Ralstonia solanacearum, agente causal da murcha bacteriana em diversas famílias de plantas, entre elas as solanáceas, causa grandes prejuízos na cultura do tabaco, se não manejada. Por se tratar de espécie complexa, esta bactéria é classificada de diversas formas. A mais recente divide a espécie em três níveis taxonômicos: filotipo, sequevar e clone. Devido à ausência de estudos sobre as populações de R. solanacearum na cultura do tabaco, este trabalho teve como objetivo caracterizar 120 isolados oriundos de solos e plantas de tabaco com murcha bacteriana, coletados em 13 municípios do Paraná, 24 de Santa Catarina, 13 do Rio Grande do Sul, um da Paraíba e dois de Pernambuco, em biovar, filotipo e por diversidade genética através das sequências repetitivas BOX, ERIC e REP (rep-PCR). Os resultados indicaram que todos os isolados estudados pertencem à biovar 1 e filotipo II. Embora tenha sido constatada homogeneidade quanto à biovar e ao filotipo, os resultados da rep-PCR permitiram a divisão dos isolados em seis grupos (A, B, C, D, E e F), a partir de 61% de similaridade, independente da origem geográfica, tipo de amostra, época de coleta e cultivar. Os grupos A e B foram os que tiveram maior número de representantes, 47 e 20 linhagens clonais, respectivamente. O conhecimento da variabilidade populacional de R. solanacearum, assim como da virulência dos diferentes isolados, pode auxiliar no sucesso de programas de melhoramento genético e de manejo integrado da doença.

Ralstonia solanacearum, causal agent of bacterial wilt on different hosts, including members of Solanaceae, causes severe losses in tobacco crop, if not managed. It is a complex species and classified in several ways. Lately, the species was divided into three taxonomic levels: phylotype, sequevar and clone. Due to the lack of studies on populations of R. solanacearum in tobacco, this research aimed to characterize 120 isolates from soil and wilted tobacco plants, from 13 counties from Paraná, 24 from Santa Catarina, 13 from Rio Grande do Sul, one from Paraíba and two from Pernambuco, by biovar, phylotype, and by using repetitive polymerase chain reaction (rep-PCR) element (BOX, ERIC and REP) primers. The results indicated that all isolates belong to the biovar 1 and phylotype II. Although there was homogeneity regarding biovar and phylotype, the results of rep-PCR allowed the formation of six groups (A, B, C, D, E and F) from 61% of similarity, regardless of sample type, geographical origin, collecting date or cultivar. Groups A and B were those that had the greatest number of isolates, 47 and 20 clonal lines, respectively. Knowledge regarding R. solanacearum population variability as well as the virulence of different isolates may help in the success of breeding programs and integrated disease management.

Citrus sinensis is a perennial woody species, for which genetic approaches to the study of reproductive development are not readily amenable. Here, the usefulness of the CitEST Expressed Sequence Tag (EST) database is demonstrated as a reliable new resource for identifying novel genes exclusively related to Citrus reproductive biology. We performed the analysis of an EST dataset of the CitEST Project containing 4,330 flower-derived cDNA sequences. Relying on bioinformatics tools, sequences exclusively present in this flower-derived sequence collection were selected and used for the identification of Citrus putative flower-specific genes. Our analysis revealed several Citrus sequences showing significant similarity to conserved genes known to have flower-specific expression and possessing functions related to flower metabolism and/or reproductive development in diverse plant species. Comparison of the Citrus flower-specific sequences with all available plant peptide sequences unraveled 247 unique transcripts not identified elsewhere within the plant kingdom. Additionally, 49 transcripts, for which no biological function could be attributed by means of sequence comparisons, were found to be conserved among plant species. These results allow further gene expression analysis and possibly novel approaches to the understanding of reproductive development in Citrus.

Visando o desenvolvimento de vetores homólogos de transformação de cloroplastos para tomate (Lycopersicon esculentum L.), fragmentos cloroplastidiais de tomate cv. IAC-Santa Clara foram clonados e analisados. Isolamento e clonagem de fragmentos PstI/SalI de cloroplastos de tomate deram origem aos plasmídios pIJB1 e pIJB2, contendo fragmentos de 8,6 pb e 6,4 pb respectivamente. Seqüenciamento e análise dos fragmentos revelaram que as seqüências apresentam de 93 a 100 % de identidade com os respectivos fragmentos em tabaco nas regiões codificadoras. Espaços intergênicos mostraram-se menos conservados, sugerindo que divergências evolutivas ocorreram principalmente em regiões não diretamente envolvidas na tradução. A diferença mais marcante encontrada está em um fragmento de 437 pb presente em tabaco na região intergênica entre os genes trnE e trnT, mas ausente no DNA cloroplastidial de tomate. Análise do padrão de restrição das seqüências cloroplastidiais apontou sítios únicos de restrição, sugerindo potencial uso dessas seqüências para a construção de vetores de transformação de cloroplastos. O recente sucesso na expressão de genes exógenos de interesse agronômico em cloroplastos de plantas sugere que essa tecnologia promete revolucionar o conceito e a aplicação da engenharia genética no melhoramento de plantas.

With the view of developing chloroplast transformation vectors based on homologous targeting regions for tomato (Lycopersicon esculentum L.), plastid DNA fragments of tomato cv. IAC-Santa Clara were cloned and analyzed. Isolation and cloning of PstI/SalI chloroplast fragments into the pBlueScript vectors yielded the plasmids pIJB1 and pIJB2 with cpDNA fragments of 8.6 kb and 6.4 kb, respectively. DNA sequencing and computer analyses revealed that the tomato sequences cloned display from 93 to 100 % of identity to the respective fragments in tobacco, which is more pronounced in coding regions. The intergenic spacers are somewhat less conserved suggesting that evolutionary divergences occurred mainly in these putative non-coding regions. The most remarkable difference found is a 437 bp sequence present in tobacco chloroplast genome in the intergenic region of the genes trnE and trnT but completely absent in the tomato chloroplast DNA. Analysis of restriction enzyme digestion patterns revealed several unique restriction sites in the intergenic spacer regions suggesting potential utility of these sequences in species-specific vector construction for tomato chloroplast transformation.