RESUMO Uma das etapas que encarece a produção de cogumelos é a desinfecção dos substratos. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar diferentes métodos de desinfecção de diversos substratos utilizados no cultivo de um Pleurotus ostreatus da Amazônia. P. ostreatus foi cultivado sob condições de temperatura não controlada em casa de vegetação (aproximadamente 30 °C) em substratos formulados com resíduos (sementes) de palmeiras de açaí e tucumã, casca de castanha do Brasil e serragem de pinus. Diferentes tratamentos de desinfecção do substrato consistiram em autoclavagem, imersão em água quente e em hidróxido de cálcio (2%). Foi analisada a composição química dos resíduos, substratos e cogumelos. Durante o cultivo, verificou-se que no tratamento com água quente, todos os sacos estavam contaminados e o tratamento com hidróxido de cálcio inibiu a colonização e o crescimento do cogumelo. P. ostreatus cultivado em substrato de açaí autoclavado e suplementado com tucumã apresentou maior produção. Os maiores teores de fibras totais foram obtidos nos cogumelos provenientes do cultivo em pinus, suplementado com castanha do Brasil (32,68 a 33,65%) e os maiores teores de proteínas (20,03 a 20,88%) nos substratos à base de açaí. Considerando que P. ostreatus apresentou maior produtividade nos substratos autoclavados, novos estudos deverão ser realizados com o objetivo de se desenvolver métodos alternativos de desinfecção de substratos para o cultivo de cogumelos na região amazônica, bem como em outras regiões de clima tropical. Contudo, o cultivo deste cogumelo mostrou-se promissor, utilizando-se substratos regionais, com ênfase para o açaí, um dos importantes produtos da Amazônia.

ABSTRACT One of the most expensive steps in mushroom production is the disinfection of the substrate. This study aimed to evaluate different methods of disinfecting various substrates used in the cultivation of Pleurotus ostreatus from the Amazon. P. ostreatus was grown under uncontrolled temperature conditions in a greenhouse (at approximately 30 °C) on substrates formulated with residues (seeds) of açaí and tucumã palm trees, Brazil nuts shell and pine sawdust. The different substrate disinfection treatments comprised autoclaving, immersion in hot water or immersion in calcium hydroxide (2%). The chemical composition of residues, substrates, and mushrooms was analyzed. During cultivation, it was found that in the treatment with hot water, all the bags were contaminated, and treatment with calcium hydroxide inhibited the colonization and growth of the mushrooms. P. ostreatus grown on the autoclaved açaí substrate supplemented with tucumã had higher production. The highest percentage of fiber content was obtained when the mushrooms were cultivated in the pine substrate supplemented with Brazil nuts (32.68 to 33.65%), and the highest protein content (20.03 to 20.88%) was found in the mushrooms grown on açaí-based substrates. Considering that P. ostreatus showed higher productivity in autoclaved substrates, further studies should be performed to develop alternative methods of disinfecting substrates for the cultivation of mushrooms in the Amazon region, as well as, in other regions with a tropical climate. However, the cultivation of this mushroom is promising using some regional substrates, especially with açaí, which is one of the important natural products of the Amazon.

Sementes de leguminosas (Fabaceae) apresentam alto conteúdo de inibidores, incluindo os inibidores de serinoproteinases que têm sido extensivamente estudados. Todavia, poucos estudos foram realizados quanto à investigação dessas proteínas em espécies arbóreas pertencentes à flora amazônica. As proteínas presentes nas sementes de quatro espécies de leguminosas da Amazônia, Parkia pendula, P. discolor, P. multijuga e P. nitida, foram obtidas pela extração usando NaCl 0.15 mol L-1 e, parcialmente purificadas usando a cromatografia de afinidade em tripsina-Sepharose 4B. Os inibidores exibiram afinidades diferentes entre a tripsina e a quimotripsina, exceto para P. nitida, a qual apresentou alta inibição contra as duas enzimas. A análise em SDS-PAGE mostrou que as espécies do gênero Parkia contém uma banda principal correspondendo aos inibidores de tripsina parcialmente purificados. As massas moleculares aparentes determinadas para os inibidores (aproximadamente, 13 a 18 kDa) e a alta especificidade pela tripsina sugerem a ocorrência de inibidores do tipo Bowman-Birk e Kunitz.

Leguminous seeds (Fabaceae) have a high content of inhibitors of which serine protease inhibitors are the most widely studied. However, there are only a few studies related to the investigation of these proteins in tree species belonging to the Amazon flora. The protein content presented in seeds of four Amazonian Leguminosae species, Parkia pendula, P. discolor, P. multijuga and P. Nitida, was extracted by using NaCl 0.15 mol L-1 and then partially fractionated by using affinity chromatography performed on a trypsin-Sepharose 4B. These inhibitors presented different affinities between trypsin and chymotrypsin serine proteases, showing a higher inhibition to trypsin compared to chymotrypsin, except for P. nitida, which showed high inhibition against both enzymes. The SDS-PAGE analysis showed that the species from Parkia genus have a main band corresponding to partially purified trypsin inhibitors. The apparent molecular mass inhibitors (approximately 13-18 kDa) and the high specificity for trypsin suggest the occurrence of Bowman-Birk and Kunitz type inhibitors.

Sementes de leguminosas apresentam alta concentração de inibidores de tripsina; estas proteínas estão envolvidas no metabolismo celular e também em mecanismos de defesa vegetal. A fim de confirmar ou não, a possível ação fungicida destas proteínas a partir de extratos de sementes de leguminosas arbóreas, o objetivo deste estudo foi detectar inibidores de tripsina em sementes de Caesalpinia ferrea (CfTI) e Swartzia polyphylla (SpTI) e testar os extratos contra os fungos fitopatogênicos Colletotrichum guaranicola, Corynespora cassiicola, Fusarium oxysporum e Sclerotium rolfsii, avaliando o crescimento micelial e a esporulação. Para tanto, amostras do material biológico vegetal, sementes finamente pulverizadas, foram submetidas à extração em NaCl 150 mM. Os extratos protéicos foram parcialmente purificados em coluna Sephadex G-100, submetidos à detecção dos inibidores e SDS-PAGE (12,5%) e, utilizados nos bioensaios contra os fungos. O perfil eletroforético revelou uma única banda em CfTI e oito bandas em SpTI. Os extratos de C. ferrea e S. polyphylla exibiram efeito na diminuição da esporulação dos fungos testados, mas S. rolfsii foi inibido apenas por C. ferrea. Quanto ao crescimento micelial, os dois extratos tiveram efeito sobre F. oxysporum e S. rolfsii, ao passo que C. guaranicola foi inibido apenas por S. polyphylla, e C. cassiicola por C. ferrea. Concluiu-se que sementes de C. ferrea e S. polyphylla apresentam inibidores de tripsina. Além disso, os resultados sugerem que estas espécies de leguminosas arbóreas são promissoras no que concerne à prospecção de fungicidas naturais, uma vez que os extratos diminuíram o crescimento micelial e a esporulação de C. guaranicola, C. cassiicola, F. oxysporum e S. rolfsii.

Legume seeds present high concentration of trypsin inhibitors; these proteins are involved in both cell metabolism and plant defense mechanisms. In order to confirm or not a possible fungicidal action of these proteins from extracts of seeds of legume tree species, the aim this study was to detect trypsin inhibitors in seeds of Caesalpinia ferrea (CfTI) and Swartzia polyphylla (SpTI) and to test their extracts against the pathogenic fungi Colletotrichum guaranicola, Corynespora cassiicola, Fusarium oxysporum and Sclerotium rolfsii, evaluating mycelial growth and sporulation. Thus, samples of the plant material, finely powdered seeds, were extracted in 150 mM NaCl. The protein extracts were partially purified on Sephadex G-100 column, subjected to detection of inhibitors and SDS-PAGE (12.5%), and used in bioassays against the fungi. The electrophoretic profile revealed a single band in CfTI and eight bands in SPTI. The extracts of C. ferrea and S. polyphylla had an effect in reducing sporulation of the tested fungi, but S. rolfsii was inhibited only by C. ferrea. As to mycelial growth, the two extracts showed an effect on F. oxysporum and S. rolfsii, while C. guaranicola was inhibited only by S. polyphylla, and C. cassiicola by C. ferrea. It was concluded that seeds of C. ferrea and S. polyphylla present trypsin inhibitors. In addition, the results suggest that these tropical tree species are promising for the exploration of natural fungicides, since the extracts reduced mycelial growth and sporulation of C. guaranicola, C. cassiicola, F. oxysporum and S. rolfsii.

Os inibidores de proteinases são proteínas extensivamente investigadas nos tecidos de estocagem, mas pouco prospectadas em outros tecidos vegetais. O objetivo deste estudo foi detectar a presença de inibidores de serinoproteinases em extratos foliares de quinze espécies de leguminosas arbóreas da Amazônia. As espécies estudadas foram: Caesalpinia echinata, C. ferrea, Cedrelinga cateniformis, Copaifera multijuga, Dinizia excelsa, Enterolobium contortisiliquum, E. maximum, E. schomburgkii, Leucaena leucocephala, Ormosia paraensis, Parkia multijuga, P. pendula, P. platycephala, Swartzia corrugata e S. polyphylla. Folhas foram coletadas, secas a 30ºC durante 48 h, trituradas e submetidas à extração com NaCl (0,15 M, 10% p/v) resultando no extrato total. Ensaios foram executados para determinar a concentração de proteínas e detectar a atividade inibitória contra a tripsina e quimotripsina bovina. Os teores de proteínas bruta e solúvel nos extratos foliares variaram de 7,9 a 31,2% e 1,3 a 14,8%, respectivamente. A atividade inibitória sobre a tripsina e quimotripsina foi observada em todos os extratos foliares. Contudo, nos extratos de E. maximum, L. leucocephala, P. pendula, S. corrugata e S. polyphylla a inibição foi maior sobre a tripsina, enquanto o extrato de P. multijuga foi mais efetivo contra a quimotripsina. Nós concluímos que nos extratos foliares de leguminosas arbóreas têm inibidores de serinoproteinases e exibem potencial aplicações biotecnológicas.

The proteinase inhibitors are proteins extensively investigated in tissue storage, but few prospected in other plant tissues. The aim of this study was to detect the presence of serine proteinase inhibitors in leaf extracts from fifteen species of leguminous trees of the Amazon forest. The species studied were Caesalpinia echinata, C. ferrea, Cedrelinga cateniformis, Copaifera multijuga, Dinizia excelsa, Enterolobium contortisiliquum, E. maximum, E. schomburgkii, Leucaena leucocephala, Ormosia paraensis, Parkia multijuga, P. pendula, P. platycephala, Swartzia corrugata and S. polyphylla. Leaves were collected, dried at 30ºC for 48 h, crushed and subjected to extraction with NaCl (0.15 M, 10% w/v), resulting in the total extract. Tests were performed to determine the concentration of proteins and to detect of inhibitory activity against bovine trypsin and chymotrypsin. The content of crude and soluble protein in leaf extracts varied from 7.9 to 31.2% and 1.3 to 14.8%, respectively. The inhibitory activity on trypsin and chymotrypsin was observed in all leaf extracts. However, in extracts of E. maximum, L. leucocephala, P. pendula, S. corrugata and S. polyphylla, the inhibition was greater on trypsin, while extract of P. multijuga was more effective against chymotrypsin. We conclude that leaf extracts of leguminous trees have serine proteinase inhibitors and show potential biotecnological applications.

Diferentes classes de proteínas são comuns em sementes de leguminosas, incluindo inibidores de tripsina e proteínas hemaglutinantes, as quais atuam sobre enzimas proteolíticas e sobre carboidratos da superfície celular, respectivamente. O objetivo deste trabalho foi quantificar, detectar e caracterizar parcialmente a ocorrência dessas proteínas em sementes de Tachigali plumbea, Sesbania exasperata e Ormosia costulata var. trifoliolata. Sementes das três espécies foram moídas e submetidas à extração salina (NaCl 0,15M - 10 %, p/v). Os extratos totais obtidos foram utilizados para quantificar o conteúdo protéico, detectar a atividade residual da tripsina, a atividade hemaglutinante (AHE) e na obtenção do perfil protéico. A atividade residual da tripsina foi observada somente para T. plumbea e S. exasperata, cujos valores foram 4 e 19 %, respectivamente. A AHE foi detectada nos extratos das três espécies, sendo que os extratos totais de T. plumbea e S. exasperata, hemaglutinaram eritrócitos de rato, camundongo e hamster, enquanto que a espécie O. costulata hemaglutinou somente eritrócitos de hamster. O perfil protéico em SDS-PAGE revelou maior ocorrência de proteínas com massa molecular aparente de 10 a 30 kDa para T. plumbea e S. exasperata, enquanto que para O. costulata prevaleceram bandas protéicas com massa molecular variando entre 20-25 kDa. Conclui-se que os extratos totais de O. costulata e S. exasperata, pertencentes à subfamília Papilionoideae, apresentam menor conteúdo de inibidores de tripsina que T. plumbea (Caesalpinioideae) e, quanto à AHE, os resultados mostraram-se diferenciados, mesmo entre as espécies da mesma subfamília, tanto para a concentração mínima hemaglutinante quanto para a especificidade de interação com os eritrócitos.

Different classes of proteins are common in Leguminosae seeds, including trypsin inhibitors and hemagglutinin proteins, which act on proteolytic enzymes and cell-surface carbohydrates, respectively. The aim of this work was to quantify, to detect and characterize partially these proteins in seeds of Tachigali plumbea, Sesbania exasperata and Ormosia costulata var. trifoliata. Seeds of the three species were powdered and submitted to an extraction with a saline solution (NaCl 0.15M - 10%, p/v). The resulting total extracts were used to quantify proteins content, detect the residual trypsin activity, hemagglutinating activity (AHE) and the proteic profile. Residual trypsin activity was observed only for T. plumbea and S. exasperata, which values were 4 and 19% respectively. AHE was detected in extracts of all three species, total extracts of T. plumbea and S. exasperata hemagglutinated erythrocytes of rats, mice and hamsters, whereas O. costulata had this effect only on hamster erythrocytes. The proteic profile obtained by SDS-PAGE showed that T. plumbea and S. exasperata have a higher content of protein with an apparent molecular mass of 10 - 30 kDa, while O. costulata predominantly contains proteic bands with molecular masses varying between 20 to 25 kDa. It is concluded that total extracts of O. costulata and S. exasperata, species of the subfamily Papilionoideae, present less trypsin inhibitors than T. plumbea (Caesalpinioideae). AHE, both in form of minimum hemagglutinin concentration and the specified interaction with erythrocytes, differed even among species from the same subfamily.

Investigou-se, em regime de casa de vegetação, o desempenho fisiológico de plantas jovens de acariquara (Minquartia guianensis) submetidas à deficiência hídrica e sua recuperação durante o processo de reidratação. Os parâmetros analisados foram: potencial da água nas folhas, trocas gasosas e fluorescência da clorofila a. Após trinta e cinco dias, o potencial da água nas folhas das plantas sem irrigação foi 70 % menor do que nas plantas do controle (irrigadas diariamente) e a condutância estomática alcançou valores próximos de zero, induzindo diminuição severa nas trocas gasosas (fotossíntese e transpiração). Seis dias após o início da reidratação prevista para as plantas submetidas ao tratamento sem irrigação, os resultados demonstraram que o estresse hídrico não afetou de forma irreversível as trocas gasosas e a eficiência quântica do fotossistema II (PSII) em plantas jovens de M. guianensis, uma vez que após o período de quatro a seis dias de reidratação, as plantas exibiram recuperação total do aparato fotossintético. Nós concluímos que M. guianensis apresentou boa tolerância ao estresse hídrico e boa capacidade de recuperação do desempenho fisiológico relativo ao potencial hídrico foliar, fotossíntese e eficiência fotoquímica do PSII sob condições de estresse hídrico, sugerindo substancial plasticidade fisiológica durante a fase juvenil dessa espécie arbórea.

The physiological performance of acariquara (Minquartia guianensis) seedlings submitted to water deficit and the recovery of physiological parameters during rehydration were investigated in a greenhouse experiment. The analyzed parameters were: leaf water potential, gas exchange and chlorophyll a fluorescence. After thirty-five days, non-irrigated plants exhibited a leaf water potential 70 % lower compared to control plants (irrigated daily) and the stomatal conductance reached values close to zero, inducing a severe decrease in gas exchange (photosynthesis and transpiration). Six days after the beginning of the rehydration of drought-stressed plants, the results demonstrated that water stress did not irreversibly affect gas exchange and quantum efficiency of photosystem II (PSII) in M. guianensis seedlings, since four to six days after rehydration the plants exhibited total recovery of the photosynthetic apparatus. We conclude that M. guianensis presented good tolerance to water stress and good capacity to recover the physiological performance related to leaf water status, photosynthesis and photochemical efficiency of PS II under hydric stress, suggesting substantial physiological plasticity during the juvenile phase for this tree species.