Resumo O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de patógenos transmitidos por carrapatos (Ehrlichia canis, Babesia vogeli, Hepatozoon spp. e Rickettsia spp.) em cães na Vila de Jericoacoara, região costeira do Ceará, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 153 animais e analisadas por métodos moleculares e sorológicos. Sessenta animais foram encontrados infectados ou expostos a pelo menos a um dos patógenos estudados. Babesia vogeli foi o patógeno mais prevalente (15%), seguido por E. canis (13,7%) e Hepatozoon spp. (11,8%), que foi identificado como Hepatozoon canis por sequenciamento. Vinte cães (13%) foram sororreativos à Rickettsia spp. Rhipicephalus sanguineus sensu lato foi observado em 11,8% dos animais. Houve associações entre idade (<3 anos) e positividade para B. vogeli, e entre habitação (cães de rua) e positividade para H. canis. Também houve associações entre anemia e infecção por H. canis, e entre leucopenia e exposição a Rickettsia spp. Não foi detectada associação entre alterações clínicas e infecção ou exposição aos patógenos estudados. Os resultados confirmaram que patógenos de importância veterinária estão circulando no nordeste do Brasil e mostraram que cães estão expostos a espécies de Rickettsia com potencial zoonótico, indicando a necessidade de medidas de controle do vetor.

Abstract The aim of this study was to determine the occurrence of tick-borne pathogens (Ehrlichia canis, Babesia vogeli, Hepatozoon spp. and Rickettsia spp.) in dogs in Vila de Jericoacoara, coastal region of Ceará, Brazil. Blood samples were collected from 153 animals and analyzed using molecular and serological methods. Sixty animals were found to be infected or exposed to at least one of the pathogens studied. Babesia vogeli was the most prevalent pathogen (15%), followed by E. canis (13.7%) and Hepatozoon spp. (11.8%), which was identified as Hepatozoon canis through sequencing. Twenty dogs (13%) were seroreactive to Rickettsia spp. Rhipicephalus sanguineus sensu lato was observed on 11.8% of the animals. There were associations between age (< 3 years old) and positivity for B. vogeli, and between habitation (stray dogs) and positivity for H. canis. There were also associations between anemia and infection with H. canis, and between leukopenia and exposure to Rickettsia spp. No association was detected between clinical alterations and infection with or exposure to the pathogens studied. The results confirmed that pathogens of veterinary importance are circulating in northeastern Brazil and showed that dogs are exposed to Rickettsia species with zoonotic potential, thus indicating a need for vector control measures.

Resumo O objetivo deste estudo foi caracterizar a resistência anti-helmíntica (RA) da população de nematoides gastrintestinais de ovinos, denominada Caucaia, do Nordeste brasileiro. Os testes fenotípicos foram: eclosão de ovos (TEO), desenvolvimento larvar (TDL) e redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF). A avaliação genotípica para benzimidazóis (BZs) foi por frequência de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) F200Y, F167Y e E198A; e para levamisol (LEV), pela frequência alélica para resistência no gene Hco-acr-8. Os “primers” foram específicos para Haemonchus contortus. As concentrações efetivas 50% (CE50) para BZs (TEO) e para lactonas macrocíclicas (LMs) e LEV (TDL) foram 1,02 µg/mL, 1,81 ng/mL e 0,04 µg/mL, respectivamente. Os fatores de resistência para LMs e LEV foram 0,91 e 3,07, respectivamente. As eficácias para BZs, LMs, monepantel (MPTL) e LEV no TRCOF foram 52,4; 87,0; 94,5 e 99,6%, respectivamente. A qPCR para BZs demonstrou frequências de 0%, 26,24% e 69,08% para SNPs E198A, F200Y e F167Y, respectivamente. Para LEV foram encontrados 54,37% de alelos resistentes. Houve concordância entre TEO, TRCOF e qPCR para BZs, e entre TDL e qPCR para LEV. Baseada na maior sensibilidade da qPCR e avaliação fenotípica, a população Caucaia foi considerada resistente a BZs, LMs, LEV e suspeita para MPTL.

Abstract The aim of this study was to characterize the anthelmintic resistance (AR) of a sheep gastrointestinal nematode population, named Caucaia, from northeastern Brazil. Phenotypic tests performed were: egg hatch (EHT), larval development (LDT) and fecal egg count reduction (FECRT). Benzimidazoles (BZs) genotypic evaluation was by frequency of single nucleotide polymorphisms (SNPs) F200Y, F167Y and E198A, and for levamisole (LEV), by frequency of resistance alleles of Hco-acr-8 gene. The primers were designed specifically for Haemonchus contortus. Effective concentrations 50% (EC50) for BZs (EHT), and for macrocyclic lactones (MLs) and LEV (LDT) were 1.02 µg/mL, 1.81 ng/mL and 0.04 µg/mL, respectively. Resistance ratios for MLs and LEV were 0.91 and 3.07, respectively. FECRT efficacies of BZs, MLs, monepantel (MPTL) and LEV were 52.4; 87.0; 94.5 and 99.6%, respectively. qPCR for BZs demonstrated resistance allele frequencies of 0%, 26.24% and 69.08% for SNPs E198A, F200Y and F167Y, respectively. For LEV, 54.37% of resistance alleles were found. There was agreement between EHT, FECRT and qPCR for BZs, and agreement between LDT and qPCR for LEV. Thus, based on higher sensitivity of qPCR, and phenotypic evaluation, the Caucaia population was considered resistant to BZs, MLs, LEV and suspect for MPTL.

Resumo O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia do acetato de carvacrila (ACV) e do ACV nanoencapsulado (nACV) sobre nematóides gastrintestinais de ovinos. O ACV foi nanoencapsulado com quitosana/goma arábica e foi analisada a eficácia de nanoencapsulamento (EE), o rendimento, potencial zeta, morfologia das nanopartículas e cinética de liberação em pH 3 e 8. Foram avaliadas as toxicidades aguda e subcrônica em roedores e a redução da contagem de ovos nas fezes (RCOF) de ovinos. Os ovinos foram divididos em quatro grupos (n = 10): G1, 250 mg/kg ACV; G2, 250 mg/kg de nACV; G3, matriz polimérica e G4: 2,5 mg/kg de monepantel. A EE e o rendimento de nACV foram de 65% e 57%, respectivamente. A morfologia das nanopartículas foi esférica, tamanho (810,6±286,7 nm), potencial zeta no pH 3,2 (+18,3 mV) e a liberação de 50% de CVA nos pHs 3 e 8 ocorreu às 200 e 10 h, respectivamente. nACV apresentou DL50 de 2.609 mg/kg. ACV, nACV e o monepantel reduziram a contagem de ovos por grama de fezes (opg) em 57,7%, 51,1% e 97,7%, respectivamente. A contagem de opg de ovelhas tratadas com ACV e nCVA não diferiu do controle negativo (P>0,05). O nanoencapsulamento reduziu a toxicidade do AVC; no entanto, nACV e ACV apresentaram resultados semelhantes na RCOF.

Abstract The objective of this study was to evaluate the efficacy of carvacryl acetate (CVA) and nanoencapsulated CVA (nCVA) on gastrointestinal nematodes of sheep. The CVA was nanoencapsulated with chitosan/gum arabic and the efficacy of nanoencapsulation (EE), yield, zeta potential, nanoparticle morphology and release kinetics at pH 3 and 8 were analyzed. Acute and subchronic toxicity were evaluated in rodents and reduction of egg counts in the faeces (FECRT) of sheep. The sheep were divided into four groups (n = 10): G1, 250 mg/kg CVA; G2, 250 mg/kg nCVA; G3, polymer matrix and G4: 2.5 mg/kg monepantel. EE and nCVA yield were 65% and 57%, respectively. The morphology of the nanoparticles was spherical, size (810.6±286.7 nm), zeta potential in pH 3.2 (+18.3 mV) and the 50% release of CVA at pHs 3 and 8 occurred at 200 and 10 h, respectively. nCVA showed LD50 of 2,609 mg/kg. CVA, nCVA and monepantel reduced the number of eggs per gram of faeces (epg) by 57.7%, 51.1% and 97.7%, respectively. The epg of sheep treated with CVA and nCVA did not differ from the negative control (P>0.05). Nanoencapsulation reduced the toxicity of CVA; however, nCVA and CVA presented similar results in the FECRT.

Resumo Este estudo objetivou avaliar os efeitos anti-helmínticos e ultraestruturais do látex de Calotropis procera sobre Haemonchus contortus. Látex de C. procera foi centrifugado duas vezes à a 10.000xg e dialisado para obter uma fração rica em proteínas, denominada proteínas do látex (LP). E centrifugado e centrifugado a 3.000 rpm, para obter uma fração rica em metabólitos secundários, denominada LNP (látex não proteico). Espécimes de H. contortus expostos à LNP, LP e PBS no Teste de Motilidade dos Nematoides Adultos (TMNA) foram submetidos a microscopia eletrônica de varredura (MEV) e de transmissão (MET), para verificar alterações em sua ultraestrutura. Testes fitoquímicos em LNP indicaram a presença de fenóis, esteroides, alcaloides e cardenolídeos. A presença dos compostos ácido gálico e quercetina em LNP foi caracterizada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). O conteúdo de proteínas em LP foi de 43,1 ± 1,1 mg/mL e de 7,7 ± 0,3 mg/mL em LNP. No TMNA, LNP e LP inibiram a motilidade de 100% dos nematoides, sendo LNP mais eficaz que LP, e a ivermectina mais eficaz que ambos (p <0,05). Alterações na cutícula de nematoides tratados com LP e LNP foram observadas por MEV e MET. O látex de C. procera apresenta efeito anti-helmíntico sobre H. contortus, causando danos à sua cutícula e outras alterações em sua ultraestrutura.

Abstract This study aimed to evaluate the anthelmintic and ultrastructural effects of Calotropis procera latex on Haemonchus contortus. C. procera latex was twice centrifuged at 10,000×g and dialyzed to obtain a fraction rich in proteins, named LP (latex protein), and at 3,000 rpm to obtain a fraction rich in secondary metabolites, named LNP (latex non-protein). Specimens of H. contortus exposed to LNP, LP and PBS in the Adult Worm Motility Test (AWMT) were submitted to scanning (SEM) and transmission (TEM) electron microscopy to verify changes in their ultrastructure. Phytochemical tests in the LNP indicated the presence of phenols, steroids, alkaloids and cardenolides. High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) characterized the presence of the compounds gallic acid and quercetin in the LNP. The protein content in the LP was 43.1 ± 1.1 mg/mL and 7.7 ± 0.3 mg/mL in LNP. In AWMT, LNP and LP inhibited the motility of 100% of the nematodes, with LNP being more effective than LP and ivermectin more effective than both (p <0.05). Cuticle changes were observed by SEM and TEM in nematodes treated with LP and LNP. Calotropis procera latex has anthelmintic effects against H. contortus, causing damage to its cuticle and other alterations in its ultrastructure.

Resumo Este trabalho objetivou avaliar a atividade anti-helmíntica do óleo essencial de Eucalyptus citriodora e citronelal sobre nematoides gastrintestinais de ovinos. A composição do óleo essencial foi determinada por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas. As substâncias foram avaliadas in vitro utilizando-se teste de motilidade de vermes adultos (AWMT) e microscopia eletrônica de transmissão (TEM). Teste de toxicidade aguda em camundongos e teste de redução da contagem de ovos fecais (FECRT) em ovinos foram realizados. Citronelal foi confirmado como componente majoritário do óleo essencial (63,9%). No AWMT, 2 mg/mL de óleo essencial e citronelal inibiram completamente a motilidade de H. contortus 6 h pós-exposição. H. contortus expostos ao óleo essencial e citronelal exibiram modificações ultraestruturais internas. Os valores da dose letal 50 em camundongos foram 5.000 e 2.609 mg/kg para óleo essencial e citronelal, respectivamente. Óleo essencial de E. citriodora reduziu opg de ovinos 14 dias pós-tratamento em 69,5% (P<0,05). Não houve diferença significativa de opg entre grupo controle negativo e citronelal (P>0,05). A interação entre citronelal e outros constituintes do óleo essencial pode ser relevante na atividade anti-helmíntica in vivo. Portanto, avaliação farmacocinética do óleo essencial de E. citriodora e citronelal pode auxiliar a elucidar a atividade anti-helmíntica desses compostos.

Abstract This study aimed to evaluate the anthelmintic activity of Eucalyptus citriodora essential oil and citronellal on sheep gastrointestinal nematodes. Essential oil composition was determined by gas chromatography mass spectrometry. The substances were evaluated in vitro using adult worm motility test (AWMT) and transmission electron microscopy (TEM). The acute toxicity test in mice and the fecal egg count reduction test (FECRT) in sheep were performed. Citronellal was confirmed as the essential oil major constituent (63.9%). According to the AWMT, 2 mg/mL of essential oil and citronellal completely inhibited Haemonchus contortus motility at 6 h post exposure. H. contortus exposed to essential oil and citronellal exhibited internal ultrastructural modifications. The lethal dose 50 values in mice were 5,000 and 2,609 mg/kg for essential oil and citronellal, respectively. E. citriodora essential oil reduced sheep epg at 14 days post treatment by 69.5% (P<0.05). No significant differences were observed in epg between the citronellal and negative control groups (P>0.05). The interaction between citronellal and other constituents in the essential oil may be relevant for its in vivo anthelmintic activity. Thus, E. citriodora essential oil and citronellal pharmacokinetic studies may help elucidate the anthelmintic activity of these compounds.

Resumo A resistência anti-helmíntica estimulou a busca por estratégias de controle de nematoides gastrintestinais, incluindo óleos essenciais livres ou em nanoemulsão. Este estudo avaliou a eficácia anti-helmíntica do óleo essencial de Cymbopogon citratus (OECc) e da nanoemulsão do óleo essencial de C. citratus (nOECc). Análises físico-químicas foram realizadas. O efeito in vitro foi determinado no teste de eclosão de ovos (TEO) sobre Haemonchus contortus e o efeito in vivo foi avaliado em ovinos infectados com nematoides gastrintestinais. Os animais foram tratados com OECc (500 mg/kg) ou nOECc (450 mg/kg) para determinação do número de ovos por grama de fezes (OPG) e carga parasitária. O principal constituinte do OECc foi citral. O conteúdo de OECc na nanoemulsão foi 20% e o tamanho médio de partícula foi 248 nm. No TEO, OECc e nOECc (1,25 mg/mL) inibiram 98,4 e 97,1% da eclosão larvar, respectivamente. Três animais tratados com o OECc morreram, enquanto um animal do grupo tratado com a nOECc morreu. O OPG e a carga parasitária total dos grupos tratados não diferiram do controle negativo (p>0.05). A nOECc apresentou eficácia somente sobre H. contortus (p<0.05). Como conclusão, o nanoencapsulamento reduziu a toxicidade e aumentou a eficácia sobre H. contortus.

Abstract The anthelmintic resistance stimulated the search for strategies for controlling gastrointestinal nematodes, including the use of free essential oils or its nanoemulsion. This study evaluated the anthelmintic efficacy of Cymbopogon citratus essential oil (CcEO) and C. citratus essential oil nanoemulsion (CcEOn). Pysicochemical analyses were performed. The in vitro effect was determined using the egg hatch test (EHT) on Haemonchus contortus and in vivo effect was evaluated in sheep infected with gastrointestinal nematodes. The animals were treated with CcEO (500 mg/kg) or CcEOn (450 mg/kg) for the fecal egg count (FEC) and the determination of worm burden. The main component of CcEO was citral. The CcEO content in the nanoemulsion was 20% (v/v), and the mean particle size was 248 nm. In EHT, CcEO and CcEOn (1.25 mg/mL) inhibited larval hatching by 98.4 and 97.1%, respectively. Three animals treated with CcEO died whereas in the group treated with CcEOn one animal died. The FEC and total worm burden of the treated groups did not differ from the negative control (p>0.05). The CcEOn showed efficacy only on H. contortus (p<0.05). In conclusion, nanoencapsulation reduced toxicity and increased efficacy on H. contortus.

Resumo A administração indiscriminada de anti-helmínticos sintéticos, como a ivermectina, contribui para a seleção de subpopulações capazes de resistir ao efeito das drogas. Para entender os mecanismos de resistência à ivermectina em Caenorhabditis elegans, este estudo visou identificar alvos moleculares. Portanto, linhagens de C. elegans sensíveis e resistentes à ivermectina foram utilizadas. Os nematóides coletados foram adicionados ao tampão de extração e macerados em nitrogênio líquido para obtenção das proteínas. As proteínas extraídas foram separadas por peso molecular em SDS-PAGE para verificar sua integridade. Posteriormente, as proteínas de ambas as linhagens foram separadas por eletroforese bidimensional. Os géis foram analisados, os spots relevantes foram excisados e identificados por espectrometria de massa (NanoESI-Q-TOF e MASCOT®), em seguida, analisados em seus termos de GO e STRING®. A expressão aumentada de proteínas associadas à alta atividade metabólica, como as proteínas ATP-2 e ENOL-1, responsáveis pela síntese de ATP, foi observada. Além disso, foram identificadas as proteínas responsáveis pelo controle da função muscular (MLC-1, ACT-1 e PDI-2), sinalização (FAR-1 e FAR-2) e desenvolvimento embrionário (VHA-2). A análise das interações proteicas indicou que a maioria das proteínas identificadas na cepa resistente participa da mesma reação desencadeada pela ivermectina.

Abstract The indiscriminate administration of synthetic anthelmintics such as ivermectin contributes to the selection of subpopulations capable of resisting the drugs’ effects. To understand the mechanisms of ivermectin resistance in Caenorhabditis elegans, this study attempted to identify molecular targets. C. elegans lineages that were sensitive and resistant to ivermectin were used. Collected nematodes were added to an extraction buffer and macerated in liquid nitrogen for protein extraction. The extracted proteins were separated according to molecular weight by SDS-PAGE to verify their integrity. Subsequently, proteins from both lineages were separated using two-dimensional electrophoresis. The gels were analyzed and the relevant spots were excised and identified by mass spectrometry (NanoESI-Q-TOF and MASCOT®) and subsequently assessed by GO enrichment and STRING® analyses. The increased expression of proteins associated with high metabolic activity, such as ATP-2 and ENOL-1, which are responsible for ATP synthesis, was observed. Furthermore, proteins with involvement in mediating muscular function (MLC-1, ACT-1, and PDI-2), signaling (FAR-1 and FAR-2), and embryo development (VHA-2) were identified. Protein interaction analysis indicated that the majority of the identified proteins in the resistant lineages participated in the same reaction triggered by ivermectin.

Resumo Timol é um monoterpeno e a acetilação deste composto pode reduzir a toxicidade e potencializar os seus efeitos biológicos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do timol e acetato de timolila (AT) sobre ovos, larvas e adultos de Haemonchus contortus e suas alterações cuticulares, toxicidade aguda em camundongos e a eficácia sobre nematoides gastrintestinais de ovinos. Os resultados dos testes in vitro foram analisados por análise de variância (ANOVA) e comparados pelo testes de Tukey ou Bonferroni. A eficácia do teste de redução da contagem de ovos nas fezes (RCOF) foi calculada pelo programa BootStreet. No teste de inibição da eclosão de ovos (TEO), timol (0,5 mg/mL) e AT (4 mg/mL) inibiram a eclosão das larvas em 98% e 67,1%, respectivamente. Timol e AT (8 mg/mL) inibiram 100% do desenvolvimento larval. Timol e AT (800 μg/mL) reduziram a motilidade dos nematoides adultos, em 100% e 83,4%, respectivamente. O timol provocou alterações cuticulares nos nematoides adultos. No teste de toxicidade aguda, a DL50 do timol e AT foi de 1.350,9 mg/kg e 4.144,4 mg/kg, respectivamente. Timol e AT reduziram a contagem de ovos por gramas de fezes (OPG) dos ovinos em 59,8% e 76,2%, respectivamente. Nos testes in vitro timol apresentou atividade melhor anti-helmíntica do que AT. Entretanto, AT foi menos tóxico do que o timol e no teste in vivo apresentaram eficácia semelhante.

Abstract Thymol is a monoterpene and acetylation form of this compound can reduce the toxicity and enhance its biological effects. The objective of this study was to evaluate the effect of thymol and thymol acetate (TA) on egg, larva and adult Haemonchus contortus and the cuticular changes, acute toxicity in mice and the efficacy on sheep gastrointestinal nematodes. In vitro tests results were analyzed by analysis of variance (ANOVA) and followed by comparison with Tukey test or Bonferroni. The efficacy of in vivo test was calculated by the BootStreet program. In the egg hatch test (EHT), thymol (0.5 mg/mL) and TA (4 mg/mL) inhibited larval hatching by 98% and 67.1%, respectively. Thymol and TA (8 mg/mL) inhibited 100% of larval development. Thymol and TA (800 µg/mL) reduced the motility of adult worms, by 100% and 83.4%, respectively. Thymol caused cuticular changes in adult worm teguments. In the acute toxicity test, the LD50 of thymol and TA were 1,350.9 mg/kg and 4,144.4 mg/kg, respectively. Thymol and TA reduced sheep egg count per gram of faeces (epg) by 59.8% and 76.2%, respectively. In in vitro tests thymol presented better anthelmintic activity than TA. However TA was less toxic and in in vivo test efficacy was similar.

O parasitismo por nematoides tem grande importância econômica no rebanho. Uma alternativa para o controle de parasitas é a fitoterapia. Este estudo avaliou a eficácia do decocto de Cymbopogon citratus (DCc), do óleo essencial de C. citratus (OECc) e do citral contra Haemonchus contortus utilizando o teste in vitro de eclosão dos ovos (TEO) e o teste de desenvolvimento larval (TDL) e um teste in vivo com modelo Meriones unguiculatus (gerbil). O efeito de 800 mg/kg de OECc foi avaliado em gerbils infectados artificialmente com 5000 larvas de terceira fase de H. contortus. As concentrações efetivas necessárias para inibir 50% (CE50) da eclosão dos ovos foram 0,46; 0,14 e 0,13 mg/mL para DCc, OECc e citral, respectivamente. Os valores da CE50 no TDL foram de 5,04; 1,92 e 1,37 mg/mL para DCc, OECc e citral, respectivamente. No grupo tratado com óleo de C. citratus a população H. contortus foi reduzida em 38,5% (P < 0,05) em comparação com o grupo controle. Estes resultados sugerem que pode ser possível a utilização de óleo essencial de C. citratus para controle de H. contortus, parasita de pequenos ruminantes.

Parasitic nematodes are of major economic importance in livestock. An alternative for the control of parasites is phytotherapy. This study evaluated the efficacy of Cymbopogon citratus decoction (CcD), C. citratus essential oil (CcEo) and citral against Haemonchus contortus using in vitro egg hatch test (EHT) and larval development test (LDT) and an in vivo test using a Meriones unguiculatus (gerbil) model. The effect of 800 mg/kg CcEo was evaluated in gerbils that had been artificially infected with 5,000 third-stage H. contortus larvae. The effective concentrations required to inhibit 50% (EC50) of egg hatching were 0.46, 0.14 and 0.13 mg/mL for CcD, CcEo and citral, respectively. The EC50 values in the LDT were 5.04, 1.92 and 1.37 mg/mL for CcD, CcEo and citral, respectively. H. contortus population in the group treated with C. citratus essential oil was reduced by 38.5% (P< 0.05) in comparison to the control group. These results suggest that it may be possible to use C. citratusessential oil to control of H. contortus parasite of small ruminant.

O principal vetor de leishmaniose visceral (LV) no Brasil é Lutzomyia longipalpis. Entretanto, a ausência de L. longipalpis em área com casos autóctones de LV demonstra a existência de outras espécies na transmissão dessa doença. Estudo realizado na cidade de La Banda, Argentina, e São Vicente Férrer, Brasil, correlacionou a ausência de L. longipalpis e a presença de Lutzomyia migoneicom casos autóctones de LV. Em São Vicente Férrer, foi comprovada a infecção natural de L. migonei por Leishmania infantum chagasi. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a ecologia dos flebotomíneos L. longipalpis e L. migonei no município de Fortaleza, área endêmica para LV. A captura de flebotomíneos foi realizada em 22 pontos de coleta distribuídos nas quatro regiões do município de Fortaleza. No total, foram capturados 32.403 flebotomíneos. Destes, 18.166 (56%) eram da espécie L. longipalpis e 14.237 (44%) eram L. migonei. Houve diferença significativa de densidade entre os vetores em cada local de captura (intra e peri) (p<0,0001). Esses achados confirmam que, na cidade de Fortaleza, L. migonei e L. longipalpis estão bem distribuídos, bem como adaptados ao ambiente intradomiciliar e que L. migonei, possivelmente, compartilhe com L. longipalpis o papel de vetor da LV em Fortaleza.

The main vector for visceral leishmaniasis (VL) in Brazil is Lutzomyia longipalpis. However, the absence of L. longipalpis in a region of autochthonous VL demonstrates the participation of other species in the transmission of the parasite. Studies conducted in La Banda, Argentina, and São Vicente Férrer, Pernambuco State, Brazil, have correlated the absence of L. longipalpisand the presence of L. migonei with autochthonous cases of VL. In São Vicente Férrer, Pernambuco, there was evidence for the natural infection of L. migonei with Leishmania infantum chagasi. Thus, the objective of this work was to assess the ecology of the sand flies L. longipalpis and L. migonei in Fortaleza, an endemic area for VL. Insect capture was conducted at 22 sampling points distributed across four regions of Fortaleza. In total, 32,403 sand flies were captured; of these, 18,166 (56%) were identified as L. longipalpis and 14,237 (44%) as L. migonei. There were significant density differences found between the vectors at each sampling site (indoors and outdoors) (p <0.0001). These findings confirm that L. migonei and L. longipalpis are distributed throughout Fortaleza, where they have adapted to an indoor environment, and suggest that L. migonei may share the role as a vector with L. longipalpis in the transmission of VL in Fortaleza.

O objetivo foi realizar um estudo epidemiológico para determinar as áreas de risco de transmissão de leishmaniose visceral pela detecção e quantificação de infecções naturais por Leishmania infantum em Lutzomyia longipalpis. As coletas foram realizadas entre fevereiro de 2009 e janeiro de 2010 em 21 locais, distribuídos em quatro regiões do município de Fortaleza. As amostras foram testadas quanto à presença de DNA de Leishmania por PCR em tempo real (qPCR). Dos 123 pools de flebotomíneos investigados, 45 foram positivos para L. infantum, e a taxa de infecção mínima foi de 3,7%. Nas regiões Norte, Sul, Leste e Oeste, a prevalência de flebotomíneos infectados foi de 3,4%, 4,7%, 4,9% e 8,4%, respectivamente. A carga de parasitas nos pools variou de 2,45 ± 0,96 a 2.820.246 ± 106.072. Não foram observadas diferenças significativas na frequência de flebotomíneos infectados entre as regiões (P = 0,3014), estação do ano (P = 0,3906) ou localização da armadilha (P = 0,8486). Foram observadas diferenças significativas na frequência de flebotomíneos somente na região oeste durante a estação chuvosa (P = 0,0152). A qPCR foi capaz de detectar e quantificar L. infantum em L. longipalpis, identificando as áreas de maior risco de transmissão de leishmaniose visceral.

The objective of this study was to perform an epidemiological survey to determine the areas at risk of visceral leishmaniasis through the detection and quantification of natural infection by Leishmania infantumin Lutzomyia longipalpis. The sandflies were captured between February 2009 and January 2010, at 21 sites in four regions of the Fortaleza municipality. Samples were screened for the presence of Leishmania DNA by Real Time PCR (qPCR), amplification of kDNA minicircle sequence. Out of the 123 pools of analyzed sandflies, 45 were positive for L.infantum, and the minimum infection rate was 3.7%. In the north, south, east and west regions, the pool screen assay predicted sand-fly infection prevalence of 3.4%, 4.7%, 4.9% and 8.4%, respectively. The parasite load ranged from 2.45 ± 0.96 to 2,820,246 ± 106,072. No statistical differences were found with respect to the frequency of sand-fly infection between the regions (P=0.3014), seasons (P = 0.3906) or trap locations (P = 0.8486). Statistical differences were found with respect to the frequency of sand-fly infection between the two seasons only in the west region (P=0.0152). The qPCR was able to detect and quantify L. infantum in L. longipalpis, therefore succeeding in identifying the areas of greatest risk of VL transmission.

Fitoterapia pode ser uma alternativa para o controle de parasitas gastrintestinais de pequenos ruminantes. Este estudo avaliou a eficácia dos óleos essenciais de Alpinia zerumbet, Coriandrum sativum, Tagetes minuta e Lantana camara sobre Haemonchus contortus através de dois testes in vitro, teste de eclosão dos ovos (TEO) e teste de desenvolvimento larval (TDL). Nenhum efeito foi observado para L. camara no TEO. Os óleos essenciais de A. zerumbet, C. sativum e T. minuta exibiram um efeito dose dependente no TEO inibindo a eclosão das larvas de H. contortus em 81,2, 99 e 98,1%, respectivamente, na concentração de 2,5 mg mL-1. A concentração efetiva para inibir 50% (CE50) da eclosão dos ovos foi de 0,94, 0,63 e 0,53 mg mL-1 para os óleos essenciais de A. zerumbet, C. sativum e T. minuta, respectivamente. No TDL, 10 mg mL-1 de L. camara, A. zerumbet, C. sativum e T. minuta inibiram em 54,9, 94,2, 97,8 e 99,5% do desenvolvimento larvar, apresentando valores de CE50 de 6,32, 3,88, 2,89 e 1,67 mg mL-1, respectivamente. Com base nos resultados promissores apresentados neste modelo in vitro, pode ser possível a utilização destes óleos essenciais para controlar os nematoides gastrintestinais. No entanto, a sua atividade anti-helmíntica deve ser confirmada in vivo.

Phytotherapy can be an alternative for the control of gastrointestinal parasites of small ruminants. This study evaluated the efficacy of Alpinia zerumbet, Coriandrum sativum, Tagetes minuta and Lantana camara essential oils by two in vitro assays on Haemonchus contortus, an egg hatch test (EHT) and larval development test (LDT). No effect was observed for L. camara in the EHT. A. zerumbet, C. sativum and T. minuta essential oils exhibited a dose-dependent effect in the EHT, inhibiting 81.2, 99 and 98.1% of H. contortus larvae hatching, respectively, at a concentration of 2.5 mg mL-1. The effective concentration to inhibit 50% (EC50) of egg hatching was 0.94, 0.63 and 0.53 mg mL-1 for A. zerumbet, C. sativum and T. minuta essential oils, respectively. In LDT, L. camara, A. zerumbet, C. sativum and T. minuta at concentration of 10 mg mL-1 inhibited 54.9, 94.2, 97.8 and 99.5% of H. contortus larval development, presenting EC50 values of 6.32, 3.88, 2.89 and 1.67 mg mL-1, respectively. Based on the promising results presented in this in vitro model, it may be possible use of these essential oils to control gastrointestinal nematodes. However, their anthelmintic activity should be confirmed in vivo.

O aumento na incidência da Leishmaníase Visceral (LV) no Brasil deve-se à ineficácia das medidas de controle da doença. Além disso, não há tratamento efetivo para LV canina com drogas sintéticas. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito dos óleos essenciais de Coriandrum sativum e de Lippia sidoides e do óleo-resina de Copaiferareticulata sobre promastigotas e amastigotas de Leishmania chagasi e analisar o grau de toxicidade sobre células monocíticas murinas RAW 264.7. Para determinar a CI50 sobre promastigotas foi usado teste MTT (brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio) e sobre amastigotas foi realizado imunoensaio in situ pela técnica de ELISA. Os resultados obtidos comprovaram que o óleo-resina de C. reticulata foi o mais eficaz contra as formas promastigotas (CI50 de 7,88 µg.mL-1) e amastigotas (CI50 de 0,52 µg.mL-1) e em nenhum dos dois testes diferiu do controle pentamidina que obteve CI50 de 2,149 µg.mL-1, no teste sobre promastigotas, e anfotericina B que obteve CI50 de 9,754 µg.mL-1, nos testes com amastigotas (p > 0.05). Quanto à citotoxicidade apenas o óleo-resina não apresentou toxicidade com 78,45% de monócitos viáveis. Os resultados obtidos sobre promastigotas e amastigotas e a ausência de citotoxicidade do óleo-resina de C. reticulata evidenciam que este óleo-resina pode ser viável para a análise de seus efeitos terapêuticos em testes in vivo.

The increased incidence of visceral leishmaniasis (VL) in Brazil is due to a lack of effective disease control measures. In addition to that, no effective treatment exists for canine VL in response to synthetic drugs. Thus, the objective of this study was to evaluate the effect of the essential oils of Coriandrum sativum and Lippia sidoides, and oleoresin from Copaifera reticulata, on Leishmania chagasi promastigotes and amastigotes. We also examined the toxicity of these treatments on the murine monocyte cell line RAW 264.7. To determine the IC50 a MTT test (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) was performed on promastigotes, and an in situ ELISA assay was conducted on amastigotes. Here, we demonstrate that oleoresin from C. reticulata was effective against both promastigotes (IC50 of 7.88 µg.mL-1) and amastigotes (IC50 of 0.52 µg.mL-1), and neither of the two treatments differed significantly (p > 0.05) from pentamidine (IC50 of 2.149 µg.mL-1) and amphotericin B (IC50 of 9.754 µg.mL-1). Of the three plant oils tested, only oleoresin showed no toxicity toward monocyte, with 78.45% viability after treatment. Inhibition of promastigote and amastigote growth and the lack of cytotoxicity by C. reticulata demonstrate that oleoresin may be a viable option for analyzing the in vivo therapeutic effects of leishmanicidal plants

Os nematóides gastrintestinais são responsáveis por acentuada redução na produtividade de ovinos e caprinos. Na tentativa de controlar esses parasitos, são utilizados diversos anti-helmínticos sintéticos, mas o desenvolvimento da resistência tem tornado esse controle pouco eficaz. Na busca por alternativas de controle dos nematóides gastrintestinais, a utilização de plantas taniníferas tem despertado interesse de pesquisadores em várias regiões do mundo. Essa revisão visa a abordar os diversos aspectos relacionados ao fornecimento dessas plantas a ovinos e caprinos, bem como os principais resultados obtidos em pesquisas utilizando taninos para o controle de nematóides de pequenos ruminantes.

The gastrointestinal nematodes are responsible for a marked reduction in the productivity of sheep and goats. In an attempt to control these parasites, different synthetic anthelmintics are used, but development of resistance has become this control little effective. In the search for alternatives to control these nematodes, the use of tanniferous plants has attracted attention from researchers in different regions of the world. This review aims to address the various aspects related to the administration of these plants to sheep and goats, and the main results obtained from studies using tannins to control nematodes in small ruminants.

Fitoterapia pode ser uma estratégia alternativa para o controle de parasitas gastrintestinais. Este estudo avaliou a eficácia anti-helmintica do óleo essencial de Eucalyptus citriodora (OeEc). Os efeitos in vitro do OeEc foram determinados através do teste de eclosão de ovos e inibição do desenvolvimento larvar de Haemonchus contortus. O OeEc foi submetido ao teste de toxicidade aguda oral e intraperitoneal, em camundongos. Os efeitos in vivo do OeEc foram avaliados através do teste de redução da contagem de ovos nas fezes (FECRT) com caprinos infectados com nematóides gastrintestinais. Os resultados mostraram que 5,3 mg.mL-1 OeEc inibiram 98,8% a eclosão de ovos e 10,6 mg.mL-1 OeEc inibiram 99,71% o desenvolvimento larvar de H. contortus. As doses letais para 50% dos camundongos foram de 4153 e 622,8 mg.kg-1 pela via oral e intraperitoneal. No FECRT, a eficácia de OeEc e ivermectina foi de 66,25 e 79,16%, respectivamente, em caprinos 8 dias após o tratamento. OeEc mostrou atividade anti-helmintica in vitro e in vivo.

Phytotherapy may be an alternative strategy for controlling gastrointestinal parasites. This study evaluated the anthelmintic efficacy of Eucalyptus citriodora essential oil (EcEO). The in vitro effects of EcEO were determined through testing the inhibition of egg hatching and larval development of Haemonchus contortus. EcEO was subjected to acute toxicity testing on mice, orally and intraperitoneally. The in vivo effects of EcEO were determined by the fecal egg count reduction test (FECRT) in goats infected with gastrointestinal nematodes. The results showed that 5.3 mg.mL-1 EcEO inhibited egg hatching by 98.8% and 10.6 mg.mL-1 EcEO inhibited H. contortus larval development by 99.71%. The lethal doses for 50% of the mice were 4153 and 622.8 mg.kg-1, for acute toxicity orally and intraperitoneally. In the FECRT, the efficacy of EcEO and ivermectin was 66.25 and 79.16% respectively, on goat gastrointestinal nematodes eight days after treatment. EcEO showed in vitro and in vivo anthelmintic activity.