículo, Tween 65/H2O) e seis grupos tratados com canamicina para induzir LRA: controle positivo (veículo), D-005 (25, 100, 200, 400 mg/kg) e extrato de semente de uva (ESU, 200 mg/kg). D-005, veículo, e tratamentos orais com ESU foram administrados uma vez por dia durante sete dias, 1 h antes da canamicina (500 mg/kg, i.p.). Avaliou-se concentrações séricas de ácido úrico e ureia, histopatologia renal e marcadores oxidativos (malondialdeído (MDA), grupos sulfidrila (SH), atividade de catalase (CAT)). Resultados: D-005 reduziu significativamente níveis de ácido úrico e ureia, partindo de D-005 100 mg/kg. Histopatologicamente, D-005, em todas as doses testadas, protegeu estruturas do parênquima renal (glomérulos, túbulos proximais e interstício). Estes achados foram acompanhados por uma redução significativa das concentrações de MDA e grupo SH, e pela restauração da atividade CAT. As maiores porcentagens de inibição foram obtidas com a dose de 400 mg/kg. ESU, a substância de referência, também evitou alterações bioquímicas e histopatológicas induzidas por canamicina, reduziu MDA e grupos SH e restaurou atividade CAT. Conclusão: A administração de doses orais repetidas de D-005 protegeu significativamente contra LRA induzida por canamicina, que pode estar associada aos efeitos antioxidantes e anti-inflamatórios deste extrato.

Abstract Introduction: Aminoglycoside-induced acute kidney injury (AKI) is a pathology closely linked to oxidative and inflammatory reactions. Taking into account the previous reported antioxidant and anti-inflammatory effects of D-005, a lipid extract obtained from Cuban palm Acrocomia crispa (Arecaceae) fruits, this work aimed to evaluate the effects of D-005 on kanamycin-induced AKI. Methods: Male Wistar rats were divided into 7 groups: negative control (vehicle, Tween 65/H2O) and six groups treated with kanamycin to induce AKI: positive control (vehicle), D-005 (25, 100, 200, and 400 mg/kg) and grape seed extract (GSE, 200 mg/kg). D-005, vehicle, and GSE oral treatments were administered once daily for seven days, 1 h before kanamycin (500 mg/kg, i.p.). Serum uric acid and urea concentrations, renal histopathology, and oxidative markers (malondialdehyde (MDA), sulfhydryl (SH) groups, and catalase (CAT) activity) were assessed. Results: D-005 significantly reduced uric acid and urea levels, starting from D-005 100 mg/kg. Histopathologically, D-005, at all the tested doses, protected renal parenchyma structures (glomeruli, proximal tubules, and interstitium). These findings were accompanied by a significant reduction of MDA and SH group concentrations as well as restoration of CAT activity. The highest percentages of inhibition were obtained with the dose of 400 mg/kg. GSE, the reference substance, also prevented kanamycin-induced biochemical and histopathological changes, as well as reduced MDA and SH groups and restored CAT activity. Conclusion: The administration of repeated oral doses of D-005 significantly protected against kanamycin-induced AKI, which could be associated with the antioxidant and anti-inflammatory effects of this extract.

ABSTRACT Oxidative stress is produced by the imbalance between the substances or factors pro-oxidant and the antioxidant defense mechanisms, which in turn plays an important role in the development and progression of various pathologies. D-005, lipid extract from the fruits of Acrocomia crispa contains a reproducible mixture of fatty acids, such as: oleic, palmitic, lauric, myristic, palmitoleic, caprylic, capric, and stearic that have antioxidant properties. The objective of this work is to evaluate the effect of D-005 administered as single oral doses on the increase in indicators of oxidative stress induced by carbon tetrachloride (CCl4) in rats. The animals were randomly distributed into seven groups: a negative control without damage and six groups to which CCl4 was administered (intraperitoneal): a positive control treated with vehicle, four with D-005 (5-100 mg/kg), and one with grape seed extract (ESU) (250 mg/kg). The animals in the positive control group (with CCl4) reached significantly higher values of malondialdehyde-marker of lipid peroxidation-, sulfhydryl groups-marker of protein oxidation- and serum transaminases-marker of liver damage- with respect to the animals of the negative control group (without damage). D-005 and ESU markedly and significantly prevented this increase. In conclusion, D-005 administered as single oral doses of 5, 25, 50, and 100 mg/kg inhibits lipid peroxidation and protein oxidation, as well as CCl4-induced liver damage.

RESUMEN El estrés oxidativo se produce por el desbalance entre las sustancias o factores pro-oxidantes y los mecanismos de defensa antioxidantes, el cual a su vez juega un papel importante en el desarrollo y progresión de diversas patologías. El D-005, extracto lipídico de los frutos de Acrocomia crispa contiene una mezcla reproducible de ácidos grasos, tales como: oleico, palmítico, laúrico, mirístico, palmitoleico, caprílico, caprico, y esteárico que presentan propiedades antioxidantes. El objetivo de este trabajo es evaluar el efecto del D-005 administrado como dosis orales únicas sobre el incremento de indicadores de estrés oxidativo inducidos por tetracloruro de carbono (CCl4) en ratas. Los animales se distribuyeron aleatoriamente en siete grupos: un control negativo sin daño y seis grupos a los cuales se les administró el CCl4 (intraperitoneal): un control positivo tratado con vehículo, cuatro con D-005 (5-100 mg/kg), y uno con extracto de semilla de uva (ESU) (250 mg/kg). Los animales del grupo control positivo (con CCl4) alcanzaron valores significativamente superiores de malondialdehido-marcador de peroxidación lipídica-, grupos sulfihidrilos-marcador de oxidación proteica- y transaminansas séricas-marcador de daño hepático- con respecto a los animales del grupo control negativo (sin daño). El D-005 y el ESU previnieron marcada y significativamente dicho incremento. En conclusión, el D-005 administrado como dosis orales únicas de 5, 25, 50 y 100 mg/kg inhibe la peroxidación lipídica y la oxidación proteica, así como el daño hepático inducidos por CCl4.

ABSTRACT Objectives. To investigate the effects of D-002, a mixture of 6 high molecular weight primary aliphatic alcohols, obtained from beeswax (Apis mellifera), on severe inflammatory ulcerative colitis (UC) induced by Dextran sulfate (DSS) and ethanol in rats (Ratus ratus). Materials and methods. Rats were randomly distributed in six groups: a zero control to which no damage was caused, and five to which the UC was induced: a negative control (vehicle), three treated with D-002 (25, 100 and 400 mg/kg) and a positive control with sulfasalazine (200 mg/kg) (reference substance). Clinical manifestations (body weight variation, diarrhea and rectal bleeding), macroscopic and histological damage score, and myeloperoxidase (MPO) activity were quantified. Results. The oral treatment with D-002 (25, 100 and 400 mg/ kg) significantly prevented the decrease in body weight. The dose of 400 mg/kg reduced the presence of diarrhea and rectal bleeding, although its comparison with the negative control only reached statistical significance on diarrhea. D-002 (25, 100 and 400 mg/kg) significantly reduced the score of macroscopic lesions (40.0; 43.3 and 47.2% inhibition, respectively), the histological damage score (31.5; 53.7 and 67.1% inhibition, respectively) and the activity of MPO (73.2; 83.6 and 85.0% inhibition, respectively), compared to the negative control group. Sulfasalazine significantly reduced all variables studied. Conclusions. D-002 (25, 100 and 400 mg/kg) significantly protected the colonic mucosa in rats with severe inflammatory UC induced by DSS and ethanol.

RESUMEN Objetivos. Investigar los efectos del D-002, mezcla de seis alcoholes alifáticos primarios de alto peso molecular, obtenida de la cera de abejas (Apis mellifera), sobre la colitis ulcerativa (CU) inflamatoria severa inducida por sulfato de dextrano (DSS) y etanol en ratas (Ratus ratus). Materiales y métodos. Las ratas se distribuyeron aleatoriamente en seis grupos: un control cero al que no se provocó daño, y cinco a los que se les indujo la CU: un control negativo (vehículo), tres tratados con D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) y un control positivo con sulfazalacina (200 mg/kg) (sustancia de referencia). Se cuantificaron las manifestaciones clínicas (variación del peso corporal, presencia de diarrea y de sangrado rectal), el puntaje de daño macroscópico e histológico, y la actividad de mieoloperoxidasa (MPO). Resultados. El tratamiento oral con D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) previno significativamente la disminución del peso corporal. La dosis de 400 mg/kg redujo la presencia de diarreas y sangrado rectal, aunque su comparación con el control negativo solo alcanzó significación estadística sobre las diarreas. El D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) redujo significativamente el puntaje de las lesiones macroscópicas (40,0; 43,3 y 47,2% de inhibición, respectivamente), el puntaje de daño histológico (31,5; 53,7 y 67,1% de inhibición, respectivamente) y la actividad de MPO (73,2; 83,6 y 85,0% de inhibición, respectivamente), comparado con el grupo control negativo. La sulfazalacina redujo significativamente todas las variables estudiadas. Conclusiones. El D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) protegió significativamente la mucosa colónica en ratas con CU inflamatoria severa inducida por DSS y etanol.

Objectives. To investigate the effects of D-002, a mixture of 6 high molecular weight primary aliphatic alcohols, obtained from beeswax (Apis mellifera), on severe inflammatory ulcerative colitis (UC) induced by Dextran sulfate (DSS) and ethanol in rats (Ratus ratus). Materials and methods. Rats were randomly distributed in six groups: a zero control to which no damage was caused, and five to which the UC was induced: a negative control (vehicle), three treated with D-002 (25, 100 and 400 mg/kg) and a positive control with sulfasalazine (200 mg/kg) (reference substance). Clinical manifestations (body weight variation, diarrhea and rectal bleeding), macroscopic and histological damage score, and myeloperoxidase (MPO) activity were quantified. Results. The oral treatment with D-002 (25, 100 and 400 mg/ kg) significantly prevented the decrease in body weight. The dose of 400 mg/kg reduced the presence of diarrhea and rectal bleeding, although its comparison with the negative control only reached statistical significance on diarrhea. D-002 (25, 100 and 400 mg/kg) significantly reduced the score of macroscopic lesions (40.0; 43.3 and 47.2% inhibition, respectively), the histological damage score (31.5; 53.7 and 67.1% inhibition, respectively) and the activity of MPO (73.2; 83.6 and 85.0% inhibition, respectively), compared to the negative control group. Sulfasalazine significantly reduced all variables studied. Conclusions. D-002 (25, 100 and 400 mg/kg) significantly protected the colonic mucosa in rats with severe inflammatory UC induced by DSS and ethanol.

Objetivos. Investigar los efectos del D-002, mezcla de seis alcoholes alifáticos primarios de alto peso molecular, obtenida de la cera de abejas (Apis mellifera), sobre la colitis ulcerativa (CU) inflamatoria severa inducida por sulfato de dextrano (DSS) y etanol en ratas (Ratus ratus). Materiales y métodos. Las ratas se distribuyeron aleatoriamente en seis grupos: un control cero al que no se provocó daño, y cinco a los que se les indujo la CU: un control negativo (vehículo), tres tratados con D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) y un control positivo con sulfazalacina (200 mg/kg) (sustancia de referencia). Se cuantificaron las manifestaciones clínicas (variación del peso corporal, presencia de diarrea y de sangrado rectal), el puntaje de daño macroscópico e histológico, y la actividad de mieoloperoxidasa (MPO). Resultados. El tratamiento oral con D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) previno significativamente la disminución del peso corporal. La dosis de 400 mg/kg redujo la presencia de diarreas y sangrado rectal, aunque su comparación con el control negativo solo alcanzó significación estadística sobre las diarreas. El D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) redujo significativamente el puntaje de las lesiones macroscópicas (40,0; 43,3 y 47,2% de inhibición, respectivamente), el puntaje de daño histológico (31,5; 53,7 y 67,1% de inhibición, respectivamente) y la actividad de MPO (73,2; 83,6 y 85,0% de inhibición, respectivamente), comparado con el grupo control negativo. La sulfazalacina redujo significativamente todas las variables estudiadas. Conclusiones. El D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) protegió significativamente la mucosa colónica en ratas con CU inflamatoria severa inducida por DSS y etanol.

Introduction: policosanol, a mixture of higher aliphatic alcohols purified from sugar cane wax, is used to treat hypercholesterolemia. D-002 (Abexol), a mixture of higher aliphatic alcohols from beeswax, is an antioxidant supplement with gastroprotective effects. Then, concomitant intake of D-002 and policosanol may occur in routine practice, so potential pharmacological interactions between them should be researched on. Objective: to find out the influence of policosanol on the gastroprotective effect of D-002 on the ethanol-induced gastric ulcer model. Methods: rats were randomized into eight groups: one treated with the vehicle (control), two with D-002 (25 and 200 mg/kg), two with policosanol (25 and 200 mg/kg), two with the same doses of D-002 + policosanol and other with sucralfate (100 mg/kg). Treatments were given as single oral doses. One hour after treatment, rats received 60% ethanol orally and one hour later they were killed and their stomachs exposed. Effects on ulcer indexes (UI) were assessed. Results: acute oral administration of D-002 (25 and 200 mg/kg) significantly reduced the ulcer indexes by 40 % and 68 %, respectively, as compared to the control group, and policosanol by 26 % and 47 %, respectively. The concomitant administration of the same doses of D-002 and policosanol significantly decreased ulcer indexes by 64 % (both given at 25 mg/kg) and by 92 % (both given at 200 mg/kg) as compared to the respective monotherapies. Sucralfate (100 mg/kg) significantly reduced (@ 99 %) ulcer indexes compared to the control group. Conclusions: the concomitant oral administration of policosanol with D-00 2 gives greater gastroprotection than D-002 monotherapy, so both products can be taken together.

Introducción: el policosanol, mezcla de alcoholes alifáticos de alto peso molecular obtenida de la cera de caña de azúcar (Saccharum officinarum L), se emplea en el tratamiento de la hipercolesterolemia. El D-002 (Abexol), mezcla de alcoholes alifáticos obtenida de la cera de abejas, es un suplemento antioxidante con efectos gastroprotectores. Así, el consumo concomitante de D-002 y policosanol puede ocurrir en la práctica rutinaria, por lo cual algunas interacciones entre ellos deben ser investigadas. Objetivo: determinar la influencia del policosanol sobre el efecto gastroprotector del D-002 en el modelo de úlcera gástrica inducida por etanol Métodos: las ratas se distribuyeron en ocho grupos: uno tratado con el vehículo (control), dos con D-002 (25 y 200 mg/kg), dos con policosanol (25 y 200 mg/kg), dos con las mismas dosis de D-002 + policosanol, y otro con sucralfato (100 mg/kg). Los tratamientos se administraron como dosis únicas orales. Una hora después las ratas recibieron por vía oral etanol 60 % y se sacrificaron; los estómagos se extrajeron y se cuantificó el índice de úlceras. Resultados: la administración oral aguda de D-002 (25 y 200 mg/kg) redujo significativamente el índice de úlceras en un 40 % y un 68 %, respectivamente, con respecto al grupo control y el policosanol en un 26 % y un 47 %, respectivamente. La administración concomitante de D-002 y policosanol redujo significativamente el índice de úlceras en un 64% (ambos administrados a 25 mg/kg) y un 92 % (ambos administrados a 250 mg/kg) al compararse con las respectivas monoterapias. Sucralfato (100 mg/kg) redujo significativa y marcadamente (@ 99 %) el índice de úlceras con respecto al grupo control. Conclusiones: la administración oral concomitante de policosanol más D-002 confiere una gastroprotección mayor que las respectivas monoterapias, de modo que pueden ser administrados conjuntamente.

Introduction: policosanol, a mixture of high molecular weight aliphatic alcohols purified from sugarcane with octacosanol as the main component, shows cholesterol-lowering and antiplatelet effects in addition to an inhibitory effect on type I cicloxygenase. Objective: to determine whether policosanol may inhibit 5-LOX enzyme activity in vitro. Methods: effects on 5-LOX enzyme activities were assessed in rat blood polymorphonuclear leukocytes. Vehicle or Policosanol suspensions (0.6 to 6 000 µg/mL) were added to tubes containing the reaction mix and then absorbance changes at 234 nm were measured. Results: added Policosanol inhibited in vitro 5-LOX activity by 30 %, which was not a significant figure but depended on the concentration(r= 0.992; p< 0.05); it was 1 250 µg/mL. Conclusions: policosanol did not significantly inhibit 5-LOX enzyme activity in rat PMNL preparations, so that it does not seem to be a dual inhibitor of COX and-LOX enzymes. This result differs from that found for beeswax alcohols and underlines the different effects of the mixtures of long-chain fatty alcohols purified from the sugarcane and the beeswax.

Introducción: el policosanol es una mezcla de alcoholes alifáticos aislados y purificados de la caña de azúcar cuyo componente mayoritario es el octacosanol, con efecto sobre la reducción de colesterol y antiagregante plaquetario, además inhibe la ciclooxigenasa (COX) tipo 1. Objetivo: determinar el poder de inhibición del policosanol en la actividad de la enzima 5-LOX in vitro. Métodos: el efecto sobre la actividad de la enzima 5-LOX se determinó en leucocitos polimorfonucleares obtenidos de sangre de ratas. Se añadieron vehículo o suspensiones de policosanol (0,6 a 6 000 µg/mL) a tubos que contenían la mezcla de reacción y se medió el cambio de absorbancia a 234 nm. Resultados: la adición de policosanol inhibió in vitro la actividad de la 5-LOX en un 30 % que no fue significativo pero sí dependiente de la concentración (r= 0,992; p< 0,05), inhibición esta que alcanzó 1 250 µg/mL. Conclusión: el policosanol no inhibió significativamente la actividad de la enzima 5-LOX en preparación de polimorfonucleares de ratas, por lo que no es un inhibidor dual de las enzimas. Este resultado difiere del encontrado para los alcoholes de la cera de abeja y subraya la diferencia de los efectos hallados entre las mezclas de alcoholes alifáticos de cadenas largas purificados de la caña de azúcar y la cera de abeja.

Introduction: policosanol, a mixture of higher aliphatic alcohols purified from sugarcane wax, inhibits cyclooxygenase-1 (COX-1) activity in vitro, an effect that could support its anti-platelet action. Its putative effects on experimental models of inflammation had not been yet investigated. Objective: to determine the in vivo effect of policosanol on acute (carrageenan-induced pleurisy) and chronic inflammation (cotton-pellet granuloma) in vivo models. Methods: in the acute model, rats were randomly distributed into seven groups: a negative vehicle control, and six with carrageenan-induced pleurisy: a positive control (vehicle), four treated with policosanol (50-800 mg/kg) and one with aspirin (100 mg/kg). Five hours later, volume of pleural exudate, protein concentration and myeloperoxidase activity were quantified. For the chronic model, rats were distributed into six groups: a control (vehicle), four treated with policosanol (50-800 mg/kg) and one group with aspirin (100 mg/kg). The cotton pellet was implanted and six days after treatment, it was extracted to determine the dry and the wet weights. Results: single oral doses of policosanol (200, 400 and 800 mg/kg) reduced significantly and moderately the volume (» 20 %), the myeloperoxidase activity (» 12 %) and the protein concentration (» 20 %) in pleural exudates, whereas aspirin 100 mg/kg decreased significantly these indicators by 35.3, 19.9 and 19.1 %, respectively. Oral administration of policosanol (400 and 800 mg/kg) for 6 days reduced significantly and moderately the wet (16.4 and 16.2 %, respectively) and dry (28.4 and 34.4 %, respectively) granuloma weights. Treatment with 100 mg/kg aspirin reduced these variables by 18.5 % (wet weight) and 34.4 % (dry weight), respectively. Both treatments reduced the dry more than the wet granuloma weight. Conclusion: oral administration of policosanol produced a moderate anti-inflammatory effect in vivo on models of acute and chronic inflammation.

Introducción: el policosanol, mezcla de alcoholes alifáticos primarios superiores purificada de la cera de caña, inhibe la actividad de la cicloxigenasa-1 (COX-1) in vitro, efecto que pudiera sustentar su acción antiagregante plaquetaria. Sin embargo, sus posibles efectos en modelos experimentales de inflamación no se habían investigado. Objetivo: determinar el efecto antinflamatorio in vivo del policosanol en un modelo de inflamación aguda (pleuresía por carragenina) y crónico (granuloma por algodón). Métodos: se distribuyeron las ratas Sprague Dawley en siete grupos para el modelo de inflamación aguda: un control negativo (vehículo) y seis a los que se les indujo la inflamación: un control positivo (vehículo), cuatro tratados con policosanol (50-800 mg/kg) y uno con aspirina (100 mg/kg). Se cuantificaron a las 5 h el volumen de exudado pleural, la concentración de proteínas y actividad de la enzima mieloperoxidasa. Se distribuyeron las ratas en seis grupos para el modelo crónico: un control (vehículo), cuatro tratados con policosanol (50-800 mg/kg) y uno con aspirina (100 mg/kg). Se extrajo el granuloma para determinar los pesos húmedo y seco seis días después de implantado el pellet. Resultados: dosis orales únicas de policosanol (200, 400 y 800 mg/kg) redujeron significativa y moderadamente el volumen, la actividad de la enzima mieloperoxidasa (» 12 %) y la concentración de proteínas (» 20 %) del exudado pleural, mientras la aspirina redujo estos indicadores en un 35,3, 19,9 y 19,1%, respectivamente. La administración oral de policosanol (400 y 800 mg/kg) durante 6 días disminuyó significativa y moderadamente el peso húmedo del granuloma (16,4 y 16,2 %), y el peso seco (28,4 y 34,4 %). La aspirina 100 mg/kg redujo estas variables en un 18,5 % (peso húmedo) y 34,4 % (peso seco). Ambos tratamientos produjeron mayores reducciones del peso seco que del peso húmedo del granuloma. Conclusiones: la administración oral de policosanol produjo un moderado efecto antinflamatorio in vivo en modelos de inflamación aguda y crónica.

Introduction: D-003, a mix of higher primary aliphatic acids purified from sugarcane, inhibits cholesterol synthesis. Recent studies have demonstrated that D-003 is effective in experimental models of osteoarthritis and inhibits the enzymatic activities of COX1 and COX2, mainly that of COX1, without causing gastrotoxicity. It has been mentioned that the dual inhibitors of COX and 5-LOX enzymes present with anti-inflammatory effects and no gastrotoxicity or even they can have gastroprotective actions. According to this background, D-003 could be a dual inhibitor of COX and 5-LOX enzymes. Objective: to study the effects of D-003 on the enzymatic activity of 5-LOX in vitro, by using the cytosolic fraction of polymorphonuclear leukocytes of rats. Methods: the following testing conditions were used: cytosolic fraction (50 µg of protein) dissolved into 0,2 mol/L borate buffer solution (pH 9) and linoleic acid (7,8-250 mmol/L) as substrate. Parallel samples were incubated with Tween-20/H2O (2 %) only (vehicle), D-003 (0,6-6 000 µg/mL) or green-lipped mussel (Perna canaliculus) extract (50 µg/mL) (reference substance). The enzymatic activity, evaluated by the conjugated diene formation, was assessed by the absorbance changes at 234 nm (5-LOX) measured in a UV-visible spectrophotometer. Results: by adding D-003, produced a dose dependent (r= 0,975; p< 0,05) (IC50= 23,06 µg/mL) in vitro inhibition of 5-LOX enzyme activity. The size of the inhibition was moderate, since the maximal inhibition, achieved from 1 250 µg/mL) on was only 30 %. Conclusions: this study demonstrates that D-003 may inhibit in vitro the 5-LOX enzymatic activity, but in a moderate way.

Introducción: el D-003, mezcla de ácidos alifáticos primarios superiores purificada de la cera de la caña, inhibe la síntesis de colesterol. Trabajos recientes han demostrado que el D-003 resulta efectivo en modelos experimentales de osteoartritis y que inhibe la actividad de las enzimas COX1 y COX2, preferentemente la COX1, sin producir gastrotoxicidad. Ha sido referido que los inhibidores duales de las enzimas COX y 5-LOX presentan efectos antinflamatorios desprovistos de gastrotoxicidad o que incluso, pueden resultar gastroprotectores. De acuerdo con estos antecedentes, el D-003 podría ser un inhibidor dual de dichas enzimas. Objetivo: investigar el efecto in vitro del D-003 sobre la actividad enzimática de la 5-LOX, utilizando la fracción citosólica de leucocitos polimorfonucleares de ratas. Métodos: se utilizaron las condiciones de ensayo siguientes: fracción citosólica (50 µg de proteína) disuelta en solución reguladora borato 0,2 mol/L (pH 9) y ácido linoleico (7,8-250 mmol/L) como sustrato, ensayándose muestras paralelas incubadas con Tween-20/H2O (2 %) (vehículo), D-003 (0,6-6 000 µg/mL) o extracto de Perna canaliculus (50 µg/mL) (sustancia de referencia). Se evaluó la actividad enzimática mediante el cambio de absorbancia a 234 nm producido por la formación de dienos conjugados y medido en espectrofotómetro UV-visible. Resultados: la adición de D-003 produjo una inhibición dosis dependiente de la actividad enzimática de la 5-LOX (r= 0,975; p< 0,05) (CI50= 23,06 µg/mL) in vitro. La magnitud de esta inhibición fue moderada, ya que la inhibición máxima, alcanzada a partir de 1 250 µg/mL, resultó de solo un 30 %. Conclusiones: el estudio demuestra que el D-003 es capaz de inhibir la actividad enzimática de la 5-LOX in vitro, pero moderadamente.

Introduction: Finasteride is a 5 a-reductase inhibitor to treat benign prostatic hyperplasia (BPH) and one of the adverse effects is the increase of depressive symptoms. D-004 is a lipid extract from the real palm fruit (Roystonea regia) that is effective to prevent prostatic hyperplasia by inhibiting 5 a-reductase and shows moderate antidepressant effects in the forced swimming test (FST) and tail suspension test. Objective: to compare the effects of D-004, Imipramine and Sertraline on the duration of behaviours under conditions of immobility, swimming and climbing in the forced swimming test. Methods: mice were randomly distributed in 8 groups: control (vehicle), 3 treated with D-004 (100, 250 and 500 mg/kg), 2 with Sertraline and 2 with Imipramine (30 and 50 mg/kg) respectively. Mice were placed in a glass cylinder containing 6 cm high column of water and their behaviours were quantified. Results: oral administration of D-004 (100, 250 and 500 mg/kg) during 14 days reduced the length of time of immobility with respect to the control group (17, 22 and 25 %), and significantly increased the behaviours at swimming by 1.58, 1.68 and 1.74 times. This is a moderate effect (25 %) if compared with Sertraline and Imipramine (³ 60 %) The doses of 250 and 500 mg/kg showed that climbing behaviours were 2.79 and 3.55 times higher than the control group. The results were similar to those of Imipramine but less effective. Conclusions: D-004 showed moderate antidepressant effect. This fact could help in the treatment of patients with benign prostatic hyperplasia, who reported similar depressive status.

Introducción: La finasterida, inhibidor de la 5 a-reductasa, se emplea en el tratamiento de la hiperplasia prostática benigna, y ocasiona entre sus efectos adversos un aumento de cuadros de depresión. El D-004 es un extracto lipídico extraído a partir del fruto de la palma real (Roystonea regia), inhibe la 5 a-reductasa y previene la hiperplasia prostática benigna, y muestra un efecto antidepresivo moderado en el ensayo de nado forzado y suspensión por la cola. Objetivo: comparar el efecto del D-004 con la imipramina y la sertralina sobre la duración de las conductas de inmovilidad, nado y escalado en el ensayo de nado forzado. Métodos: se distribuyeron los ratones en ocho grupos: control (vehículo), tres tratados con D-004 (100, 250 y 500 mg/kg), dos con sertralina y dos con imipramina (30 y 50 mg/kg) respectivamente. Estos se colocaron en un cilindro de cristal que contenía agua a una altura de 6 cm y se cuantificaron las conductas. Resultados: la administración oral de D-004 (100, 250 y 500 mg/kg) durante 14 días redujo significativamente el tiempo de inmovilidad con respecto al grupo control (17, 22 y 25 %) y aumentó significativamente la conducta de nado en 1,58, 1,68 y 1,74 veces. Este efecto resulta moderado (25 %) comparado con las reducciones alcanzadas por la sertralina y la imipramina (³ 60 %). Las dosis mayores (250 y 500 mg/kg) ocasionaron incrementos de la conducta de escalado, 2,79 y 3,55 veces superiores a la del grupo control, lo que mostró semejanza con la imipramina, aunque con una menor eficacia. Conclusiones: el D-004 ejerce un moderado efecto antidepresivo, lo que pudiera contribuir al manejo de los pacientes con hiperplasia prostática benigna en los cuales se informa coincidencia de cuadros depresivos.

Introduction: the gastric mucosa is susceptible to the effects of aggressive factors, which are counterbalanced by mucosal defensive factors. Acid peptic diseases result from the imbalance between these aggressive and defensive factors. Aspirin-induced ulcer is a model of NSAIDs-induced damage in which neutrophil infiltration plays a key role. Objective: this paper investigates the protective effect of D-002 against aspirin-induced ulcers and associated neutrophil infiltration in the gastric mucosa. Methods: rats were randomized into six groups of 8 rats each. A negative vehicle control, and five aspirin (300 mg/kg)-treated groups: a positive control, orally treated with the vehicle, three with D-002 (25, 50 and 100 mg/kg, respectively) and other with 10 mg/kg Omeprazole. Five hours after induced damage the rats were sacrificed. The stomachs were removed and opened, and lesions examined macroscopically and microscopically. Ulcer indexes and neutrophil infiltration per ulcer areas were measured. Results: all positive, none negative, controls exhibited aspirin-induced ulcers. Oral treatment with D-002 (25-100 mg/kg) dose-dependently and significantly reduced aspirin-induced gastric lesions (37 to 75 %), the mean number of microscopic ulcers (40 to 72 %) and neutrophil infiltration (41.7 to 83.1 %) in the rat gastric mucosa. Conclusion: Oral treatment with D-002 (25-100 mg/kg) effectively protects against aspirin-induced ulcers and decreases the neutrophil infiltration in the gastric mucosa induced by aspirin ulceration.

Introducción: la integridad de la mucosa gástrica depende del balance entre los factores agresivos y defensivos. La úlcera inducida por aspirina es un modelo de daño por antiinflamatorios no esteroidales en el cual el infiltrado de neutrófilos desempeña una función fundamental. Objetivo: evaluar el efecto protector del D-002 sobre la úlcera inducida por aspirina asociada al infiltrado de neutrófilos en la mucosa gástrica. Métodos: las ratas fueron aleatorizadas en seis grupos de ocho animales cada uno. Un control negativo con vehículo y cinco grupos tratados con aspirina (300 mg/kg): un control positivo, tratado por vía oral con vehículo, tres grupos con D-002 (25, 50 and 100 mg/kg respectivamente) y otro con omeprazol 10 mg/kg. Cinco horas después de inducido el daño las ratas fueron sacrificadas y se extrajeron sus estómagos para su análisis morfológico. Se determinó el índice de úlcera, el número de úlceras microscópicas y el número de neutrófilos por área ulcerada. Resultados: todos los controles positivos y ninguno negativo mostraron lesiones en la mucosa. El tratamiento por vía oral con D-002 (25-100 mg/kg) redujo de modo significativo y dependiente de la dosis el índice de úlceras gástricas (37-75 %), el promedio de úlceras microscópicas (40- 72 %) y la infiltración de neutrófilos (41,7-83,1 %) en la mucosa de las ratas. Conclusiones: el tratamiento por vía oral con D-002 (25-100 mg/kg) protege la mucosa gástrica de las ratas del daño inducido por aspirina, lo que disminuye el índice de úlcera y el infiltrado de neutrófilos.

Introduction: D-002, a mixture of six high molecular weight primary aliphatic alcohols purified from beeswax, has been shown to produce anti-inflammatory effects with no secondary gastrotoxicity in experimental models. Oral treatment with D-002 was effective for lowering the concentrations of B4 leukotriene (LTB4) in pleural exudates of rats with carragenin-induced pleurisy, suggesting that it could inhibit 5-lipooxigenase (5-LOX) enzyme activity. The mechanisms of the anti-inflammatory action of D-002, however, had not been explored yet. Objective: to evaluate the effects of D-002 on 5-LOX enzyme activity in vitro by using the cytosolic preparations from rat liver homogenates. Methods: testing conditions were as follows: cytosolic fraction (50 µg of protein) dissolved in 0.2 mol/L borate buffer solution (pH 9) and linoleic acid (7.8-250 mmol/L) as substrate. Parallel samples were incubated with Tween-20/H2O (2 %) only (vehicle, control samples), D-002 (0.9-1 000 µg/mL) or Lyprinol (500 µg/mL) (reference substance). The enzyme activity, evaluated through the formation of conjugated dienes, was assessed by the absorbance changes at 234 nm (5-lox) measured in a UV-visible spectrophotometer. Results: the in vitro addition of D-002 produced a significant, dose-dependent (r=0.980; p< 0.001) (IC50= 95.34 µg/mL) and uncompetitive inhibition of 5-LOX activity, whose maximal inhibition (70 %) was achieved with 500 µg/mL). Conclusions: thisstudy demonstrates that D-002 effectively inhibits 5-LOX enzymatic activity, an effect that may partially explain the anti-inflammatory effects of D-002 in experimental models in vivo.

Introducción: el D-002, mezcla de seis alcoholes alifáticos primarios de alto peso molecular purificada de la cera de abejas, ha mostrado efectos antiinflamatorios, sin gastrotoxicidad secundaria, enmodelos experimentales. El tratamiento oral con D-002 reduce las concentraciones de leucotrieno B4 (LTB4) en exudados pleurales de ratas con pleuresía por carragenina, sugiriendo que podría inhibir la actividad enzimática de la 5-lipooxigenasa (5-LOX), si bien los mecanismos de la acción antiinflamatoria del D-002 no habían sido aún explorados. Objetivo: evaluar el efecto in vitro del D-002 sobre la actividad de la 5-LOX, utilizando la fracción citosólica de homogenatos de hígado de ratas. Métodos: las condiciones de ensayo utilizadas fueron las siguientes: fracción citosólica (50 µg de proteína) disuelta en solución reguladora borato 0,2 mol/L (pH 9) y ácido linoleico (7,8-250 mmol/L) como sustrato, ensayándose muestras paralelas incubadas con Tween-20/H2O (2 %) (vehículo, muestras controles), D-002 (0,9-1 000 µg/mL) o Lyprinol (500 µg/mL) (sustancia de referencia). La actividad enzimática se evaluó mediante el cambio de absorbancia a 234 nm producido por la formación de dienos conjugados y medido en espectrofotómetro UV-visible. Resultados: la adición in vitro del D-002 produjo una inhibición significativa, dependiente de la dosis (r= 0,980; p< 0,001) (IC50= 95,34 µg/mL) e incompetitiva de la actividad de la 5-LOX, cuya inhibición máxima (70 %) se alcanzó con 500 µg/mL. Conclusiones: con este estudio se demuestra que el D-002 es capaz de inhibir la actividad enzimática de la 5-LOX, efecto que podría explicar, al menos parcialmente, su acción antiinflamatoria en modelos experimentales in vivo.

Introduction: the etiology of the gastric ulceration is associated to the imbalance between aggressive and defensive factors acting upon the gastric mucosa. D-002, a mixture of 6 higher primary alcohols purified from the beeswax, cause some multiple mechanism-mediated gastroprotective effects and decrease of lipid peroxidation in the gastric mucosa. Objective: to determine whether D-002 can scavenge the in vivo added or in vivo generated hydroxyl radical in rats with indometacin-induced gastric ulcer or not. Methods: For the in vitro experiment, D-002 was added at concentrations 0.9 and 1 000 mg/mL For the in vivo experiment, the rats were randomized into 6 groups: one negative control, and five indometacin-treated groups as follows a positive excipient-treated control, three under D-002 treatment (5, 25 or 100 mg/kg, respectively, p.o.), and another group treated with Omeprazole (20 mg/kg i.p.). These lines of treatment were given 1 hour (excipient and D-002) or 30 min (Omeprazole) prior to inducing the ulcers. In both experiments, aliquots from the gastric mucosa were taken and the damage infringed to 2-deoxiribose by the hydroxyl radical was determined. Results: oral administration of D-002, rather than in vitro addition, significantly protected 2-desoxiribose from the oxidative damage depending on the dosage as compared to the positive control. Conclusions: these results indicate that the ability of the orally administered D-002 (25 and 100 mg/kg) to scavenge the hydroxyl radical endogenously generated on the gastric mucosa by indometacin could contribute to its antioxidant and gastroprotective effects against the damage that the non-steroidal anti-inflammatory drugs carry to the gastric mucosa.

Introducción: el agente causal de la ulceración gástrica está asociado al desequilibrio entre factores agresivos y defensivos que actúan sobre la mucosa gástrica. El D-002, mezcla de seis alcoholes alifáticos primarios superiores purificada de la cera de abejas, produce efectos gastroprotectores mediados por múltiples mecanismos y reducción de la peroxidación lipídica en la mucosa gástrica. Objetivo: determinar si el D-002 es capaz de capturar el radical hidroxilo añadido in vitro o generado in vivo en ratas con úlcera gástrica inducida por indometacina. Métodos: En la experiencia in vitro el D-002 se añadió a concentraciones entre 0,9 y 1 000 mg/mL. En la experiencia in vivo las ratas se distribuyeron en seis grupos: un control negativo y cinco que recibieron indometacina: un control positivo tratado con el vehículo, tres con D-002 (5, 25, y 100 mg/kg, respectivamente, p.o.) y otro con omeprazol (20 mg/kg i.p.). Los tratamientos se administraron una hora (vehículo y D-002) o 30 min (omeprazol), respectivamente, antes de inducir las úlceras. En ambas experiencias se tomaron alícuotas de mucosa gástrica, y se determinó el daño a la 2-desoxirribosa por el radical hidroxilo. Resultados: la administración oral del D-002, no in vitro, protegió a la 2-desoxirribosa del daño oxidativo de modo marcado, significativo y dependiente de la dosis con respecto al control positivo. Conclusiones: los resultados indican que la capacidad del D-002 (25 y 100 mg/kg) administrado por vía oral para secuestrar el radical hidroxilo, generado en la mucosa gástrica por la indometacina, pudiera contribuir a sus efectos antioxidantes y gastroprotectores sobre el daño que los antiinflamatorios no esteroideos producen sobre la mucosa gástrica.