O Mycoplasma é considerado cosmopolita, podendo ser disseminado através do comércio internacional de animais, sêmen industrializado e de produtos de transferência de embriões. A expansão de células do cumulus é utilizada como parâmetro de avaliação de oócitos bovinos cultivados in vitro e suas alterações morfológicas são representativas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a interação do Mycoplasma bovigenitalium, exposto experimentalmente à cultura primária de célula do cumulus, após o período de maturação. Complexos oócitos cumulus (COCs) obtidos através de punção folicular de ovários bovinos, provenientes de abatedouro, foram divididos em dois grupos para serem maturados durante 24h em meio de maturação (TCM199 + hormônios) em estufa a 38º C, 5% de CO2, 95% de umidade. Posteriormente, os oócitos foram retirados das placas, permanecendo somente com as células do cumulus aderidas. Com o monoestrato celular formado, um grupo foi infectado com 30 mL de M. bovigenitalium, replicado em meio Hayflick modificado a 37º C em estufa de microaerofilia, enquanto o outro foi mantido como controle. Os resultados mostraram que, com 24h de exposição ao patógeno, as culturas apresentaram um pequeno número de células arredondadas e granulosas, quando comparadas as dos controles. Esse efeito persistiu até o sétimo dia, onde se iniciou um processo de descolamento das células. Pode-se concluir que uma contaminação por micoplasma pode ser imperceptível às manipulações da FIV, pois células infectadas por esse grupo de bactérias não apresentam turvações no meio de cultura e, quando não lisam a célula hospedeira, tornam mais suscetível ao ambiente e outros agentes infecciosos.

The Mycoplasma is considered cosmopolitan and can be disseminated through international trade of animals, industrialized semen and embryo transfer products. The expansion of cumulus cells is used as a parameter for evaluating cattle oocytes cultivated in vitro, and their morphological changes are representative. The aim of the present study was to evaluate the interaction of Mycoplasma bovigenitalium with primary-culture cumulus cells, after the in vitro maturation period. Cumulus complex oocytes (COCs) obtained through follicular puncture of ovaries from a cattle slaughterhouse were divided into two groups to be matured for 24 hours in the maturation medium (TCM 199 + hormones) in a climate controlled chamber at 38º C, 5% CO2, and 95% humidity. Subsequently, the oocytes were removed from the plates, which remained with only the cumulus cells attached. With the monostratum cell formed, one group was infected with 30 ºL (5 x 10(6) cells/mL) M. bovigenitalium, replicated in modified Hayflick medium at 37º C in a mycroaerofilic chamber, while the other was kept as a control. The results showed that with 24 hours of exposure to the pathogen, the cultures showed a small number of rounded and grainy cells, when compared to the controls. This effect persisted until the 7th day, when a process of cell detachment began. It can be concluded that a mycoplasma contamination may be imperceptible to the manipulations of FIV, because cells infected by this group of bacteria present no cloudiness in the culture field, and when they do not lyse the host cell, they make it more susceptible to environment and other infectious agents.

Avaliou-se a eficácia dos tratamentos, definidos pela International Embryo Transfer Society (IETS), de oócitos bovinos, maturados in vitro e expostos experimentalmente à Leptospira interrogans sorovar Grippotyphosa. Os oócitos foram obtidos por meio de punção folicular, selecionados e distribuídos em quatro grupos, expostos ao patógeno e submetidos aos diferentes tipos de tratamentos. Foram expostos à cepa na concentração de 4,7.10(5)/µL, virulenta e não adaptada ao meio de manutenção EMJH, e, de 6,3.10(5)/µL, avirulenta e adaptada ao meio, por 24 horas. Os grupos tratados com tripsina ou antibióticos apresentaram eficácia de 21,7%, e o grupo lavado sequencialmente 33,4%. Os tratamentos não foram eficazes para os contaminados com a cepa avirulenta. Concluiu-se que as normas de controle de qualidade estabelecidas pela IETS poderiam ser revisadas e, possivelmente, redefinidas, uma vez que a eficácia dos tratamentos, provavelmente, não depende somente da espécie do patógeno, pois há interferência da virulência e de ação dos tratamentos sobre o tipo de patógeno.

The research purpose was to evaluate the effectiveness of treatments established by the IETS, in bovine oocytes maturated in vitro, exposed experimentally to Leptospira interrogans serovar Grippotyphosa. The oocytes were obtained through follicular puncture, selected and randomly allotted in four groups, exposed to the pathogen and subjected to different types of treatments. They were exposed to the strain in the concentration of 4.7x10(5)/µL virulent and not adapted to the EMJH, and to 6,3x10(5)/µL, virulent and adapted to the medium, for 24 hours. The treatments presented for the groups with trypsin or antibiotics, 21.7% efficiency, and the group washed sequentially presented 33.4% efficiency. The treatments were not effective for those infected with avirulent strain. In the statistical analysis, by χ², was found significance in the results obtained. The standards of quality control established by IETS could be reviewed and possibly redefined, since the effectiveness of treatment probably depends not only on the species of the pathogen, but is also affected by its virulence and treatment effectiveness.

RESUMO A co-cultura de células epiteliais de oviduto bovino (BOEC) supre as necessidades de desenvolvimento dos embriões bovinos do estádio de mórula até blastocisto expandido no processo de fecundação in vitro (FIV). Este estudo avaliou a sensibilidade das células epiteliais de oviduto bovino e murino ao vírus da rinotraqueíte infecciosa bovina. As culturas primárias de células epiteliais de oviduto bovino e murino foram infectadas com o vírus da rinotraqueíte infecciosa bovina (105.6 TCID 50/mL). O efeito citopático foi observado 48 horas após a infecção, e o vírus titulado em células MDBK. A avaliação preliminar mostrou que tanto as células de oviduto bovino quanto as de oviduto murino apresentaram efeito citopático característico do vírus da rinotraqueíte infecciosa bovina, com título, respectivamente de 106.5 TCID 50/mL e 104.8 TCID 50/ mL. Este estudo mostra que as células de oviduto murino são menos susceptíveis ao vírus da rinotraqueíte infecciosa bovina, as quais podem apresentar vantagens no co-cultivo de embriões bovinos fecundados in vitro cocultura co cultura BOEC (BOEC FIV. FIV . (FIV) 105.6 1056 105 6 (105. 50/mL. 50mL mL 50 50/mL) 4 infecção MDBK título 1065 106 5 106. 1048 104 8 104. cocultivo cultivo (FIV 105. 10 (105 1 (10 (1 (

ABSTRACT Bovine oviduct epithelia cell co-culture provides the development needs of bovine embryos in the in-vitro fecundation (IVF) process. This study evaluated bovine and murine oviduct epithelial cell sensitivity to bovine infectious rinotracheitis virus (BHV-1). Their cultures were infected with the bovine infectious rinotracheitis virus (105.6 TCID 50/mL). The cytopathic effect was observed 48 hours after the infection, and the virus was titred in MDBK cells. The evaluation showed that both cell types, bovine and murine, presented BHV-1 characteristic cytopathic effect. The titres found were 106.5 TCID 50/mL for the bovine oviduct and 104.8 TCID 50/mL for the murine oviduct. This study showed that murine oviduct cells are less susceptible to BHV-1 than the bovine ones. This could be advantageous in terms of the embryos co-culture system in IVF. coculture co culture invitro vitro IVF (IVF process BHV1. BHV1 BHV 1 . (BHV-1) 105.6 1056 105 6 (105. 50/mL. 50mL mL 50 50/mL) 4 infection types BHV- 1065 106 5 106. 1048 104 8 104. ones (BHV-1 105. 10 (105 (BHV- (10 (BHV (1 (