RESUMO A antracnose é a principal doença pós-colheita do abacate. O presente trabalho teve como objetivos caracterizar a agressividade e a atividade enzimática de 30 isolados de Colletotrichum spp. de abacate. Abacates ‘Fuerte’ foram inoculados com disco de BDA contendo estruturas de cada isolado e após sete dias mensuraram-se os diâmetros das lesões. Dois grupos de isolados foram distinguidos quanto à agressividade pelo teste de teste de Scott-Knott (p=0,05), um com lesões entre 34,0 e 38,2 mm e outro com lesões entre 38,7 e 44,0 mm de diâmetro. Para caracterização enzimática, avaliaram-se as áreas dos halos formados em substratos específicos para detecção de amilase, celulase, lacase, lipase, pectato liase e protease e a atividade da enzima catalase. Os isolados não produziram amilase suficiente para formação de halo em meio de cultura. Todos os isolados produziram catalase, pectato liase e protease, enquanto 46% produziram lacase e 97% tiveram as atividades da celulase e lipase detectadas. Distinguiram-se dois grupos de isolados para as enzimas catalase e pectato liase, cinco grupos para a celulase, seis grupos para a lacase e sete grupos para as enzimas lipase e protease, pelo teste de teste de Scott-Knott (p=0,05). Não houve relação entre as atividades enzimáticas e a agressividade dos isolados.

ABSTRACT Anthracnose is the main post-harvest disease affecting avocado. This study aimed to characterize the aggressiveness and the enzyme activity of 30 isolates of Colletotrichum spp. from avocado. Avocados ‘Fuerte’ were inoculated with PDA disc containing structures from each isolate and after seven days the diameter of lesions was measured. Two groups of isolates were distinguished according to their aggressiveness based on Scott-Knott test (p=0.05), the first one showed lesions between 34.0 and 38.2 mm and the second one showed lesions between 38.7 and 44.0 mm in diameter. Enzymatic characterization consisted in evaluating the areas of halos formed on specific substrates for detection of amylase, cellulase, laccase, lipase, pectate lyase and protease, as well as catalase enzyme activity. Isolates did not produce amylase sufficient for halo formation on culture medium. All isolates produced catalase, pectate lyase and protease, while 46% produced laccase and 97% had cellulase and lipase activity detected. Two groups of isolates were distinguished for the enzymes catalase and pectate lyase, five groups for cellulase, six groups for laccase, and seven groups for the enzymes lipase and protease, according to Scott-Knott test (p=0.05). There was no relationship between enzyme activities and aggressiveness of the isolates.

RESUMOO Estado de São Paulo é um dos maiores produtores de frutas no Brasil. A competitividade no comércio internacional de frutas demanda a minimização de danos pós-colheita, especialmente os causados pela antracnose. Para o controle eficaz da antracnose em uma região é necessário conhecer quais espécies estão associadas a cada hospedeiro e qual a variabilidade dos agentes causais. Este trabalho objetivou caracterizar e identificar isolados de Colletotrichum de frutíferas cultivadas no Estado de São Paulo, Brasil. Foram analisados 93 isolados obtidos de abacate, manga, maracujá e pêssego, por meio de morfometria de conídios e colônias e análise molecular (amplificação por PCR com oligonucleotídeos espécie-específicos e análise de sequências de nucleotídeos das regiões ITS e β-tubulina). Alta variabilidade morfométrica foi observada entre os isolados. A análise molecular indicou que, no Estado de São Paulo, as antracnoses do abacate, manga, maracujá e pêssego podem ser causadas por diferentes espécies do complexo C. gloeosporoides, revelando também a presença de C. boninense associada à antracnose do maracujá e de espécies não identificadas dos complexos C. acutatum e C. gloeosporioides causando antracnose em pêssego.

ABSTRACTThe state of São Paulo is one of the largest fruit producers in Brazil. Competitiveness in the international trade in fruits has demanded the minimization of postharvest damage, especially that caused by anthracnose. For the effective control of anthracnose in a certain region, it is necessary to know which species are associated with each host and the variability of the causal agents. This study aimed to characterize and identify Colletotrichum isolates from fruit trees grown in the state of São Paulo, Brazil. A total of 93 isolates obtained from avocado, mango, passion fruit and peach were analyzed according to conidium and colony morphology and molecular analysis (PCR amplification with species-specific primers and analysis of nucleotide sequences of the ITS regions and β-tubulin). There was high morphometric variability among isolates. Molecular analysis indicated that, in the state of São Paulo, anthracnose of avocado, mango, passion fruit and peach can be caused by different species of the C. gloeosporoides complex, also revealing the presence of C. boninense associated with passion fruit anthracnose and unidentified species of C. acutatum and C. gloeosporioides complexes causing anthracnose in peach.

A antracnose, causada por Colletotrichum gloeosporioides, é caracterizada por lesões marrons nos frutos de goiabeira, causando severas perdas em pós-colheita. Os processos de infecção e colonização de C. gloeosporioides foram estudados usando microscópio eletrônico de varredura e transmissão. Frutos em plena maturação fisiológica foram inoculados com suspensão de 10(5) conídios/mL. Posteriormente, os frutos foram incubados em câmara úmida a 25 °C, por períodos de molhamento de 6; 12; 24; 48; 96 e 120 h para o estudo do processo de infecção e colonização. Germinação de conídios e formação de apressórios ocorreram seis horas após a inoculação (h.a.i). A penetração ocorreu diretamente, por meio da formação do peg de penetração emitido da base do apressório, o qual penetrou na cutícula 48 h.a.i. O apressório não produziu o cone apressorial ao redor do poro de penetração. Foram observadas vesículas de infecção nas células epidérmicas 96 h.a.i. As mesmas estruturas fúngicas foram encontradas nas células epidérmicas e parenquimáticas do hospedeiro, após 120 h da inoculação. A estratégia de colonização de C. gloeosporioides foi do tipo hemibiotrófica intracelular.

Anthracnose, caused by Colletotrichum gloeosporioides, produces brown lesions on guava fruits, causing severe losses on postharvest. In this study, the infection and colonization of guava fruits by C. gloeosporioides has been examined using scanning and transmission electron microscopy. Fruits at the physiologically mature stage were inoculated with a 10(5) conidia/mL spore suspension. Afterward, fruits were incubated at 25 °C in a wet chamber for periods of 6, 12, 24, 48, 96 and 120 h to allow examination of the infection and colonization process. Conidia germination and appressoria formation occurred six hours after inoculation (h.a.i). Penetration occurred directly via penetration pegs from appressoria, which penetrated the host cuticle 48 h.a.i. Notably, the appressoria did not produce an appressorial cone surrounding the penetration pore. Infection vesicles were found in epidermal cells 96 h.a.i. The same fungal structures were found in epidermal and parenchymal cells of the host 120 h.a.i. Colonization strategy of C. gloeosporioides on guava fruit was intracellular hemibiotrophic.

A espécie pinhão manso (Jatropha curcas L.), vem se destacando como a principal matéria-prima para produção de biodiesel. O objetivo deste estudo foi caracterizar dois isolados de Colletotrichum spp., obtidos de sementes dessa espécie, através de análise morfológica, cultural e molecular, além de avaliar a patogenicidade desses isolados em folhas e frutos da planta. Para análise morfológica foram medidos o comprimento e a largura de 30 esporos de cada isolado, produzidos em meio de cultura Extrato de Malte-Agar, a 25±1 ºC, sob luz contínua. A análise cultural foi realizada pelo crescimento do fungo em meio de BDA, com avaliações diárias do crescimento do micélio e pela coloração da colônia, após sete dias de incubação. O DNA dos isolados foi extraído e oligonucleotídeos específicos (região ITS4) foram identificados pela técnica de PCR e utilizados para identificar C. capsici (CcInt) e C. gloeosporioides (CgInt). A patogenicidade dos isolados foi avaliada em plantas com diferentes idades (10, 20, 30, 40, 50 e 60 dias após semeadura) e em frutos em seis estádios de maturação. Com base nestas análises os isolados foram identificados como C. capsici e C. gloeosporioides. Plantas jovens e frutos desenvolvidos foram mais suscetíveis à infecção pelas duas espécies do fungo.

The species known as physic nut (Jatropha curcas L.) has become important as one of main sources of feedstock for biodiesel production. The aims of this study were characterizing two different isolates of Colletotrichum spp. obtained from seeds of this species, through morphological, cultural, and molecular analyses; as well as assessing pathogenicity of both isolates on leaves and fruit of this plant species. For morphological analysis, length and width of 30 spores of each isolate, produced on medium Malt Extract-Agar (MEA), at 25 ± 1 ºC, and under constant light, were measured. Cultural analysis was performed by the fungus growth on PDA medium, through daily measurements of the mycelial growth, and the color of colonies after seven days incubation. DNA of the isolates was extracted and specific oligonucleotides primers (region ITS4) were identified by PCR and used to identify C. capsici (CcInt) and C. gloeosporioides (CgInt). Pathogenicity of isolates was assessed on plants aged 10, 20, 30, 40, 50, and 60 days after sowing and fruits at six maturation stages. Based on these analyses, isolates were identified as C. gloeosporioides and C. capsici. Young plants and the older fruits were more susceptible to infection by the two fungus species.

Plantas de hibisco com superbrotamento e definhamento seguido de morte têm sido observadas nos municípios de São Paulo, Campinas e Piracicaba. Como os sintomas são sugestivos daqueles induzidos por fitoplasmas, o presente trabalho buscou identificar o possível fitoplasma associado com a doença. Assim, 14 plantas sintomáticas de hibisco foram coletadas em Piracicaba (SP) e submetidas ao PCR duplo com os primers P1/Tint-R16F2n/R2 e ao exame em microscópio eletrônico de transmissão. A identificação foi realizada por análise de RFLP com as enzimas de restrição BfaI, DraI, HaeIII, HhaI, HpaII, MboI, MseI, RsaI e TaqI. Testes de transmissão foram conduzidos com enxertia de ramos e uso de Cuscuta subinclusa. Os resultados de nested-PCR revelaram a presença consistente de fitoplasmas em todas as plantas sintomáticas e foram confirmados pela observação de corpúsculos pleomórficos no floema, através da microscopia eletrônica. A análise de RFLP mostrou que o fitoplasma encontrado em hibisco pertence ao grupo 16SrXV, o mesmo grupo do Candidatus Phytoplasma brasiliense. O fitoplasma foi transmitido de planta doente para sadia, tanto pela enxertia como pela C. subinclusa, demonstrando ser o agente do superbrotamento do hibisco.

Ornamental hibiscus have been affected by shoot proliferation and decline followed by death in several cities in São Paulo State, especially São Paulo, Campinas and Piracicaba. As the symptoms are suggestives of those induced by phytoplasmas, the present work aimed to identify the possible phytoplasma associated with the disease. Fourteen symptomatic hibiscus were sampled in Piracicaba, submitted to nested-PCR with the primers P1/Tint-R16F2n/R2 and processed by transmission electron microscopy. The identification was made by RFLP analyses with the restriction enzymes BfaI, DraI, HaeIII, HhaI, HpaII, MboI, MseI, RsaI, and TaqI. Transmission assays were performed by grafting and Cuscuta subinclusa. The presence of phytoplasma was always detected by molecular technique and electron microscopy in all samples. The RFLP analyses showed that the phytoplasma belongs to group 16SrXV, the same group of the Candidatus Phytoplasma brasiliense. It was experimentally transmitted by C. subinclusa to periwinkle and by grafting to hibiscus in which it reproduced the original symptoms. This indicates that the studied phytoplasma is the causal agent the disease.

O carvão é uma das principais doenças da cana-de-açúcar, visto que é considerada em todos os Programas de Melhoramento Genético (PMG), tanto na seleção de genitores resistentes, como no comportamento das progênies. Quando a cultura está espalhada em grandes extensões torna-se importante conhecer a amplitude da variação patogênica na população do agente causal. Diante da importância de se obter variedades com resistência efetiva e duradoura, o objetivo do presente estudo foi verificar a ocorrência, e caracterizar, no Estado de São Paulo, a variabilidade patogênica de Ustilago scitaminea. Coletaram-se 12 populações do patógeno em 3 regiões canavieiras, Piracicaba, Jaú e Ribeirão Preto, e inocularam-se, com teliósporos dessas populações, gemas de três variedades de reação conhecida, SP71-8210 (resistente), SP84-2066 (suscetível) e Co421 (intermediária). Foi instalado um ensaio no campo, a partir destas gemas inoculadas. As avaliações de touceiras doentes foram realizadas a cada 14 dias. A variedade resistente SP71-8210 não apresentou doença. Nas outras duas variedades, a doença foi avaliada por meio da curva de progresso da doença, área abaixo da curva de progresso, incidência final e período latente gerados por cada população do patógeno. As populações de U. scitaminea apresentaram diferentes níveis de agressividade, porém não houve alterações de virulência entre as populações estudadas. Segundo os parâmetros observados, uma população de Piracicaba e duas de Jaú comportaram-se como as mais agressivas. Ficou demonstrado que existe uma considerável variabilidade na agressividade das populações de U. scitaminea do Estado de São Paulo. Os PMG que submetem os materiais a inoculações artificiais com teliósporos de carvão, em alguma etapa do programa, necessitam considerar esta variação do patógeno para desenvolverem variedades com resistência mais efetiva.

Smut is one of the main diseases of sugarcane, once it is considered in every breeding program both in the selection of breeding parents as well as in the behavior of the progeny. When the crop is extended to large extensions it becomes very important to know the amplitude of pathogen variation among its populations. In the face of the importance of obtaining varieties with effective and long lasting resistance, the objective of this study was to verify the occurrence, in the State of São Paulo, of pathogenic variability in the population of Ustilago scitaminea. Twelve populations of the pathogen were collected from three sugarcane growing regions: Piracicaba, Jaú, and Ribeirão Preto, and buds from three varieties with known response to this pathogen, SP71-8210 (resistant), SP84-2066 (susceptible) and Co421 (intermediate) were inoculated with teliospores of each population. A field trial was set up with these inoculated buds and diseased stools were evaluated every fourteen days. The resistant variety SP71-8210 did not express the disease. For the varieties that showed symptoms, it was considered the disease progress curve, the area under disease progress curve, the final incidence and, the latent period in the disease evaluation for each population. The populations of U. scitaminea showed distinct aggressiveness levels, however it was not observed changes in the virulence among tested populations. According to the evaluated parameters, one population from Piracicaba and two from Jau behaved as the most aggressive ones. Thus, it was showed that considerable aggressiveness variability exists among populations of U. scitaminea from Sao Paulo State. The variations found in this work must be taken in consideration by breeding programs when plants are artificially inoculated with smut teliospores.

Objetivou-se detectar a influência do estádio fenológico e da idade da folha de soja na infecção por Phakopsora pachyrhizi, agente causal da ferrugemasiática (FA). Plantas das cultivares BRS 154 e BRS 258 foram inoculadas, com suspensão de 10(5) urediniósporos/mL, nos estádios fenológicos V3, R1 e R5. Após 24 horas de câmara úmida, as plantas foram acondicionadas em condições de casa de vegetação por 20 dias. Avaliou-se o período latente médio (PLM) e a severidade. Para a avaliação da suscetibilidade de trifólios à FA utilizou-se a cultivar BRS 154 (V5). A inoculação foi realizada nos quatro primeiros trifólios. Aos 15 dias após a inoculação, os folíolos foram avaliados quanto à severidade, tamanho médio de lesão e freqüência de infecção. O estádio das plantas de soja não influenciou no PLM. As cultivares BRS 154 e BRS 258 tiveram PLM de 8 e 9 dias, respectivamente. As cultivares não se diferenciaram quanto à severidade da doença. Não houve diferença de severidade nos estádios V3 e R1, porém, os valores de severidade nesses estádios foram superiores ao valor de severidade no estádio R5, na avaliação realizada 8 dias após a inoculação. Em relação à suscetibilidade de folhas, o trifólio mais velho apresentou maiores valores de doença.

This work was conducted to study the influence of soybean growth stage and leaf age on the infection of Phakopsora pachyrhizi, the soybean rust pathogen. Soybean plants (cv. BRS 154 and BRS 258) at the V3, R1 and R5 growth stages were inoculated with a 1 x 10(5) urediniospores per mL suspension. After a period of 24 hours in dew chambers, all plants were removed from the chambers and placed under greenhouse conditions for 20 days. Mean latent period (PLM) and disease severity were estimated. The susceptibility of trifoliate leaves to soybean rust was estimated on cv. BRS 154 at the growth stage R5. Pathogen inoculation was done at the first four trifoliate leaves. Fifteen days after inoculation, leaflets of each trefoil were evaluated for disease severity, lesion mean size and infection frequency. Plants' growth stage did not influence the PLM. Cultivars BRS 154 and BRS 258 presented PLM of 8 and 9 days, respectively. There was no difference in disease severity at the growth stages V3 and R1, but those values were higher than at the R5 growth stage, 8 days after inoculation. The oldest trefoil showed the highest disease values.