RESUMO O meio de armazenamento dos tecidos biológicos tem grande importância para que os mesmos possam ser empregados da melhor forma em cirurgias. A glicerina tem se mostrado eficiente, considerando aspectos microbiológicos, em armazenar alguns tecidos por períodos prolongados. Porém, nunca foi avaliada a conservação da membrana amniótica bovina em glicerina 99% em temperatura ambiente para que, posteriormente, pudesse ser empregada com segurança em procedimentos cirúrgicos. Assim, foram avaliadas 80 amostras de membrana amniótica bovina armazenadas em glicerina 99% em temperatura ambiente e divididas aleatoriamente em quatro grupos de igual número. As amostras foram submetidas à avaliação microbiológica após 1, 6, 12 e 48 meses de armazenamento. Com o objetivo de avalizar a possível presença de bactérias e fungos nas amostras, elas foram inoculadas em ágar-sangue e incubadas a 37 ºC por 48 horas e em ágar Sabouraud a 25 ºC durante 5 a 10 dias. Não houve crescimento fúngico ou bacteriano em nenhuma das amostras. Conclui-se que a glicerina é um meio de conservação eficiente, no que tange a microbiologia, de membrana amniótica bovina previamente preparada, mantendo o tecido isento de microorganismos que se multiplicam nos meios utilizados por um período de até 48 meses em temperatura ambiente.

ABSTRACT The medium for storing biological tissues is of great importance for their optimal use in surgery. Glycerin has been proven efficient for storing diverse tissues for prolonged time, but the preservation of the bovine amniotic membrane in glycerin 99% at room temperature has never been evaluated to be used safely in surgical procedures. This study evaluated the preservation of 80 bovine amniotic membrane samples stored in glycerin 99% at room temperature. The samples were randomly divided evenly into four groups. Samples were microbiologically tested after 1, 6, 12 and 48 months of storage. The presence of bacteria and fungi in the samples was evaluated by inoculation on blood agar and incubation at 37 ºC for 48 hours and on Sabouraud agar at 25 ºC for 5 to 10 days. No fungal or bacterial growth was detected in any of the samples. It was concluded that glycerin is an efficient medium, regarding microbiology, for preserving pre-prepared bovine amniotic membrane, keeping the tissue free of microorganisms that grow in the media up to 48 months at room temperature.

O trabalho objetivou avaliar a biocompatibilidade, a osteocondução e a osseointegração de um compósito pastoso de hidroxiapatita (20%) e lignina (80%) como promotor de integração entre implante metálico e tecido ósseo. Um pino intramedular de Schanz foi implantado em ambas as tíbias de quinze cadelas. Na tíbia esquerda, o pino foi coberto com o biomaterial no momento da cirurgia. A cavidade medular também foi preenchida com o biomaterial. O membro direito não recebeu o biomaterial, constituindo assim o grupo controle. As tíbias foram coletadas de cinco animais aos oito, 60 e 150 dias após a cirurgia, sendo três encaminhadas para avaliação histológica e biomecânica e as duas restantes, para difração de raios X. Os resultados revelaram biocompatibilidade do material, com propriedades de osteocondução e osseointegração. As análises histológicas e os difratogramas mostraram presença da hidroxiapatita no tecido em todos os períodos avaliados, embora a presença de material orgânico de baixa cristalinidade tenha sido variável. Não houve diferença estatística na força necessária para remoção do pino intramedular entre os tempos ou tratamentos. Embora o biomaterial tenha apresentado biocompatibilidade, osteocondutividade e osseointegração, ele não foi capaz de promover uma melhor ancoragem do pino intramedular.

The study aimed to evaluate biocompatibility, osteoconduction and osseointegration of a pasty composite of hydroxyapatite (20%) and lignin (80%) as a promoter of metal implant and bone tissue integration. An intramedullary Schanz pin was implanted in both tibias of fifteen bitches. In the left tibia, the pin was coated with the biomaterial at the time of surgery. Marrow cavity was also filled with the biomaterial. Right limb did not receive the biomaterial, then constituting the control group. Tibias were harvested from five animals at 8, 60 and 150 days after surgery; three of them were analyzed by histological and biomechanical assessment and the two remaining tibias by X-ray diffraction. Results showed that the biomaterial is biocompatible, with osteoconductivity and osseointegration properties. Histological analysis and diffractograms showed the presence of hydroxyapatite in samples in all periods, although the presence of organic material of low crystallinity was variable. There was no statistical difference in the forces required for removal of the biocompatibility, osteoconductivity and osseointegration, it was not able to promote a better intramedullary pin anchorage.

Dentre os tratamentos propostos para a doença articular degenerativa (DAD), os nutracêuticos condroprotetores à base de sulfato de condroitina constituem uma terapia não invasiva que favorece a manuteção da saúde da cartilagem. Além de utilizados em humanos, foram também disponibilizados para uso veterinário administrados na forma de suplemento nutricional independentemente de prescrição, uma vez que possuem somente o registro do Serviço de Inspeção Federal, que não exige testes de eficácia e segurança. A falta desses testes pelo Ministério da Agricultura para comprovação da eficácia e segurança de medicamentos veterinários e a carência de estudos científicos que comprovem seus benefícios geram dúvidas quanto à eficiência de tais substâncias ativas. Nesse contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia de um nutracêutico condroprotetor veterinário à base de sulfato de condroitina e glucosamina, na reparação de defeitos osteocondrais no côndilo femoral lateral de 48 cães, por meio de análises clínica e radiográfica. Os animais foram distribuídos em grupos tratado (GT) e controle (GC), de forma que somente o GT recebeu o nutracêutico a cada 24 horas na posologia recomendada pelo fabricante. Os resultados dos quatro tempos de tratamento utilizados (15, 30, 60 e 90 dias) mostraram que o produto na dose, formulação e no período de administração utilizados não proporcionou melhora dos sinais clínicos e não influenciou radiograficamente o processo de reparação dos defeitos, visto que os grupos tratado e controle apresentaram aspectos radiográficos idênticos ao término dos tratamentos.

Among the proposed treatments to repair lesions of degenerative joint disease (DJD), chondroprotective nutraceuticals composed by glucosamine and chondroitin sulfate are a non-invasive theraphy with properties that favors the health of the cartilage. Although used in human, it is also available for veterinary use with administration in the form of nutritional supplement independent of prescription, since they have registry only in the Inspection Service, which does not require safety and efficacy testing. The lack of such tests to prove efficacy and safety of veterinary medicines required by the Ministry of Agriculture and the lack of scientific studies proving its benefits raises doubts about the efficiency of the concentrations of such active substances. In this context, the objective of this study was to evaluate the efficacy of a veterinary chondroprotective nutraceutical based on chondroitin sulfate and glucosamine in the repair of osteochondral defects in lateral femoral condyle of 48 dogs, through clinical and radiographic analysis. The animals were divided into treatment group (TG) and control group (CG), so that only the TG received the nutraceutical every 24 hours at the rate recommended by the manufacturer. The results of the four treatment times (15, 30, 60 and 90 days) showed that the chondroprotective nutraceutical, in the rate, formulation and administration at the times used, did not improve clinical signs and radiologically did not influence in the repair process of the defects, since the treated and control groups showed similar radiographic findings at the end of the treatments.

O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da membrana amniótica canina, preservada em glicerina, usada como bandagem na reparação de úlceras superficiais experimentais de córneas de coelhos e comparar o tempo de epitelização das córneas, entre os grupos tratado e controle. As membranas foram colhidas assepticamente e preservadas em glicerina 99%, em temperatura ambiente. Cada animal foi anestesiado e submetido a ceratectomia superficial no olho esquerdo. O grupo tratado recebeu um fragmento de membrana amniótica, como bandagem, e o grupo controle não recebeu tratamento. O grupo tratado apresentou blefarospasmo, secreção ocular e congestão conjuntival. A membrana amniótica acelerou o início do processo de reparação da córnea, porém retardou sua conclusão. As córneas tratadas demonstraram formação vascular e perda da transparência. O estroma do grupo controle apresentou-se mais espesso do que o do grupo tratado. Sugere-se que a membrana amniótica, utilizada da forma descrita, deva ser aplicada como terapia em úlceras superficiais da córnea na fase inicial do processo de reparação.

The aim of this study was to evaluate the effects of canine amniotic membrane, previously preserved in glycerin, used as a patch on the repair of experimentally-made superficial corneal ulcers and to compare corneal epithelization between the treated and non-treated groups. Xenogeneic amniotic membranes were collected aseptically and preserved in 99% glycerin at room temperature. Each animal was anesthetized and submitted to superficial corneal keratectomy of the left eye. The treated group received a fragment of canine amniotic membrane as a patch, while the control group had no treatment. The treated group showed blepharospasm, ocular discharge and conjunctival congestion. The membrane accelerated corneal repair in the beginning of the process, however, it delayed its conclusion (p<0.05). Treated eyes showed greater vessel formation and decreased corneal transparency (p<0.05). The stroma of the control group was thicker than that of the treated group (p<0.05). We suggest that amniotic membrane used in this manner can be applied as a therapy for superficial corneal ulcers in the beginning phases of the repair process.

Os eventos que fazem parte do processo de reparação de lesões da córnea ocorrem simultaneamente e envolvem proliferação, migração, diferenciação e apoptose celular, além da comunicação intercelular. Vários fatores solúveis, além de proteínas da matriz mesenquimal, proteoglicanos, enzimas proteolíticas e alguns tipos celulares são abordados nesta revisão, na qual explicam-se os processos de reparação de lesões superficiais ou penetrantes da córnea. A membrana amniótica, muito utilizada na cirurgia oftálmica, foi estudada por apresentar funções que colaboram com o processo de reparação. Entretanto, tais funções poderão ser perdidas quando tal tecido for submetido à conservação. Assim, torna-se importante conhecer o processo de reparação de lesões que envolvem, ou não, a córnea em toda a sua espessura e escolher a melhor forma de utilização da membrana amniótica quando ela for indicada na terapia para estas lesões.

The events included in the process of repair of corneal damage occur simultaneously and involve proliferation, migration, differentiation, cell apoptosis and intercellular communication. Several soluble factors, mesenchymal matrix proteins, proteoglycans, proteolytic enzymes and some cell types are covered in this review, which explains the processes of repair of corneal wounds, either superficial or penetrating. The amniotic membrane, used in ophthalmic surgery, was studied because of the contribution of its functions to the repair process. However, these functions may be lost when the amniotic membrane is subjected to conservation. Therefore, it is important to understand the repair process of lesions involving or not the entire thickness of the cornea, and choose the best use of the amniotic membrane, when it is indicated for the treatment of these lesions.

O filme lacrimal tem função importante na manutenção da integridade da superfície ocular. Durante a anestesia geral sua produção é diminuída consideravelmente, o que exige cuidados para prevenir efeitos adversos que resultam em doenças destas estruturas. Ainda não foram realizadas pesquisas comparando-se os efeitos da indução com o tiopental e com o propofol na produção lacrimal. Como estas drogas são utilizadas na Medicina Veterinária, resolveu-se avaliar a produção lacrimal de 30 cães submetidos à procedimentos cirúrgicos experimentais e de rotina no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Viçosa. Os pacientes foram distribuídos em dois grupos de número igual. Todos os animais foram sedados com clorpromazina e mantidos com isoflurano diluído em oxigênio. O grupo 1 recebeu indução com o tiopental e o grupo 2 com propofol. Foi realizado teste lacrimal de Schirmer 1 antes da sedação (T0), 15 minutos após a sedação (T1) e 10 minutos após a indução da anestesia (T2) com a droga referente ao grupo a que pertencia cada animal. Ambas as drogas levaram à diminuição considerável na produção lacrimal, sendo que não existiram diferenças significativas ao compará-las estatisticamente. Assim, diante dos resultados observados e da maneira como a pesquisa foi concebida, sugere-se a proteção da córnea e conjuntiva do paciente durante a anestesia utilizando-se qualquer uma das drogas avaliadas para a indução da anestesia.

The tear film plays an important role in maintaining the integrity of the ocular suface. During general anesthesia, tear production is considerably reduced, which requires care to prevent adverse effects that result in diseases of these structures. Studies comparing the effects of induction of anaesthesia with thiopental and propofol on tear production have not been carried out yet. Because these drugs are used in veterinary medicine, we decided to evaluate the tear production in 30 dogs undergoing experimental surgery as well as routine procedures at the veterinary hospital of Federal University of Viçosa. Patients were divided into two groups of equal number. All animals were sedated with clorpromazine and maintained with isoflurane in diluted oxygen. Group 1 was induced with thiopental whereas group 2 with propofol. Schirmer tear test 1 was performed before sedation (T0), 15 minutes after sedation (T1) and 10 minutes after induction of anesthesia (T2) with the drug chosen for one of the groups. There was a significant decrease in tear production for both drugs, but no significant statistical differences were found between them. Thus, considering the results and the way in which the study was conducted, we suggest protecting the cornea and conjunctiva of patients during anesthesia using any of the drugs here evaluated.

A biocompatibilidade, osteointegração, osteocondução e biodegradação de um novo compósito de hidroxiapatita e polihidroxibutirato foram avaliados. O compósito foi implantado em defeitos ósseos em coelhos e dados clínicos, radiográficos, histológicos e histomorfométricos foram comparados aos de defeitos não preenchidos aos 8, 45 e 90 dias após a cirurgia. Não foram observadas diferenças significantes entre os grupos para os parâmetros clínicos avaliados. Contato direto entre osso e compósito foi observado nas radiografias. Tecido ósseo se formou dentro do defeito, interface e dentro do compósito. Foram observadas diferenças significativas entre a porcentagem dos tecidos ósseo e conjuntivo dentro do defeito em todas as datas de avaliação e na interface aos 45 dias, com predominância do tecido ósseo. Sinais de biodegradação foram observados: células gigantes na superfície de fragmentos do compósito separados do bloco original, na ausência de infiltrado inflamatório. Os dados permitem concluir que o compósito é biocompatível, biodegradável, osteocondutor e se integra ao tecido ósseo.

In this work, biocompatibility, osteointegration, osteoconductivity, and biodegradation of a hydroxyapatite polyhydroxybutyrate new composite were evaluated. The composite was implanted in rabbits' bone defects and clinical, radiographic, histological, and histomorphometric data of these animals were compared with those of unfilled defects on the days 8th, 45th, and 90th after surgery. No significant differences existed between the groups for the evaluated clinical parameters. Radiographs showed bone-composite direct contact. Bone formed within the defect, interface and inside the composite. Significant differences were found between the bone and connective tissues percentage within the defect at all dates and at the interface on the 45th day, bone tissue prevailing. Composite's biodegradation signs were evident: giant cells on the surface of composite fragments separated from the original block in the absence of inflammatory infiltrate. These data supported that such composite was biocompatible, biodegradable, osteoconductive and integrate to bone.

A biocompatibilidade, a osseointegração e a reabsorção de compósitos contendo 10% de hidroxiapatita (HAP-91®) e 90% de polihidroxibutirato foram analisadas após implantação em defeitos ósseos em coelhos. Foram obtidos dados clínicos, radiográficos, histológicos e histomorfométricos aos oito, 45 e 90 dias após a realização da cirurgia, sendo os resultados comparados aos de defeitos não-preenchidos. Não foram observadas diferenças significativas entre os grupos para os parâmetros clínicos avaliados. Radiografias demonstraram o compósito em contato direto com osso aos 45 e 90 dias. Tecido ósseo se formou normalmente no defeito e na interface com o material, quando comparado ao controle. Não foi observado infiltrado inflamatório. Em todos os dias, a porcentagem de tecido ósseo foi maior que a de tecido conjuntivo (P=0,001 aos 8 e 45 dias e 0,022 aos 90 dias) dentro dos defeitos. Foram observados tecidos ósseo e conjuntivo na interface com o compósito, sendo o último significativamente maior que o primeiro aos 90 dias (P=0,004). Foram observados sinais de reabsorção do compósito: células gigantes na superfície de fragmentos do compósito separados do bloco original. Portanto, pode-se concluir que o compósito é biocompatível em coelhos, reabsorvível e se integra ao tecido ósseo.

Biocompatibility, osseointegration, and resorption of a 10% hydroxyapatite (HAP-91®) - 90% polyhydroxybutyrate composite were analyzed after implantation in rabbits´ bone defects. Clinical, radiographic, histologic and histomorphometric data were collected on the 8th, 45th, and 90th days after surgery and the results were compared to those of unfilled defects. No significant differences between groups for the evaluated clinical parameters existed. Radiographs showed bone-composite direct contact. Bone tissue was formed normally in the defect and at the composite-tissue interface when compared to the control. No inflammatory infiltrated was observed. For each sampling day, the percentages of bone were greater than those of connective tissues (P=0.001 on the 8th and 45th days and 0.022 on the 90th day) inside the defect. Bone and connective tissues were seen at the interface with the composite, being the last one significantly greater than the first on the 90th day (P=0.004). Composite's resorption signs were evident: giant cells on the surface of composite fragments separated from the original bloc. Data support that such composite is biocompatible in rabbits, resorbable and integrate to bone.

O presente estudo avaliou a influência do plasma autógeno rico em plaquetas (PRP), associado ou não ao autoenxerto esponjoso (EOE), na reparação de falhas ósseas criadas no crânio de coelhos. A falha I foi preenchida com o PRP; a falha II com 3mg de EOE; a falha III com EOE associado ao PRP e a falha IV não foi preenchida, servindo como controle. Após as cirurgias, os animais foram separados em três grupos e eutanasiados aos 30, 60 e 90 dias. Na avaliação mesoscópica, independentemente do período de observação, o preenchimento ósseo, na falha controle e naquelas tratadas com PRP, iniciou-se a partir das bordas para o centro e do fundo para a superfície das falhas. Já nas falhas tratadas com EOE e com enxerto associado ao PRP, foi notado também crescimento ósseo na porção central das falhas. Na análise radiográfica, foi observada maior radiopacidade no interior das falhas tratadas com EOE e com enxerto associado ao PRP, em todos os tempos. Microscopicamente, aos 30 dias, na falha tratada com EOE associado ao PRP, os fragmentos ósseos do enxerto estavam indistintos do tecido ósseo neoformado, presente em toda a borda do defeito, associado à moderada quantidade de tecido conjuntivo fibroso muito vascularizado e celularizado. Esse tecido apresentou material amorfo, eosinofílico e extracelular, junto a um processo inflamatório, constituído por linfócitos e, em menor número, por macrófagos e células gigantes multinucleadas, que podem ter influenciado negativamente a formação óssea precoce. Aos 60 e 90 dias, apenas focos ocasionais de inflamação linfocitária foram observados. O comportamento dos dois tratamentos, PRP associado ou não ao EOE, em relação a preenchimento ósseo, foi semelhante ao final do período de observação; o enxerto, utilizado de forma isolada, determinou precocidade de reparação óssea e a tromboplastina, utilizada para formação do gel de plaquetas, incitou uma reação semelhante a do tipo corpo estranho, que atuou negativamente na fase inicial de reparação.

The present study evaluated autogenous platelet rich plasma's (PRP) influence on the reparation process of four bone defects made on rabbit's skull, associated or not to autogenous bone graft (EOE). Defect I received PRP only; defect II received 3mg of EOE only; defect III received EOE associated to PRP; defect IV was left to heal naturally, serving as control. After each surgery the animals were randomly divided into three groups that were euthanized at 30, 60 and 90 days. In the mesoscopic evaluation bone ingrowth started from the defect's borders to the center and from the bottom to the surface for all observation times on the control (VI) and PRP only (I) groups. In the groups treated with EOE only (II) and EOE associated to PRP (III) new bone was observed in the center of the defects. Radiographic analysis showed greater central radiopacity for groups treated with EOE only (II) and EOE associated to PRP (III) at all observation times. Microscopically in the group treated with EOE associated to PRP (III) at 30 days the graft was indistinguishable from new bone present on the border of the defect, associated to a moderate quantity of a very vascularized and cellular fibrous connective tissue. This tissue showed an extracelular eosinophilic amorphous foamy material, associated to an inflammatory process constituted by lymphocytes and in less number by macrophages and multinucleated giant cells that may have negatively influenced early bone formation. At 60 and 90 days occasional spots of lymphocytic inflammation were observed. Both treatments, PRP associated or not to EOE, were similar for the bone ingrowth at the final time of observation; the graft used alone determined early bone reparation and thromboplastine used for the platelet gel formation incited a foreign body-like reaction that acted negatively on the initial reparation.