AIM: to disseminate the indicators of associated paralytic poliomyelitis found during 44 years in children that received the oral antipoliomyelitis vaccine, which was only administered in massive vaccination campaigns from 1963 to 2006, and to report the risk of vaccine-associated paralytic poliomyelitis as regards different epidemiological aspects. METHODS: a retrospective study was undertaken in 596 cases of acute flaccid paralysis in children admitted in pediatric hospitals, based on virology researches, and on the detection of different epidemiological variables. RESULTS: 120 viral agents were isolated from 113 studied patients. 30 were identified as poliovirus. The clinical and epidemiological data from 596 cases of acute flaccid paralysis allowed to categorize 20 children affected with vaccine-associated paralytic poliomyelitis. All the cases were children under one that were exclusively administered the oral antipoliomyelitis vaccine through the strategy of the massive vaccination campaigns. 19 of them were caused by the first dose. Global risk in children vaccinated with the first dose from 1963-2006 was of one in 379 888 (7 217 866 doses administered/19 cases with vaccine-associated paralytic poliomyelitis). Cases of vaccine-associated paralytic poliomyelitis have been sporadic or in a group of 8 cases during 1989-1992. The risk of first dose in sporadic cases was of one in 612 864, and in the group of 1 in 84 670. The risk of grouped cases is 7.2 times higher than those occurred in isolated cases. Particularly, in 1992, coinciding with an outbreak of epidemic neuropathy, the risk was of one in 52 140, which represented an increase of 11.8 times compared with sporadic cases. Children aged 4-7 months old also had a higher risk of 1 in 132 812. CONCLUSIONS: there were identified epidemiological aspects that augmented the risk of vaccine-associated paralytic poliomyelitis, in which the aspects of nutritional deficiencies coincided.

OBJETIVO: divulgar los indicadores de poliomielitis paralítica asociada encontrados en 44 años en niños vacunados con oral antipoliomielítica, suministrada exclusivamente en campañas masivas de vacunación durante el período de 1963 a 2006 y reportar el riesgo de poliomielitis paralítica asociada a la vacuna con relación a diferentes aspectos epidemiológicos. MÉTODOS: se realizó un estudio retrospectivo en 596 casos de parálisis fláccida aguda en niños ingresados en hospitales pediátricos, basado en investigaciones virológicas y detección de diferentes variables epidemiológicas. RESULTADOS: de 113 pacientes estudiados se aislaron 120 agentes virales y 30 fueron identificados como poliovirus. Los datos clínicos y epidemiológicos en 596 casos de parálisis fláccida aguda permitieron categorizar a 20 niños afectados con poliomielitis paralítica asociada a la vacuna. Todos los casos se presentaron en niños menores de un año, vacunados con oral antipoliomielítica con estrategias de campañas masivas de vacunación exclusivamente y 19 fueron producidos por la primera dosis. El riesgo global en los niños vacunados con primera dosis de 1963 a 2006 fue 1 en 379 888 (7 217 866 dosis administradas/19 casos con poliomielitis paralítica asociada a la vacuna). Los casos de poliomielitis paralítica asociada a la vacuna se han presentado esporádicos o en un grupo de 8 casos en el período 1989-1992. El riesgo de primera dosis en casos esporádicos fue 1 en 612 864 y en el grupo de 1 en 84 670. El riesgo en casos agrupados es 7,2 veces mayor que los ocurridos en casos aislados. Particularmente en el año 1992, que coincidió con una epidemia de neuropatía epidémica, el riesgo fue de 1 en 52 140, lo que representó un incremento de 11,8 veces a lo ocurrido en casos esporádicos. Los niños de 4-7 meses de edad también tuvieron un riesgo mayor que fue 1 en 132 812. CONCLUSIONES: se identificaron aspectos epidemiológicos que incrementaron el riesgo de poliomielitis paralítica asociada a la vacuna, en los cuales coinciden aspectos de deficiencias nutricionales.

Stool specimens collected from 1 515 healthy children following a mass vaccination campaign in Cuba were tested for poliovirus excretion using L20B cell lines. In spite of the selectivity of this cell line for polioviruses (117/129; 90.7 %) some other nonpolio enteroviruses (12/129; 9.3 %), such as coxsackie A virus types 4, 8 and 10, can grow in L20B cells.

Se estudió la excreción de poliovirus en muestras de heces fecales de 1 515 niños saludables, colectados después de la campaña de vacunación en Cuba con el empleo de células L20B. A pesar de la selectividad de esta línea celular para poliovirus (117/129; 90,7 %), algunos enterovirus nopoliovirus (12/129; 9,3 %), como los coxsackievirus A tipos 4, 8 y 10, pueden crecer en células L20B.

Se estudiaron muestras de heces y sueros obtenidos en niños menores de 3 años de edad para incrementar el conocimiento de las circulaciones de los virus vacunales durante las campañas masivas. El uso de vacuna oral antipoliomielítica (VOP) con esquemas de campañas masivas, permite la circulación del virus vacunal 2 meses después de concluidas estas. El empleo de esquemas de vacunación continua permite la circulación del virus vacunal a períodos de tiempo mayor e incluso, en poblaciones con baja cobertura de inmunidad, pueden surgir brotes epidémicos de los virus derivados de la vacuna. El total de poliovirus vacunal aislados en los niños de 2 años (11 casos, 11,0 %) y las reactivaciones de anticuerpos neutralizantes (51 casos, 51,0 %), demuestran una contradicción entre la verificación de las infecciones por aislamientos de los virus y los resultados de reactivación. Los bajos porcentajes de aislamientos de virus vacunal y los porcentajes significativamente altos de seroconversiones o reactivaciones a poliovirus, permiten inferir la ocurrencia de circulación silenciosa. La circulación silenciosa autolimitada a los 2 meses de concluida la campaña es debida, entre otras causas, a la respuesta inmune, homóloga o no, inducida por la infección primaria con la primera dosis de la VOP y por las infecciones secundarias. La autolimitación de la circulación de los poliovirus en campañas masivas es una excelente prevención de los riesgos que representan los virus derivados de la vacuna surgidos en vacunaciones con esquemas continuos.

An investigation on seroconversion and circulation of the viruses excreted from the oral polio vaccine (OPV) was made for some years and its results were introduced into the improvement of the program for erradicating this disease. A retrospective analysis of the data showed new results that are still into effect in the context of the program for the world erradication of polio. 98 children under 2 were administered 2 doses of trivalent oral polyo vaccine (T-OPV) with an interval of 4 weeks. Stool samples were obtained weekly from the first dose to 4 weeks after the second dose. Serum samples were taken before vaccination and 4 weeks later. The percentage of isolation of homologous poliovirus in children with no previous antibodies is higher (116.7 %) than the one attained in children with previous antibodies (34.2 %). The percentages of total isolations from poliovirus in children with seroconversion (72.4 %) is higher than those registered in children with booster (167 %). The cases without isolations in seroconversions with previous heterologous antibodies plus the boosters without anamnestic reaction, or homologous isolations allowed to infer a selflimited silent circulation. The interference to the polioviruses by the non-polio enteroviruses, together with the increase of antibodies by the campaigns, caused that the circulations of poloivirus were selflimited shortly after concluding the mass campaign

Una investigación sobre seroconversión y circulación de los virus excretados de la vacuna oral antipoliomielítica (VOP), se realizó durante varios años y sus resultados se introdujeron en el perfeccionamiento del programa para la erradicación de la enfermedad. Un análisis retrospectivo de los datos demostró nuevos resultados que mantienen vigencia en el contexto del programa de la erradicación mundial. En 98 niños menores de dos años de edad se administraron dos dosis de vacuna oral antipoliomielítica trivalente (VOP-T) con intervalo de 4 sem. Se obtuvieron muestras de heces fecales semanalmente, desde la primera dosis hasta 4 sem después de la segunda dosis y también de sueros antes de la vacunación y 4 sem después de la segunda dosis. El porcentaje de aislamiento de poliovirus homólogos en niños sin anticuerpos previos fue más alto (116,7 %) que los obtenidos en niños con anticuerpos previos (34,2 %), mientras los porcentajes de aislamientos totales a poliovirus en niños con seroconversión (72,4 %) resultó más elevado que los registrados en niños con reactivación (167 %). Los casos sin aislamientos en seroconversiones con anticuerpos heterólogos previos más las reactivaciones sin estímulos, anamnesis o aislamientos homólogos permitieron inferir una circulación silenciosa autolimitada. La interferencia a los poliovirus por los enterovirus no polio, conjuntamente con el incremento de anticuerpos por las campañas, produjo que las circulaciones de poliovirus fueran autolimitadas a corto tiempo después de concluida la campaña masiva.

For the detection of Enterovirus, we devised a direct economical method of polymerase chain reaction which does not require a previous extraction of ribonucleic acid and uses infected cell culture supernatants. The system was developed on the basis of universal primers of Enterovirus and specific primers of vaccinal strain Sabin 1. The achieved results proved that the non-existance of methods of RNA extraction and purification prior to the reaction does not affect the susceptibility and specificity of the system, in the rapid detection of Enterovirus genomes and identification of vaccinal strains of poliovirus.

Se desarrolló un método directo y económico de reacción en cadena de la polimerasa para la detección de Enterovirus, que no requiere pasos previos de extracción de ácido ribonucleico (ARN), a partir de sobrenadantes de cultivos celulares infectados. El sistema se desarrolló mediante cebadores universales del género Enterovirus y cebadores específicos de la cepa vacunal Sabin ¹. Los resultados obtenidos demuestran que la ausencia de métodos de extracción y purificación de ARN previos a la reacción no afectan la sensibilidad y especificidad del sistema, lo que posibilita que pueda ser utilizado para la detección rápida de genomas de Enterovirus e identificación de cepas vacunales de poliovirus.

This paper reported the appraisal of a novel thechnology for the detection of enterovirus in sewage based on a viral recovery method using polyethilenglycol as a concentrating agent and on the combined use of viral isolation and polymerase chain reaction as viral detection and identification techniques. It was also confirmed that the viral recovery method is highly efficient since it allows to recover all viruses present in sewage and to preserve their infective capacity. It was proved that the polymerase chain reaction (PCR) is less sensitive than cell culture for detecting enteroviruses in sewage. It is also possible to use guadinine isothiocyanate, whose components can be prepared in the lab, as an alternative method for taking out and purifying nucleic acids instead of using the conventional TRIZOL method wich is the one recommended in these cases by the World Health Organization.

Se reportó la valoración de una novedosa tecnología para la detección de enterovirus en aguas negras, basada en un método de recuperación viral que emplea el polietilenglicol como agente concentrador y el uso combinado del aislamiento viral y la reacción en cadena de la polimerasa, como técnicas de detección e identificación viral. Se confirmó que el método de recuperación viral es de alta eficiencia pues permite recuperar la totalidad de virus presentes en las aguas negras, y preservar su capacidad infectiva. Se demostró que la reacción en cadena de polimerasa (RCP) es menos sensible que el cultivo celular para la detección de enterovirus en aguas negras. También el método del isotiocianato de guanidina (GnTCN), cuyos componentes se pueden preparar en el laboratorio, es posible utilizarlo como alternativa para la extracción y purificación de ácidos nucleicos en sustitución del método comercial del TRIZOL, que es el recomendado por la Organización Mundial de la Salud en estos casos.

The polimerase chain reaction techniques was introduced for the intratypic characterization of Poliovirus. Primers were used only to promote the amplification of the Sabin vaccine strains proved by electrophoretic run of the amplified DNA products (Sabin 1 - 97 pb, Sabin 2 - 71 pb, Sabin 3 - 44 pb) and whose specificity was satisfactorily verified. 23 Cuban poliovirus strains isolated and identified at the Laboratory of Enterovirus of the "Pedro Kourí" Tropical Medicine Institute from 1993 to 1994 were studied by this technique. All of them were of the vaccine type. It was observed how the Sabin vaccine poliovirus may be the cause of viral meningoencephalitis as a milder neurological complication. Tghis study provided one more evidence about the non circulation of the wild poliovirus in Cuba.

Se introdujo la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa para la caracterización intratípica de Poliovirus. Se usaron cebadores que sólo promueven la ampliación de las cepas vacunales de Sabin, comprobada por corrida electroforética de los productos de ADN amplificados (Sabin 1-97 pb, Sabin 2-71 pb, Sabin 3-44 pb) y cuya especificidad se verificó satisfactoriamente. Se estudiaron por esta técnica 23 cepas cubanas de Poliovirus aisladas e identificadas en el Laboratorio de Enterovirus del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" de 1993 a 1994, y todas resultaron ser del tipo vacunal. Se observó cómo el Poliovirus vacunal de Sabin puede ser causa de meningoencefalitis viral como complicación neurológica más leve. Este estudio aportó una evidencia más a favor de la no circulación del Poliovirus salvaje en Cuba.

An increase of the cases of viral meningoencephalitis was reported in our country from October to December, 1995. 23 faeces specimens were received from 2 provinces aimed at obtaining the viral isolation by their inoculation in cell culture and in newborn mice at the same time in order to compare the sensitivity of both systems in isolation. A higher number of isolations was obtained in cell culture. The cell culture from kidney of a normal adult green African monkey (Vero) proved to be more sensitive. 18 isolations were obtained and identified as Coxsackievirus B5. An anatomical and pathological study was conducted in inoculated mice and injuries compatible with the enteroviral infection were observed.

Entre los meses de octubre y diciembre de 1995 se reportó un incremento en los casos de meningoencefalitis viral en nuestro país. Se recibieron 23 muestras de heces fecales, que procedían de 2 provincias, con la finalidad de obtener el aislamiento viral mediante la inoculación de éstas en cultivo de células y ratones recién nacidos simultáneamente, para comparar la sensibilidad de ambos sistemas en el aislamiento. Se obtuvo un mayor número de aislamientos en cultivo de células que en ratones, el cultivo de células de riñón de mono verde africano adulto normal (Vero) resultó el más sensible. Se lograron 18 aislamientos, que fueron identificados como Coxsackievirus B5. Se realizó un estudio anatomo-patológico en ratones inoculados y se observaron lesiones compatibles con la infección enteroviral.

Of the 115 patients who suffered from epidemic neuropathy and receved attention from March 16 de April 30, 1993, at the Center for Medical and Surgical Research (CMSR), in Havana City, 114 controls were selected at random in the community. In the univariate analysis it was found a significant association mainly with the smoking habit (odds ratio = 3,45 [95 % confidence interval 1.85 to 6.35)] and with the consumption of edible fat of uncerfified procedence (odds ratio = 2.77 [95 % confidence interval 1.34 to 5.8]). All were ratified in the multivariate logistical regression analysis. Association (odds ratio = 8.8 [95 % confidence interval 2.58 to 30.55] with the presence of antibodies against the Coxsackie virus A-9 strain 47 was also found among the 182 individuals who had serological test. It seems that the toxic factor derived from the smoking habit, together with the deficiency of some nutrients due to the changes occurred in the diet, as well as the contact with the isolated virus in one of the patients facilitated the clinical expression of this disease and therefore in the origin of the epidemics.

A partir de los 115 enfermos atendidos por neuropatía epidémica entre el 15 de marzo al 30 de abril de 1993 en el Centro de Investigaciones Médicos Quirúrgicas (CIMEQ) de Ciudad de La Habana, fueron seleccionados aleatoriamente 114 controles en la comunidad. En el análisis univariado se encontró asociación significativa sobre todo con el hábito de fumar (razón de disparidad = 3,45 [intervalo de confianza al 95 % = 1,85-6,35]) y el consumo de grasa comestible de procedencia no certificada (razón de disparidad = 2,77 [intervalo de confianza 95 % = 1,34-5,8]). Fueron ratificados todos en el análisis de regresión logística multivariada y se encontró además asociación (razón de disparidad = 8,88 [intervalo de confianza 95 % = 2,58-30,55]) con la presencia de anticuerpos frente al virus Coxsackie A-9 cepa 47, entre los 182 individuos que tenían examen serológico. Todo parece indicar que el factor tóxico derivado del hábito de fumar, unido a deficiencias de algunos nutrientes por los cambios ocurridos en la dieta, así como el contacto con el virus aislado en 1 de los pacientes facilitaron la expresión clínica de esta enfermedad y por consiguiente en el origen de la epidemia.

During the epidemic of neuropathy occurred in Cuba from 1992 to 1994 viral agents antigenically related to the Coxsackie viruses were isolated from the cerebrospinal fluid of patients. To establish a function of these viruses in the etiopathogeny of the disease, strains 47/93 IPK identified as Coxsackie A9 and the strain 44/93 of light cytopathic effect were selected to conduct a study of their antigenic characteristics by Western Blot. It was proved that there is an antigenic relationship between both strains and it was also demonstrated the absence of structural proteins in their native form among the agents of light cytopathic effect. According to these results, it is stated the possibility that persistance may be a mechanism through which these viruses take part in the etiopathogeny of epidemic neuropathy in Cuba.

Durante la epidemia de neuropatía ocurrida en Cuba en los años 1992/1994 se aislaron del líquido cefalorraquídeo de pacientes agentes virales relacionados antigénicamente con los virus Coxsackie. Para establecer una función de estos virus en la etiopatogenia de la enfermedad se seleccionaron las cepas 47/93 IPK identificada como Coxsackie A9 y la cepa 44/93 IPK de efecto citopático ligero (ECP-L) y se realizó un estudio de sus características antigénicas mediante Western Blot. Se comprobó la relación antigénica entre ambas cepas y se demostró la ausencia de proteínas estructurales en su forma nativa en los agentes de ECP-L. A partir de estos resultados se plantea la posibilidad de que la persistencia sea un mecanismo por el cual estos virus participen en la etiopatogenia de la neuropatía epidémica en Cuba.

An etiopathogenic hypothesis is explained taking into consideration the most significant results of the research performed on neuropathy as well as the latest knowledge about the infections produced by Enterovirus. The hypothesis allows to make a logical interpretation of these results; however, the new aspects included make it controversial in the light of the present knowledge of pathogeny by Enterovirus. Further research is needed to confirm this hypothesis.

Se formula una hipótesis etiopatogénica que toma en consideración los resultados más significativos de las investigaciones realizadas sobre la neuropatía y los últimos conocimientos acerca de las infecciones producidas por Enterovirus. La hipótesis permite dar una interpretación lógica a estos resultados. Los nuevos aspectos que plantea la hacen controvertida a la luz actual de los conocimientos de la patogenia por Enterovirus y necesita de más investigaciones que permitan su confirmación o no.

The genomic characterization of the strain of light cytopathic effect by nucleotide sequence is presented. It was possible to sequence 90 % of the strain of light cytopathic effect. A close relationship with Coxsackie A9 was observed. The greatest mutations occurred in the region of the genoma that codifies for the structural proteins. Therefore, it may be considered as a variant of Coxsackie A9 never reported before.

Se presenta la caracterización genómica de la cepa de efecto citopático ligero por secuenciación nucleotídica. Se logró secuenciar el 90 % de la cepa de efecto citopático ligero, se mostró una estrecha relación con los Coxsackie A9 y las mayores mutaciones ocurrieron en la región del genoma que codifica para las proteínas estructurales. De ahí que se pueda considerar una variante de Coxsackie A9 no reportada antes.