Probability-based empirical methods were employed as an alternative approach to predicting uncertainties associated with rock mass properties. The focus was on developing probabilistic spreadsheets to forecast rock mass classification indexes. Histograms were constructed to describe the best distribution in predicting rock mass properties. The developed models also offer utility in predicting the impact of discontinuities within the rock mass on rock strength and rock mass classification systems. Statistical analyses identified volumetric joint count, joint spacing, joint frequency, and rock strength as the most influential parameters. Moreover, the statistical analysis revealed varying degrees of correlation among different rock mass properties. While some properties demonstrated significant correlations suitable for modelling, others did not align well with any correlation model. The results highlight the need for a comprehensive approach to rock mass characterization, considering multiple factors beyond volumetric joint count. Geological complexities, including tectonic activity and weathering processes, may obscure direct correlations. These results emphasize the importance of empirical modelling and detailed site investigations for accurate assessment of rock mass quality and stability in the Himalaya.

Resumo O presente estudo envolve a análise química e bacteriológica de água de diferentes fontes, ou seja, furo, poços, garrafa e torneira, dos distritos de Peshawar, Mardan, Swat e Kohat da província de Khyber Pakhtunkhwa (KP), Paquistão. De cada distrito, 50 amostras de água (10 amostras de cada fonte), independentemente do status urbano e rural, foram coletadas dessas fontes e analisadas para sulfatos, nitratos, nitritos, cloretos, sólidos solúveis totais e coliformes (E. coli). Os resultados indicaram que a maioria das fontes de água tinha uma contagem inaceitável de E. coli, ou seja, > 34 UFC / 100 mL. As amostras positivas para E. coli foram elevadas no distrito de Mardan, seguido por Kohat, Swat e distrito de Peshawar. Além disso, algumas fontes de água também foram contaminadas quimicamente por diferentes fertilizantes inorgânicos (nitratos/nitritos de sódio, potássio), mas em níveis seguros, enquanto os resíduos agrícolas e industriais (compostos de cloreto e sulfato) estavam em níveis inseguros. Entre todos os distritos, a qualidade da água foi considerada comparativamente mais deteriorada nos distritos de Kohat e Mardan do que nos distritos de Peshawar e Swat. Essas fontes de água química e bacteriologicamente impróprias para beber podem causar problemas à saúde humana.

Abstract The present study involves the chemical and bacteriological analysis of water from different sources i.e., bore, wells, bottle, and tap, from Peshawar, Mardan, Swat and Kohat districts of Khyber Pakhtunkhwa (KP) province, Pakistan. From each district, 50 water samples (10 samples from each source), regardless of urban and rural status, were collected from these sources and analysed for sulphates, nitrates, nitrites, chlorides, total soluble solids and coliforms (E. coli). Results indicated that majority of the water sources had unacceptable E. coli count i.e.> 34 CFU/100mL. E. coli positive samples were high in Mardan District, followed by Kohat, Swat and Peshawar district. Besides this, the some water sources were also chemically contaminated by different inorganic fertilizers (nitrates/nitrites of sodium, potassium) but under safe levels whereas agricultural and industrial wastes (chloride and sulphate compounds) were in unsafe range. Among all districts, the water quality was found comparatively more deteriorated in Kohat and Mardan districts than Peshawar and Swat districts. Such chemically and bacteriologically unfit water sources for drinking and can cause human health problems.

Resumo Os hábitos alimentares de ratos bandicoot (Bandicota bengalensis) foram investigados nas plantações agrícolas do planalto de Pothwar, Paquistão, por meio da análise do conteúdo estomacal. As atividades da pesquisa foram conduzidas nas principais culturas de campo, incluindo trigo e amendoim, e em terras de pousio durante a estação não agrícola nos limites do campo. Os espécimes foram capturados dos campos usando armadilhas kill/snap e dissecados para coletar suas amostras de estômago para análise laboratorial. Lâminas de microscopia de luz do material vegetal foram recuperadas de amostras de estômago; os materiais de referência foram coletados no campo. Os resultados revelaram que o rato bandicoot alimentava-se predominantemente de culturas cultivadas durante a época de cultivo, mas consumia vegetação selvagem durante a época de não colheita. Não houve diferença significativa entre as dietas de verão e inverno. Os alimentos agrícolas mais frequentemente consumidos foram trigo (Triticum aestivum; 28,57%), amendoim (Arachis hypogea; 11,26%), sorgo (Sorghum bicolor; 10,17%), grão de bico (Cicer arietinum; 9,52%), milho (Zea mays; 6,49%), milheto (Pennisetum glaucum; 5,84%), cevada (Hordeum vulgare; 4,98%) e mostarda (Brassica campestris; 4,98%). Entre a vegetação silvestre foram consumidos khbal gha (Cynodon dactylon; 7,79%), barão dhab (Demostachya bipinnata; 7,36%) e flor espinhosa (Achyranthes aspera; 3,03%). O estudo conclui que, além de consumir culturas de trigo e amendoim, o rato bandicoot pequeno também subsiste de gramíneas, ervas daninhas e algumas culturas forrageiras, componentes importantes de sua dieta no agroecossistema do planalto de Pothwar.

Abstract Dietary habits of bandicoot rats (bandicota bengalensis) were investigated in the agricultural crops of the Pothwar Plateau, Pakistan by analysing stomach contents. The research activities were conducted in major field crops including wheat-groundnut and in the fallow lands during non-crop season at the field boundaries. The specimens were captured from the fields using kill/snap traps, and dissected to collect their stomach samples for laboratory analysis. Light microscopic slides of the plant material were recovered from stomach samples and the reference materials were collected from the field. Results revealed that the bandicoot rat predominantly fed upon cultivated crops during cropping season but consumed wild vegetation during non-cropping season. There was no significance difference between summer and winter diets. Most frequently consumed crop food items were wheat (Triticum aestivum; 28.57%), groundnut (Arachis hypogea; 11.26%), sorghum (Sorghum bicolor; 10.17%), chickpea (Cicer arietinum; 9.52%), maize (Zea mays; 6.49%), millet (Pennisetum glaucum; 5.84%), barley (Hordeum vulgare; 4.98%) and mustard (Brassica campestris; 4.98%). Among wild vegetation were consumed khbal gha (Cynodon dactylon; 7.79%), baron dhab (Demostachya bipinnata; 7.36%) and Prickly flower (Achyranthes aspera; 3.03%). The study concludes that, in addition to consuming wheat and groundnut crops, the Lesser bandicoot rat also subsists on grasses, weeds, and some fodder crops, as important component of its diet in agro-ecosystem of the Pothwar Plateau.

Abstract The national burden of HCV has significantly mounted over the period of last few decades placing Pakistan at the worst placement of second largest burden of HCV globally. Herein for the first time from Pakistan, we examined clinical correlation of potential biomarkers with HCV. Nation-wide study was conducted on 13,348 suspected HCV patients during 2018-2022. During pre-COVID-19 era of 2018-2019, prevalence of HCV remained 30%. During 2018, among HCV positive patients, 91% of ALT, 63% of AST, 67% of GGT, 28% of Bili T, 62% of HB, 15% of HBA1C, 25% of CREAT, 15% of PT, 15% of aPTT and 64% of AFP were abnormal. During 2019, among HCV infected 74.47% of ALT, 63.54% of AST, 70.24% of GGT, 24.71% of Bili T, 8.77% of HB and 75% of AFP were raised. CT/CAT scan revealed 4.65% liver complications (mild 13.04%, moderate 30.43% and severe 56.52%). During 2020, HCV prevalence remained 25%. 65.17% of ALT, 64.20% of AST, 68.75% of GGT, 31.25% of Bili T, 20.97% of HB, 4.65% of CREAT and 73.68% of AFP levels were raised. CAT analysis revealed liver complications among 4.41% (14.81% mild, 40.74% moderate, and 44.44% sever). 85.71% of participants diabetes was out of control. During 2021, HCV prevalence remained 27.1%. ALT (73.86%), AST (50.6%), GGT (67.95%), Bili T (28.21%), HB (20%), CREAT (5.8%) and AFP (82.14%) levels were abnormal. During 2022, the levels of ALT (56.06%), AST (56.36%), GGT (56.6%), Bili T (19.23%), HB (43.48%), HBA1C (14.81), CREAT (18.92%), AFP (93.75%) were abnormal. CAT analysis revealed 7.46% liver complications (25% mild, 30.36% moderate, and 42.86% sever). During 2021-2022, 83.33% of subject’s diabetes was not controlled. globally Nationwide Nation wide 13348 13 348 13,34 20182022. 20182022 2018 2022. 2022 2018-2022 preCOVID19 preCOVID pre COVID 19 pre-COVID-1 20182019, 20182019 2019 2018-2019 30 30% 91 63 67 28 62 15 HBAC HBA C 25 PT 64 abnormal 7447 74 47 74.47 6354 54 63.54 7024 70 24 70.24 2471 71 24.71 877 8 77 8.77 75 raised CTCAT CT 465 4 65 4.65 mild 1304 04 13.04% 3043 43 30.43 56.52%. 5652 56.52% . 56 52 56.52%) 2020 6517 17 65.17 6420 20 64.20 6875 68 68.75 3125 31 31.25 2097 97 20.97 7368 73 73.68 441 41 4.41 14.81% 1481 14 81 (14.81 4074 40 40.74 4444 44 44.44 sever. sever sever) 8571 85 85.71 control 2021 271 27 1 27.1% 73.86%, 7386 73.86% , 86 (73.86%) 50.6%, 506 50.6% 50 6 (50.6%) 67.95%, 6795 67.95% 95 (67.95%) 28.21%, 2821 28.21% 21 (28.21%) 20%, 20% (20%) 5.8% 58 5 (5.8% 82.14% 8214 82 (82.14% 56.06%, 5606 56.06% 06 (56.06%) 56.36%, 5636 56.36% 36 (56.36%) 56.6%, 566 56.6% (56.6%) 19.23%, 1923 19.23% 23 (19.23%) 43.48%, 4348 43.48% 48 (43.48%) 14.81, 14.81 (14.81) 18.92%, 1892 18.92% 18 92 (18.92%) 93.75% 9375 93 (93.75% 746 7 46 7.46 (25 3036 30.36 4286 42 42.86 20212022, 20212022 2021-2022 8333 83 33 83.33 subjects subject s controlled 1334 34 13,3 2018202 201 202 2018-202 preCOVID1 pre-COVID- 2018201 2018-201 3 9 2 744 74.4 635 63.5 702 70.2 247 24.7 87 8.7 4.6 130 0 13.04 304 30.4 565 56.52 651 65.1 642 64.2 687 68.7 312 31.2 209 20.9 736 73.6 4.4 148 (14.8 407 40.7 444 44.4 857 85.7 27.1 738 73.86 (73.86% 50.6 (50.6% 679 67.95 (67.95% 282 28.21 (28.21% (20% 5.8 (5.8 82.14 821 (82.14 560 56.06 (56.06% 563 56.36 (56.36% 56.6 (56.6% 192 19.23 (19.23% 434 43.48 (43.48% 14.8 189 18.92 (18.92% 93.75 937 (93.75 7.4 (2 303 30.3 428 42.8 2021202 2021-202 833 83.3 133 13, 201820 2018-20 pre-COVID 74. 63. 70. 24. 8. 4. 13.0 30. 56.5 65. 64. 68. 31. 20. 73. (14. 40. 44. 85. 27. 73.8 (73.86 50. (50.6 67.9 (67.95 28.2 (28.21 (20 5. (5. 82.1 (82.1 56.0 (56.06 56.3 (56.36 56. (56.6 19.2 (19.23 43.4 (43.48 14. 18.9 (18.92 93.7 (93.7 7. ( 42. 202120 2021-20 83. 20182 2018-2 13. (14 (73.8 (50. 67. (67.9 28. (28.2 (5 82. (82. (56.0 (56.3 (56. 19. (19.2 43. (43.4 18. (18.9 93. (93. 20212 2021-2 2018- (1 (73. (50 (67. (28. (82 (56 (19. (43. (18. (93 2021- (73 (67 (28 (8 (19 (43 (18 (9 (7 (6 (4

Resumo A carga nacional de HCV aumentou significativamente ao longo das últimas décadas, colocando o Paquistão na pior colocação da segunda maior carga de HCV globalmente. Pela primeira vez no Paquistão, examinamos a correlação clínica de potenciais biomarcadores com HCV. Um estudo nacional foi realizado com 13.348 pacientes suspeitos de HCV de 2018 a 2022. Durante a era pré-COVID-19 de 2018 a 2019, a prevalência do HCV permaneceu em 30%. Durante 2018, entre pacientes positivos para HCV, 91% de ALT, 63% de AST, 67% de GGT, 28% de Bili T, 62% de HB, 15% de HBA1C, 25% de CREAT, 15% de PT, 15% de aPTT e 64% de AFP eram anormais. Durante 2019, entre os infectados pelo HCV, 74,47% de ALT, 63,54% de AST, 70,24% de GGT, 24,71% de Bili T, 8,77% de HB e 75% de AFP foram elevados. A TC/TAC revelou 4,65% de complicações hepáticas (leve 13,04%, moderada 30,43% e grave 56,52%). Durante 2020, a prevalência do HCV permaneceu em 25%. 65,17% de ALT, 64,20% de AST, 68,75% de GGT, 31,25% de Bili T, 20,97% de HB, 4,65% de CREAT e 73,68% de AFP estavam elevados. A análise de TAC revelou complicações hepáticas em 4,41% (14,81% leves, 40,74% moderadas e 44,44% graves). 85,71% dos participantes o diabetes estava fora de controle. Durante 2021, a prevalência de HCV permaneceu em 27,1%. Os níveis de ALT (73,86%), AST (50,6%), GGT (67,95%), Bili T (28,21%), HB (20%), CREAT (5,8%) e AFP (82,14%) estavam anormais. Durante 2022, os níveis de ALT (56,06%), AST (56,36%), GGT (56,6%), Bili T (19,23%), HB (43,48%), HBA1C (14,81), CREAT (18,92%), AFP (93,75%) eram anormais. A análise de TAC revelou 7,46% de complicações hepáticas (25% leves, 30,36% moderadas e 42,86% severas). Durante 2021 e 2022, 83,33% do diabetes do sujeito não foi controlado. décadas globalmente 13348 13 348 13.34 201 2022 préCOVID19 préCOVID pré COVID 19 pré-COVID-1 2019 30 30% 91 63 67 28 62 15 HBAC HBA C 25 PT 64 anormais 7447 74 47 74,47 6354 54 63,54 7024 70 24 70,24 2471 71 24,71 877 8 77 8,77 75 elevados TCTAC TC 465 4 65 4,65 leve 1304 04 13,04% 3043 43 30,43 56,52%. 5652 56,52% . 56 52 56,52%) 2020 6517 17 65,17 6420 20 64,20 6875 68 68,75 3125 31 31,25 2097 97 20,97 7368 73 73,68 441 41 4,41 14,81% 1481 14 81 (14,81 leves 4074 40 40,74 4444 44 44,44 graves. graves graves) 8571 85 85,71 controle 271 27 1 27,1% 73,86%, 7386 73,86% , 86 (73,86%) 50,6%, 506 50,6% 50 6 (50,6%) 67,95%, 6795 67,95% 95 (67,95%) 28,21%, 2821 28,21% 21 (28,21%) 20%, 20% (20%) 5,8% 58 5 (5,8% 82,14% 8214 82 (82,14% 56,06%, 5606 56,06% 06 (56,06%) 56,36%, 5636 56,36% 36 (56,36%) 56,6%, 566 56,6% (56,6%) 19,23%, 1923 19,23% 23 (19,23%) 43,48%, 4348 43,48% 48 (43,48%) 14,81, 14,81 (14,81) 18,92%, 1892 18,92% 18 92 (18,92%) 93,75% 9375 93 (93,75% 746 7 46 7,46 (25 3036 30,36 4286 42 42,86 severas. severas severas) 202 8333 83 33 83,33 controlado 1334 34 13.3 préCOVID1 pré-COVID- 3 9 2 744 74,4 635 63,5 702 70,2 247 24,7 87 8,7 4,6 130 0 13,04 304 30,4 565 56,52 651 65,1 642 64,2 687 68,7 312 31,2 209 20,9 736 73,6 4,4 148 (14,8 407 40,7 444 44,4 857 85,7 27,1 738 73,86 (73,86% 50,6 (50,6% 679 67,95 (67,95% 282 28,21 (28,21% (20% 5,8 (5,8 82,14 821 (82,14 560 56,06 (56,06% 563 56,36 (56,36% 56,6 (56,6% 192 19,23 (19,23% 434 43,48 (43,48% 14,8 189 18,92 (18,92% 93,75 937 (93,75 7,4 (2 303 30,3 428 42,8 833 83,3 133 13. pré-COVID 74, 63, 70, 24, 8, 4, 13,0 30, 56,5 65, 64, 68, 31, 20, 73, (14, 40, 44, 85, 27, 73,8 (73,86 50, (50,6 67,9 (67,95 28,2 (28,21 (20 5, (5, 82,1 (82,1 56,0 (56,06 56,3 (56,36 56, (56,6 19,2 (19,23 43,4 (43,48 14, 18,9 (18,92 93,7 (93,7 7, ( 42, 83, 13, (14 (73,8 (50, 67, (67,9 28, (28,2 (5 82, (82, (56,0 (56,3 (56, 19, (19,2 43, (43,4 18, (18,9 93, (93, (1 (73, (50 (67, (28, (82 (56 (19, (43, (18, (93 (73 (67 (28 (8 (19 (43 (18 (9 (7 (6 (4

Abstract Despite of the global unity against COVID-19 pandemic, the threat of SARS-CoV-2 variants on the lives of human being is still not over. SARS-CoV-2 pandemic has urged the need of rapid viral detection at earliest. To cope with gradually expanding scenario of SARS-CoV-2, accurate diagnosis is extremely crucial factor which should be noticed by international health organizations. Limited research followed by sporadic marketing of SARS-CoV-2 rapid pharmaceutical detection kits raises critical questions against quality assurance and quality control measures. Herein we aimed to interrogate effectivity and specificity analysis of SARS-CoV-2 pharmaceutical rapid detection kits (nasopharyngeal swab based) using conventional gold standard triple target real-time polymerase chain reaction (USFDA approved). A cross-sectional study was conducted over 1500 suspected SARS-CoV-2 patients. 100 real time-PCR confirmed patients were evaluated for pharmaceutical RDT kits based upon nasopharyngeal swab based kits. The SARS-CoV-2 nasopharyngeal swab based rapid diagnostic kit (NSP RDTs) analysis showed 78% reactivity. Among real time PCR confirmed negative subjects, 49.3% represented false positivity. The positive predictive analysis revealed 67.82%, while negative predictive values were 64.40%. The NSP RDTs showed limited sensitivities and specificities as compared to gold standard real time PCR. Valid and authentic detection of SARS-CoV-2 is deemed necessary for accurate COVID-19 surveillance across the globe. Current study highlights the potential consequences of inadequate detection of SARS-CoV-2 and emerging novel mutants, compromising vaccine preventable diseases. Current study emphasizes need to wake higher authorities including strategic organizations for designing adequate measures to prevent future SARS-CoV-2 epidemics. COVID19 COVID 19 COVID-1 SARSCoV2 SARSCoV SARS CoV 2 SARS-CoV- earliest SARSCoV2, 2, realtime USFDA approved. approved . approved) crosssectional cross sectional 150 10 timePCR 78 reactivity subjects 493 49 3 49.3 positivity 6782 67 82 67.82% 6440 64 40 64.40% globe mutants diseases epidemics COVID1 1 COVID- SARS-CoV 15 7 4 49. 678 6 8 67.82 644 64.40 67.8 64.4 67. 64.

Resumo Apesar da unidade global contra a pandemia de COVID-19, a ameaça das variantes do SARS-CoV-2 na vida do ser humano ainda não acabou. A pandemia de SARS-CoV-2 alertou para a necessidade de detecção viral rápida o mais cedo possível. Para lidar com o cenário de expansão gradual do SARS-CoV-2, o diagnóstico preciso é um fator extremamente crucial que deve ser observado pelas organizações internacionais de saúde. Pesquisa limitada seguida de comercialização esporádica de kits de detecção farmacêutica rápida de SARS-CoV-2 levanta questões críticas contra a garantia de qualidade e as medidas de controle de qualidade. Aqui, objetivamos questionar a eficácia e a análise de especificidade dos kits farmacêuticos de detecção rápida de SARS-CoV-2 (baseados em swab nasofaríngeo) usando a técnica de reação em cadeia da polimerase em tempo real padrão-ouro convencional (aprovado pelo USFDA). Um estudo transversal foi realizado em 1.500 pacientes suspeitos de SARS-CoV-2. Cem pacientes confirmados por PCR em tempo real foram avaliados para kits farmacêuticos de RDT baseados em kits baseados em swabs nasofaríngeas. A análise do kit de diagnóstico rápido baseado em swab nasofaríngeo SARS-CoV-2 (NSP RDTs) mostrou 78% de reatividade. Entre os indivíduos negativos confirmados por PCR em tempo real, 49,3% representaram falsa positividade. A análise preditiva positiva revelou 67,82%, enquanto os valores preditivos negativos foram de 64,40%. Os NSP RDTs mostraram sensibilidades e especificidades limitadas em comparação com a PCR em tempo real padrão-ouro. A detecção válida e autêntica do SARS-CoV-2 é considerada necessária para a vigilância precisa de COVID-19 em todo o mundo. O estudo atual destaca as possíveis consequências da detecção inadequada de SARS-CoV-2 e novos mutantes emergentes, comprometendo doenças evitáveis por vacina. O estudo atual enfatiza a necessidade de alertar autoridades superiores, incluindo organizações estratégicas, para projetar medidas adequadas para prevenir futuras epidemias de SARS-CoV-2. COVID19, COVID19 COVID 19, 19 SARSCoV2 SARSCoV SARS CoV 2 SARS-CoV- acabou possível SARSCoV2, 2, saúde Aqui padrãoouro padrão ouro aprovado USFDA. USFDA . USFDA) 1500 1 500 1.50 SARSCoV2. 2. nasofaríngeas 78 reatividade 493 49 3 49,3 positividade 6782 67 82 67,82% 6440 64 40 64,40% padrãoouro. ouro. COVID-1 mundo emergentes vacina superiores estratégicas COVID1 SARS-CoV 150 50 1.5 7 4 49, 678 6 8 67,82 644 64,40 COVID- 15 5 1. 67,8 64,4 67, 64,

Resumo O protocolo de imersão floral mediado por Agrobacterium é o método de transformação mais amplamente utilizado para uma planta-modelo Arabidopsis thaliana. Existem vários métodos úteis para transformações de Arabidopsis mediados por Agrobacterium tumefaciens, mas são demorados e com baixa eficiência de transformação. Aqui, desenvolvemos uma linha transgênica de Arabidopsis TET12p::TET12-RFP em um curto período de tempo e eficiência de transformação aprimorada usando um método de transformação modificado por meio da aplicação de estresse hídrico após o mergulho floral. Neste protocolo, células de Agrobacterium transportando vetores recombinantes TET12p::TET12-RFP foram ressuspensas em uma solução de 5% de sacarose, 0,05% (v/v) silwet L-77 para transformar gametas femininos de inflorescências de Arabidopsis em desenvolvimento. Arabidopsis tratadas foram então aplicadas com diferentes níveis de estresse hídrico para estimular as plantas a utilizar o máximo de energia da planta no processo de maturação das sementes. Os estresses aplicados alcançaram a rápida maturação das inflorescências já tratadas enquanto paravam o crescimento de inflorescências não tratadas recém-surgidas, diminuindo, assim, as chances de coleta errada de sementes não transformadas. Consequentemente, as sementes coletadas eram principalmente transgênicas, com uma frequência de transformação de pelo menos 10%; portanto, a triagem para seleção dos transformantes positivos foi mais vantajosa em um meio seletivo em comparação com um método clássico de imersão floral. Dentro de 2-3 meses, 200 plantas transgênicas individuais foram produzidas a partir de apenas 10 plantas infiltradas. Este estudo conclui que a aplicação de estresse hídrico em um estágio específico da planta é uma estratégia benéfica para alcançar a Arabidopsis transgênica em um curto período de tempo com alta eficiência de transformação.

Abstract The Agrobacterium-mediated floral dip protocol is the most extensively used transformation method for a model plant Arabidopsis thaliana. Several useful methods for Agrobacterium tumefaciens–mediated transformations of Arabidopsis are existing, but they are time consuming and with low transformation efficiency. Here, we developed a transgenic Arabidopsis lines TET12p::TET12-RFP in a short period of time and enhanced transformation efficiency by using a modified transformation method by applying drought stress after floral dip. In this protocol, Agrobacterium cells carrying TET12p::TET12-RFP recombinant vectors were resuspended in a solution of 5% sucrose, 0.05% (v/v) silwet L-77 to transform female gametes of developing Arabidopsis inflorescences. Treated Arabidopsis were then applied with different levels of drought stresses to stimulate plants for the utilization of maximum plant energy in seed maturation process. The applied stresses achieved the fast maturation of already treated inflorescences while stopped the growing of newly arising untreated inflorescence, thus decreased the chances of wrong collection of untransformed seeds. Consequently, the collected seeds were mostly transgenic with a transformation frequency of at least 10%, thus the screening for positive transformants selection was more advantageous on a selective medium as compared to a classical floral dip method. Within 2-3 months, two hundred of individual transgenic plants were produced from just 10 infiltrated plants. This study concludes that application of drought stresses in a specific stage of plant is a beneficial strategy for achieving the transgenic Arabidopsis in a short period of time with high transformation efficiency.

Resumo Os efeitos protetores antidiabéticos e hepatorrenais dos extratos etanólicos de Citrullus colocynthis e Momordica charantia foram investigados em ratos albinos machos diabéticos induzidos por estreptozotocina (STZ). Ratos diabéticos foram tratados com extrato misto de C. colocynthis, M. charantia ou C. colocynthis + M. charantia na dose de 250 mg/kg de peso corporal por via oral por dia durante 21 dias. O peso corporal médio de todos os grupos de ratos diabéticos no dia 1 de tratamento (dia 10 de diabetes) foi significativamente menor do que o grupo de ratos controle normal (P < 0,05). O nível de glicose no sangue de todos os grupos de ratos diabéticos no dia 1 de tratamento (dia 10 de diabetes) foi significativamente (P < 0,05) maior (> 200 mg/dl) do que o grupo de ratos controle normal (95,5 ± 2,7). Ao final do tratamento (dia 21), os ratos diabéticos tratados com extratos vegetais apresentaram aumento significativo (P < 0,05) no peso corporal e redução significativa (P < 0,05) na glicemia quando comparados aos animais controle diabéticos. Aumento significativo (< 0,05) foi observado nos níveis séricos de bilirrubina, alanina transaminase (ALT), aspartato transaminase (AST), fosfatase alcalina (ALP), ureia e creatinina do grupo controle diabético. Os níveis séricos desses parâmetros hepáticos e renais de ratos diabéticos tratados com extrato vegetal foram significativamente menores quando comparados ao grupo controle de ratos diabéticos (p < 0,05). Fotomicrografias de microseções de fígado e rim de ratos diabéticos tratados com esses extratos vegetais mostraram melhora nas histoarquiteturas hepatorrenais. Concluiu-se que os extratos metanólicos de C. colocynthis e M. charantia são antidiabéticos e hepatorrenais protetores em ratos machos diabéticos induzidos por STZ. O tratamento de ratos diabéticos com extrato misto de C. colocynthis + M. charantia é mais eficaz na melhora do diabetes e lesões hepatorrenais em ratos machos diabéticos induzidos por STZ.

Abstract The antidiabetic and hepato-renal protective effects of Citrullus colocynthis and Momordica charantia ethanol extracts were investigated in streptozotocin (STZ) induced diabetic male albino rats. Diabetic rats were treated with C. colocynthis, M. charantia or C. colocynthis + M. charantia mixed extract at a dose of 250 mg /kg body weight per oral per day for 21 days. The mean body weight of all the diabetic rat groups on day 1 of treatment (day 10 of diabetes) was significantly lower than the normal control rat group (P<0.05). The blood glucose level of all the diabetic rat groups on day 1 of treatment (day 10 of diabetes) was significantly (P<0.05) higher (> 200 mg/dl) than the normal control rat group (95.5 ± 2.7). At the end of treatment (day 21), the diabetic rats treated with plant extracts showed significant increase (P<0.05) in body weight and significant (P<0.05) reduction in blood glucose level when compared to diabetic control animals. Significant increase (< 0.05) was observed in the serum bilirubin, alanine transaminase (ALT), aspartate transaminase (AST), alkaline phosphatase (ALP), urea and creatinine levels of diabetic control rat group. The serum levels of these liver and kidney-related parameters of diabetic rats treated with plant extract were significantly lower when compared to diabetic control rat group (p < 0.05). Photomicrographs of liver and kidney microsections from diabetic rats treated with these plant extracts showed amelioration in the hepato-renal histoarchitectures. It was concluded that the C. colocynthis and M. charantia methanol extracts are antidiabetic and hepato-renal protective in STZ induced diabetic male rats. Treatment of the diabetic rats with C. colocynthis + M. charantia mixed extract is more effective in the amelioration of diabetes and hepato-renal injuries in STZ induced diabetic male rats.

Resumo O presente estudo teve como objetivo investigar a relação entre polimorfismos em genes desintoxicantes (GSTM1, GSTT1 e GSTP1) e sua associação com câncer colorretal (CCR) em tabagistas da etnia pashtun. Os polimorfismos nos genes selecionados foram genotipados em um estudo de caso-controle composto por 100 pacientes do sexo masculino com CCR, confirmados histologicamente, e 100 controles saudáveis, pareados por ano de nascimento e sexo usando o método PCR-RFLP. Os genótipos GSTM1 nulo e GSTT1 nulo contribuíram significativamente para o risco de CCR nos casos (OR = 3,131, IC 95%: 1,451-6,758, P = 0,004; OR = 3,541, IC 95%: 1,716-7,306, P = 0,001, respectivamente), enquanto a associação observada para GSTP1 Val/Val (1,139, IC 95%: 0,356-3,644, P = 0,826) não apresentou significância estatística. O GSTM1 nulo e o GSTT1 nulo combinados mostraram um risco 41 vezes maior (IC 95%: 4,945-351,950, P = 0,001) para CCR, enquanto os genótipos GSTM1 nulo e GSTP1 Ile/Val ou Val/Val combinados apresentaram risco cerca de 3 vezes maior (IC 95%: 1,196-7,414, P = 0,019) para CCR. Da mesma forma, os genótipos combinados GSTT1 nulo e GSTP1 Ile/Val ou Val/Val tiveram um risco para CRC cerca de 3 vezes maior (95% CI: 1,285-8,101, P = 0,013). Na combinação de três genótipos GST, os genótipos GSTM1 nulo, GSTT1 nulo e GSTP1 Ile/Val ou Val/Val apresentaram um risco 22 vezes maior (IC 95%: 2,441-212,106, P = 0,006) para CRC. Nossos achados sugerem que o polimorfismo GSTM1 e GSTT1 e sua combinação com GSTP1 podem estar associados à suscetibilidade ao CRC da população pashtun de Khyber Pakhtunkhwa, Paquistão, viciada em Naswar.

Abstract The current study aimed to investigate the relationship between polymorphisms in detoxifying (GSTM1, GSTT1, and GSTP1) genes and their association with colorectal cancer (CRC) in tobacco addicts of Pashtun ethnicity. Polymorphisms in the selected genes were genotyped in a case-control study consisting of 100 histologically confirmed male CRC patients and 100 birth-year and gender-matched healthy controls using the PCR−RFLP method. The GSTM1 null, and GSTT1 null genotypes were significantly contributed to the risk of CRC in the cases (OR= 3.131, 95% CI: 1.451−6.758, P = 0.004, and OR= 3.541, 95% CI: 1.716−7.306, P = 0.001, respectively), whereas the association observed for GSTP1 Val/Val (1.139, 95% CI: 0.356−3.644, P = 0.826) did not show statistical significance. The combined GSTM1 null and GSTT1 null showed a 41-fold increased risk (95% CI: 4.945−351.950, P = 0.001), while, the combined GSTM1 null and GSTP1 Ile/Val or Val/Val variant genotypes exhibited about 3-fold (95% CI: 1.196−7.414, P = 0.019) increased risk to CRC. Similarly, the combined GSTT1 null and GSTP1 Ile/Val or Val/Val variant genotypes showed about a 3-fold (95% CI: 1.285−8.101, P = 0.013) increased risk of CRC. In the combination of three GST genotypes, the GSTM1 null, GSTT1 null, and GSTP1 Ile/Val or Val/Val variant genotypes demonstrated a more than a 22-fold (95% CI: 2.441−212.106, P = 0.006) increased risk of CRC. Our findings suggest that GSTM1 and GSTT1 polymorphism and its combination with GSTP1 may be associated with CRC susceptibility in the Naswar addicted Pashtun population of Khyber Pakhtunkhwa, Pakistan.

Resumo O mel é uma das substâncias mais nutritivas do mundo, possuindo diversos serviços na regulação das funções do organismo. Dez elementos (K, Na, Ca, Co, Cr, Mn, Mo, Ni, Pb, Se) de amostras de mel foram analisados em 80 locais diferentes de Punjab e dez floras. O objetivo do presente estudo foi determinar a qualidade e quantidade de minerais e análises físico-químicas em mel. Um fotômetro de chama foi usado para medir a concentração dos principais minerais (K, Ca e Na). A concentração de microminerais (Co, Cr, Mn, Mo, Ni, Pb e Se) foi analisada utilizando espectrômetro de absorção atômica. A concentração de macroelementos obtida foi a seguinte (em ppm): K (166-1732), Na (107-418) e Ca (07-99), enquanto a concentração de microelementos (em ppm) Co (1-2), Cr (> 1), Mn (< 1), Mo (1,818), Ni (1,911), Pb (< 1) e Se (1,968). Os minerais mais abundantes foram potássio, cálcio e sódio, variando entre 396-810,5, 17,5-640,63 e 169,88-238,62 ppm, respectivamente. No entanto, os oligoelementos do mel foram obtidos na ordem decrescente Se > Co > Ni > Pb > Cr > Mo > Mn. Os resultados mostraram que todos os metais pesados como Co, Cr, Ni e Pb estavam presentes em quantidades vestigiais e próximos ao Padrão Internacional de Qualidade do Mel. O resultado de determinadas amostras de mel representou o maior valor de umidade (31,23%), cor (80 mm pfund), pH (8,23), acidez (72,02 meq/kg), condutividade elétrica (0,85 ms/cm) e teor de cinzas (0,83%).

Abstract Honey is one of the best nutritious substances in the world, having different services in the body functions regulation. Ten elements (K, Na, Ca, Co, Cr, Mn, Mo, Ni, Pb, Se) from honey samples were analyzed from 80 different locations of Punjab and ten floras. The aim of the present study was to determine the quality and quantity of minerals and Physico-chemical analysis in honey. A flame photometer was used to measure the concentration of major minerals (K, Ca and Na). The concentration of micro minerals (Co, Cr, Mn, Mo, Ni, Pb and Se) was analyzed using Atomic Absorption Spectrometer. The concentration of macro-elements obtained was as follow (in ppm): K (166-1732), Na (107-418) and Ca (07-99), while the concentration of microelements (in ppm) Co (1-2), Cr (>1), Mn (<1), Mo (1.818), Ni (1.911), Pb (<1) and Se (1.968). The most abundant minerals were potassium, calcium and sodium, ranging between 396-810.5, 17.5-640.63 and 169.88-238.62 ppm, respectively. However, the trace mineral elements of honey were obtained in the order of decreasing Se > Co > Ni > Pb > Cr > Mo > Mn. The findings showed that all the heavy metals like Co, Cr, Ni and Pb were present in trace amounts and close to International Honey Quality Standard. The result of given honey samples represented highest value of moisture (31.23%), color (80 mm pfund), pH (8.23), acidity (72.02 meq/kg), electrical conductivity (0.85 ms/cm) and ash contents (0.83%).

Resumo A fibrose hepática é a fase inicial de qualquer doença hepática crônica, e em sua fase final desenvolve-se para cirrose. As doenças hepáticas crônicas são uma questão de saúde global crucial e a causa de aproximadamente 2 milhões de mortes por ano em todo o mundo. A cirrose, hoje em dia, é a 11ª causa mais comum de morte globalmente. O tratamento da célula-tronco mesenquimal (MSCs) é uma maneira eletiva de tratar a doença hepática aguda e crônica. O objetivo deste estudo é melhorar o potencial terapêutico dos MSCs combinados com a melatonina (MLT) para superar a fibrose hepática induzida por CCl4 e também investigar o impacto individual da melatonina e MSCs contra o comprometimento do fígado induzido por CCl4 no modelo animal. Os ratos BALB / C fêmeas foram usados como modelo de animal fibrótico de fígado induzido por CCl4. Cinco grupos de modelo animal foram feitos: Controle Negativo, Controle Positivo, CCl4 + MSCs Tratados Grupo, Grupo Tratado CCl4 + MLT e Grupo Tratado CCl4 + MSCs + MLT. MSCs cultivados da medula óssea dos ratos foram transplantados para o modelo de camundongos de fígado induzido por CCl4, individualmente, bem como em conjunto com a melatonina. Duas semanas após a administração MSCs e MLT, todos os grupos de camundongos foram sacrificados para o exame. Os resultados morfológicos e histopatológicos mostraram que a terapia combinada do MSCs + MLT mostrou impacto benéfico substancial no modelo ferido no fígado induzido pelo CCl4, em comparação com o MSCs e o MLT individualmente. A redução bioquimicamente considerável foi observada em bilirrubina sérica e níveis ALT de ratinhos tratados com MLT + MSCs, em comparação com outros grupos. Os resultados de PCR mostraram regulação negativa do BAX e regulação positiva do BCL-XL e da albumina, confirmando um efeito terapêutico significativo do MSCs + MLT na fibrose hepática induzida por CCl4. Dos resultados, conclui-se que a terapia combinada de MSCs e MLT mostram um forte efeito terapêutico na fibrose hepática induzida por CCl4, em comparação com MSCs e MLT individualmente.

Abstract Liver fibrosis is initial stage of any chronic liver disease and its end stage is develops into cirrhosis. Chronic liver diseases are a crucial global health issue and the cause of approximately 2 million deaths per year worldwide. Cirrhosis is currently the 11th most common cause of death globally. Mesenchymal stem cell (MSCs) treatment is the best way to treat acute and chronic liver disease. The aim of this study is to improve the therapeutic potential of MSCs combined with melatonin (MLT) to overcome CCl4-induced liver fibrosis and also investigate the individual impact of melatonin and MSCs against CCl4-induced liver impairment in animal model. Female BALB/c mice were used as CCL4-induced liver fibrotic animal model. Five groups of animal model were made; negative control, Positive control, CCl4+MSCs treated group, CCl4+MLT treated group and CCl4+MSCs+MLT treated group. Cultured MSCs from mice bone marrow were transplanted to CCl4-induced liver injured mice model, individually as well as together with melatonin. Two weeks after MSCs and MLT administration, all groups of mice were sacrificed for examination. Morphological and Histopathological results showed that combined therapy of MSCs+MLT showed substantial beneficial impact on CCl4-induced liver injured model, compared with MSCs and MLT individually. Biochemically, considerable reduction was observed in serum bilirubin and ALT levels of MLT+MSC treated mice, compared to other groups. PCR results shown down-regulation of Bax and up-regulation of Bcl-xl and Albumin, confirm a significant therapeutic effect of MSCs+MLT on CCI4-induced liver fibrosis. From the results, it is concluded that combined therapy of MSCs and MLT show strong therapeutic effect on CCL4-induced liver fibrosis, compared with MSCs and MLT individually.

Resumo A ferrugem da folha, causada por Puccinia triticina, é a ferrugem mais comum do trigo. O fungo é um parasita obrigatório, capaz de produzir urediniósporos infecciosos. Para estudar a estrutura genética da população de ferrugem da folha, 20 primers RAPD foram avaliados em 15 amostras de isolados coletadas no Paquistão. Um total de 105 fragmentos RAPD foram amplificados com uma média de 7 fragmentos por primer. O número de fragmentos amplificados variou de 1 a 12. GL Decamer L-07 e GL Decamer L-01 amplificaram o maior número de bandas (doze), e o primer GL Decamer A-03 amplificou o menor número de bandas, ou seja, um. Os resultados mostraram que quase todos os isolados investigados eram geneticamente diferentes, o que confirma a alta diversidade genética na população de ferrugem da folha. Os esporos de ferrugem podem seguir o padrão de migração em distâncias curtas e longas para áreas vizinhas. Os resultados indicaram que a maior variabilidade foi revelada por 74,9% da diferenciação genética nas populações de ferrugem. Esses resultados sugeriram que cada população não era completamente idêntica e um alto fluxo gênico ocorreu entre a população de ferrugem da folha de diferentes áreas. A maior diferenciação e distância genética entre as populações de ferrugem da folha do Paquistão foram detectadas entre a população de ferrugem da folha no isolado NARC (NARC-4) e AARI-11 e a maior similaridade foi observada entre os isolados NARC (NARC-4) e (NARC-5). O presente estudo mostrou que a população de ferrugem da folha no Paquistão é altamente dinâmica e variável.

Abstract Leaf rust, caused by Puccinia triticina, is the most common rust disease of wheat. The fungus is an obligate parasite capable of producing infectious urediniospores. To study the genetic structure of the leaf rust population 20 RAPD primers were evaluated on 15 isolates samples collected in Pakistan. A total of 105 RAPD fragments were amplified with an average of 7 fragments per primer. The number of amplified fragments varied from 1 to 12. GL Decamer L-07 and GL Decamer L-01 amplified the highest number of bands (twelve) and primer GL Decamer A-03 amplified the lowest number of bands i.e one. Results showed that almost all investigated isolates were genetically different that confirms high genetic diversity within the leaf rust population. Rust spores can follow the migration pattern in short and long distances to neighbor areas. Results indicated that the greatest variability was revealed by 74.9% of genetic differentiation within leaf rust populations. These results suggested that each population was not completely identical and high gene flow has occurred among the leaf rust population of different areas. The highest differentiation and genetic distance among the Pakistani leaf rust populations were detected between the leaf rust population in NARC isolate (NARC-4) and AARI-11and the highest similarity was observed between NARC isolates (NARC-4) and (NARC-5). The present study showed the leaf rust population in Pakistan is highly dynamic and variable.

Resumo Os produtos naturais têm se mostrado muito eficazes contra várias doenças desafiadoras, incluindo câncer e infecções bacterianas. O gálio tricorne é uma importante fonte de produtos naturais, ainda pouco explorada, apesar de sua profunda proeminência etnomedicinal. O presente estudo foi desenvolvido para explorar o potencial biológico de G. tricorne e extrair e isolar constituintes químicos de sua parte aérea e sementes, respectivamente, juntamente com a identificação de seus constituintes químicos. A triagem fitoquímica foi realizada para descobrir a presença de metabólito secundário em G. tricorne, extrato metanólico bruto (Gt.Crd) que foi obtido da parte aérea enquanto os ácidos graxos foram extraídos das sementes, que posteriormente foram analisadas por GCMS. Da mesma forma, os métodos Well Diffusion e MTT foram usados para atividade antibacteriana e ensaio de linha de células cancerígenas, respectivamente. Para avaliar o potencial citotóxico, foram utilizadas artémias. Da mesma forma, na análise de cromatografia gasosa-espectroscopia de massa (GC-MS) um número total de 23 compostos foi identificado no extrato de Gt.Crd, dos quais 7 compostos foram selecionados para ter algum tipo de perfil de toxicidade. Da mesma forma, 5 ácidos graxos foram identificados nas sementes de G. tricorne. Além disso, entre as frações, a fração clorofórmio (Gt.Chf) apresentou maior zona de inibição (ZOI), 20,37 mm, seguida de Gt.Crd 18,40 mm contra S. aureus e S. pyogenes, respectivamente. Na citotoxicidade Gt.Chf foi mais ativo seguido pela fração acetato de etila (Gt.Eta), exibindo 88,32±0,62% (LC50=60 µg/mL) e 73,95±2,25% (LC50=80 µg/mL) respectivamente a 1000 µg/ concentração de mL da amostra testada. Gt.Chf exibiu maior atividade inibitória da linha celular (IC50 = 61 µg/mL) contra a linha celular HeLa. Da mesma forma, Gt.Crd apresentou valores de IC50 de 167,84 µg/mL e 175,46 µg/mL contra linha celular HeLa e NIH/3T3, respectivamente. Com base na revisão de literatura e triagens, pode-se concluir que a parte aérea e as sementes de G. tricorne são as ricas fontes de compostos bioativos. Os resultados do presente estudo também autenticam a base científica para os usos etnomedicinais de G. tricorne.

Abstract Natural products have long been proven very effective against various challenging diseases including cancer and bacterial infections. Galium tricorne is one of the important source of natural products, which has not been explored till date in spite of its profound ethnomedicinal prominence. The current study has been designed to explore the biological potential of G. tricorne and to extract and isolate chemical constituents from its aerial part and seeds respectively along with identification of their chemical constituents. Phytochemical screening was performed to figure out the presence of secondary metabolite in G. tricorne. Crude Methanolic extract (Gt.Crd), which was obtained from the aerial part while the fatty acids were extracted from the seeds, which were later on analyzed by GCMS. Similarly, Well Diffusion and MTT method were used for antibacterial activity and cancer cell line assay respectively. To evaluate the cytotoxic potential, brine shrimps were used. Likewise, in Gas Chromatography-Mass Spectroscopy (GC-MS) analysis a total number of 23 compounds were identified in Gt.Crd extract out of which 7 compounds were sorted out to have some sort of toxicity profile. In the same fashion, 5 fatty acids were identified in the seeds of G. tricorne. Moreover, among the fractions, chloroform fraction (Gt.Chf) exhibited greater zone of inhibition (ZOI) 20.37 mm followed by Gt.Crd 18.40 mm against S. aureus and S. pyogenes respectively. In cytotoxicity Gt.Chf was more active followed by ethyl acetate fraction (Gt.Eta) by exhibiting 88.32±0.62% (LC50=60 µg/mL) and 73.95±2.25% (LC50=80 µg/mL) respectively at 1000 µg/mL concentration of the tested sample. Gt.Chf exhibited greater cell line inhibitory activity (IC50=61 µg/mL) against HeLa cell line. Similarly, Gt.Crd displayed IC50 values of 167.84 µg/mL and 175.46 µg/mL against HeLa and NIH/3T3 cell line respectively. Based on the literature review and screenings, it may be concluded that the aerial part and seeds of G. tricorne are the rich sources of bioactive compounds. The results of the current study also authenticate the scientific background for the ethnomedicinal uses of G. tricorne.

Resumo O SARS-CoV-2 é um vírus que surgiu recentemente e causou milhões de mortes em todo o mundo. Para enfrentar a pandemia de COVID-19, necessita-se de uma análise aprofundada da replicação viral. Nosso objetivo foi examinar a carga viral em pacientes com SARS-CoV-2 durante as duas primeiras ondas de COVID-19 no Paquistão. Foram selecionados para o estudo 225.615 indivíduos suspeitos de 75 regiões diferentes do Paquistão. Os RNAs do SARS-CoV-2 foram detectados por PCR em tempo real. Durante a primeira onda de COVID-19 (período de junho a julho de 2020), a prevalência de SARS-CoV-2 foi de 20,38%. No entanto, durante a segunda onda de COVID-19 (período de novembro a dezembro de 2020), a taxa de prevalência foi de 9,41%. Durante a primeira onda de COVID-19, 96,31% dos participantes permaneceram PCR positivos por 14-21 dias, 3,39% dos indivíduos apresentaram resultados positivos por 22-35 dias, enquanto valores tardios de Ct foram observados em 0,26% dos participantes por 36-49 dias. No entanto, durante a segunda onda de COVID-19, 89,31% dos indivíduos tiveram sintomas e resultados positivos de PCR em tempo real por 14-21 dias, 9,42% apresentaram resultados positivos por 22-35 dias, enquanto resultados de valores de Ct significativamente atrasados foram observados em 1,026% dos participantes durante 36-63 dias (3,95 vezes superior à primeira onda). Em contraste com a primeira onda de COVID-19, os fatores que foram diferentes na segunda onda não foram nem virais (estirpes diferentes), nem hospedeiros (mesma população). No entanto, os fatores de tratamento mudaram significativamente. Assim como durante a segunda onda, além da azitromicina, o consumo de corticosteroide dexametasona aumentou, causando, consequentemente, negatividade tardia do valor de Ct. Isso sugere que o tratamento com corticosteroides pode estar associado ao atraso no valor de Ct ou na depuração viral. Este estudo é crucial para reconsiderar opções terapêuticas eficazes contra a COVID-19. SARSCoV2 SARSCoV SARS CoV 2 SARS-CoV- mundo COVID19, COVID19 COVID 19, 19 necessitase necessita se COVID-1 Paquistão 225615 225 615 225.61 7 período 2020, 2020 , 2020) 2038 20 38 20,38% entanto 941 9 41 9,41% 9631 96 31 96,31 1421 14 21 14-2 339 3 39 3,39 2235 22 35 22-3 026 0 26 0,26 3649 36 49 36-4 8931 89 89,31 942 42 9,42 1026 1 1,026 3663 63 36-6 3,95 395 95 (3,9 onda. . onda) estirpes diferentes, diferentes) mesma população. população população) azitromicina aumentou causando consequentemente COVID19. 19. SARS-CoV COVID1 COVID- 22561 61 225.6 202 203 20,38 94 4 9,41 963 96,3 142 14- 33 3,3 223 22- 02 0,2 364 36- 893 8 89,3 9,4 102 1,02 366 6 3,9 (3, 2256 225. 20,3 96, 3, 0, 89, 9, 10 1,0 (3 20, 1, (

Abstract SARS-CoV-2 is recently emerged virus, which caused millions of deaths, all over the world. To tackle COVID-19 pandemic, there is an utmost need for in-depth analysis of viral replication. We aimed to examine viral load in SARS-CoV-2 patients during first two waves of COVID-19 in Pakistan. 225,615 suspected subjects from 75 different regions of Pakistan were selected in the study. SARS-CoV-2 RNAs were detected via real time PCR. During first wave (period of June-July, 2020) of COVID-19 the prevalence of SARS-CoV-2 was 20.38%. However, during second wave (period of November-December, 2020) of COVID-19, the rate of prevalence was 9.41%. During first wave of COVID-19 96.31% of participants remained PCR positive for 14 to 21 days, 3.39% of subjects showed positive results for 22 to 35 days, while delayed Ct values were observed among 0.26% of participants for 36 to 49 days. However, during second wave of COVID-19 89.31% of the subjects exhibited symptoms and showed real-time PCR positive results for 14 to 21 days, 9.42% showed positive results for 22 to 35 days, while significantly delayed Ct value results were observed among 1.026% of participants for 36 to 63 days (3.95 times higher than first wave). In contrast to first wave of COVID-19, the factors that were different in second wave were neither viral (different strains) nor host (same population). But treatment factors changed significantly. As during second wave besides azithromycin, corticosteroid dexamethasone consumption was increased consequently causing delayed Ct value negativity. This suggests that corticosteroid treatment might be linked with delayed Ct value or viral clearance. This study is crucial for re-considering effective therapeutic options against COVID-19. SARSCoV2 SARSCoV SARS CoV 2 SARS-CoV- virus deaths world COVID19 COVID 19 COVID-1 pandemic indepth depth replication 225615 225 615 225,61 7 period JuneJuly, JuneJuly June July, July June-July 2020 2038 20 38 20.38% However NovemberDecember, NovemberDecember November December, December November-December COVID19, 19, 941 9 41 9.41% 9631 96 31 96.31 1 339 3 39 3.39 026 0 26 0.26 4 8931 89 89.31 realtime 942 42 9.42 1026 1.026 6 3.95 395 95 (3.9 wave. . wave) strains same population. population population) azithromycin negativity clearance reconsidering re considering COVID19. 19. SARS-CoV COVID1 COVID- 22561 61 225,6 202 203 20.38 94 9.41 963 96.3 33 3.3 02 0.2 893 8 89.3 9.4 102 1.02 3.9 (3. 2256 225, 20.3 96. 3. 0. 89. 9. 10 1.0 (3 20. 1. (

Resumo A Doença Arterial Coronariana (DAC) é um problema de saúde global, com modalidades diagnósticas e fatores de risco que apresentam variações regionais. Este estudo, realizado no Centro de Diagnóstico de Islamabad, Paquistão, teve como objetivo fornecer uma avaliação abrangente da prevalência, da gravidade e dos fatores de risco associados da DAC, ao mesmo tempo em que avaliou a precisão diagnóstica do teste coronário por tomografia computadorizada (CTT) e do teste ergométrico em esteira (TET). em uma coorte de 2.909 pacientes. Entre os pacientes avaliados por tomografia computadorizada de coronárias, a DAC foi observada universalmente, apresentando graus variados de gravidade. Nossos achados indicaram que 24,5% dos pacientes apresentavam DAC leve, 28,6% apresentavam DAC leve a moderada, 16,3% foram diagnosticados com DAC moderada, 18,4% apresentavam DAC moderada a grave e 20,4% apresentavam DAC grave. Este espectro ressalta a natureza diversificada da DAC na população estudada. Além do CTT, realizamos uma avaliação detalhada dos resultados do TET em 49 pacientes. Estes resultados revelaram que 55,1% dos pacientes apresentaram resultado positivo para isquemia durante o teste ergométrico, enfatizando a prevalência de estresse cardíaco e DAC subjacente. Por outro lado, 32,7% dos pacientes apresentaram resultados negativos do TET, indicando tolerância cardíaca favorável durante a atividade física. Um subconjunto de pacientes produziu resultados não diagnósticos ou inconclusivos, necessitando de avaliação clínica adicional. A análise do histórico de doenças mostrou uma dicotomia dentro da coorte, com 20,4% com histórico médico conhecido e 79,6% com histórico de doença desconhecido, destacando a importância de registros médicos abrangentes na prática clínica. A hipertensão, fator de risco cardiovascular crítico, foi identificada em 87,8% dos pacientes, ressaltando sua importância. A história de tabagismo apresentou variação notável, com 69,4% categorizados como fumantes, 14,3% como ex-fumantes e 10,2% como não fumantes. A análise do perfil lipídico indicou que 69,4% dos pacientes apresentavam níveis lipídicos alterados. Para avaliar a acurácia diagnóstica do CTT e do TET, calculamos Valores Preditivos Positivos (VPP) e Valores Preditivos Negativos (VPN). Os CTTs exibiram um VPP de aproximadamente 5,99% e um VPN de aproximadamente 4,40%, enquanto o TET apresentou um VPP mais elevado de cerca de 26,44% e um VPN substancialmente mais elevado de cerca de 49,24%. Este estudo oferece informações valiosas sobre a prevalência, a gravidade e os fatores de risco associados da DAC em uma coorte paquistanesa, enfatizando a importância da avaliação holística do risco e de intervenções personalizadas na prática clínica. Nossas descobertas também destacam a utilidade diagnóstica do TET na avaliação de DAC. (DAC global regionais Islamabad Paquistão (CTT TET. . (TET) 2909 2 909 2.90 coronárias universalmente 245 24 5 24,5 286 28 6 28,6 163 16 3 16,3 184 18 4 18,4 204 20 20,4 estudada 551 55 1 55,1 subjacente lado 327 32 7 32,7 física inconclusivos adicional 796 79 79,6 desconhecido hipertensão crítico 878 87 8 87,8 notável 694 69 69,4 fumantes 143 14 14,3 exfumantes ex 102 10 10,2 alterados (VPP VPN. (VPN) 599 99 5,99 440 40 4,40% 2644 26 44 26,44 4924 49,24% paquistanesa (TET 290 90 2.9 24, 28, 16, 18, 20, 55, 32, 79, 87, 69, 14, 10, (VPN 59 9 5,9 4,40 264 26,4 492 49,24 29 2. 5, 4,4 26, 49,2 4, 49,

Abstract Coronary Artery Disease (CAD) is a global health concern, with diagnostic modalities and risk factors that exhibit regional variations. This study, conducted at the Islamabad Diagnostic Center, Pakistan, aimed to provide a comprehensive assessment of CAD prevalence, severity, and associated risk factors, while also evaluating the diagnostic accuracy of Computed Tomography Coronary Test (CTT) and Exercise Treadmill Test (ETT) in a cohort of 2909 patients. Among the patients assessed via CT Coronary scans, CAD was universally observed, presenting with varying degrees of severity. Our findings indicated that 24.5% of patients had mild CAD, 28.6% exhibited mild to moderate CAD, 16.3% were diagnosed with moderate CAD, 18.4% demonstrated moderate to severe CAD, and 20.4% displayed severe CAD. This spectrum underscores the diverse nature of CAD within the study population. In addition to CTT, we conducted a detailed evaluation of ETT results in 49 patients. These results revealed that 55.1% of patients tested positive for ischemia during the exercise test, emphasizing the prevalence of cardiac stress and underlying CAD. Conversely, 32.7% of patients exhibited negative ETT results, indicating favorable cardiac tolerance during physical activity. A subset of patients yielded non-diagnostic or inconclusive results, necessitating further clinical assessment. Disease history analysis showed a dichotomy within the cohort, with 20.4% having a known medical history and 79.6% possessing an unknown disease history, highlighting the importance of comprehensive medical records in clinical practice. Hypertension, a critical cardiovascular risk factor, was identified in 87.8% of patients, underscoring its significance. Smoking history displayed notable variation, with 69.4% categorized as smokers, 14.3% as ex-smokers, and 10.2% as non-smokers. Lipid profile analysis indicated that 69.4% of patients had abnormal lipid levels. To assess the diagnostic accuracy of CTT and ETT, we calculated Positive Predictive Values (PPV) and Negative Predictive Values (NPV). CTT exhibited a PPV of approximately 5.99% and an NPV of approximately 4.40%, whereas ETT displayed a higher PPV of around 26.44% and a substantially higher NPV of about 49.24%. This study offers valuable insights into CAD prevalence, severity, and associated risk factors in a Pakistani cohort, emphasizing the importance of holistic risk assessment and tailored interventions in clinical practice. Our findings also highlight the diagnostic utility of ETT in CAD assessment. (CAD concern variations Center Pakistan severity (CTT (ETT 290 scans observed 245 24 5 24.5 286 28 6 28.6 163 16 3 16.3 184 18 4 18.4 204 20 20.4 population 551 55 1 55.1 test Conversely 327 32 7 32.7 activity nondiagnostic non 796 79 79.6 practice Hypertension factor 878 87 8 87.8 significance variation 694 69 69.4 smokers 143 14 14.3 exsmokers, exsmokers ex ex-smokers 102 10 2 10.2 nonsmokers. nonsmokers smokers. non-smokers levels (PPV NPV. . (NPV) 599 99 5.99 440 40 4.40% 2644 26 44 26.44 4924 49.24% 29 24. 28. 16. 18. 20. 55. 32. 79. 87. 69. 14. 10. (NPV 59 9 5.9 4.40 264 26.4 492 49.24 5. 4.4 26. 49.2 4. 49.

Resumo Os organismos marinhos produzem uma variedade de compostos com atividades farmacológicas. Para melhor compreender o valor medicinal de cinco ordens específicas de algas marinhas – Ulvales (Ulva intestinalis), Bryopsidales (Codium decorticatum), Ectocarpales (Iyengaria stellata), Dictyotales (Spatoglossum aspermum) e Gigartinales (Hypnea musciformis) –, o objetivo desta investigação foi fazer uma análise bioativa, incluindo a triagem de componentes fitoquímicos, atividades antioxidantes e antimicrobianas. As espécies U. intestinalis foram coletadas em Sandspit, enquanto C. decorticatum, I. stellata, S. aspermum e H. musciformis foram coletadas em Buleji. Estas espécies foram avaliadas quanto à sua capacidade de inibir os patógenos Gram-positivos infecciosos humanos Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis, bem como as bactérias Gram-negativas Escherichia coli. Além disso, o patógeno vegetal Fusarium oxysporum e os patógenos de frutas Aspergillus niger e Aspergillus flavus foram avaliados para determinar a zona de inibição. Dois solventes orgânicos, etanol e metanol, foram utilizados para preparar o extrato de algas marinhas. O método de difusão em disco foi utilizado para quantificar a zona de inibição, e o método DPPH foi empregado para medir a atividade antioxidante. O estudo revelou vários fitoconstituintes nas algas testadas, com flavonoides, taninos e proteínas encontrados em todas as espécies selecionadas, enquanto saponinas, terpenoides e carboidratos estavam ausentes em I. stellata e S. aspermum. Notavelmente, os extratos etanólicos de I. stellata e S. aspermum demonstraram maior atividade antioxidante, com percentagens crescentes de inibição de 1 a 6 mg/ml. Além disso, os resultados indicaram que o extrato etanólico de U. intestinalis apresentou a maior resistência contra F. oxysporum e A. flavus, entre outras algas marinhas. Enquanto isso, o extrato etanólico de C. decorticatum teve maior resistência contra A. Niger. Além disso, o extrato etanólico de I. stellata e H. musciformis apresentou a maior resistência contra as bactérias Gram-negativas E. coli e as bactérias Gram-positivas S. epidermidis, enquanto o extrato metanólico de U. intestinalis demonstrou a maior resistência contra a bactéria Gram-positiva S. aureus. Os resultados desta investigação mostram que uma série de compostos bioativos com propriedades antioxidantes está envolvida nas atividades antimicrobianas de patógenos causadores de doenças. farmacológicas Ulva intestinalis, , intestinalis) Codium decorticatum) Iyengaria stellata) Spatoglossum Hypnea bioativa fitoquímicos U Sandspit C I S H Buleji Grampositivos Gram positivos epidermidis Gramnegativas negativas disso orgânicos metanol antioxidante testadas flavonoides selecionadas saponinas Notavelmente mgml mg ml mg/ml F A isso Niger E Grampositivas positivas Grampositiva positiva doenças

Abstract Marine organisms produce a variety of compounds with pharmacological activities. In order to better comprehend the medicinal value of five particular seaweed orders Ulvales (Ulva intestinalis), Bryopsidales (Codium decorticatum), Ectocarpales (Iyengaria stellata), Dictyotales (Spatoglossum aspermum) and Gigartinales (Hypnea musciformis), a bioactive analysis including the screening of phytochemical components, antioxidant and antimicrobial activities was the aim of the investigation. The species include U. intestinalis was collected from Sandspit, while C. decorticatum, I. stellata, S. aspermum, and H. musciformis were gathered from Buleji. These species evaluated for their ability to inhibit human infectious gram positive pathogens Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis as well as gram negative bacteria Escherichia coli. Additionally vegetable pathogen Fusarium oxysporum, and fruit pathogens (Aspergillus niger and Aspergillus flavus) were evaluated to determine the zone of inhibition. Two organic solvents, ethanol and methanol, were used to prepare seaweed extract. The disc diffusion method was utilized to quantify the zone of inhibition and the DPPH method was employed to measure the antioxidant activity. The study unveiled various phyto-constituents in the tested seaweeds, with flavonoids, tannins, and proteins found in all selected species, while saponins, terpenoids, and carbohydrates were absent in I. stellata and S. aspermum. Notably, ethanolic extracts of I. stellata and S. aspermum demonstrated superior higher antioxidant activity, with increasing percentages of inhibition from 1 to 6 mg/ml. Furthermore, the findings indicated that the ethanolic extract of U. intestinalis displayed the highest resistance against F. oxysporum and A. flavous among other seaweeds. Meanwhile, the ethanolic extract of C. decorticatum exhibited the highest resistance against A. Niger. Additionally, the ethanolic extract of I. stellata and H. musciformis displayed the highest resistance against the gram-negative bacteria E. coli and the gram-positive bacteria S. epidermidis, whereas the methanolic extract of U. intestinalis demonstrated the highest resistance against the gram-positive bacteria S. aureus. The findings of this investigation show that a range of bioactive compounds with antioxidant properties are involved in the antimicrobial activities of disease-causing pathogens. Ulva intestinalis, , intestinalis) Codium decorticatum) Iyengaria stellata) Spatoglossum Hypnea musciformis, musciformis) components U Sandspit C I S H Buleji aureus flavus solvents methanol activity phytoconstituents phyto constituents seaweeds flavonoids tannins saponins terpenoids Notably mgml mg ml mg/ml Furthermore F A Meanwhile Niger gramnegative E grampositive diseasecausing disease causing