ABSTRACT Objective: The treatment of ovarian cancer is complicated by high drug-resistance often linked to over-expression of focal adhesion kinase (FAK). Additionally, cancer cells preferentially metabolize glucose and hyperglycaemia is considered a promoter of tumour growth. In this context, the anti-diabetic drug metformin is being investigated as a potential treatment. The present study assessed the cytotoxic effects of metformin and FAK inhibitor, PF-573228, as therapeutic adjuncts with carboplatin in the treatment of platinum resistant OVCAR3 ovarian cancer cells. Method: OVCAR-3 cells were maintained in eagle's minimum essential medium (EMEM) complete media (80% EMEM, 20% FBS, 1% antibiotic) with a culture environment of 5% CO2 at 37 °C. Cells were exposed to metformin (5 mM, 25 mM, 50 mM), carboplatin (1 μM, 10 μM, 100 μM) and FAK inhibitor, PF-573228 (5 μM, 50 μM, 100 μM) over 24 hours in triplicates to determine IC50. Twenty-four-hour combination treatments of metformin plus carboplatin, metformin plus PF-573228 and metformin plus carboplatin plus PF-573228 were carried out in triplicates. Cytotoxicity tests were performed using the (MTT) [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] assay and absorbance was measured by a spectrophotometer at 570 nm. Results: Metformin, carboplatin and FAK inhibitor (PF-573228), alone induced a dose-dependent cytotoxicity in OVCAR-3 cells with IC50 of 26.31 mM, 57 μM and 100 μM, respectively. For combination treatments, metformin significantly enhanced the cytotoxic effects of carboplatin by 10% (p = 0.0002) and PF-573228 by 36% (p < 0.00001). The combination result of all three revealed 94% (p < 0.000001) cytotoxicity which was significantly higher than metformin only (29%, p < 0.05) or carboplatin and PF573228 only which produced 50% cytotoxicity. Conclusion: Metformin potentiates the cytotoxic effects of carboplatin and PF-573228, in platinum resistant ovarian cancer cells.
RESUMEN Objetivo: El tratamiento del cáncer ovárico es complicado por la alta resistencia a los fármacos vinculada a menudo a la sobreexpresión de la quinasa de adhesión focal (FAK, siglas en inglés). Además, las células cancerosas metabolizan preferentemente la glucosa, y la hiperglucemia se considera un promotor del crecimiento tumoral. En este contexto, el fármaco antidiabético metformina ahora se está investigando como un tratamiento potencial. El presente estudio evaluó los efectos citotóxicos de la metformina y el inhibidor de la FAK, PF-573228, como complementos terapéuticos con el carboplatino en el tratamiento de las células cancerosas ováricas de la línea celular del carcinoma ovárico humano resistente al platino (OVCAR-3). Método: Las células OVCAR-3 fueron mantenidas en medios completos del medio esencial mínimo de Eagle (EMEM) (80% EMEM; 20% FBS; 1% antibiótico) con un ambiente de cultivo de 5% de dióxido de carbono (CO2) a 37°C. Las células se expusieron a metformina (5 mM, 25 mM, 50 mM), carboplatino (1 μM, 10 μM, 100 μM) e inhibidor de FAK, PF-573228 (5 μM, 50 μM, 100 μM) más de 24 horas por triplicado para determinar IC50. Tratamientos combinados de 24 horas de metformina con carboplatino, metformina con PF-573228, y metformina con Carboplatino y PF-573228 se realizaron por triplicados. Las pruebas de citotoxicidad se realizaron mediante el ensayo MMT y la absorbancia se midió mediante un espectrofotómetro a 570 nm. Resultados: La metformina, el carboplatino y el inhibidor de la FAK (PF-573228) indujeron una citotoxicidad dependiente de la dosis en las células OVCAR-3 con un IC50 de 26.31 mM, 57 μM y 100 μM, respectivamente. Para los tratamientos combinados, la metformina mejoró significativamente los efectos citotóxicos del carboplatino en un 10% (p = 0.0002) y PF-573228 en 36% (p < 0.00001). El resultado de la combinación de los tres reveló 94% (p < 0.000001) de citotoxicidad, que fue significativamente más alto que la metformina solamente (29% p < 0.05) o el carboplatino y PF573228 sólo, que produjeron un 50% de citotoxicidad. Conclusión: La metformina potencia los efectos citotóxicos del carboplatino y PF-573228, en las células cancerosas ováricas resistente al platino.