Es importante definir criterios diagnósticos que permitan dilucidar el papel patógeno de Blastocystis sp. Se evaluó morfología y se estimó el diámetro de las formas, número de parásitos por campo y por gramo de heces y los anticuerpos IgM e IgG anti- Blastocystis sp. mediante ELISA, en sujetos con sintomatología general y portadores sanos. Se encontró 77% de muestras positivas para Blasctocystis sp, 52% provenientes de pacientes con síntomas como flatulencia 6 (24%), dolor abdominal 5 (20%), náuseas 2 (8%), diarrea 6 (24%) y estreñimiento 6 (24%). Los rangos de parásitos por campo más frecuente en sintomáticos fueron 0-3 (74%) y 10-12 (26%), mientras que 100% de los pacientes asintomáticos presentaron Blastocystis sp. en el rango 0-3. Los pacientes asintomáticos presentaron menor número de parásitos por gramo de heces, en el rango de 0-3 y el rango 7-10 con altas cargas parasitarias solo fue observado en sintomáticos. Se encontró menor cantidad de formas granulares en ambos grupos, en el rango 0-3 en sintomáticos: 85% vacuolares y 15% granulares; 76% vacuolares y 24% granulares, en asintomáticos. En el rango 10-12, 98% vacuolares y 2% de granulares, en sintomáticos. El diámetro promedio de las formas vacuolares fue 11,9±2 μm en los pacientes sintomáticos y 7,9±3,7 μm en asintomáticos. En los granulares fue 9,3±2,3 μm en sintomáticos y 8,2±0,1 μm en asintomáticos. Observándose diferencias significativas entre las formas vacuolares de ambos grupos (P=0,000026), pero no en los granulares (P=0,346). El 3,5% de los pacientes sintomáticos presentaron anticuerpos IgG anti-Blastocystis sp. El estudio morfológico empleado contribuyó en la optimización del diagnóstico, mientras que las técnicas inmunoenzimáticas resultaron de baja sensibilidad.

It is important to define diagnostic criteria to elucidate the pathogenic role of Blastocystis sp. Morphology was assessed and diameter of the shapes, number of parasites per field and per gram of faeces and Blastocystis sp. IgM and IgG antibodies was estimated by ELISA in subjects with constitutional symptoms and healthy carriers. Seventy percent Blasctocystis sp positive samples were found, 52% from patients with symptoms such as flatulence 6 (24%), abdominal pain 5 (20 %), nausea 2 (8%), diarrhea 6 (24%) and constipation 6 (24%). Ranges of parasites per field found more frequently in symptomatic patients were 0-3 (74%) and 10-12 (26%), while 100% of asymptomatic patients had Blastocystis sp. in the range 0-3. Asymptomatic patients showed lower number of parasites per gram feces in the range of 0-3 and the 7-10 range with high parasitic load was only observed in symptomatic. Less granular forms in both groups was found, in the range 0-3 in symptomatic patients: 85% vacuolar and 15% granular; 76% vacuolar and 24% granular in asymptomatics. In the range 10-12, 98% vacuolar and 2% granular in symptomatic patients. The average diameter of the vacuolar forms was 11.9 ± 2 μm in symptomatic patients and 7.9 ± 3.7 μm in asymptomatics . In the granular form was 9.3 ± 2.3 μm in symptomatic and 8.2 ± 0.1 μm in asymptomatics. Significant difference was found among vacuolar forms of both groups (P= 0.000026), but not in the granular form (P= 0.346). Only 3.5 % of symptomatic patients had IgG antibodies to Blastocystis sp. The morphological study employed contributed to the diagnosis optimization while immunoenzymatic techniques were of low sensitivity.

Los antígenos secretados por los huevos de S. mansoni inducen la proliferación de células endoteliales in vivo, así como la producción del Factor de Crecimiento del Endotelio Vascular (VEGF), sugiriendo que la patogénesis en la esquistosomiasis se relaciona con eventos angiogénicos. Se evaluó la expresión del VEGF, como una medida de angiogénesis estimulada por los huevos y los gusanos de S. mansoni, en la infección Bisexual (BIS) y los gusanos adulto (infección UNI) en el hígado de ratones Balb/c, antes y después del tratamiento con PZQ. Los resultados indican que tanto la infección UNI como BIS son capaces de estimular la producción de VEGF en tejido hepático, lo que explica la vascularizacón anómala durante este cuadro infeccioso. Este proceso se acompaña con la presencia de un elevado número de infiltrados leucocitarios en los sitios donde se observa lesión tisular; la producción de VEFG remite tras 48 de tratamiento con PZQ. Estos resultados indican que la producción anómala de VEGF junto con la intensa respuesta pro-inflamatoria asociada no solo a la actividad de VEGF sino también a los infiltrados leucocitarios observados en el tejido hepático, causada tanto por los huevos secretados como por las formas adultas de S. mansoni son los mecanismos que subyacen a las lesiones granulomatosas observadas durante el curso de la esquistosomiasis, pudiendo al menos revertirse el incremento en la vascularización mediante el uso de PZQ.

The antigens secreted by eggs of S. mansoni induce the proliferation of endothelial cells in vivo, as well as the production of Factor Vascular Endothelial Growth factor (VEGF), suggesting that the pathogenesis of schistosomiasis relations with angiogenic events. We evaluated the expression of VEGF, as a measure of angiogenesis stimulated by the eggs and worms S. mansoni in infection bisexual (BIS) and adult worms ( UNI infection ) in the liver of BALB / c mice before and after treatment with PZQ. These results indicate that abnormal production of VEGF with intense pro-inflammatory response not only associated with the activity of VEGF but also leukocyte infiltrates observed in the liver tissue caused by both secreted and eggs by adult forms S. mansoni are the mechanisms underlying granulomatous lesions observed during the course of schistosomiasis, and can be reversed at least the increased vascularization by using PZQ .

El Blastocystis sp es un protozoario con alta prevalencia en Venezuela. Es controversial por su papel patógeno y su gran variabilidad genética, relacionada con la dificultad de mantenerlo en condiciones de viabilidad fuera del hospedador. Se evaluó la utilidad de los medios de cultivo in vitro RPMI1640, TB1, MBD y MBDM para mantener la viabilidad del Blastocystis sp. Se seleccionaron 97 muestras de heces, 43 (44%) de las cuales resultaron positivas solo para Blastocystis sp y de 15 de ellas se purificaron los Blastocystis sp mediante gradiente (ficol-diatrizaoato de sodio). En cada medio de cultivo y en solución salina 0,85% (SSI) se inoculó1x103 parásitos por paciente y se evaluó la viabilidad mediante coloración con azul de tripano a las 24, 48 y 72 horas. Los resultados mostraron porcentajes de viabilidad a las 24 h: en SSI de 2%, en RPMI1640 5%, en TB1 5%, MBD 24% y MBDM 40%. A las 48 h: en SSI de 3%, en RPMI1640 4%, en TB1 4%, MBD 17% y MBDM 21%. A las 72 h: en SSI 2%, en RPMI1640 2%, en TB1 2%, MBD 15% y MBDM 16%. Se observaron diferencias estadísticamente significativas después de las 24 h, entre los medios TB1, MBD y MBDM comparado con SSI. Se concluye que el medio MBDM es el que ofrece las mejores condiciones para mantener viable a Blastocystis sp por 72 h.

The protozoan Blastocystis sp is a high prevalence in Venezuela. Its role is controversial pathogen and its wide genetic variability related to the difficulty of keeping it in a position outside the host viability. We evaluated the utility of in vitro culture media RPMI1640, TB1, and MBDM MBD to maintain the vitality of Blastocystis sp. They selected 97 stool samples, 43 (44%) of which were positive for Blastocystis sp and only 15 of them were purified by gradient Blastocystis sp (ficoll-sodium diatrizaoato). In each culture medium and 0.85% saline (SSI) is inoculó1x103 parasites per patient and viability was assessed by trypan blue staining after 24, 48 and 72 hours. The results showed viability percentage at 24 hours: in SSI of 2%, 5% RPMI1640 at TB1 5%, 24% and MBDM MBD 40%. After 48 h: SSI 3% in RPMI1640 4%, 4% TB1, MBD MBDM 17% and 21%. After 72 h: SSI 2% in RPMI1640 2%, 2% TB1, MBD 15% and 16% MBDM. Statistically significant differences were observed after 24 h, between TB1 media, compared MBDM MBD and SSI. We conclude that the medium is MBDM which offers the best conditions for maintaining viable Blastocystis sp for 72 h.

Venezuela se encuentra entre los países sudamericanos afectados por la esquistosomiasis y la quimioterapia con praziquantel (PZQ) es la principal estrategia de control. Se determino el efecto cuantitativo del tratamiento con praziquantel sobre la actividad de la Fosfatasa Alcalina (ALP), Fosfatasa Acida (ACP) y Superoxido Dismutasa (SOD), en antígenos solubles (ASG) y productos de excreción-secreción (PESG) de gusanos hembras y machos condición control (ASGHc, ASGMc, PESGHc and PESGMc) o incubados con PZQ in vitro (ASGMpzq, ASGHpzq, PESGMpzq and PESGHpzq). Las proteínas totales se determinaron por colorimetría, la SOD y ACP mediante espectrofotometría y la ALP por fluorometría. Se encontró una mayor concentración de proteínas en las ASG de gusanos no tratados, y en las preparaciones obtenidas luego de la incubación con PZQ in vitro, en los PESG, un incremento en la actividad ACP en los ASG y PESG preparados con gusanos no-tratados, y una disminución de dicha actividad en los ASG y PESG tratados. La SOD, evidenció en los ASG una disminución estadísticamente significativa en los gusanos tratados. La concentración de la ALP disminuyó significativamente en los ASG y PESGH de gusanos tratados en relación a los gusanos no tratados. En conclusión, se observó una disminución en las proteínas totales, actividades enzimáticas ACP y SOD, y concentración de ALP, en ASG y PESG obtenidos con gusanos tratados.

Venezuela is among South American countries affected by schistosomiasis and chemotherapy with praziquantel (PZQ) is the main control strategy. We determined the quantitative effect of treatment with PZQ on alkaline phosphatase activity (ALP), acid phosphatase (ACP) and superoxide dismutase (SOD) in soluble antigens of worms (SWAP) and excretion-secretion products (EEP) of male and female worms (SMWAPc, SFWAPc, ESPWMc and ESPWHc) or incubated with PZQ in vitro (SMWAP PZQ, SFWAP PZQ, ESPWM PZQ and ESPWH PZQ). Total proteins were determined by colorimetry, SOD and ACP by spectrophotometry and fluorometry ALP. There was higher protein concentration in the untreated worms EG, and the preparations obtained after incubation with PZQ in vitro, in the EG, an increase in ACP activity in the EG and PG prepared with non-treated worms and a decrease of such activity on the EG and treated PG. On the other hand, SOD activity, the EG showed statistical significance in the treated worms. In the PG showed the same behavior, but those differences were not statistically significant. Similarly, there was a decrease in the concentration of ALP noticeable in the EG and worm PGh treated worms relative to untreated statistically significant. In conclusion, we observed a decrease in total protein, ACP and SOD enzyme activities and concentration of ALP, and EG in PG treated worms.

El papel patógeno de Blastocystis sp es controversial, por lo que es importante definir criterios diagnósticos que permitan dilucidar tal rol. Se evaluó la morfología de Blastocystis sp, número de parásitos por campo y por gramo de heces, en sujetos con sintomatología general y portadores sanos. El estudio fue descriptivo y el diseño no-experimental. La observación y contaje al microscopio se hizo en diez campos consecutivos de 40X y en relación al peso de las heces en gramos, en parásitos teñidos con lugol. Se encontró 77% de muestras positivas para Blastocystis sp, 52% provenientes de pacientes con síntomas como flatulencia 6 (24%), dolor abdominal 5 (20%), náuseas 2 (8 %), diarrea 6 (24%) y estreñimiento 6 (24%). Los rangos de parásitos por campo más frecuente en sintomáticos fueron 0-3 (74%) y 10-12 (26%), mientras que 100% de los pacientes asintomáticos presentaron Blastocystis sp en el rango 0-3. Los pacientes asintomáticos presentaron menor número de parásitos por gramo de heces, en el rango de 0-3 y el rango 7-10 con altas cargas parasitarias sólo fue observado en sintomáticos. Se encontró menor cantidad de formas granulares en ambos grupos, en el rango 0-3 en sintomáticos: 85% vacuolares y 15% granulares; 76% vacuolares y 24% granulares, en asintomáticos. En el rango 10-12, 98% vacuolares y 2% de granulares, en sintomáticos. En conclusión, el estudio de las morfologías, el reporte de la cuantificación diferencial de formas por campo y la cuantificación del número de parásitos por campo pueden contribuir a optimizar el diagnóstico y el manejo quimioterapeútico del paciente.

Morphological types, number of parasites per field and parasite load of Blastocystis sp from symptomatic and asymptomatic patients The pathogenicity of Blastocystis sp is controversial, therefore, it is important to define diagnostic criteria for its determination. We evaluated the morphology of Blastocystis sp, number of parasites per field and per gram of faeces in patients with general symptoms and in healthy carriers. The study was a descriptive and nonexperimental design. The microscopic observation and counting was done in ten consecutive fields in relation to 40X and stool weight in grams. We found 77% of samples positive for Blastocystis sp, 52% from patients with symptoms such as flatulence 6 (24%), abdominal pain 5 (20%), nausea 2 (8 %), diarrhea 6 (24%) and constipation 6 (24%) . The ranges of parasites per field more frequent in symptomatic patients were 0-3 (74%) and 7-10 (26%); and in the asymptomatic group 100% of the patients were in the 0-3 range. In the 0-3 range asymptomatic patients had a lower number of parasites per gram of feces, while in the 7-10 range high parasite loads were observed only in symptomatic patients. Less granular forms in relation to vacuolar ones were found in both groups, in the 0-3 range of the symptomatic group, 85% vacuolar and 15% granular, and 76% vacuolar, and 24% granular in the asymptomatic. In conclusion, the study of the morphologies, the quantification of differential forms by field and the quantification of the number of parasites per field contributes to the technical optimization of routine coproparasitology.

Biomphalaria glabrata and Schistosoma mansoni relationship was studied by light microscopy (LM) and freeze-fracture replica technique (FFR). We observed very thin cytoplasmic extensions of hemocytes in the LM, which then surround immobilize the miracidia. FFR images showed that the contact site between hemocytes cytoplasmic extensions and the external tegumentary coat involved only superficial layers of miracidia. Numerous vacuoles and filopodia were observed in the hemocyte cytoplasm, the latter binding with those from neighboring cells. In spite of the close interfilopodia contact, no cellular junctions were seen at these sites nor between filopodia-miracidia contact areas. The observed migration of hemocytes and their disposition in layers surrounding the miracidia in vitro correspond to previous studies.

In this work we have studied the modifications in the biological properties of Trypanosoma cruzi when the parasite is maintained for a long time in axenic culture. The studies were done with a clone from an avirulent strain (Dm30L) and a non-cloned virulent strain (EP) of T. cruzi. Both parasiteswere maintained, for at least three years, by successive triatomine/mouse alternate passage (control condition), or by serial passage in axenic medium (culture condition), or only in the mouse (mouse condition). The comparison between parasites of culture and control condition showed that metacyclogenesis capacity was reduced in the former and that the resulting metacyclics displayed an attenuatedvirulence. In order to compare the virulence of metacyclics from the urine of the insect vector, Rhodnius prolixus were infected by artificial feeding with parasites of the control or culture condition. After three triatomine/triatomine passages, there was observed an almost identical biological behavior for these parasites, hence indicating that the maintenance of T. cruzi for a long time in axenic culture affects the differentiation capacity and the virulence of the parasite. Additionally, it was demonstrated that it is possible to maintain T. cruzi exclusively through passages in the invertebrate host.