The tissue microarray (TMA) technique is based on making cylindrical cores from paraffin donor blocks and transfer to a single recipient block. The TMA has revolutionized the field of pathology for the possibility to evaluate multiple samples in one slide. There is no precedent of this subject in Cuba, so the objective of this research was to implement the TMA technique. The concordance of the results obtained by complete section and the TMA were evaluated for this purpose, in the evaluation of the estrogen receptors (ER), progesterone (PR) and epidermal growth factor type 2 (HER2) in samples of breast cancer. Forty-five paraffin-embedded samples from women diagnosed with breast cancer at the Institute of Oncology in 2012 were studied. Two TMA blocks were constructed, and subsequently the expression of markers ER, PR and HER2 was determined by immunohistochemistry, in the complete section of tissue and in the TMA. Kappa index was used for concordance analysis. A good concordance was obtained for all three markers (ER k=0.8272; PR k=0.793 and HER2 k=0.716). This study constitutes the first report on the TMA technique in Cuba and shows that it is a valuable tool, suggesting its potential use in translational research and clinical trials on vaccines. The tissue microarray (TMA) technique is based on making cylindrical cores from paraffin donor blocks and transfer to a single recipient block. The TMA has revolutionized the field of pathology for the possibility to evaluate multiple samples in one slide. There is no precedent of this subject in Cuba, so the objective of this research was to implement the TMA technique. The concordance of the results obtained by complete section and the TMA were evaluated for this purpose, in the evaluation of the estrogen receptors (ER), progesterone (PR) and epidermal growth factor type 2 (HER2) in samples of breast cancer. Forty-five paraffin-embedded samples from women diagnosed with breast cancer at the Institute of Oncology in 2012 were studied. Two TMA blocks were constructed, and subsequently the expression of markers ER, PR and HER2 was determined by immunohistochemistry, in the complete section of tissue and in the TMA. Kappa index was used for concordance analysis. A good concordance was obtained for all three markers (ER k=0.8272; PR k=0.793 and HER2 k=0.716). This study constitutes the first report on the TMA technique in Cuba and shows that it is a valuable tool, suggesting its potential use in translational research and clinical trials on vaccines. <p></p>

La técnica de micromatrices de tejidos (TMA), basada en la toma de ponches cilíndricos de bloques de parafina donantes y su transferencia a un solo bloque receptor, revolucionó el campo de la patología, por la posibilidad de evaluar múltiples muestras en una sola lámina. En Cuba no existen antecedentes del tema, por lo que el objetivo de este trabajo fue implementar la técnica de TMA. Para ello, se evaluó la concordancia de los resultados que se obtienen por sección completa y por TMA, en la evaluación de los receptores de estrógeno (RE), progesterona (RP) y del factor de crecimiento epidérmico tipo 2 (HER2) en muestras de cáncer de mama. Se estudiaron 45 muestras parafinadas de mujeres con esta enfermedad que se atendieron en el Instituto de Oncología en el año 2012. Se construyeron dos bloques de TMA y posteriormente se determinó, mediante inmunohistoquímica, la expresión de los marcadores RE, RP y HER2, en la sección completa de tejido y en el TMA. Para el análisis de concordancia se empleó el índice Kappa. Se obtuvo una buena concordancia para los tres marcadores (RE k=0,8272; RP k=0,793 y HER2 k=0,716). Este trabajo constituye el primer reporte sobre la técnica de TMA en Cuba y demuestra que es una herramienta valiosa, por lo que se sugiere su potencial uso en la investigación traslacional y en los ensayos clínicos de vacunas. La técnica de micromatrices de tejidos (TMA), basada en la toma de ponches cilíndricos de bloques de parafina donantes y su transferencia a un solo bloque receptor, revolucionó el campo de la patología, por la posibilidad de evaluar múltiples muestras en una sola lámina. En Cuba no existen antecedentes del tema, por lo que el objetivo de este trabajo fue implementar la técnica de TMA. Para ello, se evaluó la concordancia de los resultados que se obtienen por sección completa y por TMA, en la evaluación de los receptores de estrógeno (RE), progesterona (RP) y del factor de crecimiento epidérmico tipo 2 (HER2) en muestras de cáncer de mama. Se estudiaron 45 muestras parafinadas de mujeres con esta enfermedad que se atendieron en el Instituto de Oncología en el año 2012. Se construyeron dos bloques de TMA y posteriormente se determinó, mediante inmunohistoquímica, la expresión de los marcadores RE, RP y HER2, en la sección completa de tejido y en el TMA. Para el análisis de concordancia se empleó el índice Kappa. Se obtuvo una buena concordancia para los tres marcadores (RE k=0,8272; RP k=0,793 y HER2 k=0,716). Este trabajo constituye el primer reporte sobre la técnica de TMA en Cuba y demuestra que es una herramienta valiosa, por lo que se sugiere su potencial uso en la investigación traslacional y en los ensayos clínicos de vacunas. <p></p>

Introduction: Human Papillomavirus (HPV) infection is the necessary condition for the occurernce and development of cervical cancer. The high oncogenic risk genotypes are the responsible for this type of neoplasia and the most frequent is HPV 16 that affects roughly 60 % of cases. Commercial kits for HPV detection are expensive for resource-poor countries, which suggests the search for alternative throguh non-expensive simple protocoles. Objectives: to standardize an immunochemical method for the detection of HPV 16 L1 antigen in cervical samples of patients with squamous intraepithelial lesions and to determine the diagnostic coincidence between the immunochemical method and the real-time polymerase chain reaction to estimate the usefulness of this method for the detection of cervical infection with this viral genotype. Methods: three immunostaining methods (Two-Step Indirect Immunoperoxidase, Labelled Streptavidin-Biotin and Enhanced Polymer) were compared in terms of analytical sensitivity, nonspecific background staining and time of completion, for the detection of protein L1 of HPV-16 in a cell line derived from human cervical carcinoma and clinical samples from uterine cervix. The optimized protocol was applied to 82 cervical samples from women aged 30-59 years with squamous intraepithelial lesions and to 10 samples of sexually active women without previous signals of positive cytology. The presence of type 16 HPV was also detected with the aid of RT-PCR. Results: the Streptavidin-Biotin system was the most sensitive and specific. The diagnostic agreement between the immunochemical method and the real-time polymerase chain reaction reached 98.6 %, sensitivity was 98.57 % and specificity was 91.67 %, with positive and negative predictive values above 90 %. Conclusions: the validity of the immunochemical method as a confirmatory test for infection by HPV-16 has been demonstrated. The normalized immunochemical method proved to be a sensitive, simple, relatively fast method to detect HPV from clinical samples of cervical cells. Furthermore, this method provides information quickly, avoiding the use of invasive methods in patients.

Introducción: la infección por Papilomavirus Humano (PVH) es la condición necesaria para la aparición y desarrollo del cáncer cérvico-uterino. Los genotipos de alto riesgo oncogénico son los causantes de este tipo de neoplasia y dentro de ellos el más frecuente es el PVH 16, que se encuentra aproximadamente en el 60 % de los casos. Los métodos de diagnóstico comerciales resultan costosos para países con escasos recursos económicos, lo que sugiere la búsqueda de alternativas empleando protocolos sencillos y baratos. Objetivos: normalizar un método inmunoquímico para la detección del antígeno L1 de PVH tipo 16 en muestras cérvico-uterinas de pacientes con lesiones intraepiteliales escamosas y determinar la coincidencia entre el método normalizado y la Reacción en Cadena de la Polimerasa en Tiempo Real (RCP-TR), como técnica de referencia, para estimar la utilidad de dicho método en el diagnóstico de la infección por este genotipo viral. Métodos: se compararon tres procedimientos de inmunotinción (Indirecto de inmunoperoxidasa en dos pasos, Estreptavidina-Biotina y Amplificación por polímero) respecto a sensibilidad analítica, tinción inespecífica de fondo y tiempo de terminación, para la detección de la proteína L1 de PVH 16 en líneas celulares derivadas de carcinomas cervicales humanos y en muestras cérvico-uterinas utilizadas como controles. El protocolo normalizado se aplicó a muestras cérvico-uterinas de mujeres entre 30 y 59 años, 82 con lesiones intraepiteliales cervicales y 10 sin antecedentes de alteraciones citológicas, a las que además se les determinó PVH 16 mediante RCP-TR. Resultados: el procedimiento de Estreptavidina-Biotina resultó el más sensible y específico. La coincidencia entre el método inmunoquímico y la RCP-TR fue de un 98,6 %, la sensibilidad fue de un 98,57 % y la especificidad de un 91,67 %, con valores predictivos negativo y positivo por encima del 90 %. Conclusiones: se demostró la validez del método inmunoquímico como prueba confirmatoria de la infección por PVH 16. Dicho método probó ser sensible, sencillo y no requiere de una compleja infraestructura para detectar PVH 16 en muestras cervicales. Además, esta técnica permite obtener información rápidamente y evita el uso de métodos invasivos.

INTRODUCTION: Angiostrongylus cantonensis meningoencephalitis is an emergent disease in the Americas. METHOD: Twelve children suffering from eosinophilic meningoencephalitis due to this parasite aged between 6-10 years were studied. Cerebrospinal fluid (CSF) and serum samples were taken simultaneously in the first diagnostic puncture at admission. RESULTS: All cases showed typical findings on the routine CSF and serum analysis: increased CSF total protein, increased Q (CSF/serum) albumin accompanied by eosinophilia in CSF. No intrathecal synthesis of immunoglobulins was found. Mean serum and CSF sICAM-1 values were 337.4 and 3.97 ng/mL. Qalbumin and QsICAM-1 mean values were 4.1 and 6.2 respectively. In 50% of the patients an increased brain-derived fraction of sICAM-1 was found. CONCLUSION: It may be suggested that a dynamic of the sICAM-1 brain derived fraction is perhaps associated to the immune response in the evolution of the disease.sICAM-1 may be an agent in negative feedback for eosinophils passage through the blood-CSF barrier into the inflammatory brain response.

INTRODUCCIÓN: La meningoencefalitis por Angiostrongylus cantonensis es una enfermedad emergente en las Américas. MÉTODO: Doce niños con meningoencefalitis eosinofílica por Angiostrongylus cantonensis con edades entre 6 y 10 años fueron estudiados. Se tomaron muestras simultáneas de suero y líquido cefalorraquídeo (LCR) en la primera punción lumbar diagnóstica. RESULTADOS: Todos los casos evidenciaron hallazgos típicos en los análisis de rutina del LCR y suero: incremento de proteínas totales, aumento de la razón albúmina Q (LCR/suero) acompañado de eosinofilia en LCR. No se encontró síntesis intratecal de inmunoglobulinas. Los valores medios de sICAM-1 en suero y LCR fueron de 337,4 y 3,97 ng/mL respectivamente. Los valores medios de Q albúmina y Q sICAM-1 fueron de 4,1 y 6,2 respectivamente. En el 50% de los pacientes se encontró un incremento de la fracción de sICAM-1 derivado del cerebro. CONCLUSIÓN: Se puede sugerir que la dinámica de la fracción sICAM-1 derivada del cerebro ocurre quizas asociada a la respuesta inmune frente a la enfermedad. sICAM-1 puede ser un agente de retroalimentación negativa para el paso de eosinófilos de la sangre a través de la barrera sangre-LCR en el cerebro inflamado.

An IgG subclass deficiency is often associated with bacterial infections. We studied four pediatric patients suffering from meningoencephalitis, two of them due to Streptococcus pneumoniae and two due to Haemophilus influenzae type b. Simultaneous diagnostic serum and cerebrospinal fluid samples were taken during income. The four subclasses of IgG and albumin were quantified in both biologic fluids by radial immunodiffusion. Very low levels of seric IgG2 with non detectable cerebrospinal fluid IgG2 were found in the patients. No intrathecal IgG subclass synthesis was found in two patients. One patient with S. pneumoniae had IgG3 intrathecal synthesis. Intrathecal IgG1, IgG3 and IgG4 synthesis was found in one patient suffering from H. influenzae according with reibergrams. Substitutive therapy with intravenous gammaglobulin was given to the patients as part of the treatment.

Las deficiencias por subclases de IgG se asocian frecuentemente con infecciones de origen bacteriano. Se estudian cuatro pacientes en edad pediátrica con meningoencefalitis, dos de ellos a Streptococcus pneumoniae y dos a Haemophilus influenzae tipo b. Se toman muestras simultáneas diagnósticas de suero y líquido cefalorraquídeo en el momento del ingreso. Se cuantificaron las cuatro sublclases de IgG y albúmina en ambos líquidos biológicos por inmunodifusión radial. Se encontró que los pacientes presentaban cifras muy disminuidas de IgG2 sérico y ningun exhibia IgG2 en el líquido cefalorraquídeo. Dos pacientes no sintetizaron ninguna subclase de IgG intratecalmente. Un paciente con S. pneumoniae sintetizó IgG3 intratecal. Uno de los pacientes con meningoencefalitis a H. influenzae sintetizó IgG1, IgG3 e IgG4 intratecalmente de acuerdo com el reibergrama. Estos pacientes recibieron terapia substitutiva com gammaglobulina intravenosa como parte de la medicación.