RESUMO: A leishmaniose é um grande problema de saúde pública que afeta tanto humanos quanto animais. A doença é causada pelo protozoário Leishmania spp., que possui um ciclo complexo envolvendo um vetor flebotomíneo. O teste ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), juntamente com um imunoensaio cromatográfico, foi definido pelo Ministério da Saúde do Brasil como protocolo de triagem confirmatória em 2011. A cidade de Uruguaiana fica a 630 km de Porto Alegre, o que dificulta o envio de amostras e o diagnóstico da leishmaniose, além da demora para obter os resultados. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo avaliar um método de ELISA indireto in-house comparado ao ensaio de imunofluorescência indireta (IFA) e imunoensaio cromatográfico de plataforma de dupla via (DPP-BioManguinhos®) para a detecção de uma resposta imune contra Leishmania spp. na espécie canina. A avaliação sorológica incluiu 48 caninos da fronteira oeste do Brasil (cidade de Uruguaiana e Barra do Quaraí). Das 48 amostras caninas testadas, 18 foram positivas na técnica de ELISA, 19 foram positivas com IFA e 17 foram positivas com o teste rápido DPP®. A técnica de ELISA apresentou sensibilidade/especificidade de 83,3%/86,7% quando comparada ao IFA e 100%/96,8% em relação ao DPP®. O presente estudo apresentou prevalência de 37,5%, demonstrando que a infecção circula na população estudada. Pode-se concluir que a técnica de ELISA foi valiosa para uso em condições de campo na realização de testes de triagem em áreas endêmicas.

ABSTRACT: Leishmaniosis is a great public health problem affecting both humans and animals. The disease is caused by the protozoan Leishmania spp., which has a complex cycle involving a phlebotomine vector. The ELISA test (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) along with a chromatographic immunoassay was defined by the Brazil Health Ministry as the confirmatory screening protocol in 2011. Uruguaiana city is 630 km away from Porto Alegre, which makes it difficult to send samples and diagnose leishmaniasis, as well as receive quick results. In view of this, the present study evaluated an in-house indirect ELISA method compared to indirect immunofluorescence assay (IFA) and dual-path platform chromatographic immunoassay (DPP-BioManguinhos®) for the detection of an immune response to Leishmania spp. in canine species. The serological evaluation included 48 canines from the western border of Brazil (Uruguaiana and Barra do Quaraí city). Among the 48 canine samples tested, 18 were positive when using the ELISA technique, 19 were positive with IFA, and 17 were positive with rapid test DPP®. The ELISA technique showed a sensitivity/specificity of 83.3%/86.7% when compared to IFA and 100%/96.8% compared to DPP®. The present study showed a prevalence of 37.5%, demonstrating that the infection circulates in the studied population. It can be concluded that the ELISA technique was valuable for use in field conditions when performing screening tests in endemic areas.

RESUMO: O estudo descreve a identificação genética, as características clínicas e epidemiológicas de um foco de Anemia Infecciosa Equina que ocorreu no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Três equinos criados na região periurbana da cidade de Uruguaiana testaram positivos pela prova sorológica de IDGA. O exame foi realizado como requerimento para trânsito dos animais. Nenhum animal apresentava sinais clínicos da infecção, um cavalo foi necropsiado e os outros dois foram roubados. Na necropsia não obsevou-se nenhuma alteração e microscopicamente foi constatada hemosiderose discreta em fragmento do fígado e baço. A infecção foi confirmada pela amplificação e sequenciamento de um segmento do genoma pró-viral do EIAV de amostras do sangue, baço e linfonodo mesentérico. A análise filogenética do primeiro EIAV sequenciado no Estado do RS indica similaridade com outras amostras que circulam no Brasil. O resultado confirma a presença do vírus no rebanho equino da região e descreve características clínicas e epidemiológicas que contribuem para a manutenção e disseminação do vírus no rebanho. RESUMO genética Sul Brasil IDGA animais roubados obsevouse obsevou se próviral pró viral sangue mesentérico

ABSTRACT: The study describes the genetic identification, clinical, and epidemiological characteristics of an outbreak of equine infectious anemia occurring in the state of Rio Grande do Sul, Brazil. Three animals kept in the periurban region of Uruguaiana city tested positive for the AGID test. The serology was performed as a requirement for transit. None of the animals showed clinical signs of infection, one animal was necropsied, and the others were stolen. In the post-mortem examination, no macroscopic changes were observed, and microscopically, discrete hemosiderosis was detected in fragments of the liver and spleen. Amplifying and sequencing a proviral DNA fragment in blood, spleen, and mesenteric lymph node samples confirmed EIAV infection. Phylogenetic analysis of the first sequenced EIAV sample from the Rio Grande do Sul State indicates a high similarity with other Brazilian samples. Results confirmed the viral presence in the state’s herds and described epidemiological and virological characteristics of EIA that contribute to the maintenance and dissemination of the virus in herds. ABSTRACT identification Brazil test transit infection necropsied stolen postmortem post mortem examination observed microscopically spleen blood states s

RESUMO: Este estudo teve como objetivo avaliar a qualidade higiênica sanitária e a presença de microrganismos patogênicos em carnes in natura e linguiças frescais comercializadas na cidade de Uruguaiana, Rio Grande do Sul (RS), Brasil. Foram analisadas 238 amostras de linguiças, carne bovina, suína e de frango de 18 estabelecimentos comerciais (açougues, supermercados e mercearias). As amostras foram submetidas à enumeração de microrganismos indicadores de higiene (aeróbios mesófilos e enterobactérias) e detecção de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. As contagens médias de aeróbios mesófilos e enterobactérias foram 5,09 e 3,54 log UFC/g, respectivamente. Salmonella spp. esteve presente mais frequentemente em amostras de carne bovina (4,91 %), enquanto L. monocytogenes foi mais frequente em linguiças frescais (19,04 %). Das amostras analisadas, 43,70 % não atenderam aos parâmetros microbiológicos estabelecidos pelo Ministério da Saúde. A presença de Salmonella spp. e L. monocytogenes em diferentes amostras e estabelecimentos comerciais demonstra falhas de boas práticas de fabricação na indústria e pontos de venda, além da necessidade de treinar manipuladores de alimentos para reduzir a exposição dos consumidores à riscos.

ABSTRACT: This study evaluated the sanitary hygienic quality and the presence of pathogenic microorganisms in raw meats and fresh sausages marketed in the city of Uruguaiana, Rio Grande do Sul (RS), Brazil. We analyzed 238 samples of fresh sausages, beef, pork, and chicken from 18 commercial establishments (butchers, supermarkets, and groceries). Samples were subjected to enumerate hygiene indicator microorganisms (mesophilic aerobes and enterobacteria) and detection of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes. The mean counts of mesophilic aerobes and enterobacteria were 5.09 and 3.54 log CFU/g, respectively. Beef samples presented the highest frequency of Salmonella spp. (7.93%) and fresh sausages present the highest frequency of L. monocytogenes (19.04%). Among the analyzed samples, 43.70% did not comply with the microbiological parameters established by the Brazilian Ministry of Health. The presence of Salmonella spp. and L. monocytogenes in different samples and commercial establishments demonstrate the failures of good manufacturing practices in industrial environmental and retails points and the need to train food handlers to reduce the exposure of consumers to potential risks.

RESUMO: A resposta sorológica induzida por quatro vacinas comerciais uruguaias inativadas contra os alfaherpesvírus bovinos (BoHV-1 e -5) e pestivírus de bovinos (BVDV-1, BVDV-2 e HoBiPeV) foi avaliada em ovinos. Os animais foram imunizados duas vezes (dia 0 e dia 25) e o soro testado em diferentes intervalos (dias 0, 25, 40, 60 e 90) após a vacinação (PV). Dentre as quatro vacinas testadas, apenas uma (G4) apresentou títulos de anticorpos neutralizantes moderados para os BoHV-1 e -5, BVDV-1 e 2. A vacina G3 apresentou resposta somente para alfaherpesvírus bovinos. As vacinas G1 e G2 estimularam resposta somente em alguns animais vacinados. Para a vacina G4, observou-se que a resposta imunológica frente ao BoHV-1 e 5 foi semelhante e pelo menos 70% dos animais apresentaram níveis protetivos de anticorpos neutralizantes. Para os pestivírus bovinos, a vacina G4 estimulou resposta para o BVDV-2 mais elevada quando comparada com o BVDV-1, e quase que indetectável para HoBiPeV. O pico de anticorpos neutralizantes para o BoHV-1 foi observado no dia 40 PV e no dia 60 PV para o BVDV-1. Após isso, observou-se um decréscimo considerável na resposta de anticorpos neutralizantes. Os resultados demonstraram que vacinas comerciais uruguaias testadas não induziram resposta sorológica de magnitude e duração adequadas. Assim, ressalva-se a importância de rever periodicamente a formulação e composição das vacinas comerciais para alfaherpesvírus e pestivírus bovinos.

ABSTRACT: The serological responses induced by four commercial inactivated Uruguayan vaccines against bovine alphaherpesviruses (BoHV)-1 and -5 and bovine pestiviruses (BVDV-1, BVDV-2, and HoBiPeV) were evaluated in sheep. Thirty-seven sheep were immunized twice (day 0 and 25) and their serum samples were tested at different intervals (days 0, 25, 40, 60, and 90) post-vaccination (PV). Among the four vaccines tested, only one (G4) could induce the production of moderate neutralizing antibody titers against BoHV-1 and -5 and BVDV-1 and -2. The G3 vaccine showed a neutralizing serological response against the bovine alphaherpesviruses only. The G1 and G2 vaccines produced extremely low levels of antibodies in a few vaccinated animals only (geometric mean titers (GMT) 2.2). Similar levels of immunological responses were induced by the G4 vaccine against BoHV-1 and -5, and titers of neutralizing antibodies induced in approximately 70% of the animals are known to confer protection (GMT > 8). For bovine pestiviruses, the vaccine stimulated response of G4 against BVDV-2 was higher compared to that against BVDV-1, and extremely low for HoBiPeV. The peak of neutralizing antibodies to BoHV-1 and BVDV-1 was observed on days 40 and 60 PV, respectively. Thereafter, a remarkably decrease in neutralizing antibody response was observed at day 90 PV. These results demonstrated that tested commercial Uruguayan vaccines did not induce a serological response of adequate magnitude and duration. Thus, it is important to periodically review formulations and compositions of commercial vaccines against bovine alphaherpesviruses and pestiviruses.

Resumo O objetivo do estudo foi produzir anticorpos policlonais para vírus bovino e testar a reatividade em imunoensaios como imunofluorescência, imunoperoxidase e slot blot. Como imunógeno utilizou-se cepas e/ou isolados dos herpesvírus bovino tipo 1, 2 e 5 (BoHV-1, BoHV-2 e BoHV-5), vírus da diarreia viral bovina (BVDV), vírus respiratório sincicial bovino (BRSV), vírus da língua azul (BTV) e vírus vaccina (VACV) amplificados em cultivo celular. Os coelhos foram imunizados em intervalos regulares e o soro hiperimune produzido foi utilizado como anticorpo primário nos imunoensaios. A diluição de trabalho para cada antissoro foi determinada por diluição seriada limitante e variaram entre 1:800 e 1:51.200. As maiores diluições foram observadas para imunoperoxidase, quando comparadas com a imunofluorescência e slot blot. Diluições menores que 1:800 foram associadas com aumento de reações inespecíficas. Os antissoros anti-BoHV-1, -BoHV-5, -BVDV e -BRSV reagiram frente a isolados heterólogos em ensaios de imunofluorescência e imunoperoxidase. Conclui-se que os antissoros produzidos possuem elevadas concentrações de anticorpos específicos para os vírus e é uma alternativa para a utilização em imunoensaios.

Abstract The objective of the study was to produce polyclonal antibodies to bovine viruses and to test the reactivity in immunoassays such as immunofluorescence, immunoperoxidase and slot blot. Bovine viral diarrhea virus (BVDV), bovine respiratory syncytial virus (BRSV), bovine herpesvirus type 1, 2 and 5 (BoHV-1, BoHV-2 and BoHV-5) blue tongue virus (BTV) and vaccinia virus (VACV) were amplified in cell culture and used to immunize rabbits. Animals were immunized at regular intervals and the hyper immune serum produced was used as primary antibody in the immunoassays. The working dilution for each antiserum was determined by limiting serial dilution and varied from 1: 800 to 1: 51,200. The highest dilutions were observed for immunoperoxidase, when compared with immunofluorescence and slot blot. Dilutions lower than 1:800 were associated with the presence of nonspecific reactions. Anti-BoHV-1, -BoHV-5, -BVDV and -BRSV antisera reacted against heterologous isolates in immunofluorescence and immunoperoxidase assays. It is concluded that the produced polyclonal antibodies have high concentrations of virus-specific antibodies and are an alternative for use in immunoassays.

RESUMO O objetivo do estudo foi avaliar a ocorrência de lesões sugestivas de hidatidose, cisticercose e tuberculose em carcaças bovinas oriundas de abatedouros frigoríficos sob inspeção sanitária da Divisão de Inspeção de Produtos de Origem Animal (DIPOA), no Estado do Rio Grande do Sul. Os dados de condenações entre os anos de 2009 e 2016 foram obtidos junto a Secretaria da Agricultura Pecuária e Irrigação (SEAPI) e apresentados conforme as regiões administrativas estabelecidas pela SEAPI. Nesse período foram abatidos 7.509.544 bovinos e as condenações estiveram presentes em todas as regiões do estado, em níveis variáveis. Os valores médios das condenações demonstraram a presença de hidatidose em 523.399 (6,97%), cisticercose em 92.277 (1,23%) e tuberculose em 10.595 (0,14%) das carcaças bovinas. Os valores médios de condenações por hidatidose foram maiores nas regionais de Alegrete (14,19%), Bagé (19,62%) e Pelotas (17,71%). As regionais de Osório (1,86%), Santa Maria (2,10%) e São Luiz Gonzaga (1,83%) apresentaram as maiores médias para a presença de cisticercose. Todas as regiões mantiveram uma média abaixo de 1% para condenações por tuberculose bovina e a região de Estrela obteve o maior índice (0,70%). Os resultados demonstram que as três enfermidades são causas de condenações em todas as regiões do estado, os índices médios de prevalência em cada região são variáveis e a distribuição parece ser regionalizada. Esse conhecimento poderá subsidiar a elaboração de planos de controle dessas enfermidades, as quais, além do aspecto zoonótico, são responsáveis por perdas econômicas ao setor produtivo pelas condenações de carcaças e órgãos dos bovinos.

ABSTRACT This study sought to evaluate the occurrence of lesions suggestive of hydatidosis, cysticercosis, and tuberculosis in animals slaughtered under sanitary inspection of the Divisão de Inspeção de Produtos de Origem Animal (DIPOA), in the state of Rio Grande do Sul. Condemnation data between the years 2009 and 2017 were obtained from Secretaria da Agricultura Pecuária e Irrigação (SEAPI) and presented according to the administrative regions established by SEAPI. In that period, 7,509,544 cattle were slaughtered and condemnations occurred in all regions of the state at varying levels. The mean condemnation values showed the presence of hydatidosis in 523,399 (6.97%), cysticercosis in 92,277 (1.23%), and tuberculosis in 10,595 (0.14%) cattle carcasses. The mean values of hydatidosis diagnoses were higher in the regions of Alegrete (14.19%), Bagé (19.62%), and Pelotas (17.71%). The regions of Osório (1.86%), Santa Maria (2.10%), and São Luiz Gonzaga (1.83%) had highest rates of cysticercosis condemnations. All regions maintained an average bovine tuberculosis diagnosis rate of less than 1% and Estrela region had the highest index (0.70%). Results showed that the three diseases occurred in all regions of the state, the average prevalence rates in each region are variable, and distribution seems to be regionalized. This knowledge contributes to the plans for controlling these diseases, which are zoonoses that cause economic losses to the productive sector.

RESUMO: O objetivo do estudo foi caracterizar os focos de EIA identificados, entre 2009 e 2015, na região oeste do estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Inicialmente foram identificados 26 equinos positivos em 24 propriedades, sendo que cada propriedade foi considerada um foco. Os diagnósticos foram realizados por imunodifusão em gel de ágar (AGID) na ocasião do transporte ou como medidas sanitárias, em casos de vínculo com animais infectados ou para fim de certificação do status sanitário. Um foco foi identificado em animais transportados ilegalmente da Argentina para o Brasil. Os estabelecimentos positivos eram fazendas ou estábulos e os animais infectados utilizados para trabalho, esporte ou reprodução. Quinze focos ocorreram em propriedades não cadastradas no SVO. Onze focos localizaram-se na zona urbana e 13 em propriedades rurais. Somente no ano de 2015 foram diagnosticados 12 dos 24 focos, sendo que no munícipio de São Borja ocorreram nove surtos neste período. Em duas propriedades o resultado inicial não foi confirmado no reteste, fazendo com que estes focos fossem encerrados imediatamente. Em três propriedades, durante o saneamento, identificou-se outros 12 animais positivos em três propriedades, de uma população de 1.108 susceptíveis. Assim sendo, pode-se concluir que a infecção que está presente na região, ocorre de maneira subclínica, associada a propriedades não cadastradas no SVO e animais transportados de forma ilegal, inclusive transporte internacional ilegal.

ABSTRACT: This study aimed to characterize the outbreaks of equine infectious anemia (EIA) identified, between the years 2009 and 2015, in the western region of the state of Rio Grande do Sul, Brazil. We identified 26 positive horses on 24 properties. Each positive property was considered an outbreak of the disease. The diagnoses were made using the agar gel immunodiffusion (AGID) test as a part of the sanitary checks conducted during animal transportation or certification of the horse´s sanitary status. The positive properties included farms or horse barns, and the infected animals were used for ranch work, sports, or reproduction. One outbreak was identified in animals that were being illegally transported from Argentina to Brazil. Fifteen outbreaks occurred on properties that were not registered with the Official Veterinary Service (OVS). Eleven outbreaks were identified in urban areas and 13 in rural areas. Twelve of the 24 outbreaks were diagnosed in 2015 alone, nine of which occurred in São Borja county. On two properties, a diagnosis could not be confirmed with a retest; therefore, these outbreaks were discharged. During sanitation checks on three properties, 12 additional positive animals were identified among a population of 1,108 susceptible animals. Based on these findings, we concluded that a subclinical form of the infection is present in that area, which is linked to properties that are not registered with the OVS, and that animals which are transported illegally across international borders represent a potential risk.

RESUMO: Com o objetivo de estudar a patogenicidade de uma amostra brasileira do BVDV-1a (241.10), quatro bovinos foram inoculados pela via intranasal com uma suspensão viral contendo 107,2 TCID50 mL-1. Um bezerro foi mantido em contato com o grupo infectado para avaliar a transmissibilidade. Após a inoculação, os animais foram monitorados diariamente para observação dos sinais clínicos. A presença de vírus no sangue e na secreção nasal foi confirmada pelo isolamento viral em cultivo celular. A contagem total de leucócitos no sangue foi realizada com intervalos de três dias pré- e pós-infecção e a detecção de anticorpos a cada sete dias, iniciando-se no dia 0 até o dia 42 pós-inoculação (pi). Após a inoculação, não foram observados sinais clínicos evidentes, apenas secreção nasal e ocular serosa entre os dias 1 e 5 pi e tosse discreta entre os dias 2 e 4 pi. A temperatura corporal teve leve aumento entre os dias 4 e 6 pi. O animal controle não desenvolveu os sinais observados no grupo infectado. O isolamento viral indicou presença de viremia entre os dias 4 a 8 pi e excreção viral na secreção nasal entre os dias 1 e 10 pi. Os animais inoculados apresentaram redução na contagem total de leucócitos no sangue. A detecção de anticorpos iniciou-se no dia 14 pi e os níveis mantiveram-se elevados até o dia 35 pi. No animal controle, não foi observada viremia, presença de vírus na secreção nasal e sorologia positiva, demonstrando ausência da transmissão. Assim sendo, conclui-se que a amostra de BVDV 1a 241.10 possui baixa patogenicidade, mantém a capacidade imunossupressora e tem baixa transmissibilidade.

ABSTRACT: To study the pathogenicity of the Brazilian bovine viral diarrhea virus (BVDV) type 1a 241.10 isolate, four calves were intranasally inoculated with a viral suspension containing 107.2 TCID50 mL-1. One calf was left uninoculated and kept in contact with the other calves to investigate viral transmissibility. After inoculation, the animals were monitored daily for clinical signs of infection. The presence of the virus in the blood and nasal secretions was confirmed by virus isolation in cell culture. White blood cells were quantified prior to and every 3 days after infection, and the presence of antibodies was checked every 7 days, starting at day 0 until day 42 post-inoculation (pi). After infection, nasal and ocular serous secretions were observed between days 1 and 5 pi, along with a mild cough from days 2 to 4 pi; however, no severe clinical signs were present. Body temperature was slightly elevated between days 4 and 6 pi. The control calf did not develop any of the signs observed in the infected animals. Cell culture-mediated virus isolation confirmed viremia between days 4 and 8 pi and the presence of the virus in the nasal secretions between days 1 and 10 pi. All infected animals showed a decrease in white blood cell count. Antibodies could be detected from day 14 pi, and these levels remained high until day 35 pi. The control calf had no viremia, viral presence in nasal secretions, or positive serology, indicating the absence of viral transmission. Thus, isolate BVDV 1a 241.10 has low pathogenicity and transmissibility but retains immunosuppressive capacity.

Feline calicivirus (FCV) and feline herpesvirus type 1 (FHV-1) are the two primary causes of upper respiratory tract disease in cats. The aim of this study was to demonstrate the distribution of FCV and FHV-1 among the feline population of several counties in Rio Grande do Sul State, Brazil. To this end, conjunctival and nasal swabs were collected from 302 cats from different locations, including households, breeding catteries, veterinary clinics, animal hospitals and experimental research facilities. The samples were collected between July 2006 to June 2009. The virus isolation was performed in CRFK cells and, subsequently, the identification was confirmed by PCR. FCV, FHV-1, or both were isolated from 55 cats from 28 different locations. FCV alone was isolated from 52.7% (29/55) of the animals that tested positively, FHV-1 alone was isolated from 38.2% (21/55) of the animals that tested positively, and co-infection were detected in 9.1% (5/55) of the animals that tested positively. Virus detection was more prevalent in cats that were less than 1 year old, among animals that shared a living space with other cats, and females. FCV and FHV-1 were isolated from vaccinated cats. In addition, both viruses were isolated from cats that showed no signs of disease. The results suggest that a carrier state is common for both viruses in the evaluated population. A search for other causes of respiratory disease in that population is necessary; and further studies relating to the molecular characterization of viruses and vaccine efficacy are also necessary.

West Nile virus (WNV) envelope glycoproteins preM/E were stably expressed in baby hamster kidney cells and tested as antigen in a fluorescent antibody assay for WNV antibodies. Sera from horses, mice and chicken immunized with an inactivated WNV vaccine and, less consistently, sera from horses acutely infected with WNV, reacted specifically with viral antigens present in preM/E-expressing cells.

Um equino, sem raça definida, macho com três anos de idade apresentou múltiplos nódulos na pele, em diversas regiões do corpo. As lesões localizavam-se predominantemente nos lábios, nas bochechas, na região submandibular e na região inguinal direita. Os tumores caracterizavam-se como sarcoides dos tipos misto, fibroblástico, verrucoso e oculto. Histologicamente apresentaram proliferação de fibroblastos dérmicos, muitas vezes ulcerado, com ou sem hiperplasia pseudoepiteliomatosa da epiderme e formação de pequenos grupos isolados de fibroblastos neoplásicos na derme superficial. Três amostras de tecido foram submetidas à extração de DNA e amplificação por PCR com oligonucleotídeos iniciadores genéricos direcionados para uma região interna do gene L1 dos papilomavírus. Os produtos resultantes da amplificação de duas amostras foram sequenciados e demonstraram identidade de 99% com o papilomavírus bovino (BPV) BR-UEL-4. Essa é a primeira descrição da infecção de equinos, bem como de sua associação com sarcoide pelo BPV BR-UEL-4, um suposto novo tipo de BPV identificado recentemente no Brasil a partir de papilomas cutâneos em bovinos.

A 3-year-old, mixed breed, male horse showed multiple nodules in different areas of the skin. Lesions occurred predominantly on the lips, cheeks, and submandibular and right inguinal regions. The nodules were characterized as mixed, fibroblastic, verrucous and occult types of sarcoid. Histologically there was proliferation of dermal fibroblasts, with or without pseudoepitheliomatous hyperplasia of the epidermis (frequently ulcerated), and formation of small isolated groups of neoplastic fibroblasts in the superficial dermis. Three tissue samples were submitted to DNA extraction and PCR amplification with generic primers for the internal region of the papillomavirus L1 gene. The amplified products from two samples were sequenced and showed 99% identity with the bovine papillomavirus (BPV) BR-UEL-4. This is the first description of BPV BR-UEL-4 infecting a horse and causing sarcoid in this species. BPV BR-UEL-4 is a putative new BPV type recently identified in skin papillomas in a Brazilian cattle herd.

Os herpesvírus bovino tipos 1 (BoHV-1) e 5 (BoHV-5) são agentes virais genética e antigenicamente relacionados, associados com diversas manifestações clínicas em bovinos, incluindo doença respiratória, genital, neurológica e abortos. Estudos epidemiológicos indicam que esses vírus estão amplamente disseminados no rebanho bovino brasileiro. O diagnóstico sorológico, que permite identificar animais portadores da infecção latente, se constitui em importante ferramenta para monitoramento individual e de rebanho. O presente artigo relata a padronização de um teste imunoenzimático do tipo ELISA, com base em anticorpo monoclonal (AcM), para a detecção de anticorpos séricos que reagem contra BoHV-1 e/ou BoHV-5. Inicialmente, determinou-se o AcM mais adequado para a sensibilização das placas, as diluições apropriadas do antígeno e dos soros-teste e o ponto de corte do ensaio. Após a padronização, o ensaio foi validado testando-se 506 amostras de soro bovino, previamente testadas para anticorpos neutralizantes contra BoHV-1 e/ou BoHV-5 pela técnica de soroneutralização (SN). Comparando-se com os resultados da SN frente a BoHV-1, o teste de ELISA apresentou sensibilidade e especificidade de 96,6% e 98,3%, respectivamente. Os valores preditivos positivo e negativo foram de 97,6%, a concordância foi de 97,6% e o índice de correlação kappa entre os testes foi de 0,95, o que indica uma excelente concordância. Comparando-se com os resultados da SN frente o BoHV-5, o ELISA apresentou 94,3% de sensibilidade; 97,9% de especificidade; 97,1% de valor preditivo positivo e 95,9% de valor preditivo negativo. Para BoHV-5, a concordância entre os testes foi de 96,4% e o índice de correlação foi de 0,92, também excelente. Esses resultados demonstram que o teste padronizado apresenta sensibilidade e especificidade adequados para o diagnóstico sorológico das infecções por BoHV-1 e BoHV-5 em nível individual e de rebanho. Dessa forma, o ensaio pode se constituir em alternativa para o teste de SN e para os kits de ELISA importados.

Bovine herpesviruses 1 (BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are antigenic and genetically related viruses associated with different clinical syndromes in cattle, including respiratory, reproductive, neurological disease and abortion. Epidemiological studies indicate the widespread distribution of both viruses among Brazilian cattle. Serological diagnosis, that allows the identification of latently infected animals, represents an important tool for individual and herd monitoring. The present article describes the standardization of a monoclonal antibody (MAb)-based immunoenzymatic test (ELISA) for detection of antibodies to BoHV-1 and/or BoHV-5. The initial steps involved the determination of the most suitable MAb, the appropriate dilutions of viral antigen and serum samples, and the cut-off value of the assay. After standardization, the ELISA was validated by testing 506 cattle serum samples previously tested for neutralizing antibodies to BoHV-1 and BoHV-5 by virus neutralizing assay (VN). Comparing to the VN for BoHV-1 antibodies, the ELISA presented sensitivity and specificity of 96.6% and 98.3%, respectively. Positive and negative predictive values were 97.6%, the concordance between the tests was 97.6% and the coefficient of correlation k (kappa) was 0.95, demonstrating an excellent correlation. Comparing to the VN for BoHV-5 antibodies, the ELISA presented 94.3% of sensitivity, 97.9% of specificity, 97.1% of positive predictive value, 95.9% negative predictive value, concordance of 96.4% and kappa coefficient of 0.92. These results demonstrate that the ELISA presents suitable specificity and sensitivity to be used for individual and herd serological diagnosis of BoHV-1 and BoHV-5, thus, representing an alternative for VN assays and imported ELISA kits.

Bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5) is the agent of meningoencephalitis, an important disease of cattle in South America. The neuropathogenesis of BoHV-5 infection is poorly understood and most previous research focused on the role of envelope glicoproteins in neurovirulence. Thymidine kinase (TK) is a viral enzyme necessary for virus replication in neurons and, therefore, represents a potential target for virus attenuation. The selection and characterization of BoHV-5 variants resistant to the nucleoside analog brivudin (BVDU), which selects TK-defective viruses is here described. Several BVDU-resistant clones were obtained after multiple passages in tissue culture in the presence of BVDU and one clone (BoHV-5/R-27) was further characterized. The selected clone replicated to similar titers and produced plaques with similar size and morphology to those of wild-type virus (SV507/99). The genetic stability of the resistant virus was demonstrated after ten passages in cell culture in the absence of the drug. Moreover, the drug-resistant virus showed reduced virulence in a rabbit model: virus inoculation in four rabbits did not result in disease, in contrast with 75% morbidity (3/4) and 50% mortality (2/2) among rabbits inoculated with the parental virus. These results demonstrate that BoHV-5 is sensitive to BVDU and that drug-resistant mutants can be readily selected upon BVDU treatment. BVDU-resistant mutants, likely defective in TK, retained their ability to replicate in tissue culture yet were attenuated for rabbits. This strategy to obtain TK-defective BoHV-5 may be useful to study the role of TK in BoHV-5 neuropathogenesis and for vaccine development.

Duas amostras brasileiras do vírus da Diarréia Viral Bovina tipo 2 (BVDV-2) foram inoculadas em bezerros com o objetivo de avaliar a sua virulência e estudar a patogenia da infecção. Previamente à inoculação, os animais foram imunodeprimidos com dexametasona. Quatro bezerros com idades entre 45 e 90 dias (grupo A) foram inoculados com a amostra SV-260 (n=2) ou LV-96 (n=2) e quatro bezerros com 6 a 8 meses de idade foram inoculados com a amostra SV-260 (grupo B). Após a inoculação, os bezerros do grupo A apresentaram anorexia, depressão, hipertermia, sinais de infecção respiratória e diarréia profusa, acompanhada de melena em dois animais. Os sinais respiratórios e digestivos progrediram, e os animais morreram ou foram sacrificados in extremis entre os dias 7 e 12 pós-inoculação. Úlceras e erosões no trato digestivo (língua, n=4; esôfago, n=1; rúmen, n=1 e abomaso, n=3), edema pulmonar (n=4) e na mucosa do abomaso (n=3); equimoses e sufusões na serosa do baço (n=2), no rúmen, no intestino delgado e no ceco (n=1), no coração (n=1) e na mucosa da bexiga (n=1) e intussuscepção intestinal (n=1) foram os achados macroscópicos mais marcantes. Úlceras e erosões, acompanhadas de infiltrado mononuclear na mucosa e submucosa do trato digestivo e depleção linfóide nos linfonodos e placas de Peyer, foram as alterações microscópicas mais freqüentes. O vírus foi detectado em vários tecidos e órgãos. Antígenos virais foram demonstrados por imuno-histoquímica, principalmente em células epiteliais do trato digestivo; em células mononucleares nos espaços perivasculares e peribronquiais; na cápsula e septos de linfonodos; e em linfócitos e células mononucleares das placas de Peyer e baço. Os animais do grupo B apresentaram depressão, hipertermia, sinais moderados de infecção respiratória e digestiva, ulcerações na língua e bochecha, mas recuperaram-se após alguns dias. Esses resultados demonstram que as amostras de BVDV-2 foram capazes de reproduzir a enfermidade aguda quando inoculadas em bezerros e que as conseqüências clínico-patológicas da infecção foram mais severas nos animais mais jovens.

Two Brazilian isolates of bovine viral diarrhea virus type 2 (BVDV-2) were inoculated in calves to evaluate their virulence and to study the pathogenesis of the infection. Previously to virus inoculation, the calves were immunossupressed with dexamethasone. Four 45 to 90-days-old calves (group A) were inoculated with isolate SV-260 (n=2) or LV-96 (n=2), and four 6 to 8-months-old calves (group B) were inoculated with isolate SV-260. Following virus inoculation, group A calves showed anorexia, depression, hyperthermia, signs of respiratory infection and profuse diarrhea, bloody in two cases. The respiratory and digestive signs progressed and the animals died or were euthanized in extremis between days 7 and 12 post-inoculation. Ulcers and erosions in the digestive tract (tongue, n=4; esophagus, n=1; rumen, n=1 and abomasum, n=3), edema of the lung (n=4) and abomasal mucosa (n=3); echimosis and suffusions in the spleen serosa (n=2), rumen, small intestine and ceccum (n=1), heart (n=1) and urinary bladder mucosa (n=1) and intestinal intussuseption (n=1) were the most prominent findings. Ulcerations and erosions accompanied by mononuclear cell infiltrates in the digestive tract mucosa and submucosa, and lymphoid depletion in lymph nodes and Peyer’s patches were frequently observed. Infectious virus was detected in several tissues and organs. Viral antigens were detected by immunohistochemistry mainly in epithelial cells of the digestive tract, in mononuclear cells of the perivascular and peribronchial spaces; in lymph node septae and capsule; and in lymphocytes and other mononuclear cells of the spleen and Peyer’s patches. Group B calves showed depression, hyperthermia, moderate signs of respiratory and digestive infection, small ulcerations in the tongue and recovered after a few days. These results demonstrate that the Brazilian BVDV-2 isolates were capable of producing an acute disease in calves upon experimental inoculation, and that the clinical and pathological consequences of the infection were more severe in young calves.