Resumo Este estudo objetiva avaliar as técnicas de diagnóstico da tripanossomíase, causada pelo Trypanosoma vivax, em bovinos naturalmente infectados, em Minas Gerais, Zona da Mata. A morte de seis vacas em lactação com condições clínicas semelhantes - caracterizadas por hiporexia, hipogalaxia e decúbito - foi relatada em uma propriedade. Inicialmente, dois animais foram examinados e diagnosticados com tripanossomíase através da identificação do protozoário em esfregaço sanguíneo. Após o diagnóstico inicial, todas as vacas em lactação (n = 37) na propriedade foram examinadas, e amostras de sangue foram coletadas para testes, incluindo esfregaço de sangue total, esfregaço de capa leucocitária, técnica de Woo, ensaio imunoenzimático (ELISA) e reação em cadeia da polimerase (PCR). O teste de Woo, os esfregaços de capa leucocitária e de sangue total indicaram que 4/37 (10,81%) animais foram positivos para tripanossomíase, enquanto ELISA e PCR indicaram que 33/37 (89,19%) e 27/37 (72,97%) animais, respectivamente, foram positivos. A concordância entre técnicas parasitológicas foi classificada como alta, enquanto entre ELISA e PCR, sem concordância. As técnicas parasitológicas apresentam baixa capacidade para identificar animais infectados na fase crônica da infecção por T. vivax. Dessa forma, técnicas como PCR e/ou ELISA devem ser utilizadas para minimizar a ocorrência de falsos negativos.

Abstract This study aimed to evaluate diagnostic techniques for trypanosomiasis, caused by Trypanosoma vivax, in naturally infected cattle in Minas Gerais, Zona da Mata. The deaths of six lactating cows with similar clinical conditions—characterized by hyporexia, hypogalactia, and recumbency—had been reported from one property. Initially, two animals were examined and diagnosed with trypanosomiasis through identification of the protozoan in a blood smear. After the initial diagnosis, all lactating cows (n=37) on the property were examined, and blood samples were collected for tests including whole blood smear, buffy coat smear, Woo's technique, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and polymerase chain reaction (PCR). Woo's test, buffy coat smears, and whole blood smears indicated that 4/37 (10.81%) animals were positive for trypanosomiasis, whereas ELISA and PCR indicated that 33/37 (89.19%) and 27/37 (72.97%) animals, respectively, were positive. The agreement obtained between parasitological techniques was classified as high, while between ELISA and PCR, no agreement. In conclusion, parasitological techniques have a low capacity to identify infected animals in the chronic stage of T. vivax infection. Therefore, techniques such as PCR and/or ELISA should be used to minimize the occurrence of false negatives.

Visceral leishmaniasis (VL) is fatal if left untreated. Infected dogs are important reservoirs of the disease, and thus specific identification of infected animals is very important. Several diagnostic tests have been developed for canine VL (CVL); however, these tests show varied specificity and sensitivity. The present study describes the recombinant protein rLc36, expressed by Leishmania infantum, as potential antigen for more sensitive and specific diagnosis of CVL based on an immunoenzymatic assay. The concentration of 1.0 μg/mL of rLc36 enabled differentiation of positive and negative sera and showed a sensitivity of 85% and specificity of 71% (with 95% confidence), with an accuracy of 76%.

Objetivou-se isolar e identificar bactérias do gênero Aeromonas de amostras de ostras e de água, pelos métodos microbiológico e molecular. A identificação do gênero Aeromonas foi realizada pelo método convencional e pela técnica da PCR e a caracterização das espécies foi realizada pela chave de identificação Aerokey II e pela técnica de RFLP-PCR do 16S rDNA. Foram identificadas 59 (98,3%) amostras de ostras e 15 (75%) amostras de água contaminadas por bactérias do gênero Aeromonas. Dos 74 isolados de Aeromonas spp. obtidos pela análise microbiológica, 53 (71,62%), 38 (65,51%) de amostras de ostras e 15 (100%) de amostras de água, confirmaram a caracterização do gênero pela técnica molecular. Quanto a identificação bioquímica das espécies 59,3% (n=35) e 40,6% (n=24) dos isolados de Aeromonassp. obtidos das amostras de ostras foram classificados como A. hydrophila e A. caviae, respectivamente; e para os isolados obtidos das amostras de água, 60% (n=9) foram classificados como A. hydrophila e 40% (n=6) como A. caviae; entretanto, somente a A. hydrophila foi confirmadapelo sequenciamento genético. Quanto a classificação através da RFLP-PCR 16S rDNA, foram obtidos padrões de bandas inespecíficos, impossibilitando a identificação das espécies por esta técnica. O grande número de amostras de ostras contaminadas com Aeromonas spp. e a identificação da A. hydrophila demonstram que este molusco pode oferecer risco à saúde dos consumidores, principalmente por ser consumido in natura e se tratar de um micro-organismo potencialmente patogênico para o ser humano.

This study aimed to isolate and identify Aeromonas bacteria from samples of oysters and water, by microbiological and molecular methods. Identification of Aeromonas was performed by the conventional method and by PCR and species characterization was performed by identification key Aerokey II and by RFLP-PCR of 16S rDNA. 59 (98.3%) samples of oysters and 15 (75%) samples of water contaminated by Aeromonas bacteria were identified. Of the 74 isolates of Aeromonas spp. obtained by microbiological analysis, 53 (71.62%), 38 (65.51%) oyster samples and 15 (100%) of water samples confirmed the characterization of the genus by molecular technique. As to biochemical species identification, 59.3% (n = 35) and 40.6% (n = 24) of isolates from Aeromonas sp. obtained from oyster samples were rated as A. hydrophila and A. caviae, respectively; and from isolates obtained from water samples, 60% (n = 9) were classified as A. hydrophila and 40% (n = 6) as A. caviae; however, only the A. hydrophila was confirmed by genetic sequencing. Regarding the classification by RFLP-PCR 16S rDNA, patterns of nonspecific bands were obtained, making it impossible to identify the species by this technique. The large number of oyester samples contaminated with Aeromonas spp. and identification of A. hydrophila, demonstrate that this mollusk might present a risk to consumer health, mainly because it is consumed raw and is to a potentially pathogenic micro-organism to humans.

Introduction Arboviruses are an important public health problem in Brazil, in especially flaviviruses, including the Saint Louis encephalitis virus (SLEV) and the Rocio virus (ROCV), are especially problematic. These viruses are transmitted to humans or other vertebrates through arthropod bites and may cause diseases with clinical manifestations that range from asymptomatic infection, viral hemorrhagic fever to encephalitis. Methods A serological survey of horses from various regions of Brazil using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with recombinant SLEV domain III peptides and ROCV E protein as antigens. Results Overall, 415 (55.1%) of the 753 horses that were screened were seropositive for flavivirus and, among them, monotypic reactions were observed to SLEV in 93 (12.3%) and to ROCV in 46 (6.1%). These results suggested that these viruses, or other closely related viruses, are infecting horses in Brazil. However, none of the studied horses presented central nervous system infection symptoms. Conclusions Our results suggest that SLEV and ROCV previously circulated among horses in northeast, west-central and southeast Brazil.

Since the emergence of West Nile virus (WNV) in North America in 1999, there have been several reports of WNV activity in Central and South American countries. To detect WNV in Brazil, we performed a serological survey of horses from different regions of Brazil using recombinant peptides from domain III of WNV. Positive samples were validated with the neutralisation test. Our results showed that of 79 ELISA-positive horses, nine expressed WNV-specific neutralising antibodies. Eight of the infected horses were from the state of Mato Grosso do Sul and one was from the state of Paraíba. Our results provide additional evidence for the emergence of WNV in Brazil and for its circulation in multiple regions of the country.

A erliquiose canina é causada pela bactéria Ehrlichia canis, que desencadeia no hospedeiro uma doença febril e sistêmica, de patogênese pouco conhecida. O presente estudo avaliou a expressão das citocinas TNF-α, IL-10, IFN-γ, em células esplênicas e em leucócitos sanguíneos, durante a fase aguda da erliquiose e após o tratamento com hiclato de doxiciclina, em cães experimentalmente infectados com a amostra E. canis Jaboticabal. Os resultados mostraram expressão significativa de TNF-α 18 dias após a inoculação, reduzindo aproximadante 70% após o tratamento. Houve um único pico de expressão de IL-10 e de IFN-γ entre 18 e 30 dias após a inoculação, respectivamente. Este estudo sugere que o TNF-α participa da patogenia da fase aguda da erliquiose canina, e que o tratamento com hiclato de doxiciclina reduz os efeitos sistêmicos dessa citocina, possivelmente por reduzir ou eliminar a parasitemia.

Canine ehrlichiosis is caused by the bacterium Ehrlichia canis and is characterized by a systemic febrile disease of unknown pathogenesis. This study evaluated the expression of cytokines TNF-α, IL-10, IFN-γ, in splenic cells and blood leukocytes during the acute phase of ehrlichiosis and after treatment with doxycycline hyclate in dogs experimentally infected with the E. canis Jaboticabal strain. The study results showed a significant expression of TNF-α 18 days post-inoculation, reducing by approximately 70% after treatment. There was a unique peak of expression of IL-10 and IFN-γ 18 and 30 days post-inoculation, respectively. This study suggests that TNF-α plays a role in the pathogenesis of the acute phase of canine ehrlichiosis and that treatment with doxycycline hyclate reduces the systemic effects of this cytokine, possibly by reducing or eliminating parasitemia.

O objetivo desse estudo foi determinar a soroprevalência de anticorpos anti-B. bovis e anti-B. bigemina em bezerros da região de Araguaína, Estado do Tocantins, Brasil. Nesta pesquisa foram coletadas 506 amostras de soros de bezerros com faixa etária entre 8 e 24 meses, fêmeas e machos, as quais foram processadas pelo ensaio imunoenzimático indireto (ELISA-teste). Como análise estatística utilizou-se o Qui-Quadrado (χ2) com correção de Yates. As prevalências obtidas em bezerros foram de 90,5 e 91,7% para B. bigemina e B. bovis, respectivamente, caracterizando esta região como de estabilidade enzoótica para as espécies analisadas. A soroprevalência para B. bovis apresentou maior positividade entre os bezerros com faixa etária de 19-24 meses.

The aim of this study was to determine the seroprevalence of antibodies against B. bovis and B. bigemina in calves from the region of Araguaína, State of Tocantins, Brazil. In this research we used sera obtained from 506 calves, from both genders and of 8 to 24 months old, to detect antibodies by indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA-test). Statistical analysis of the data was performed using the Chi-square (χ2) test with Yates correction. The seroprevalence obtained was 90.5 and 91.7% for B. bigemina and B. bovis, respectively, characterizing the region as an area of enzootic stability for the species analyzed. The seroprevalence to B. bovis showed higher positivity among calves 19-24 months old.

O objetivo desse estudo foi comparar a pesquisa de mórulas de Ehrlichia canis e a nPCR em sangue total e em aspirado de baço. Selecionaram-se 40 cães apresentando trombocitopenia associada a sinais e sintomas sugestivos de erliquiose canina. A pesquisa de mórula mostrou que dentre 35 amostras, 17 apresentaram mórulas nas preparações do baço, e duas nos esfregaços feitos a partir da papa leucocitária. O DNA de Ehrlichia canis foi detectado em 29 de 40 amostras de baço e em 30 de 40 no sangue. No presente estudo observou-se que a pesquisa de mórula é mais eficiente nas preparações citológicas obtidas da punção aspirativa do baço e que tanto a nPCR de baço quanto a de sangue foram eficientes no diagnóstico da doença.

The aim of this study was to compare the detection of Ehrlichia canis morulae and DNA by nPCR in whole blood and spleen aspiration. The sample included 40 dogs showing thrombocytopenia associated to clinical signs suggestive of canine ehrlichiosis. Morulae detection showed that in 35 of the dogs studied, 17 had morulae in spleen tissue, and two in buffy coat smears. E. canis DNA was detected in 29/40 blood samples. We verified that morulae detection is more efficient in cytological preparations from spleen aspiration. On the other hand, nPCR on spleen and blood samples were equally efficient for disease diagnosis.

O propósito do presente trabalho foi o estudo da Leishmaniose Visceral Canina - LVC por meio de métodos parasitológicos e imunoistoquímicos para a detecção de formas amastigotas de Leishmania (L.) chagasi em baço, além de descrever a histopatologia das lesões esplênicas em 34 cães, com diferentes manifestações clínicas da LVC, eutanasiados pelo Centro de Controle de Zoonoses de Ilha Solteira, SP. Esses animais foram examinados clinicamente antes da eutánásia e de acordo com os sinais clínicos da LVC, foram classificados em três grupos: assintomáticos (8 cães), oligossintomáticos (17 cães) e sintomáticos (9 cães). Após a realização desses exames, dos 34 cães, 22 (64,7%) estavam positivos e 12 (35,3%) negativos. Desses cães positivos, 1/22 (4,5%) era assintomático, 12/22 (54,5%) eram oligossintomáticos e 9/22 (40,1%) sintomáticos. Pela histopatologia, os cães, especialmente os sintomáticos apresentavam o baço com inflamação crônica e espessamento na região capsular e trabecular, além de extensa alteração morfológica na polpa vermelha e branca pela presença de grande quantidade de macrófagos repletos de amastigotas, pela reação granulomatosa inflamatória e pelas áreas hemorrágicas. Os exames histopatológicos e a detecção microscópica direta da L. (L.) chagasi revelaram que o baço é um órgão útil para auxiliar no diagnóstico da LVC. A coloração imunoistoquímica foi a que detectou o maior número de tecidos esplênicos positivos com amastigotas, além de elucidar os casos suspeitos pelos exames parasitológicos, principalmente, nos animais assintomáticos ou oligossintomáticos.

The purpose of this work was a Canine Visceral Leishmaniasis - CVL study by parasitological direct examination of Leishmania (L.) chagasi (imprinting and histological), immunohistochemical test and histopathological analysis using spleen tissues from 34 dogs euthanized by the Zoonotic Disease Control Centre from Ilha Solteira, SP, Brazil. According to the clinical signs, the dogs were divided in three groups: asymptomatics (8 dogs), oligosymptomatics (17 dogs) and symptomatics (9 dogs). After the accomplishment of all diagnostic tests, 22 dogs were considered positives (64.7%) and 12 (35.3%) were negatives to CVL. From these positive dogs, 1/22 (4.5%) was asymptomatic, 12/22 (54.5%) were oligosymptomatics and 8/22 (40.1%) were symptomatics. The histopathological study in spleen tissues from positive, especially symptomatic dogs, showed a diffuse chronic inflammation with thickness of capsular and trabecular regions and there was extense morphologic alteration of the red and white pulp by the presence of abundant macrophages full with amastigotes, the granulomatous inflammatory reaction and haemorragic areas. The data of this work from histopathologic examination and direct microcopic visualization of L. (L.) chagasi showed that the spleen was an useful organ to collect sample tissues for CVL diagnosis. The immunostaining detected the highest number of positive dogs and were considered an important and conclusive method to be used in addition to parasitological methods for CVL, particularly in asymptomatic or oligosymptomatic dogs.

A babesiose bovina é uma hemoparasitose causada, no Brasil, pelos protozoários B. bovis e B. bigemina, as quais apresentam como único vetor biológico o carrapato Boophilus microplus. Foram avaliadas amostras dos animais da Estação Experimental de Estudos de Bovinos Curraleiros (EEEC) colhidas nos anos de 2001 (n=117) e 2003 (n=113). A detecção de anticorpos anti-B. bovis e anti-B. bigemina foi realizada pelo ELISA-indireto. O objetivo deste trabalho foi estudar a soroepidemiologia da babesiose bovina em rebanho Curraleiro, obter informações sobre a situação da doença na população e relacionar os resultados obtidos com informações edafoclimáticas e de manejo disponíveis. A taxa de ocorrência em 2001 foi de 92,3% para B. bovis e de 83,8% para B. bigemina e, em 2003, foi de 92,9 e 66,4%, respectivamente. Houve diferença significativa na freqüência de soropositivos em relação à faixa etária no ano de 2003, ocorrendo uma diminuição com o avançar da idade. Sendo assim, foi possível concluir que, apesar das condições edafoclimáticas e do controle químico realizado no combate a ectoparasitas, os animais foram expostos à Babesia spp e encontravam-se em situação de estabilidade enzoótica para babesiose.

Bovine babesiosis is a blood parasitic disease. In Brazil it is caused by B. bovis and B. bigemina protozoa, both of which reveal the Boophilus microplus tick as the only biological vector. Animal samples were collected at Experimental Study Farm of Curraleiro Cattle (ESFC) in 2001 (n=117) and 2003 (n=113). The detection of antibodies against B. bovis and B. bigemina was carried out by ELISA-indirect method. This research was aimed at studing seroepidemiological aspects of bovine babesiosis in a Curraleiro herd, as well as obtain information about babesiosis stability in this population and relate the results with available climactic and management information. The occurrence rate of positive animals was 92.3% for B. bovis and 83.8% for B. bigemina in 2001; in 2003 it was 92.9% and 66.4%, respectively. There was a significant difference between seropositive frequency and age in 2003; such a frequency decreased with ageing. It was possible to conclude that despite environmental conditions and chemical controls against endo and ectoparasites, these animals were exposed to Babesia spp and they found themselves in a situation of enzootic stability for babesiosis.

O presente trabalho relata o isolamento de Ehrlichia canis em cultivo de células DH82 e posterior padronização da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Leucócitos de uma cadela experimentalmente infectada com o isolado Jaboticabal de E. canis foram inoculados em cultivo de células DH82. A inoculação foi monitorada após a segunda semana, a cada 5-6 dias, através de exames citológicos e pela amplificação de um fragmento do gene dsb de Ehrlichia pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para confirmação da infecção. A cultura apresentou-se positiva aos 27 dias pós-inoculação pela PCR e aos 28 dias pela citologia. No 33o dia pós-inoculação, observou-se 20% de células infectadas e, aos 53 dias, 60% de infecção. Atualmente, o isolado encontra-se estabelecido em células DH82, com várias passagens atingindo 90-100% de células infectadas entre 7-10 dias após a inoculação. Após o seqüenciamento do produto de PCR, o isolado apresentou-se 100% similar à seqüência correspondente de E. canis depositada no GenBank. As células infectadas foram utilizadas como antígeno para a padronização da RIFI para detecção da infecção em cães.

The present study describes a successful isolation of Ehrlichia canis and its establishment in DH82 cells, followed by the development of an Indirect Fluorescent Antibodies Test (IFAT). Leukocytes collected from an experimentally infected dog with the Jaboticabal strain of E. canis were used to inoculate a DH82 cell monolayer. Two weeks later, the inoculated culture was checked for infectivity, every 5-6 days by both cytological staining and PCR, targeting a fragment of the dsb gene. The cell culture showed to be infected by Ehrlichia on day 27 by PCR and on day 28 by cytological staining. By the day 33, the infection rate reached 20% and on day 53, 60%. Currently, the isolate is established in DH82 cells, with several passages reaching 90-100% of infected cells, within 7 to 10 days post inoculation. After sequencing, the amplicon was identical to other E. canis corresponding sequences available in the GenBank. DH82 infected cells were used to standardize an IFAT for the diagnosis of canine ehrlichiosis.

A infecção ocasionada pelo Rhodococcus equi é responsável por elevadas taxas de mortalidade e grandes perdas econômicas na equideocultura. Diante da importância dessa enfermidade, este trabalho objetivou a padronização de um ensaio imunoenzimático indireto (ELISA teste) para a detecção de anticorpos anti-Rhodococcus equi em potros (n=16) antes e após a ingestão de colostro de mães vacinadas. Nesse ensaio, foram utilizados dois tipos de antígenos de Rhodococcus equi, o APTX (proteína semi-purificada VapA, extraído pelo detergente Triton X e precipitado em acetona), e o comercial¹. Os resultados da titulação em bloco determinou a concentração ótima dos antígenos em 2,0µg/ml e a diluição única do soro 1:200 para soros de referências negativo, positivo e soros testes. Anticorpos de classe IgG anti-R.equi foram detectados nos potros após a ingestão do colostro até 150 dias de experimento. O antígeno comercial detectou títulos de anticorpos maiores e de maior persistência que o APTX. No entanto, para ambos os antígenos utilizados, o ELISA-teste demonstrou elevada sensibilidade.

The infection caused by Rhodococcus equi (R.equi) is responsible for large economic damage, losses and high mortality rates. Due to the importance of this disease, the aim of this study was to the standarize the enzyme linked immunosorbent essay (ELISA test) for Rhodococcus equi antibodies detection in foals (n=16) before and after colostrum ingestion in vaccinated mares. Two antigens of Rhodococcus equi, APTX and a commercial one were used. The results of block titulation determinated optimal concentration of antigens on 2.0µg/ml and the diluition of serum 1:200 to serum of negative and positive reference and serum tests. IgG antibodies anti-R.equi were detected in foals 150 days after colostrum ingestion. The comercial antigen detected higher and more persistent antibodies title when compared to APTX antigen. Both antigens that had used the ELISA-test, demonstrated high sensitivity.