RESUMO Conservantes naturais, como exemplo as enterocinas, têm sido foco de diversos estudos para uso na indústria de alimentos. No entanto, os meios comerciais utilizados para obtenção de enterocinas ainda são onerosos, sendo a grande desvantagem para produção em larga escala. Neste estudo foram desenvolvidas quatro formulações de meios de cultura contendo farinha de soja para obtenção de enterocina por Enterococcus durans MF5. A atividade antilisterial da enterocina MF5 obtida em meio soja e MRS (controle) foi testada contra Listeria monocytogenes CLIP2032 e L. innocua CLIP12612. O crescimento de E. durans (UFC/mL) foi significativamente afetado pelo tempo de incubação nos meios soja e MRS (p<0,05), porém a composição do meio não afetou o desenvolvimento celular do microrganismo produtor de enterocina. Ao avaliar os genes que codificam a síntese de enterocina, foram obtidos resultados positivos para enterocina A, B, P e X. Quando tratada com enzimas proteolíticas (α-quimotripsina, protease e proteinase-K), a enterocina foi inativada, confirmando seu caráter proteico. A atividade antilisterial das enterocinas obtidas em meio de soja foi de até 6.400 AU mL-1. Enterocina produzida nos meios de soja M1 e M2 apresentaram atividade antibacteriana na concentração de 1 mg/mL após 6 h de incubação. Assim, mostramos que meios de cultura formulados com farinha de soja são substratos promissores para a produção de enterocinas que permitiriam a expansão do protocolo em larga escala.

ABSTRACT Natural preservatives, such as enterocins, have been the focus of several studies for use in the food industry. However, the commercial media used to obtain enterocins are still expensive, presenting a disadvantage for large-scale production. In this study was developed four formulations of culture media containing soybean flour for obtaining Enterococcus durans enterocins. The antilisterial activity of E. durans MF5 enterocins obtained in soybean and MRS media (control) was characterized, with Listeria monocytogenes CLIP2032 and L. innocua CLIP12612 as the bacterial strains. The growth of E. durans (CFU/mL) was significantly affected by the incubation time in the soybean and MRS media (p <0.05), but the composition of the media did not affect the cell development of the enterocin-producing microorganism. When evaluating the genes encoding enterocin synthesis, positive results were obtained for enterocin A, B, P, and X. When treated with proteolytic enzymes (α-chymotrypsin, protease, and proteinase-K), enterocin was inactivated, confirming its protein character. The antilisterial activity of the enterocins obtained in soybean media was up to 6,400 AU mL-1. Enterocins from soybean media M1 and M2 showed antibacterial activity at a concentration of 1 mg/mL after 6 h incubation. Thus, we show that culture media formulated with soybean flour are promising substrates for enterocin production that would allow the protocol to be expanded on a large scale.

Os enterococos são cada vez mais responsáveis por infecções hospitalares em todo o mundo. Este estudo foi realizado para comparar a identificação e perfil de suscetibilidade entre o sistema automatizado MicrosScan e a técnica molecular de PCR em espécies de Enterococcus spp. Foram avaliados 30 isolados clínicos de Enterococcus spp. Os isolados foram identificados pelo sistema MicrosScan® e pela técnica de PCR. A detecção de genes de resistência a antibióticos (vancomicina, gentamicina, tetraciclina e eritromicina) foi determinada por PCR. Suscetibilidades antimicrobianas à vancomicina (30 µg), gentamicina (120 µg), tetraciclina (30 µg) e eritromicina (15 µg), foram testados pelos métodos automatizados e pelo disco difusão, de acordo com as orientações do CLSI. No que diz respeito à identificação de Enterococcus em geral entre os dados obtidos pelo método de PCR e pelo sistema automático foi de 90,0% (27/30). Para todos os isolados de E. faecium e E. faecalis observamos concordância de 100%. Freqüências de resistência foi maior em E. faecium do que em E. faecalis. As taxas de resistência obtidas foi maior para eritromicina (86,7%), vancomicina (80,0%), tetraciclina (43,35%) e gentamicina (33,3%). A correlação entre a técnica de disco difusão e automação revelou-se de acordo para maioria dos antibióticos com taxas > 80%. O gene van(A) foi detectado em 100% dos Enterococcus resistentes á vancomicina. O ensaio baseado em PCR é de simples realização e de confiança para identificação de enterococos clinicamente relevantes. Os dados obtidos reforçam a necessidade de melhoria no sistema automatizado para identificar alguns enterococos.

Enterococci are increasingly responsible for nosocomial infections worldwide. This study was undertaken to compare the identification and susceptibility profile using an automated MicrosScan system, PCR-based assay and disk diffusion assay of Enterococcus spp. We evaluated 30 clinical isolates of Enterococcus spp. Isolates were identified by MicrosScan system and PCR-based assay. The detection of antibiotic resistance genes (vancomycin, gentamicin, tetracycline and erythromycin) was also determined by PCR. Antimicrobial susceptibilities to vancomycin (30 µg), gentamicin (120 µg), tetracycline (30 µg) and erythromycin (15 µg) were tested by the automated system and disk diffusion method, and were interpreted according to the criteria recommended in CLSI guidelines. Concerning Enterococcus identification the general agreement between data obtained by the PCR method and by the automatic system was 90.0% (27/30). For all isolates of E. faecium and E. faecalis we observed 100% agreement. Resistance frequencies were higher in E. faecium than E. faecalis. The resistance rates obtained were higher for erythromycin (86.7%), vancomycin (80.0%), tetracycline (43.35) and gentamicin (33.3%). The correlation between disk diffusion and automation revealed an agreement for the majority of the antibiotics with category agreement rates of > 80%. The PCR-based assay, the van(A) gene was detected in 100% of vancomycin resistant enterococci. This assay is simple to conduct and reliable in the identification of clinically relevant enterococci. The data obtained reinforced the need for an improvement of the automated system to identify some enterococci.

INTRODUÇÃO: Neste estudo objetivamos a identificação de isolados de Candida obtidos de sangue, urina, secreção traqueal e de lesões de unha/pele, de casos atendidos no Hospital Universitário de Londrina num período de três anos. Avaliamos também a suscetibilidade dos isolados ao fluconazol. MÉTODOS: Os isolados de Candida foram identificados pela reação em cadeia da polimerase (RCP) usando oligonucleotídeos iniciadores espécie-específicos. O teste de suscetibilidade in vitro ao fluconazol foi realizado segundo o procedimento de referência EUCAST-AFST. RESULTADOS: Isolados foram obtidos de urina (53,4%), sangue (19,2%), secreção traqueal (17,8%) e lesões de unha/pele (9,6%). Considerando as amostras de urina, a prevalência foi similar em mulheres (45,5%) e em homens (54,5%) e foi alta no grupo de idade > 61 anos do que em grupos mais jovens. Para amostras de sangue a prevalência foi alta em neonatos (35%) e idades avançadas (22,5%). Para amostras de unha e pele a prevalência foi maior em mulheres (71,4%) do que em homens (28,6%). Candida albicans foi a mais frequentemente isolada no hospital, mas outras espécies de Candida corresponderam a 64% dos isolados, incluindo predominantemente Candida tropicalis (33,2%) e Candida parapsilosis (19,2%). A tendência de Candida não-albicans como espécie predominante foi observada para todas as amostras clínicas, exceto para amostras de urina. Todos isolados de Candida foram considerados suscetíveis, in vitro, ao fluconazol com exceção dos isolados pertencentes às espécies intrinsecamente menos suscetíveis C. glabrata. CONCLUSÕES: Espécies de Candida não-albicans foram mais frequentemente isoladas no hospital. Resistência ao fluconazol foi rara no nosso estudo.

INTRODUCTION: In this study, we aimed at identifying Candida isolates obtained from blood, urine, tracheal secretion, and nail/skin lesions from cases attended at the Hospital Universitário de Londrina over a 3-year period and at evaluating fluconazole susceptibilities of the isolates. METHODS: Candida isolates were identified by polymerase chain reaction (PCR) using species-specific forward primers. The in vitro fluconazole susceptibility test was performed according to EUCAST-AFST reference procedure. RESULTS: Isolates were obtained from urine (53.4%), blood cultures (19.2%), tracheal secretion (17.8%), and nail/skin lesions (9.6%). When urine samples were considered, prevalence was similar in women (45.5%) and in men (54.5%) and was high in the age group >61 years than that in younger ones. For blood samples, prevalence was high in neonates (35%) and advanced ages (22.5%). For nail and skin samples, prevalence was higher in women (71.4%) than in men (28.6%). Candida albicans was the most frequently isolated in the hospital, but Candida species other than C. albicans accounted for 64% of isolates, including predominantly Candida tropicalis (33.2%) and Candida parapsilosis (19.2%). The trend for non-albicans Candida as the predominant species was noted from all clinical specimens, except from urine samples. All Candida isolates were considered susceptible in vitro to fluconazole with the exception of isolates belonging to the intrinsically less-susceptible species C. glabrata. CONCLUSIONS: Non-albicans Candida species were more frequently isolated in the hospital. Fluconazole resistance was a rare finding in our study.

INTRODUÇÃO: Leveduras do gênero Candida são responsáveis pela maioria das infecções fúngicas em humanos. Candida tropicalis tem sido uma das mais comumente isoladas dentre as espécies não-albicans. O objetivo foi analisar a hemólise in vitro promovida por isolados clínicos de C. tropicalis provenientes de sangue e outras amostras clínicas de pacientes internados no Hospital Universitário da UEL, PR-Brasil. MÉTODOS: Foi avaliada a hemólise promovida por 28 isolados clínicos de C. tropicalis, sendo os isolados agrupados em classes de acordo com os níveis de hemólise. RESULTADOS: A maioria dos isolados de sangue apresentou hemólise fraca (+), enquanto as classes de hemólise forte (+++) e muito forte (++++) foram as predominantes nos isolados de outras amostras clínicas como urina, lesão de unha e secreção traqueal, embora não tenham sido detectadas diferenças estatísticas (p>0,05). CONCLUSÕES: Isolados de C. tropicalis, obtidos de diferentes amostras clínicas, apresentam capacidade de promover hemólise in vitro.

INTRODUCTION: Yeasts belonging to the genus Candida are responsible for the majority of fungal infections in humans. Candida tropicalis has been one of most commonly isolated non-albicans species. To analyze in vitro hemolysis promoted by clinical isolates of C. tropicalis obtained from blood and other clinical samples from hospitalized patients at the University Hospital of Londrina State University, Paraná, Brazil. METHODS: The hemolysis promoted by 28 clinical isolates of C. tropicalis was evaluated, and the isolates were grouped into classes according to the hemolysis levels. RESULTS: The majority of the blood isolates showed weak hemolysis (+), while the classes of strong hemolysis (+++) and very strong hemolysis (++++) predominated among isolates from other clinical samples such as urine, nail lesions and tracheal secretions. However, no statistical differences were detected (p> 0.05). CONCLUSIONS: Isolates of C. tropicalis obtained from different clinical samples showed a capacity to promote in vitro hemolysis.