BACKGROUND Lymphatic filariasis (LF) is a parasitic disease caused mainly by the Wuchereria bancrofti worm and that affects up to 120 million people worldwide. LF is the second cause of chronic global deformity, responsible for 15 million people with lymphedema (elephantiasis) and 25 million men with scrotal hydrocele. Its diagnosis is still associated with numerous difficulties, such as the sample collection periods (microfilaria nocturnal periodicity) and limited diagnostic kits. OBJECTIVES The aim of this work was to evaluate two recombinant antigens (Wb14 and WbT) as part of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based antibody capture tests for LF. METHODS The recombinant antigens rWb14 and rWbT were expressed in Escherichia coli BL21 and an antibody capture ELISA was performed. For this, sera were used from microfilaremic individuals with W. bancrofti (MF), chronic pathology (CP), individuals infected with Strongyloides (SP) and healthy controls from endemic (EN) and non-endemic (NE) areas. FINDINGS Both tests showed similar results, with 90% sensitivity and 96.6% specificity. In comparison with the BM14 ELISA commercial test, the Wb14 and WbT antigens performed with identical sensitivity but greater specificity. Reduced positivity with the CP suggested a potential to monitor cure. This was not confirmed, however, when sera from individuals up to seven years after treatment were assayed. MAIN CONCLUSIONS The Wb14 and WbT ELISAs were considered efficient and promising diagnostic tests. Due to the importance of antibody capture analysis to evaluate the Global Program to Eliminate Lymphatic Filariasis (GPELF), the tests proposed here appear as great alternatives to the available commercial system.

Resumo Casos de dengue têm aumentado em grupos etários mais jovens no Brasil. Anticorpos antidengue maternos podem exercer efeito protetor nos primeiros meses de vida, mas seu declínio pode aumentar o risco de dengue grave. Uma coorte de nascimento prospectiva foi estabelecida na cidade do Recife, Pernambuco, Brasil, entre 2011-2012, para determinar a incidência de infecção sorotipo-específica do dengue e cinética dos anticorpos antidengue materno-transferidos nos primeiros anos de vida. Este artigo descreve o desenho, os métodos e resultados preliminares deste estudo de coorte. Trezentas e cinquenta e quatro crianças foram acompanhadas clínico e laboratorialmente por dois anos, com 15% de perdas de seguimento. A taxa global de novas infecções foi de aproximadamente 10% na coorte de crianças no primeiro ano de seguimento. Informações sobre a força de infecção sorotipo-específica do dengue nos primeiros anos de vida, bem como a avaliação da cinética de anticorpos materno-transferidos poderão contribuir para a compreensão da etiopatogenia da doença.

Abstract Dengue cases have increased in younger age groups in Brazil. Maternal anti-dengue antibodies can have a protective effect in the first months of life, but their decline can increase the risk of severe dengue. A prospective birth cohort was established in 2011-2012 in the city of Recife, Pernambuco State, Brazil, to determine the incidence of serotype-specific dengue infection and the kinetics of transferred maternal anti-dengue antibodies in the first years of life. This article describes the design, methods and preliminary results of this cohort study. 354 children underwent clinical and laboratory monitoring for two years, with 15% losses to follow-up. The overall rate of new infections was approximately 10% in the first year of follow-up. Information on the force of serotype-specific dengue infection and the evaluation of transferred maternal antibodies can contribute to understanding dengue etiopathogenesis.

Resumen Los casos de dengue han aumentado en los grupos de edad más jóvenes en Brasil. Los anticuerpos antidengue maternos pueden ejercer un efecto protector en los primeros meses de vida, pero su decremento puede aumentar el riesgo de dengue grave. Una cohorte de nacimientos prospectiva se estableció en la ciudad de Recife, Pernambuco, Brasil, entre 2011-2012, para determinar la incidencia de infección serotipo-específica de dengue y la cinética de los anticuerpos antidengue materno-transferidos durante los primeros años de vida. Este artículo describe el diseño, los métodos y resultados preliminares de este estudio de cohorte. 354 niños fueron acompañados clínicamente y en laboratorio durante dos años, con un 15% de pérdidas en el seguimiento. La tasa global de nuevas infecciones fue de aproximadamente un 10% en la cohorte de niños durante el primer año de seguimiento. La información sobre la fuerza de infección serotipo-específica del dengue en los primeros años de vida, así como la evaluación de la cinética de los anticuerpos materno-transferidos, podrá contribuir a la comprensión de la etiopatogenia de la enfermedad.

Resumo Casos de dengue têm aumentado em grupos etários mais jovens no Brasil. Anticorpos antidengue maternos podem exercer efeito protetor nos primeiros meses de vida, mas seu declínio pode aumentar o risco de dengue grave. Uma coorte de nascimento prospectiva foi estabelecida na cidade do Recife, Pernambuco, Brasil, entre 2011-2012, para determinar a incidência de infecção sorotipo-específica do dengue e cinética dos anticorpos antidengue materno-transferidos nos primeiros anos de vida. Este artigo descreve o desenho, os métodos e resultados preliminares deste estudo de coorte. Trezentas e cinquenta e quatro crianças foram acompanhadas clínico e laboratorialmente por dois anos, com 15% de perdas de seguimento. A taxa global de novas infecções foi de aproximadamente 10% na coorte de crianças no primeiro ano de seguimento. Informações sobre a força de infecção sorotipo-específica do dengue nos primeiros anos de vida, bem como a avaliação da cinética de anticorpos materno-transferidos poderão contribuir para a compreensão da etiopatogenia da doença.

Abstract Dengue cases have increased in younger age groups in Brazil. Maternal anti-dengue antibodies can have a protective effect in the first months of life, but their decline can increase the risk of severe dengue. A prospective birth cohort was established in 2011-2012 in the city of Recife, Pernambuco State, Brazil, to determine the incidence of serotype-specific dengue infection and the kinetics of transferred maternal anti-dengue antibodies in the first years of life. This article describes the design, methods and preliminary results of this cohort study. 354 children underwent clinical and laboratory monitoring for two years, with 15% losses to follow-up. The overall rate of new infections was approximately 10% in the first year of follow-up. Information on the force of serotype-specific dengue infection and the evaluation of transferred maternal antibodies can contribute to understanding dengue etiopathogenesis.

Resumen Los casos de dengue han aumentado en los grupos de edad más jóvenes en Brasil. Los anticuerpos antidengue maternos pueden ejercer un efecto protector en los primeros meses de vida, pero su decremento puede aumentar el riesgo de dengue grave. Una cohorte de nacimientos prospectiva se estableció en la ciudad de Recife, Pernambuco, Brasil, entre 2011-2012, para determinar la incidencia de infección serotipo-específica de dengue y la cinética de los anticuerpos antidengue materno-transferidos durante los primeros años de vida. Este artículo describe el diseño, los métodos y resultados preliminares de este estudio de cohorte. 354 niños fueron acompañados clínicamente y en laboratorio durante dos años, con un 15% de pérdidas en el seguimiento. La tasa global de nuevas infecciones fue de aproximadamente un 10% en la cohorte de niños durante el primer año de seguimiento. La información sobre la fuerza de infección serotipo-específica del dengue en los primeros años de vida, así como la evaluación de la cinética de los anticuerpos materno-transferidos, podrá contribuir a la comprensión de la etiopatogenia de la enfermedad.

O replicon de RNA derivado do genoma de Flavivirus é uma ferramenta valiosa para o estudo de replicação viral independente da montagem e da maturação do virion, além de possuir um grande potencial para expressão de genes heterólogos. Neste estudo nós descrevemos a construção de replicons subgenômicos do vírus da febre amarela utilizando a técnica de recombinação homóloga em levedura. O plasmídeo contendo o replicon do vírus febre amarela cepa 17D (pBSC-repYFV-17D), caracterizado anteriormente, foi manipulado para a expressão heteróloga dos genes repórteres green fluorescent protein (repYFV-17D-GFP) e firelly luciferase (repYFV-17D-Luc). Ambos os replicons foram construídos por recombinação homóloga entre o vetor pBSC-repYFV-17D linearizado e o produto de PCR contendo 25 nucleotídeos terminais homólogos incorporados aos oligonucleotídeos iniciadores. A organização genômica dos construídos é semelhante ao repYFV-17D, com inserção de um gene repórter entre os restantes 63 nucleotídeos N-terminais da proteína do capsídeo e 72 nucleotídeos C-terminais da proteína E. Os replicons repYFV-17D-GFP e repYFV-17D-Luc mostraram uma eficiente replicação e expressão dos genes repórteres. A técnica de recombinação homóloga em levedura usada neste estudo demonstrou ser aplicável à manipulação do genoma do vírus da febre amarela para a construção de replicons subgenômicos.

RNA replicon derived from Flavivirus genome is a valuable tool for studying viral replication independent of virion assembly and maturation, besides being a great potencial for heterologous gene expression. In this study we described the construction of subgenomic replicons of yellow fever virus by yeast-based homologous recombination technique. The plasmid containing the yellow fever 17D strain replicon (pBSC-repYFV-17D), previously characterized, was handled to heterologous expression of the green fluorescent protein (repYFV-17D-GFP) and firefly luciferase (repYFV-17D-Luc) reporter genes. Both replicons were constructed by homologous recombination between the linearized vector pBSC-repYFV-17D and the PCR product containing homologous 25 nucleotides ends incorporated into PCR primers. The genomic organization of these constructs is similar to repYFV-17D, but with insertion of the reporter gene between the remaining 63 N-terminal nucleotides of the capsid protein and 72 C-terminal nucleotides of the E protein. The replicons repYFV-17D-GFP and repYFV-17D-Luc showed efficient replication and expression of the reporter genes. The yeast-based homologous recombination technique used in this study proved to be applicable for manipulation of the yellow fever virus genome in order to construct subgenomic replicons.

O manejo de pacientes infectados pelo dengue ainda é um problema desafiador. A maioria dos casos de dengue é benigna mas parte desses casos pode evoluir para o desenvolvimento de vasculopatia severa conhecida como dengue hemorrágica, que pode ser letal. Os sintomas iniciais da dengue e sua forma hemorrágica são bastante similares. O desenvolvimento de um teste diagnóstico que seja rápido e capaz de diferenciar as duas formas clínicas da dengue é crucial para o cuidado adequado de pacientes. O presente estudo avalia, através da PCR quantitativa em tempo real, o potencial preditivo dos níveis de expressão de RNAm candidatos a marcadores da dengue hemorrágica, previamente identificados por estudos genômicos funcionais. Um conjunto de seis marcadores moleculares para a dengue hemorrágica foi avaliado e apresentou correlação entre seus níveis de transcrição e o posterior desenvolvimento da vasculopatia severa. Os marcadores selecionados foram capazes de indicar, nos momentos iniciais dos sintomas, a evolução de um paciente infectado pelo dengue para a forma severa da doença. O painel de candidatos a marcadores de prognóstico obtido demonstrou um bom potencial para uso clínico na forma de um ensaios rápido baseado em amostras de sangue.

The management of acute dengue patients during outbreaks is a challenging problem. Most of the dengue fever cases are benign, but some cases develop into a severe and possibly lethal vasculopathy, known as dengue hemorrhagic fever. Early symptoms of dengue and hemorrhagic fever are very similar. An early differential diagnosis is needed to predict which of these two clinical presentations is crucial to proper patient care and public health management. This study evaluates the predictive potential of specific mRNA expression markers of dengue hemorrhagic fever using quantitative real-time PCR assays. Six candidate "dengue hemorrhagic fever specific signature genes" were evaluated and all showed good correlation among their transcription levels at early days of infection and the later development of severe vasculopathy. The markers selected were able to indicate, at early stages of infection, the evolution of a dengue-infected patient to the severe form of the illness. Despite the fact that these results grant further validation studies, the panel of candidate prognostic markers obtained demonstrated the potential to be useful for clinical use in the form of a fast assay based in blood samples.

A vacinação é a estratégia mais prática e o melhor custo-benefício para prevenir a maioria das infecções dos flavivirus, para os quais existe vacina disponível. Entretanto, as vacinas baseadas em vírus atenuados podem potencialmente promover efeitos colaterais e, mais raramente, reações fatais. Diante deste cenário, o desenvolvimento de estratégias alternativas de vacinação, como vacinas baseadas em DNA codificando seqüências específicas dos flavivirus, está sendo considerado. Antí-genos citoplasmáticos endógenos, caracteristicamente codificados por vacinas de DNA plasmidial, são majoritariamente apresentados ao sistema imune através de moléculas do Complexo Maior de Histocompatibilidade de classe I - MHC I. A via de apresentação MHC I é mais associada à resposta celular citotóxica e, frequentemente, não elicita uma resposta humoral satisfatória. Uma das principais estratégias para direcionar antígenos codificados pelas vacinas de DNA para o compartimento MHC II é expressar estes antígenos dentro da Proteína de Associação à Membrana Lisossomal (LAMP). A proteína do envelope dos flavivirus é reconhecidamente a principal proteína de superfície viral e o principal alvo para anticorpos neutralizantes. Diferentes grupos têm demonstrado que a co-expressão das proteínas de membrana e do envelope dos flavivirus em células de mamíferos, fusionada com a porção carboxi-terminal de LAMP, é capaz de induzir níveis satisfatórios de anticorpos neutralizantes. Neste trabalho revisamos a estratégia de co-expressão da proteína do envelope dos flavivírus, como quimeras de LAMP, com o objetivo de desenvolver vacinas de DNA contra a febre do Oeste do Nilo, dengue e febre amarela.

Vaccination is the most practical and cost-effective strategy to prevent the majority of the flavivirus infection to which there is an available vaccine. However, vaccines based on attenuated virus can potentially promote collateral side effects and even rare fatal reactions. Given this scenario, the developent of alternative vaccination strategies such as DNA-based vaccines encoding specific flavivirus sequences are being considered. Endogenous cytoplasmic antigens, characteristically plasmid DNA-vaccine encoded, are mainly presented to the immune system through Major Histocompatibility Complex class I - MHC I molecules. The MHC I presentation via is mostly associated with a cellular cytotoxic response and often do not elicit a satisfactory humoral response. One of the main strategies to target DNA-encoded antigens to the MHC II compartment is expressing the antigen within the Lysosome-Associated Membrane Protein (LAMP). The flavivirus envelope protein is recognized as the major virus surface protein and the main target for neutralizing antibodies. Different groups have demonstrated that co-expression of flavivirus membrane and envelope proteins in mammalian cells, fused with the carboxyl-terminal of LAMP, is able to induce satisfactory levels of neutralizing antibodies. Here we reviewed the use of the envelope flavivirus protein co-expression strategy as LAMP chimeras with the aim of developing DNA vaccines for dengue, West Nile and yellow fever viruses.

Este artigo discute os benefícios de se desenvolver um sistema de informação em rede, centrado nos pacientes dos serviços médicos primários, usando tecnologias open-source e definições de padrões de programação e o desenvolvimento de ferramentas capazes de detectar desigualdades. Esses sistemas, que podem ser implementados em nível local e gradualmente se expandirem para uso nacional, capacitariam a expansão da prática da medicina baseada em evidência, a identificação mais clara das desigualdades e análises mais precisas de custos-benefícios. Os setores de saúde pública também poderiam interligar esse sistema aos prontuários eletrônicos tradicionais a custos muito reduzidos por meio da promoção do uso dos sistemas padrões de estocagem e transferência de dados nos produtos de informática comerciais usados nos serviços de saúde. Em sua forma final, esse novo sistema de informação em saúde seria capaz de assistir à gestão da redução das desigualdades nas medidas de saúde pública. De fato, países em desenvolvimento como Brasil, Índia e África do Sul estão muito bem posicionados para darem um salto na frente de outros países que já estão comprometidos com sistemas de informações antiquados.

The past 20 years have witnessed an astonishing increase in computational power and an incredible reduction in the cost of contemporary computer systems, but the public health infostructure in most countries has not changed significantly. This article discusses the potential benefits of applying patient-centered infostructure at the primary medical "points-of-care" services, based on networked integrated open-source technology and programming standards to develop tools to detect and reduce health inequalities. Such systems, which could be implemented from the local to the national level, would enable the expansion of evidence-based medicine, clearer identification of health inequalities, and more accurate cost-benefit analyses. In addition, the public health sector could link such databases to traditional Electronic Patient Record (EPR) systems at a greatly reduced cost by promoting the use of standards-based formats for data transfer and storage. Ultimately, the new health infostructure would help decrease health inequity. In fact, developing countries like Brazil, India, and South Africa are well-positioned to take advantage of the open-source movement and "leapfrog" countries burdened by legacy systems.

Este artigo discute os benefícios de se desenvolver um sistema de informação em rede, centrado nos pacientes dos serviços médicos primários, usando tecnologias open-source e definições de padrões de programação e o desenvolvimento de ferramentas capazes de detectar desigualdades. Esses sistemas, que podem ser implementados em nível local e gradualmente se expandirem para uso nacional, capacitariam a expansão da prática da medicina baseada em evidência, a identificação mais clara das desigualdades e análises mais precisas de custos-benefícios. Os setores de saúde pública também poderiam interligar esse sistema aos prontuários eletrônicos tradicionais a custos muito reduzidos por meio da promoção do uso dos sistemas padrões de estocagem e transferência de dados nos produtos de informática comerciais usados nos serviços de saúde. Em sua forma final, esse novo sistema de informação em saúde seria capaz de assistir à gestão da redução das desigualdades nas medidas de saúde pública. De fato, países em desenvolvimento como Brasil, Índia e África do Sul estão muito bem posicionados para darem um salto na frente de outros países que já estão comprometidos com sistemas de informações antiquados.

The past 20 years have witnessed an astonishing increase in computational power and an incredible reduction in the cost of contemporary computer systems, but the public health infostructure in most countries has not changed significantly. This article discusses the potential benefits of applying patient-centered infostructure at the primary medical "points-of-care" services, based on networked integrated open-source technology and programming standards to develop tools to detect and reduce health inequalities. Such systems, which could be implemented from the local to the national level, would enable the expansion of evidence-based medicine, clearer identification of health inequalities, and more accurate cost-benefit analyses. In addition, the public health sector could link such databases to traditional Electronic Patient Record (EPR) systems at a greatly reduced cost by promoting the use of standards-based formats for data transfer and storage. Ultimately, the new health infostructure would help decrease health inequity. In fact, developing countries like Brazil, India, and South Africa are well-positioned to take advantage of the open-source movement and "leapfrog" countries burdened by legacy systems.