O objetivo deste estudo foi aperfeiçoar um ensaio de PCR que amplificasse um fragmento de 843 pares de bases do gene p28 da Ehrlichia canis e compará-lo com outros dois métodos de PCR utilizados para amplificar partes do gene 16S rRNA e dsb do gênero Ehrlichia. Amostras sanguíneas foram colhidas de cães com diagnóstico clínico de erliquiose. A amplificação do gene p28 pela PCR produziu um fragmento de 843pb e esse ensaio permitiu a detecção do DNA de um parasita dentre 1 bilhão de células. Todas as amostras positivas detectadas pela PCR baseada no gene p28 foram também positivas pela nested PCR para detecção do gene 16S rRNA e também pela PCR dsb. Dentre as amostras negativas para a PCR p28, 55,3% foram co-negativas, mas 27,6% foram positivas pela PCR baseada nos genes 16S rRNA e dsb. A PCR p28 parece ser um teste útil para detecção molecular de E. canis, entretanto otimizações na sensibilidade nesta PCR são necessárias, para que esta técnica se torne uma importante alternativa no diagnóstico da erliquiose canina.

The aim of this study was to optimize a PCR assay that amplifies an 843 pb fragment from the p28 gene of Ehrlichia canis and compare it with two other PCR methods used to amplify portions of the 16S rRNA and dsb genes of Ehrlichia. Blood samples were collected from dogs suspected of having a positive diagnosis for canine ehrlichiosis. Amplification of the p28 gene by PCR produced an 843-bp fragment and this assay could detect DNA from one gene copy among 1 billion cells. All positive samples detected by the p28-based PCR were also positive by the 16S rRNA nested-PCR and also by the dsb-based PCR. Among the p28-based PCR negative samples, 55.3% were co-negatives, but 27.6% were positive in 16S rRNA and dsb based PCR assays. The p28-based PCR seems to be a useful test for the molecular detection of E. canis, however improvements in this PCR sensitivity are desired, so that it can become an important alternative in the diagnosis of canine ehrlichiosis.

Utilizando a técnica de macroarranjos de cDNA em membranas de náilon, analisou-se o perfil de expressão de 3.575 ESTs ("Expressed Sequence Tags") de cana-de-açúcar, oriundas do projeto SUCEST, em duas variedades, uma tolerante (SP80-0185) e outra suscetível (SP70-3370) ao Raquitismo da Soqueira. Foram analisadas amostras foliares de plantas inoculadas com Leifsonia xyli subsp. xyli., agente etiológico do Raquitismo, contrastadas com plantas não inoculadas (controle), para cada variedade, marcadas com sondas de cDNA e hibridizadas contra os macroarranjos. Após as hibridizações e análises estatísticas dos dados foi possível identificar 49 ESTs com expressão alterada, sendo 44 na variedade tolerante (41 ESTs induzidos e 3 reprimidos) e 5 na variedade suscetível (2 ESTs induzidos e 3 reprimidos). Os resultados obtidos sugerem que a tolerância da variedade SP80-0185 de cana-de-açúcar à bactéria fitopatogênica pode estar relacionada com a percepção de sinais extracelulares, visto que ESTs relacionados a vias de transdução de sinais apresentaram expressão gênica induzida na variedade tolerante, os quais codificam para uma EST com similaridade à H+-ATPase da membrana plasmática, fatores de transcrição G-box, OsNAC6, "DNA binding", família MYB e "Zinc Finger" e ainda uma EST com similaridade ao fator de ligação ao G-Box, o qual corresponde a uma seqüência de DNA cis presente em vários promotores de plantas e requerido para o reconhecimento de muitos estímulos ambientais. Na variedade suscetível foi reprimido uma EST com similaridade à lipase. Esta enzima, também de membrana, faz parte da síntese do jasmonato, o qual ativa as defesas vegetais contra patógenos de plantas. Possíveis funções para os genes induzidos ou reprimidos nas cultivares de cana tolerante ou resistente ao Raquitismo são discutidas neste trabalho. náilon analisouse analisou se 3575 575 3.57 Expressed Tags Tags" canadeaçúcar, canadeaçúcar açúcar, açúcar SUCEST variedades SP800185 SP SP80 0185 (SP80-0185 SP703370 SP70 3370 (SP70-3370 Soqueira subsp xyli. controle, controle , (controle) 4 alterada 41 (4 2 ( reprimidos. . SP80-018 extracelulares H+ATPase HATPase H+ ATPase H plasmática Gbox, Gbox G box, box G-box OsNAC6 OsNAC binding, binding binding" Zinc Finger GBox, GBox Box, Box G-Box ambientais lipase enzima jasmonato trabalho 357 57 3.5 SP80018 SP8 018 (SP80-018 SP70337 SP7 337 (SP70-337 (controle SP80-01 35 3. SP8001 01 (SP80-01 SP7033 33 (SP70-33 SP80-0 SP800 0 (SP80-0 SP703 (SP70-3 SP80- (SP80- (SP70- (SP80 (SP70 (SP8 (SP7 (SP

The macroarray nylon membrane technology was used to study the differential gene expression of 3.575 ESTs clones from sugarcane libraries. Total RNA was extracted from two varieties, one known as tolerant (SP80-0185) and another known as susceptible (SP70-3370) to the ratoon stunting disease (RSD), after being inoculated with Lefsonia xyli subsp. xyli bacterial extracts, and used as probe. Out of the 3.575 ESTs, 49 showed differential expression levels. Most of the selected ESTs were found in the resistant variety, 41 being induced and 3 being repressed in response to bacterial inoculation. On the other hand, the susceptible variety showed only 5 differentially expressed genes, 2 being induced and 3 being repressed. These results indicate that the tolerance to bacterial infection could be associated to extracellular signal perception because ESTs associated to signal transduction pathways were induced in the variety SP80-185, e.g. plasma membrane H+ ATPase EST. Also, ESTs related to transcription factor expression, such as G-box, OsNAC6, "DNA binding", MYB family, Zinc Finger were induced in the tolerant variety after infection. An EST with high similarity to G-Box binding factor, a cis-DNA sequence present in some plant promoter genes required to signal transduction for environmental signals, was also induced. Even though the susceptible variety had no significant difference in gene expression, a lipase-like EST was repressed when plants were infected. Lipase, a membrane enzyme, is also involved in jasmonate biosynthesis, which plays a major role in plant defense mechanisms. Putative roles for induced and repressed genes in both tolerant and susceptible varieties are discussed here. 3575 575 3.57 libraries SP800185 SP SP80 0185 (SP80-0185 SP703370 SP70 3370 (SP70-3370 RSD, RSD , (RSD) subsp extracts probe 4 levels inoculation hand SP80185, SP80185 185, 185 SP80-185 eg e g e.g H Also Gbox, Gbox G box, box G-box OsNAC6 OsNAC DNA binding, binding" family GBox Box cisDNA cis signals lipaselike lipase like infected Lipase enzyme biosynthesis mechanisms here 357 57 3.5 SP80018 SP8 018 (SP80-018 SP70337 SP7 337 (SP70-337 (RSD SP8018 18 SP80-18 35 3. SP8001 01 (SP80-01 SP7033 33 (SP70-33 SP801 1 SP80-1 SP800 0 (SP80-0 SP703 (SP70-3 SP80- (SP80- (SP70- (SP80 (SP70 (SP8 (SP7 (SP

The genetic relationships and structure of fourteen goat (Capra hircus) populations were estimated based on genotyping data from 14 goat populations (n = 410 goats) at 13 microsatellite loci. We used analysis of molecular variance (AMOVA), principal component analysis (PCA) and F statistics (F IS, F IT and F ST) to evaluate the genetic diversity (Ho, He and ad) of the goats. Genetic distances between the 14 goat populations were calculated from allelic frequency data for the 13 microsatellite markers. Moderate differentiation was observed for the populations of the undefined breeds (including the Anglo-Nubian-M breed), the naturalized Brazilian breeds (Moxotó, Canindé), the exotic purebred breeds (Alpine, Saanen, Toggenbourg and Anglo-Nubian) and the naturalized Brazilian Graúna group. Our AMOVA showed that a major portion (88.51%) of the total genetic variation resulted from differences between individual goats within populations, while between-populations variation accounted for the remaining 11.49% of genetic variation. We used a Reynolds genetic distance matrix and PCA to produce a phenogram based on the 14 goat populations and found three clusters, or groups, consisting of the goats belonging to the undefined breed, the naturalized breeds and the exotic purebred breeds. The closer proximity of the Canindé breed from the Brazilian state of Paraíba to the Graúna breed from the same state than to the genetically conserved Canindé breed from the Brazilian state of Ceará, as well as the heterozygosity values and significant deviations from Hardy-Weinberg equilibrium suggests that there was a high number of homozygotes in the populations studied, and indicates the importance of the State for the conservation of the local breeds. Cataloguing the genetic profile of Brazilian goat populations provides essential information for conservation and genetic improvements programs.

A escaldadura da folha, causada pela bactéria Xanthomonas albilineans colonizadora do xilema, é uma das principais doenças da cana-de-açúcar. A sintomatologia na fase crônica é caracterizada principalmente pelo aparecimento de uma faixa branca paralela à nervura central da folha, que evolui até queimar totalmente, sendo também observado brotação de gemas laterais no colmo. Neste trabalho, a técnica de macroarranjos de cDNA foi empregada para o estudo da expressão de 3.575 ESTs (espressed sequence tags) em folhas de cana-de-açúcar. Foram utilizadas duas variedades, uma resistente (SP82-1176) e outra suscetível (SP78-4467) a Xanthomonas albilineans as quais foram infectadas mecanicamente por ferimentos. As membranas dos macroarranjos foram confeccionadas a partir de ESTs de bibliotecas de folha e cartucho de cana-de-açúcar provenientes do projeto SUCEST e hibridizadas contra sondas de cDNA de plantas infectadas e controle marcadas com isótopos radioativos. Analisando os resultados dos macroarranjos foi possível verificar um comportamento diferenciado para cada variedade durante o ataque do patógeno. Após realizadas análises estatísticas identificamos na variedade resistente ESTs com expressão induzida relacionadas com biossíntese de isoprenoides, proteínas LRR transmembrânica, "ziper" de leucina, lignificação, tolerância ao frio, diferenciação de plastídeos, sistemas de defesa e de adaptação da planta ao meio ambiente. As ESTs reprimidas na variedade resistente foram àquelas relacionadas com genes responsáveis pela síntese de proteínas do controle da expansão da parede celular, detoxificação e transporte de auxina. Na variedade susceptível foram reprimidas ESTs relacionadas a genes de proteínas das respostas de defesa da planta, biossíntese de Etileno e regulação da transcrição.

The leaf scald disease, caused by the xylem-invading pathogen Xanthomonas albilineans, is one of the most devastating diseases of sugarcane. Chronic symptoms are characterized by white pencil-line streaks surrounding invaded leaf vascular bundles, which may result in fully burnt leaves, and by lateral bud development. In this work, using a macroarray approach, we analyzed the expression profile of 3,575 ESTs (expressed sequence tags) of sugarcane, in two sugarcane varieties, classified as susceptible (SP78-4467) or resistant (SP82-1176) to Xanthomonas albilineans infection. Membranes were constructed with ESTs from sugarcane leaf roll tissues and hybridized with radio labeled cDNAs from infected and non-infected sugarcane tissue. Data analysis showed a different pattern of expression during pathogen infection. This approach allowed the identification of differentially induced ESTs for proteins involved isoprenoid biosynthesis, transmembrane LRR protein, leucine zipper, lignification, cold tolerance, plant response and environmental adaptation in the resistant variety. Repressed ESTs in this variety were related to proteins involved in plant cellular expansion, detoxification, and auxin transport. In the susceptible variety, the differentially repressed ESTs were related to proteins involved in plant defense response, Ethylene biosynthesis, and transcription regulation.

The hepatic expression and plasma concentrations of IGF-I were investigated in three broiler chicken strains selected for different growth rates (HP-Hubbard-Pettersen, a fast growing strain; NN-Naked-neck, a strain with an intermediate growth rate and a heterozygous genotype, and C-Caipira, a slow growing crossbred strain). The chickens were studied at 1, 21 and 42 days of age and had free access to food throughout the study. Hepatic IGF-I mRNA expression was assessed by dot blot analysis using a randomly labeled chicken IGF-I cDNA as the probe and plasma IGF-I concentrations were assayed by radioimmunoassay. The hepatic levels of IGF-I mRNA increased from 1 to 21 days of age in all strains, with NN chickens showing a higher (p < 0.05) IGF-I expression than the other strains. Plasma IGF-I concentrations increased (p < 0.05) with broiler chicken age, but there were no significant differences among the strains. These results indicate that despite differences in the growth rates among the strains, the changes in the expression of IGF-I mRNA in liver and in the plasma levels of IGF-I were independent of broiler chicken strain, but varied with chicken age.

O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito do nível energético da dieta no desempenho e nos níveis hormonais após um período de restrição alimentar. O experimento foi em parcelas subdivididas, com os tratamentos principais em um esquema fatorial 2x2. O consumo de ração das aves foi reduzido em 30% em relação ao grupo controle, do 7º ao 14º dia de idade, sendo posteriormente alimentadas ad libitum com dietas contendo baixa (2.900 kcal EM/kg) ou alta energia (3.200 kcal EM/kg), até os 49 dias de idade. Aves alimentadas com o maior nível energético mostraram um menor consumo de ração, melhor conversão alimentar e decréscimo na quantidade de proteína da carcaça. A gordura abdominal e total da carcaça não foram afetadas pelo nível energético ou programa alimentar, assim como o peso corporal aos 49 dias de idade. Os níveis séricos do fator de crescimento tipo insulina-1 (FCI-1) foram reduzidos durante a restrição, mas aumentou com a realimentação. O programa alimentar e o nível energético não afetaram as concentrações de T3, T4 e hormônio de crescimento. A restrição alimentar em 30% do consumo ad libitum não é suficiente para promover alterações na qualidade da carcaça nem nas concentrações dos hormônios metabólicos, com exceção do FCI-1, que apresenta um rápido aumento após a restrição.

The aim of this work was to investigate the influence of diet energy level on performance and hormonal profiles of broilers during post restriction period. It was a split-plot experiment, and the main treatments were in a 2x2 factorial scheme. Birds were fed restricted to 30% of the ad libitum intake, from 7 to 14 days of age. After the restriction period, birds were fed ad libitum with diets containing low (2,900 kcal ME/kg) or high (3,200 kcal ME/kg) energy until 49 days of age. Broilers fed with high energy ration showed lower feed intake and better feed conversion and decreased carcass protein; however, abdominal fat pad, and total carcass fat were not affected by ration energy levels or feeding program. Neither diet energy level nor feed restriction program changed body weight at 49 days. The profile of insulin-like growth factor-1 (IGF-1) was reduced during the feed restriction period, but increased at refeeding period. Feeding program and ration energy level did not affect T3, T4 and growth hormone serum concentrations. Feed restriction at 30% of ad libitum intake is not enough to promote changes on carcass quality, related to fat deposition, and on metabolic hormone levels, except IGF-1 seric level that has rapid increase after feed restriction.

The objective of this work was to assess the functionality of the glycolytic pathways in the bacterium Xylella fastidiosa. To this effect, the enzymes phosphoglucose isomerase, aldolase, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase and pyruvate kinase of the glycolytic pathway, and glucose 6-phosphate dehydrogenase of the Entner-Doudoroff pathway were studied, followed by cloning and expression studies of the enolase gene and determination of its activity. These studies showed that X. fastidiosa does not use the glycolytic pathway to metabolize carbohydrates, which explains the increased duplication time of this phytopatogen. Recombinant enolase was expressed as inclusion bodies and solubilized with urea (most efficient extractor), Triton X-100, and TCA. Enolase extracted from X. fastidiosa and from chicken muscle and liver is irreversibly inactivated by urea. The purification of enolase was partial and resulted in a low yield. No enzymatic activity was detected for either recombinant and native enolases, aldolase, and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, suggesting that X. fastidiosa uses the Entner-Doudoroff pathway to produce pyruvate. Evidence is presented supporting the idea that the regulation of genes and the presence of isoforms with regulation patterns might make it difficult to understand the metabolism of carbohydrates in X. fastidiosa.

The promoter region and the beginning of the coding region of the hsp70 stress gene were analysed in broiler chickens of a commercial breed (Hubbard-Pettersen), a breed selected for weight gain (PP1) and a non-selected breed (naked-neck Label Rouge). The naked neck gene (Naked neck, Na), which reduces feathering in birds and is thus related to heat resistance, was present in both PP1 and Label Rouge breeds. Genomic DNA was restricted with PstI and Southern blotting analysis of the samples revealed the absence of polymorphic sites for that enzyme in the promoter region and beginning of the coding region of the hsp70 gene of studied birds. PCR-SSCP analysis of these regions, however, indicated the presence of polymorphisms in the beginning of the coding region and the sequencing of the PCR products confirmed and identified two polymorphic sites in this region: a transition A ® G in position +258 and a transversion C ® G in position +276. Both mutations were considered to be silent, since they did not modify the aminoacid sequence of the protein Hsp70. The promoter region of the hsp70 gene was identical in all studied birds, indicating that the regulation pattern of this gene must be the same in all birds at the promoter region. Three different alleles (hsp70-1, hsp70-2 and hsp70-3) were identified for the hsp70 gene from the observed mutations. The allele hsp70-3 was detected in only two breeds, Hubbard-Pettersen and PP1, but at a low frequency (0,016 and 0,006, respectively).

Como em outros seres vivos, também nas células das aves ocorre a síntese das proteínas de baixo peso molecular (Hsp), cujo aumento é induzido sob condições de estresse. As Hsps têm um papel importante na manutenção da integridade celular, questiona-se o seu envolvimento no mecanismo de proteção celular de órgãos alvos na ocorrência da síndrome ascítica (SA). Este trabalho objetivou avaliar a temperatura corporal e os níveis da Hsp70 no coração e pulmão de frangos de corte Hubbard (sensível à SA) e caipira de pescoço-pelado (resistente), criados em termoneutralidade (25°C) e frio (16°C) entre 10 e 45 dias de idade. Foram utilizados 192 pintos machos, 96 de cada linhagem. Não houve mortalidade por SA nas aves caipiras. Nas aves Hubbard, a mortalidade devida à SA foi de 4% e 41% em ambiente termoneutro e frio, respectivamente. Em ambiente frio, a temperatura corporal das aves Hubbard foi menor que a das caipiras. A temperatura corporal e o nível de Hsp70 do coração das aves Hubbard diminuíram com o aumento da idade, mas não nas aves caipiras, os quais se mantiveram constantes, inclusive a Hsp70 do pulmão. Independente da idade ou da temperatura, o nível de Hsp70 no pulmão das aves caipiras era superior ao das aves Hubbard. Em relação às aves Hubbard, as caipiras são homeotérmicas mais competentes e apresentam uma maior indução de Hsp70 nos órgãos primariamente afetados na SA, mas este não parece ser o sistema de proteção contra SA, a qual as aves de pescoço pelado são resistentes.

Similar to other living animals, the cells of the birds also synthesize small proteins (heat shock protein, Hsp), which increasing levels can be induce by stress. The Hsp have a relevant function in maintaining the integrity of the cell, and we question if they are involved in the mechanism of the cellular protection of target organs affected by ascites syndrome (AS). The objective of this study was to evaluate the body temperature, and the Hsp70 levels in the heart and lungs of broilers Hubbard (sensitive to AS) and naked-neck (resistant), raised under thermo-neutral (25C) or cold (16C) environments between 10 and 45 days of raising. We used 192 male chicks, 96 from each broiler strain. No AS mortality occurred among naked-neck birds, but 4% and 41% of Hubbard broilers submitted, respectively, to thermo-neutral and cold temperatures died due to AS. The body temperatures of cold-exposed-Hubbard-birds were lowers than that of naked-necks. The Hsp70 levels of heart and the body temperature of Hubbard chicks decreased as the age increased, for naked-neck these variables were constant during their lives, including the Hsp70 level in the lung cells. Independently from age or temperature effects, the lung cells of naked-neck birds had higher Hsp70 levels than those of Hubbard chickens. Comparing to Hubbard broilers, the naked-neck birds are more competent homoeothermics, and present superior level of Hsp70 in the organs firstly affected by AS, but it did not seem the system of protection against AS, in which the naked-neck birds are resistant.

Com o objetivo de se avaliar o comportamento fisiológico das aves, bem como, se ocorre a expressão da proteína do choque térmico (Hsp 70) no fígado e cérebro, como conseqüência da exposição ao estresse por calor, em quatro dias sucessivos (2 a 5 dias de vida), 20 pintos de corte de duas linhagens Pescoço pelado (Na/na) e Hubbard-Petersen, foram ou não estressados à temperatura de 36-37°C, durante cinco horas. Foram colhidas amostras de fígado e cérebro, ao final do período de estresse, e analisadas por Western Blotting, para determinação dos níveis de Hsp 70. Os resultados não mostraram associação entre perda de peso corporal e as demais características. Aumentos da variação de temperatura cloacal apresentaram aumentos nos níveis de Hsp70 no tecido hepático e cerebral. Concluiu-se que a concentração de Hsp70 no cérebro, apresentou-se correlacionada com a variação de temperatura cloacal, quando se usou o condicionamento ao calor em pintos de corte, embora não se possa afirmar que seria indicativo de termotolerância de aves.

This study was run to evaluate the physiological response and expression of hepatic and brain Hsp70, of 20 Naked neck (Na/na) and Hubbard-Petersen broiler chicks (2 to 5 days of age), exposed or not to 36-37°C. The trial was conducted during four days and the birds were exposed to high temperature during 5 hours. Liver and brain tissue samples were collected at the end of the stress period and analyzed for Western Blotting for determination of Hsp70 level. No association between body weight loss and the other variables were observed. Increasing the variation in cloacal temperature resulted in an increase in Hsp70 hepatic and brain tissue levels. Results indicate that brain Hsp70 levels were correlated with variation in cloacal temperature, concerning the chicks subjected to heat stress, but it can not be stated that it is an indicative of thermotolerance by the birds.

Oitenta pintos de corte de duas linhagens, pescoço pelado (Na/na) e Hubbard-Pettersen, entre 2 e 5 dias de idade, foram expostos a estresse térmico agudo (36-37°C), durante cinco horas. Foram avaliados temperatura cloacal e peso corporal individuais ao início e final do período de estresse térmico agudo. Os pintos foram sacrificados ao final e amostras de fígado e cérebro foram coletadas e analisadas por Western Blotting e Northern Blotting, para quantificação da proteína e RNA mensageiro da Hsp70, respectivamente. Os resultados apresentaram maiores níveis protéicos de Hsp70 no tecido cerebral do que no hepático. Antes do estresse térmico, não houve diferenças de linhagens para expressão e síntese de Hsp70, em ambos os tecidos. Após o estresse térmico, as aves estressadas apresentaram maiores níveis protéicos de Hsp70, quando o tecido analisado foi o fígado (para as pescoço pelado nas idades de 4 e 5 dias), e menores níveis, em relação às controles, quando o tecido analisado foi o cérebro (para as Pescoço pelado na idade de 2 dias). O tamanho do transcrito de RNA mensageiro de Hsp70 foi de 2,7 kb. Os resultados do presente experimento sugerem que, para o tecido cerebral, a indução de Hsp70 ocorreu em níveis transcripcional e traducional e para o tecido hepático foi detectada apenas alteração em nível traducional, para ambas as linhagens.

Eighty broiler chicks, Naked neck (Na/na) and Hubbard-Pettersen strains, were exposed to acute heat stress (36-37°C), from 2 to 5 days of age, and body weight and cloacal temperature were measured in the beginning and at the end of the heat stress period (5 h). Birds were sacrificed at the end and liver and brain samples were collected and analyzed using Western Blotting and Northern Blotting to quantify Hsp70 levels and mRNA Hsp70 transcript, respectively. The brain tissue had higher Hsp70 level than liver tissue. Before heat stress it was not observed difference in the Hsp70 expression between strains. After heat stress in the liver it was observed in increase in the Hsp70 level (naked neck birds at 4 and 5 days), and in the brain a reduced Hsp70 level was found when compared with the control birds (Naked neck birds at 2 days). The size of the mRNA Hsp70 transcript was 2.7 kb. The data of this experiment suggest that to the brain tissue heat stress affect Hsp70 at transcriptional and translational levels, and for hepatic tissue the effect is only at translational level, for different lines.

Neste trabalho, a técnica de PCR ("polymerase chain reaction") foi utilizada para a sexagem de 92 embriões bovinos fertilizados in vitro. Os embriões originaram-se de fertilização in vitro de oócitos aspirados de ovários de fêmeas bovinas, provenientes de abatedouros comerciais. Os oócitos foram maturados, fertilizados e cultivados até o estádio de blastocisto. Os embriões foram lavados em solução de PBS, transferidos para tubos de polipropileno contendo água ultrapura, e imediatamente congelados a -196ºC. Os embriões foram descongelados sobre isopor contendo gelo picado e tratados com proteinase K. Para a reação de PCR, utilizaram-se alíquotas de 34 µl de cada tudo, onde foram acrescidos dois pares de primers, seqüência BC1.2 e seqüência satélite 1.715, desoxinucleotídeos, MgCl2, tampão PCR 10X, TaqDNA polimerase e água, em um volume final de 50 µl. As amostras foram amplificadas e a eletroforese realizada em gel de poliacrilamida a 8%. Os géis foram corados com solução de brometo de etídio e analisados em transiluminador de luz ultravioleta. Um índice de 93,47% de amplificação foi atingido, com 41 embriões (47,67%) machos e 45 (52,32%) embriões fêmeas. O uso de gel de poliacrilamida a 8% foi eficaz na separação de fragmentos de DNA muito próximos.

In the present study the polymerase chain reaction (PCR) was used for sexing ninety-two in vitro fertilized bovine embryos. The embryos were obtained after in vitro fertilization of oocytes from slaughterhouses. The oocytes were matured, fertilized, and cultured until the blastocyst stage. The embryos were washed in PBS solution, and transferred to polypropylene tubes with containing ultrapure water and immediately frozen at -196ºC. The embryos were thawed on ice and treated with proteinase K. For the PCR reaction, aliquots of 34 µl from each tube were mixed to the primers BC1.2 and microsatellite sequence 1715, dNTPs, MgCl2, 10X PCR buffer, Taq DNA polymerase and water in a final volume of 50 µl. The samples were amplified and the PCR products separated by electrophoresis in a 8% polyacrylamide gel. The gels were stained in ethidium bromide solution and vizualized under UV-light. The amplification rate was 93.47%, with 41 (47.67%) male embryos and 45 (52.32%) female embryos. The use of 8% polyacrylamide gel was efficient for separating DNA fragments of very similar size.

O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da aplicação de 20 mg de somatotropina recombinante bovina (rBST) de liberação lenta, em períodos de 14 e 28 dias, sobre a ingestão de matéria seca, os coeficientes de digestibilidade de matéria seca (MS), fibra em detergente ácido (FDA), proteína bruta (PB) e energia bruta (EB), o balanço de nitrogênio e o ganho de peso diário, em rações à base de silagem de milho, cana-de-açúcar ou bagaço hidrolisado e concentrado. Foi usado um total de 24 borregos mestiços, não-castrados, com média de 4 a 5 meses de idade e 22 ± 2 kg de PV. Não houve efeito da rBST na ingestão de matéria seca, nas digestibilidades de PB e FDA, no balanço de nitrogênio e no ganho de peso diário dos borregos. A digestibilidade da energia bruta foi influenciada pela aplicação de rBST, quando os diferentes volumosos ou períodos pós-aplicação hormonal foram considerados, porém, somente foi observado efeito da ação hormonal sobre a digestibilidade de MS nas dietas à base de silagem de milho.

The objective of this work was to evaluate the effect of the administration of 20 mg of slow liberation bovine somatotropin (rBST) on the dry matter intake and on the digestibility coefficient of dry matter (MS), acid detergent fiber, crude protein, crude energy, nitrogen balance and the daily weight gain in lambs fed diets based on corn silage, sugar cane or hydrolyzed bagasse and concentrate. Twenty-four crossbred lambs, averaging 4-5 months of age and 22 + 2 kg LW, were used. There was no effect of the rBST on the dry matter intake, the digestibilities of crude protein, acid detergent fiber, the nitrogen balance and the daily weight gain of the lambs. The gross energy digestibility was affected by the rBST administration when different forages or periods post hormonal administration were considered, however, the effect of the hormonal action was observed only on the dry matter digestibility of corn silage diets.

Foram analisadas 40 amostras de salmouras empregadas na salga por submersão de queijos tipo mussarela, em uma indústria de laticínios do Estado de São Paulo, Brasil, com o objetivo de se conhecer a variação das características físico-químicas e microbiológicas durante o período de sua utilização. Os valores médios do pH, concentração de cloreto de sódio e de proteínas solúveis, desde o preparo da salmoura até o 21° dia de utilização, variaram de 7,21 a 5,76, 27,1 a 24,5 e de zero a 0,126 mg/ml, respectivamente. Por outro lado, os valores médios das contagens de microrganismos mesófilos e do número mais provável de coliformes totais e de origem fecal variaram de 5,8 x 10 UFC/ml a 6,9 x 10(4) UFC/ml, zero a 1,6 x 10(5)/100ml e zero a 1,1 x 10(5)/100ml, respectivamente. Além disso, os valores médios das contagens de bolores e leveduras e de Staphylococcus coagulase positiva, variaram de 0,4 x 10 UFC/ml a 2,0 x 10³ UFC/ml e de zero a 1,3 x 10 UFC/ml, respectivamente. Os resultados encontrados sugerem a existência de condições higiênicas inadequadas durante o preparo e utilização das salmouras, de modo a representar uma importante fonte de contaminação para os queijos. Em decorrência deste fato, existe a possibilidade do comprometimento da qualidade dos queijos, de modo a representar risco potencial à população consumidora.

Variation of the physical, chemical and microbiological characteristics of brines during their utilization for salting mozzarella cheese. Forty brine samples used for submersion salting of mozzarella cheese in a dairy industry in the State of S. Paulo, Brazil, were analysed for the purpose of discovering the variation in the physical, chemical and microbiological characteristics observed over their period of utilization. The mean values preparation up to the 21st day of utilization of pH, sodium chloride and protein concentration varied from 7.21 to 5.76, from 27.1 to 24.5 and from zero to 0.126 mg/ml, respectively over the period from their. The mean values of the mesophylic microorganism counts and of the total and fecal coliforms MPN varied from 5.8x10 CFU/ml to 6.9x10(4) CPU/ml, from zero to 1.6x10(5)/100ml and from zero to 1.1x10(5)/100ml, respectively. Moreover, the mean values of mould and yeast and Staphylococcus positive coagulase counts varied from 0.4 x 10 CFU/ml to 2.0 x 10³ CFU/ml and from zero to 1.3 x 10 CFU/ml, respectively. The results obtained suggest that the hygienic conditions during the preparation and the utilization of the brine were not satisfactory so that they may represent an important source of contamination for the cheeses. The quality of the product may be harmed, as a result of this fact, in such a way as to represent a potential harzard for the health of the consuming population.

Foram analisadas 40 amostras de salmouras empregadas na salga por submersão de queijos tipo mussarela, em uma indústria de laticínios do Estado de São Paulo, Brasil, com o objetivo de se conhecer a variação das características físico-químicas e microbiológicas durante o período de sua utilização. Os valores médios do pH, concentração de cloreto de sódio e de proteínas solúveis, desde o preparo da salmoura até o 21° dia de utilização, variaram de 7,21 a 5,76, 27,1 a 24,5 e de zero a 0,126 mg/ml, respectivamente. Por outro lado, os valores médios das contagens de microrganismos mesófilos e do número mais provável de coliformes totais e de origem fecal variaram de 5,8 x 10 UFC/ml a 6,9 x 10(4) UFC/ml, zero a 1,6 x 10(5)/100ml e zero a 1,1 x 10(5)/100ml, respectivamente. Além disso, os valores médios das contagens de bolores e leveduras e de Staphylococcus coagulase positiva, variaram de 0,4 x 10 UFC/ml a 2,0 x 10³ UFC/ml e de zero a 1,3 x 10 UFC/ml, respectivamente. Os resultados encontrados sugerem a existência de condições higiênicas inadequadas durante o preparo e utilização das salmouras, de modo a representar uma importante fonte de contaminação para os queijos. Em decorrência deste fato, existe a possibilidade do comprometimento da qualidade dos queijos, de modo a representar risco potencial à população consumidora.

Variation of the physical, chemical and microbiological characteristics of brines during their utilization for salting mozzarella cheese. Forty brine samples used for submersion salting of mozzarella cheese in a dairy industry in the State of S. Paulo, Brazil, were analysed for the purpose of discovering the variation in the physical, chemical and microbiological characteristics observed over their period of utilization. The mean values preparation up to the 21st day of utilization of pH, sodium chloride and protein concentration varied from 7.21 to 5.76, from 27.1 to 24.5 and from zero to 0.126 mg/ml, respectively over the period from their. The mean values of the mesophylic microorganism counts and of the total and fecal coliforms MPN varied from 5.8x10 CFU/ml to 6.9x10(4) CPU/ml, from zero to 1.6x10(5)/100ml and from zero to 1.1x10(5)/100ml, respectively. Moreover, the mean values of mould and yeast and Staphylococcus positive coagulase counts varied from 0.4 x 10 CFU/ml to 2.0 x 10³ CFU/ml and from zero to 1.3 x 10 CFU/ml, respectively. The results obtained suggest that the hygienic conditions during the preparation and the utilization of the brine were not satisfactory so that they may represent an important source of contamination for the cheeses. The quality of the product may be harmed, as a result of this fact, in such a way as to represent a potential harzard for the health of the consuming population.