Immunity to hepatitis A virus (HAV) is in first instance due to neutralizing antibodies. Neutralization assays are essential to evaluate new candidate vaccines against this pathogen. In this paper, an in vitro neutralization assay to evaluate HAV vaccine candidates using phage-display technology is described. 10³ and 10² DICT50 of HAV were incubated with different antibodies preparations and were inoculated onto plates with FRhK4 cells. After seven days of incubation, the neutralizing titer was determined as reciprocal of the serum dilution reducing HAV growth (inhibition of CPE) by 50%. 10³ and 10² DICT50 were neutralized by 7E7 anti-HAV monoclonal antibody and anti-VHA positive human sera (A12 and A31). Negative controls of the assay did not neutralize viral infectivity. Sera from mice immunized with phages displaying VHA mimotopes had neutralizing titers from 4-16. Neither negative control nor pre-immune and sera from mice immunized with M13 wild type phage neutralized HAV. A simple and faster in vitro neutralization assay was developed to evaluate new HAV vaccine candidates.

La inmunidad contra el virus de la hepatitis A (VHA) se debe en primera instancia a la inducción de anticuerpos neutralizantes. Disponer de ensayos de neutralización es indispensable para evaluar nuevos candidatos vacunales contra este patógeno. En el presente trabajo se desarrolló un ensayo de neutralización in vitro que permitió evaluar la inmunogenicidad de mimotopos del VHA obtenidos mediante la tecnología de expresión en fagos al ser inmunizados ratones Balb/c. Diferentes diluciones de anticuerpos se incubaron con 10³ o 10² Dosis Infecciosas en Cultivo de Tejidos 50% (DICT50) del clon citopático HM175/18f de VHA, y se inocularon en placas con células FRhK4. Después de 7 días de incubación el título neutralizante se determinó como el recíproco de la dilución del suero capaz de reducir la multiplicación viral al 50%. Tanto 10³ como 10² DICT50 fueron neutralizadas por el anticuerpo monoclonal 7E7 y los sueros humanos (A12 y A31) positivos a anticuerpos anti-VHA. Los controles negativos del ensayo no neutralizaron al virus. Los títulos neutralizantes de los sueros de ratones inmunizados con fagos portadores de mimotopos de VHA oscilaron entre 4 y 16, mientras que los sueros preinmunes y los de ratones inmunizados con fago salvaje M13 no neutralizaron la infectividad viral. Este ensayo de neutralización resultó adecuado para la evaluación de los inmunógenos propuestos.

Influenza A viruses infect humans and other mammalian and bird species. Since 1997, it has been known that some avian strains were able to infect humans, generally causing a mild disease.The present H5N1 avian influenza outbreak has led to a heightened level of awareness of the scientific and public health officials, not only because of its high mortality, but also because of its potential to trigger a new pandemic. In response to this emerging threat, the international sanitary authorities are developing a wide preparation program, which involving different measures such as the accurate diagnosis of animal and human outbreaks; systematic characterization of circulating strains; elimination of infected birds; mass production of antiviral drugs,and research,development and large scale production of efficacious vaccines. In the last aspect, great effort is being carried out for the improvement of classic vaccines and in the search for alternatives based on new technologies.

Los virus de la influenza A, además del hombre, infectan otros mamíferos y una gran variedad de especies de aves. Desde 1997 se sabe que cepas aviares son capaces de infectar al hombre provocando una enfermedad generalmente leve. El brote actual de gripe aviar H5N1 en humanos ha puesto en alerta a la comunidad científica internacional, no solo por su elevada mortalidad sino por su potencialidad en la generación de una nueva pandemia. Las autoridades sanitarias han puesto en marcha un amplio programa para la preparación ante esta contingencia, que abarca diferentes campos, desde el diagnóstico y la detección precoz de los brotes tanto en animales como en humanos, la caracterización sistemática de las cepas circulantes, el sacrificio de aves infectadas, la producción masiva de antivirales y por supuesto el desarrollo y producción a gran escala de vacunas eficaces. En este último tema se trabaja intensamente tanto en el mejoramiento de las vacunas ya existentes como en la búsqueda de alternativas basadas en tecnologías de nueva generación.

A study of an acute viral hepatitis A outbreak that occurred in a day care center in the City of Havana during 1996 is described. With the purpose of comparing their usefulness for diagnosis: clinical behavior, the level of the ALT enzyme, detection of viral antigen in feces and the presence of anti HAV IgM were considered. The relationship between these indicators was established. The doctor of the institution provided the information on the clinical behavior and the ALT values of the individuals. The detection of viral antigen in feces and the anti HAV IgM in serum were performed by ELISA. An 87.5% of the infected individuals remained asymptomatic and in more than half of the cases serum ALT was considered within the normal range. Only 3 of 84 fecal samples were positive to the viral antigen. The detection of anti HAV IgM showed the highest percentage (12,4%) of positive samples when compared to the other indicators. This correlates with the known fact that this is the choice method to establish the diagnosis of hepatitis A outbreaks.

Se realizó el estudio de un brote de hepatitis A ocurrido en un círculo infantil de Ciudad de La Habana en 1996. Con el objetivo de comparar su utilidad para el dignóstico etiológico de dicho brote, se estableció la relación entre los siguientes indicadores: comportamiento clínico, valor de la enzima ALT, presencia del virus en las heces fecales y detección de la IgM anti VHA en el suero de los individuos estudiados. La información sobre el comportamiento clínico y las cifras de ALT la facilitó por el médico de la institución. La detección del Ag VHA en las heces fecales y de la IgM anti VHA en el suero se realizó mediante la técnica de ELISA. El 87,5% de los infectados permaneció asintomático y en más de la mitad de los casos la cifra de ALT sérica se mantuvo entre los límites normales. Sólo 3 de 84 muestras de heces fecales resultaron positivas para el Ag VHA. La detección de la IgM anti VHA, en cambio, mostró el mayor porcentaje de positividad (12,4%), en comparación con el resto de los indicadores, lo que confirma que constituye el método de elección para el diagnóstico de los brotes de hepatitis A.